CD137信号通过抑制自噬小体与溶酶体融合促进载脂蛋白E-/-小鼠斑块钙化形成
摘要: 目的 探讨CD137信号是否通过抑制自噬小体与溶酶体融合促进动脉粥样斑块钙化的形成.方法 (1)体内实验:分别采用激动型或抑制型CD137抗体激动或抑制CD137信号,将15只6~8周龄载脂蛋白(Apo)E-/-小鼠分为3组(每组5只):对照组(腹腔注射IgG2b 200μg),CD137激动组(腹腔注射激动型CD137抗体200 μg),CD137抑制组(腹腔注射抑制型CD137抗体200 μg,24 h后注射激动型CD137抗体200 μg).(2)细胞实验:采用组织块贴壁法原代培养小鼠血管平滑肌细胞,实验分为3组:对照组,CD137激动组(激动型CD137抗体10 μg/ml),CD137抑制组(预孵抑制型CD137抗体10μg/ml 60 min后+激动型CD137抗体10 μg/ml).细胞及斑块钙化采用von Kossa染色,免疫组织化学染色检测斑块中LC3B、Beclin 1及p62蛋白表达水平.采用Western blot检测骨形成蛋白-2(BMP-2)、Runx2、LC3Ⅱ/Ⅰ及p62蛋白表达水平,荧光显微镜观察自噬流,透射电镜观察自噬小体形成.结果 (1)体内实验结果:CD137激动组Apo E-/-小鼠斑块钙化面积比率大于对照组[(3.01±0.45)%比(0.27±0.06)%,P<0.01],而CD137抑制组斑块钙化面积比率少于CD137激动组[(1.23±0.39)%比(3.01±0.45)%,P<0.05].免疫组织化学染色结果显示,CD137激动组及抑制组自噬早期标记蛋白LC3B、Beclin 1表达水平均高于对照组,激动组更高(P<0.05);同样CD137激动组晚期标志蛋白p62表达水平高于CD137抑制组(P<0.05).(2)细胞实验结果:CD137激动组和抑制组自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ比值及p62表达水平高于对照组(P<0.01),激动组p62蛋白表达水平高于抑制组(P<0.05).细胞钙化诱导实验中,CD137激动组BMP-2及Runx2蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.01),而CD137抑制组BMP-2、Runx2蛋白表达水平低于CD137激动组(p<0.05).结论 激动CD137信号能抑制自噬小体与溶酶体融合从而促进Apo E-小鼠动脉粥样斑块钙化形成.
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