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癌性腹水对卵巢癌细胞增殖及迁移的影响
目的 探讨癌性腹水对卵巢癌腹水中肿瘤细胞和卵巢癌细胞系( SKOV3)的形态学特征、增殖和迁移能力的影响. 方法 卵巢癌腹水中提取的肿瘤细胞在体外用DMEM高糖培养液培养;卵巢癌细胞系(SKOV3)分别用DMEM高糖培养液和DMEM高糖培养液中加入不同比例癌性腹水制成的混合培养液培养;分别通过光学显微镜和电子显微镜观察各组细胞的形态学特点;用CCK试剂盒检测各组细胞的增殖能力;用划痕实验检测癌性腹水对卵巢癌细胞系SKOV3迁移能力的影响. 结果 卵巢癌腹水中肿瘤细胞与卵巢癌细胞系( SKOV3 )形态学特征明显不同;腹水中的肿瘤细胞离开腹水微环境后增殖能力明显减弱;混合培养液培养的SKOV3肿瘤细胞比DMEM高糖培养液培养的SKOV3肿瘤细胞的增殖及迁移能力明显增强. 结论 卵巢癌腹水中的肿瘤细胞发生了更有利于其增殖及迁移的形态学改变;癌性腹水对卵巢癌细胞系( SKOV3)的增殖及迁移具有促进作用.
关键词: 卵巢癌 癌性腹水 卵巢癌细胞系(SKOV3) 增殖能力 迁移能力 -
IL-12对CIK细胞体外增殖及体内外杀瘤活性影响的实验研究
目的 动态观察IL-12对细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells,CIK)体外增殖,体内外的细胞毒活性的影响.方法 采用三种不同的细胞因子组合扩增CIK细胞,即IL-2组:IFN-γ、CD3单抗、IL-1和IL-2;IL-2加IL-12组:IFN-γ、CD3单抗、IL-1、IL-2和IL-12;IL-12组:IFN-γ、CD3单抗、IL-1和IL-12.流式细胞术分析细胞表型,细胞计数法测定细胞的增殖.MTT法测定CIK体外细胞毒活性,并通过做扫描和透射电镜,对CIK细胞杀伤的肿瘤细胞进行形态学观察.研究CIK细胞对BGC-823荷瘤裸鼠的体内抗肿瘤作用.结果 三种方法均可使细胞增殖能力显著增加,对CD3+CD56+细胞的诱导作用也无明显差异,IL-12与IL-2联合作用组促增殖能力和细胞毒性作用明显强于其他两组(P<0.05).被CIK细胞杀伤的肿瘤细胞的死亡形式是坏死和凋亡.动物实验证实CIK有较强的体内抗瘤活性,可延长荷瘤鼠的生存期,联合IL-12与IL-2诱导的CIK细胞疗效较好.结论 IL-12同样可以用于CIK细胞的诱导,而联合IL-12与IL-2诱导的CIK细胞其增殖能力和体内外抗肿瘤活性均增强.
关键词: 细胞因子诱导的杀伤细胞 白介素-12 增殖能力 体内外抗肿瘤作用 -
脾移植前去除成熟树突状细胞预防移植排斥反应的体外研究
[陈天宇,姜洪池,孙备.中华肝胆外科杂志,2000,6(5):361]目的建立治疗性单抗溶液持续灌注大鼠脾脏模型,应用抗大鼠树突状细胞单克隆抗体(WZD)降低大鼠移植脾的免疫原性。方法以WZD溶液持续灌注移植脾,筛选佳方案,并观察灌注后混合淋巴细胞培养(mixed lymphocyte culture,MLC)淋巴细胞增殖情况及脾细胞的超微结构,以及灌注后移植脾细胞的免疫组化情况。结果 WZD灌注组MLC淋巴细胞增殖能力明显降低,与对照组及应用CsA组相比差异有显著意义(P<0.05),与WZD灌注+CsA组相比差异无明显意义(P>0.05),21℃灌注组脾细胞功能活跃,线粒体损伤小,灌注后移植脾DC呈现强荧光染色。结论移植脾在21℃下,每小时给予灌注50ml单抗溶液灌注获得了佳效果,WZD溶液灌注移植脾,可去除成熟树突状细胞,确能降低其免疫原性,有可能减少免疫抑制剂的应用剂量。
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制备淋巴细胞转化标本的改进方法
淋巴细胞转化实验即淋巴细胞的增殖反应,是测定免疫细胞功能及状态的一种方法.机体内淋巴细胞在受到抗原及有丝分裂原的特异或非特异的刺激后,导致细胞活化,细胞因子合成,细胞因子受体表达及活化的细胞发生增殖,可表示此群细胞在整体状态下的增殖能力,是免疫缺陷病诊断的主要依据[1],通过对其功能的研究,可为临床疾病(如Down综合征、恶性肿瘤、慢性白色念球菌病等)的发生,发展及转归作出一定的预测,为基础理论的研究提供一定的实验依据[2].
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055肿瘤坏死因子α缺失导致乙型肝炎病毒特异性细胞毒T淋巴细胞增殖能力受损
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Percoll非连续等密度梯度离心法纯化牛肾上腺嗜铬细胞
肾上腺髓质嗜铬细胞是具有合成、储存和分泌儿茶酚胺功能的神经元样细胞[1,2],对疼痛和帕金森病的治疗具有显著效果[3].但是,肾上腺髓质嗜铬细胞在体外无增殖能力,只能依赖于肾上腺髓质的分离来获取.牛的肾上腺髓质细胞(Bovine Chromaffin Cells, BCC)由于产量高,易分离获取而成为首选的细胞来源,同时建立一种能够满足临床移植需要的BCC分离纯化方法也显得十分重要.但目前通常采用的方法[4~7]很少考虑细胞的产率、纯度及工艺成本.为此,本文建立了一种稳定、经济、简单的BCC分离纯化方法,为细胞临床移植提供充足、健康的细胞来源.
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去分化脂肪细胞的多向分化潜能及其应用
细胞治疗和组织工程是再生医学的核心内容,寻找理想的种子细胞又是细胞治疗和组织工程共同的关键问题.鉴于干细胞具有较强的增殖能力及潜在的多向分化能力等,目前已被作为细胞治疗和组织工程构建种子细胞的主要来源.相比胚胎干细胞存在伦理学、致瘤性问题,成体干细胞在再生医学中可能更具应用前景.脂肪组织广泛分布,容易获取,成熟脂肪细胞在一定条件下发生去分化,成为去分化脂肪(dedifferentiated fat,DFAT)细胞,不仅与脂肪来源的间充质干细胞(adipose-derived stem cells,ASCs)一样具有多向分化能力,而且DFAT细胞得率高,具有高度的同质性,表型稳定[1],其他细胞污染的机会少.所以,DFAT细胞有可能成为细胞治疗和组织工程种子细胞的新来源,在再生医学的应用中发挥重要的作用.
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饲养层体系的建立与胚胎干细胞的培养
胚胎干细胞(ES细胞)是由早期胚胎内细胞团或原始生殖细胞经体外分离、抑制分化培养获得的多潜能细胞.ES细胞的研究已在多种动物实验中获得了突破性进展[1,2].ES细胞在体外培养不仅要保持其增殖能力,而且要维持其未分化的状态.由于饲养层细胞能分泌白血病抑制因子(LIF)等抑制ES细胞分化的因子,目前,ES细胞的培养主要是以饲养层来维持其干细胞特性.本实验探讨了胎鼠成纤维细胞(MEF)的分离培养、传代及其作为饲养层细胞的处理条件,建立快速稳定的MEF培养体系,并在此基础上探索了小鼠ES细胞的适宜培养、传代条件.
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Cyclin D1和p16蛋白在胎儿心肌细胞中的表达
心肌细胞从胚胎期具有增殖能力的细胞成为成年期不具有增殖能力而只有发生肥大反应能力的过程中,存在增殖能力的变化和逐渐分化现象[1],该现象受细胞周期调控.细胞周期素(cyclin)是对细胞周期起正性调节作用的一类物质.p16蛋白是细胞周期素依赖的蛋白激酶抑制因子(cyclin dependent kinase inhibitor,CKI)的一种,静止细胞中具有相当高的表达,增殖细胞中表达却减低.关于cyclin D1和p16蛋白在心肌细胞分化中的作用目前尚不清楚,因此本研究采用免疫组化方法,检测cyclin D1和p16蛋白表达量的变化,以寻找调控心肌细胞分化的关键因素.
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骨髓间充质干细胞生物学特性及其在肝病应用中的进展
骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)是肝细胞移植的重要来源之一,已成为肝细胞移植领域中继胚胎干细胞之后又一个"明星"细胞.作者通过计算机检索中国期刊网和Pubmed等数据库有关文献,归纳了BM-MSCs的免疫表型、异质性、增殖能力、分化潜能、归巢现象及体内外分化为肝样细胞的研究现状,对其在肝病中的应用前景和存在问题做初步探讨.
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KPNA2基因沉默对人肝癌细胞株 SMMC7721和 Bel7404增殖和侵袭能力的影响
目的:观察核转运蛋白基因α2(Karyopherin α-2,KPNA2)基因沉默对人肝癌细胞株 SMMC7721和 Bel7404增殖以及侵袭能力的影响。方法将 KPNA2 siRNA 干扰质粒用 LipofectaminTM 2000方法瞬时转染人肝癌细胞株SMMC7721和 Bel7404,转染后48 h 应用蛋白质印迹法检测转染细胞中 KPNA2蛋白表达。采用 MTT 法检测基因沉默细胞增殖能力,采用 Transwell 法检测基因沉默细胞侵袭能力。结果 SMMC7721细胞株对照组 mRNA 为1.02±0.13,高于 siRNA 转染组的0.37±0.07(t=10.78,P <0.01);肝癌 Bel7404细胞株对照组 mRNA 为1.05±0.17,高于 siRNA 转染组的0.36±0.06(t=9.38,P <0.01)。肝癌 SMMC7721细胞株对照组蛋白定量值为0.96±0.10,高于转染组的0.42±0.05(t=11.83,P <0.01);肝癌 Bel7404细胞株对照组蛋白定量值为0.93±0.09,高于转染组的0.48±0.06(t =10.19, P <0.01)。SMMC7721和 Bel7404细胞株在24、48和72 h 时对照组增殖能力高于转染组,且差异有统计学意义(P <0.05)。SMMC7721细胞株对照组侵袭能力值为126.20±21.61,高于 siRNA 转染组的51.13±10.2(t =7.68,P <0.01);肝癌 Bel7404细胞株对照组侵袭能力值为125.124±8.04,高于 siRNA 转染组的55.20±18.54(t =8.48,P <0.01)。结论 KPNA2基因沉默可以调节人肝癌细胞株 SMMC7721和 Bel7404的增殖能力和侵袭能力。
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树突状细胞调节和细胞因子诱导的杀伤细胞的抗肿瘤机制及其在结直肠癌治疗中的应用前景
利用细胞因子诱导树突状细胞(dendritic cell,DC)和细胞因子诱导的杀伤细胞(cvtokine induced killer,CIK细胞),以肿瘤抗原冲击DC,将经过抗原冲击的DC和CIK细胞按一定比例混合进行共培养,得到一种新的免疫效应细胞群,即DC调节和细胞因子诱导的杀伤细胞(DCIK细胞).DCIK细胞具有识别和特异性杀伤恶性细胞的作用,打破了放化疗"敌我不分"的状况.DCIK细胞不但存活率高,增殖能力强,而且对肿瘤细胞具有特异性杀伤能力,为肿瘤免疫治疗开创了一条新的途径.
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肿瘤相关巨噬细胞计数、基质金属蛋白酶-2及 Ki-67的表达与结直肠癌预后的关系
结直肠癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一,其病死率仅次于肺癌和乳腺癌[1]。近年来,肿瘤相关巨噬细胞(tumor associated macrophage,TAM)成为研究热点,但在结直肠癌中研究鲜有报道。已有研究证实,恶性肿瘤中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)及细胞增殖相关蛋白 Ki-67表达含量越高,细胞浸润转移、增殖能力越强,预后越差[2-3]。本研究通过检测 TAM 计数、MMP-2和 Ki-67在结直肠癌中的表达,拟探讨这些指标对结直肠癌侵袭转移增殖及预后的影响。
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逆转录病毒载体介导β-gal基因在原代大鼠肝细胞的表达
逆转录病毒载体被广泛用于移植肝细胞的基因标记和肝病的体外基因治疗.但重组逆转录病毒的感染需要靶细胞处于分裂增殖状态,而原代大鼠肝细胞增殖能力弱,逆转录病毒感染效率低,近年来采用生长因子刺激肝细胞增殖,取得了较好效果[1].本实验观察了含表皮生长因子(EGF)的培养条件下,双顺反子逆转录病毒载体介导β-gal基因表达于肝细胞的效率.
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人牙髓干细胞的高效扩增及其对分化潜能的影响
目的 检测不同接种密度对人牙髓干细胞(Dental pulp stem cells,DPSCs)增殖能力和分化潜能的影响,建立其高效扩增方法.方法 不同密度接种培养DPSCs,计算细胞产量、倍增次数,观察细胞形态、检查克隆形成率和钙结节形成能力.结果 低密度培养的乳牙牙髓干细胞(Stem cells from human exfoliated deciduous teeth.SHED)始终保持较高增殖、克隆形成率:而低密度DPSCs只在前3代保持与常规密度相似的增殖、克隆形成效率,3代以后其增殖和分化能力明显下降.低密度培养条件下DPSCs的矿化能力与常规密度的没有明显差别.结论 1.5-3 cells/cm2低密度接种培养DPSCs有利于细胞快速扩增,扩增后的细胞保持较高的增殖和分化潜能.SHED的增殖能力、克隆形成效率和钙结节形成能力均优于DPSCs.
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骨髓间充质干细胞和胚胎干细胞向软骨细胞转化可能的分子机制
现代外科的发展将使人类替换体内任一组织的梦想变为现实.软骨属于增殖能力极弱的终末细胞,自1743年Hunter提出软骨一旦破坏即不可自身修复以来,软骨组织的修复一直无理想方法,组织工程概念的提出为解决这一问题带来了曙光.理想的种子细胞获取是软骨组织工程面临的首要问题,目前骨髓间充质干细胞和胚胎干细胞是研究多的两类种子细胞来源,具有较大的潜力,在体内外培养过程中,发现有许多因子在其向软骨细胞分化时发挥调节作用,本文就这方面的研究现状进行综述.
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非整倍体与肿瘤细胞致瘤性关系的初步研究
背景与目的:非整倍体与肿瘤形成有关,本研究旨在探讨非整倍体与肿瘤细胞致瘤性的关系.方法:C3和C5细胞系是来自于同一淋巴瘤细胞系的两个亚克隆,采用CCK-8检测2个淋巴瘤细胞系C3和C5的增殖能力;应用常规染色体分析法检测这些细胞系的核型;采用软琼脂克隆形成实验检测这些细胞系的体外致瘤能力;采用Transwell小室检测这些细胞系的侵袭转移能力;通过小鼠体内成瘤实验检测这些细胞系的体内致瘤能力.结果:两个细胞系中C3增殖能力强于C5,差异有统计学意义.核型分析结果表明,这两个细胞系都是非整倍体核型,细胞系C3的众数范围是38~78,C5的众数范围是28~50,C3细胞系中亚二倍体、二倍体和超二倍体所占比例分别为20.33%、8.47%和71.2%,C5细胞系中亚二倍体、二倍体和超二倍体所占比例分别为11.11%、86.42%和2.47%.C3和C5细胞系的非整倍体细胞比例分别为95.73%和13.58%.C3细胞系可以在软琼脂中形成克隆,而C5细胞系未能形成克隆.在体外,C3细胞系的侵袭转移能力强于C5细胞系.体内致瘤实验结果表明,C3细胞系恶性程度较高,体内致瘤能力明显强于C5细胞系,C3细胞系在体内的转移灶较多,在肝脏和肾脏均有转移灶点,而C5细胞系只在肾脏出现转移灶点.结论:非整倍体与肿瘤细胞致瘤性之间存在相关性,非整倍体对细胞的恶性转化及肿瘤发生具有重要贡献.
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流行性腮腺炎病毒减毒株S79在几株肿瘤细胞和正常细胞中增殖的比较研究
目的比较HeLa、SPC-A1、ACHN、HT1080 4株肿瘤细胞和wish、HEL HES、HEK 4株正常人二倍体细胞对MuVS79病毒的敏感性和病毒对细胞的不同影响.方法细胞感染病毒后用CPE实验和血球吸附实验研究病毒的复制情况,用空斑实验测定细胞裂解液的PFU;用MTT实验,活细胞计数,流式细胞仪实验,TUNEL染色等研究MuVS79对细胞的影响.结果 MuVS79在4株肿瘤细胞中的增殖能力明显>4株正常人二倍体细胞,敏感顺序为ACHN>HeLa>HT1080>SPC-A1>HEK>wish>HEL,HES.染毒后,肿瘤细胞的生长速度明显减慢,用MTT实验测得HeLa、SPC-A1、ACHN、HT1080、HEK、wish HEL和HES的细胞生长抑制率分别为38.2%33.0%41.2%35.6%7.2%5.6%1.2%和-1.4%.感染Mu-VS79后可引起肿瘤细胞G1期细胞阻滞,与未染毒对照细胞比较凋亡发生率明显增高;而4株正常人二倍体细胞凋亡发生率未见明显变化.结论 MuVS79具有选择地在肿瘤细胞中增殖和引起肿瘤细胞凋亡的能力.
关键词: 流行性腮腺炎病毒减毒株S79 增殖能力 肿瘤细胞株 正常人细胞株 -
骨髓间充质干细胞及其临床应用前景
干细胞是近年来生物学上具挑战性、也有吸引力的领域之一.其中造血干细胞(HSC)已经应用于临床,在治疗血液系统恶性疾病、遗传性免疫缺陷等方面取得了显著的成就.除了造血干细胞以外,在机体成熟组织中还存在非造血干细胞(如肌肉干细胞、神经元干细胞、表皮层干细胞等),在机体受到外伤、老化、疾病等损伤时,这些细胞就增殖分化,产生新的组织来替代它们,以保持机体的稳态平衡.骨髓间充质干细胞(MSC)位于骨髓的基质细胞系中,在体外可以通过贴壁培养加以分离,分裂增殖能力强,可以分化为多种结缔组织细胞(纤维、骨、软骨、腱、肌肉、脂肪),并易于被外源基因转染且稳定表达,被认为是组织工程、细胞及基因治疗理想的靶细胞.因此,骨髓MSC已成为该领域研究的热点之一.
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RPMI 1640,DMEM及不同生长因子对大鼠颌下腺细胞生长作用的观察
目的观察RPMI 1640、DMEM及不同生长因子对大鼠颌下腺细胞增殖能力的影响,探讨有利于大鼠颌下腺细胞的培养方法.方法在RPMI 1640或DMEM培养基中分别加入一定浓度的FBS(胎牛血清)、EGF(表皮生长因子)、HC(氢化可地松)、INS(胰岛素),观察纤维细胞和腺细胞在不同培养基中的增殖能力.结果在含5%FBS、10ng/ml EGF、5μg/ml HC、5μg/ml INS的DMEM培养基中,上皮细胞生长良好,在只含血清的RPMI 1640培养基中,纤维细胞生长旺盛,上皮样细胞生长不良,在不含血清的培养基中所有细胞均生长缓慢.结论含有5%血清、10ng/ml EGF、5μg/ml HC及5μg/ml INS的DMEM培养基适合鼠涎腺上皮样细胞的生长.