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生长抑素抑制人低分化胃癌细胞株BGC-823的生长及其机制初探
生长抑素(SS)广泛存在于神经内分泌系统和消化道,研究发现,SS能影响细胞的增殖能力[1,2],促使我们探讨外源性SS可否作为肿瘤治疗的一种选择方法.胃癌是消化道常见肿瘤之一,本文旨在观察对人低分化胃癌细胞株BGC-823生长的影响,并进一步探讨SS对细胞内信息传递途径的影响,为临床治疗胃癌提供理论依据.
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肿瘤干细胞分离方法的研究进展
干细胞是一类具有无限或者永生的自我更新能力的细胞,多向分化潜能和自我更新是干细胞的两个基本特征[1].干细胞从维持多能性到分化的分子机制的逐渐揭密,当今严重威胁生命的顽疾就会迎刃而解.对肿瘤的研究发现,恶性肿瘤细胞的生长、分化等特性与干细胞特点惊人的相似,进而推测肿瘤的发生起源于干细胞,并提出肿瘤干细胞学说[2].近的科学研究发现[3],肿瘤之所以能具有无限增殖能力,其根本在于肿瘤细胞中占极少数量(0.01%~4%)的肿瘤干细胞,正是这类占极少数量肿瘤干细胞在机体中以极快的速度不断复制出有基因突变的细胞,使肿瘤细胞的数量、瘤体体积急剧扩张并侵入临近组织及迁徙至机体其他组织器官,导致组织器官正常功能的紊乱,并终导致机体死亡.本文对近几年来国内外对肿瘤干细胞的研究现况作一综述.
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Gleevec的开发历程及展望
诺华(Novartis)公司的抗癌药Gleevec(imatinib mesilate)的诞生过程可谓药物开发的又一典范.该药作为通过"关闭"一种可使细胞具有癌变与增殖能力的酶而起到抗癌作用[抑制bcr-abl阳性细胞系和费城染色体阳性的慢性髓样白血病(CML)细胞的增殖并诱导其凋亡].通过在基因水平研究癌细胞的增殖,Novartis的研究人员开发了以该分子为靶的化合物,其审批进程比同类药物快了一倍.
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靶向干扰CXCR7基因表达对肝癌(HCC)细胞增殖及凋亡的影响
目的 探讨CXCR7基因在不同肝癌细胞系及肝癌组织中的表达情况,并研究靶向抑制CXCR7基因表达对肝癌细胞增殖及凋亡的影响.方法 应用Western blot检测不同肝癌细胞系及10例肝癌组织中CXCR7蛋白的表达水平.采用短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰技术沉默HCCLM3与MHCC97L细胞中CXCR7基因的表达,分别采用Western Blot和qRT-PCR检测shRNA的靶向沉默效果.通过CCK-8增殖实验与Annexin V-FITC/PI细胞双染色研究CXCR7抑制对HCCLM3与MHCC97L增殖及凋亡的影响.结果 CXCR7表达水平与肝癌细胞的恶性程度呈正相关,肝癌组织中CXCR7表达水平较癌旁显著升高.实验成功构建了9个慢病毒表达载体,其中CXCR7 shRNA-566序列干扰效率高.增殖实验显示干扰表达组细胞生长速度受到明显抑制(P<0.05);流式细胞仪分析显示干扰CXCR7表达可诱导细胞凋亡的发生.结论 CXCR7表达水平与肝癌恶性程度呈正相关,靶向干扰CXCR7表达可抑制细胞的增殖能力,诱导细胞发生凋亡.
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低氧暴露下血管内皮生长因子高表达与血脑屏障通透性改变的关系
血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是1989年Ferrara等在牛垂体星形胶质细胞体外培养液中首先分离并纯化出的一种糖蛋白.由于它具有很强的促血管内皮细胞分裂增殖能力,并能增强毛细血管的通透性,故又称为血管通透因子(vascular permeability factor,VPF).多
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血管紧张素Ⅱ在心肌纤维化形成中的作用
心脏是由心肌细胞和几种非心肌细胞(成纤维细胞、平滑肌细胞和内皮细胞)构成的,非心肌细胞约占心脏细胞总数的三分之二,其中90%以上是成纤维细胞,它是合成和分泌细胞外基质的主要细胞.虽然婴儿出生后心肌细胞立即丧失增殖能力,但非心肌细胞仍然增殖,甚至在成人心脏也如此….心肌纤维化有多种分型,大多根据有无心肌细胞坏死和瘢痕出现,而分为修复性心肌纤维化和反应性心肌纤维化.在心肌纤维化的发生发展过程中,血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的作用是非常重要的.
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重视间充质干细胞研究,推动重要脏器功能的修复与重建
干细胞作为形成机体各种组织器官的始祖细胞,在特定条件下具有自我复制和多向分化能力[1].间充质干细胞(mesenchvmal stem cells,MSCs)是干细胞研究的一个重要分支,先在骨髓中被发现,因此被统称为骨髓间充质干细胞(BMSCs),后来相继在脐带等多种结缔组织和器官间质中被发现.BMSCs具有强大的增殖能力和多向分化潜能,具有免疫调节及免疫重建功能,并且来源方便,易于分离、培养、扩增和纯化,经多次传代扩增后仍具有干细胞特性,不存在免疫排斥.
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神经干细胞——神经生物学的新视点
随着神经生物学的深入发展,发现成体神经系统组织可以再生,在中枢神经系统中的某些特殊部位存在着一些具有分裂增殖能力和多项分化潜能的细胞,其作用类似于造血干细胞,被命名为神经干细胞(NSC).其将通过移植或替代的方法为神经系统损伤或变性疾病患者带来福音.
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OFCD牙根过度发育机制初探
目的:初步探讨眼面心牙综合症(oculo-facio-cardio-dental syndrome,OFCD)患者牙根过度发育的机制.方法:分别取OFCD患者和正常人根尖牙乳头干细胞,通过MTT法检测增殖能力、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)试剂盒法检测ALP活性、Western Blot检测牙本质涎蛋白(dentin sialoprotein,DSP)和核心结合因子(runt-related transcription factor 2,Runx2)的表达量.结果:OFCD患者根尖牙乳头干细胞的增殖活性、ALP活性、DSP和Runx2蛋白表达量均高于正常人来源的根尖牙乳头干细胞.结论:根尖牙乳头干细胞的增殖及成牙成骨能力增强可能是导致OFCD患者牙根过度发育的原因.
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英文文摘
1.香豆素类衍生物蛇床子素对人牙周膜和颌骨骨髓间充质干细胞膜片成骨性能的影响(英)/Gao LN…//Biomateri-als.-2013,34(38).-9937-9951
细胞膜片工程是一种无支架的过渡性方法,可在临床前和临床试验中改善由间充质干细胞介导的外伤或病理性损伤牙周组织的再生。然而,细胞膜片生产的佳策略还有待确定。本研究是探讨蛇床子素(一种香豆素类衍生物,从中药中提取得到)对人牙周膜干细胞(PDLSCs)及颌骨骨髓间充质干细胞(JBMMSCs)的细胞膜片形成和成骨性能的生物学影响。我们将匹配患者的 PDLSCs和 JBMMSCs进行分离,通过评价两种细胞类型的细胞增殖能力和碱性磷酸酶(ALP)活性,筛选出细胞培养中合适的蛇床子素浓度。接着,通过评价各类型细胞的胞外基质(ECM)蛋白的生成及成骨相关基因的表达量来选择蛇床子素诱导各类型细胞膜片形成的佳刺激方式。此外,将优化后的 PDLSC 和JBMMSC 膜片移植于裸鼠皮下,以评估其异位骨再生的能力。结果表明:尽管4组中不同蛇床子素浓度对 JBMMSCs的增殖影响无差异(P>0.05),10-5 m/L 浓度的蛇床子素能显著提高 PDLSCs 和 JBMMSCs 的增殖能力(P<0.05),10-5 m/L浓度的蛇床子素是提高两种细胞 ALP 活性的佳浓度。根据细胞外基质蛋白(I 型胶原酶、整合素β1和纤连蛋白)的生成及成骨基因(ALP,RUNX2和 OCN)的表达情况,在 PDLSCs整个培养阶段(10 d)或 JBMMSCs 培养早期(前3 d),加入10-5 m/L浓度蛇床子素进行刺激,是蛇床子素作用于细胞膜片形成的有效给药方式(P <0.05)。体内移植结果表明蛇床子素介导的 PDLSC 和JBMMSC 膜片,较无蛇床子素干预组形成更多新骨(P<0.001)。此研究表明适当浓度和给药方式的蛇床子素刺激可增强 ECM生成,并显著影响细胞膜片工程中的细胞行为。 -
磷酸钙骨水泥凝固初期的钙磷降解规律探索及对RAW264.7细胞增殖影响的研究
目的 探索磷酸钙骨水泥(CPC)凝固初期的钙磷降解规律及其浸提液对细胞增殖的影响.方法 将CPC初凝块浸置于DMEM培养液中浸提,在1h、2h、3h、6h、12 h、1d、2d、3d时进行换液并收集液体,用全谱直读型电感耦合等离子体发射光谱仪检测浸提液中钙、磷的含量.将RAW264.7单核巨噬细胞分别培养于DMEM培养液、DEME培养液+CPC初凝块(CPC组),通过甲基四唑基噻唑法检测浸提液对细胞增殖的影响.结果 在DMEM完全培养基浸提实验中,磷离子浓度在1h内达到析出高峰,其浓度为(4.380±0.019) mmol/L,随后析出量显著降低,2h磷离子浓度为(1.944±0.109)mmol/L(P<0.05).钙离子析出呈现缓慢增加的过程,6h时达到高峰,浓度为(1.590±0.064) mmol/L,随后逐渐降低.在细胞增殖实验中,CPC组细胞的相对增殖率在1d时低,为67.23%,在7d时达到高值95.93%.结论 CPC凝固初期周围离子浓度波动较大,随着换液以及固化完成,离子浓度逐渐稳定.CPC浸提液在第1天时细胞相对增殖率较低,随后逐渐恢复,与空白对照组对RAW264.7细胞增殖的影响无明显差别.
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肝细胞核因子4α抑制大鼠肝癌细胞增殖、侵袭能力和新生血管生成相关基因表达
目的:研究肝细胞核因子4α(hepatocyte nuclear factor 4α,HNF4α)在体内、体外实验中与大鼠肝癌新生血管生成相关基因表达之间的相互关系.方法:将过表达HNF4α腺病毒转染CBRH-7919细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖效应,Transwell法检测细胞侵袭能力,RT-PCR和Western blot检测血管生成素2(angiopoietin-2,Ang-2)、血管内皮生长因子(vascular endothelial grouth factor,VEGF)的表达情况.体内试验建立肝大部切除模型(70%),分别在残肝上注入CBRH-7919细胞(空白组)或转染空载体腺病毒CBRH-7919细胞(阴性对照组)或转染过表达HNF4α腺病毒的CBRH-7919细胞(实验组).4周后处死大鼠,通过免疫组化来观察肝标本Ang-2、VEGF的表达情况.结果:转染过表达HNF4α腺病毒的CBRH-7919细胞增殖能力和侵袭能力较空白、阴性对照组均明显抑制(P<0.05);实验组Ang-2、VEGF在基因、蛋白水平表达较空白、阴性对照组均明显抑制(P<0.05).体内实验大鼠肝脏组织免疫组织化学切片显示实验组Ang-2、VEGF蛋白表达水平较空白、阴性对照组均明显抑制(P<0.05).结论:HNF4a可以抑制大鼠肝癌7919的增殖、侵袭能力,并且抑制肝癌新生血管生成相关基因Ang-2、VEGF的表达.
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组织工程骨的研究与应用
骨组织工程研究的目的是为了将细胞和材料构建成工程骨用作骨移植替代材料.骨髓基质干细胞作为种子细胞的培养技术较为成熟,基因转移技术的应用使得其分化增殖能力得到增强,更利于骨组织的再生.现有多种人工合成或天然的支架材料均未能达到理想的要求,需应用新技术工艺对其进行修饰和改性以降低免疫原性,增强细胞在支架材料上的吸附、分化、增殖能力,并在工程骨构建过程中引入生长因子,利于新骨形成.组织工程骨初步进入临床应用取得了良好的效果,并将逐步实现产品产业化生产.
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高浓度葡萄糖对牙周膜干细胞成骨分化能力的影响
目的:观察高浓度葡萄糖刺激下牙周膜干细胞(PDLSCs)的增殖能力和成骨分化能力。方法组织块法体外培养非糖尿病患者PDLSCs,分别用0mg/L(正常对照组)、1100mg/L(低糖组)、4500mg/L(高糖组)浓度葡萄糖刺激,MTT法检测PDLSCs增殖能力,矿化诱导后茜素红染色观察矿化结节形成,实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测Runt相关转录因子2(Runx-2)、碱性磷酸酶(ALP)和I型胶原(Col-1)成骨相关基因表达。结果 MTT法检测显示高糖组OD值较低糖组和正常对照组低(P<0.05);21天成骨诱导后,高糖组矿化结节面积少于低糖组和正常对照组(P<0.05, P<0.01);成骨诱导期间,高糖组ALP、Runx2和Col-1诱导前后相对倍增数低于低糖组和正常对照组(P<0.05,P<0.01)。结论高浓度葡萄糖抑制PDLSCs增殖能力和成骨分化能力。
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肿瘤细胞周期中Cyclin E的失调节
细胞周期调控机制紊乱是细胞增生失控从而导致癌变的重要原因.Cyclin E作为CDK2的一个正向的调节亚单位,它在正常细胞的S期(S phase)有着重要的启动作用.曾经认为cyclin E的过度表达可以加速细胞周期,异常提高的细胞增殖能力而造成肿瘤发生.随着研究的深入,对于cyclin E及CDK2有了新的认识,并认为是cyclin E的失调节(Deregulation of cyclin E)导致细胞周期中染色体的不稳定性(chromosome instability,CIN),从而造成肿瘤发生.
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细胞因子诱导的杀伤细胞对胆囊癌细胞株GBC-SD杀伤活性的影响
目的 研究脐血单个核细胞体外多向诱导分化为LAK,CD3AK,CIK细胞及体外对胆囊癌细胞株GBC-SD杀瘤活性的变化.方法 采用IL-2刺激诱生LAK细胞;用CD3单抗和IL-2刺激诱生扩增CD3AK细胞;加入IFN-γ,24 h后加入IL-1,CD3单抗,IL-2刺激诱生CIK细胞,观察它们的扩增情况,并分析其相互关系;取培养的CIK细胞用流式细胞仪分析表型;用MTT法以胆囊癌细胞株GBC-SD为靶细胞,分组测定LAK,CD3AK,CIK细胞的杀伤活性.结果 CD3AK和CIK细胞的扩增能力远大于LAK细胞(P<0.05).CIK细胞和CD3AK相比,在前期无明显差异,至第20天左右时CIK细胞的扩增倍数显著高于CD3AK(P<0.05).流式细胞仪分析结果显示CIK细胞培养后,其主要效应细胞CD3+ CD56+细胞较培养前显著增加(P<0.05),CD8+细胞也较培养前显著增加(P<0.05).CD3AK和CIK细胞对胆囊癌细胞株GBC-SD的杀伤活性均显著高于LAK细胞(P<0.05),而CIK细胞杀伤活性又强于CD3AK细胞(P<0.05).结论 CIK细胞具有更高的扩增能力和更强的杀伤活性,是肿瘤过继免疫治疗中更为有效的杀伤效应细胞.
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骨髓间充质干细胞在骨科中的应用研究进展
在骨髓基质中存在一种非造血系的干细胞称为间充质干细胞(bone marrowderived mesenchymal stem cells简称BMSCs).在不同的理化环境和细胞因子的诱导下,BMSCs具有可分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌腱细胞、肌管细胞、肌肉细胞甚至神经元样细胞,即多系分化潜能,且分化后各种组织细胞有很强的增殖能力.
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药物介导小鼠胚胎干细胞体外定向分化为心肌细胞
胚胎干细胞(embryonic stem cells, ES细胞)具有体外不分化的无限增殖能力,当处于合适的培养条件下,可定向分化形成多种单一的细胞.本研究利用ES细胞的这种特性,以小鼠ES细胞作为生物测试载体,采用特定的药物改变其培养微环境,经过约13 d培养,先后分两批定向分化出30多个具有自律性搏动的心肌细胞团.其搏动频率有差异,范围在80~130次/min之间,各细胞团搏动的节律非常有规则,以搏动频率与节律作为评价指标,定向分化成功率达80%以上.
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肝癌干细胞标志物的研究进展
目前肿瘤干细胞(tumor stem cells,TSCs)已成为肿瘤研究领域的主要热点之一,1997年Bonnet等[1]在急性粒细胞白血病中首次证实了TSCs的存在,以后在乳腺癌,结直肠癌等其他实体肿瘤中也有发现.其具有自我更新,不断分化和恶性增殖能力,并且维持着肿瘤的生长;通过裸鼠皮下种植实验可以产生具有原发肿瘤特征的二/三级肿瘤;还具有逃避常规疗法如放化疗的能力.
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非对称性二甲基精氨酸对内皮生长晕细胞生物学功能的影响
目的 观察非对称性二甲基精氨酸(ADMA)对内皮生长晕细胞(EOC)及其生物学功能的影响.方法 分离脐血中单个核细胞,采用贴壁培养法培养EOC,以免疫细胞化学染色及荧光染色法鉴定其内皮细胞特性.以10μmol/L ADMA及配制ADMA的溶剂(含0.5 % DMSO的EBM-2培养基),分别与第二代细胞孵育72h,检测并对比细胞的凋亡率、增殖能力及血管生成能力.结果 免疫细胞染色后可见细胞表面VIII因子相关抗原、CD34以及Flk-1均阳性表达,DiI-ac-LDL和FITC-UEA-Ⅰ荧光染色后可见双染色阳性细胞均为正在分化的EOC.ADMA组细胞凋亡率[(5.96±0.12)%]显著高于正常组[(1.48±0.03)%](P< 0.01),而细胞增值活性及血管生成活性(0.27、0.02、8.25、0.96)均明显弱于正常组(8.25、0.96、16.25、1.71)(P<0.05或0.01).结论 ADMA能促进EOC凋亡,抑制其增值活性及血管生成活性,其对EOC细胞功能的损伤作用可能是通过氧化应激机制实现的.
关键词: 内皮生长晕细胞 非对称性二甲基精氨酸 氧化应激 增殖能力 成血管能力