中华口腔医学研究（电子版）杂志
Chinese Journal of Stomatological Research(Electronic Edition) 중화구강의학구잡지（전자판）
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脂肪间充质干细胞条件培养基及其外泌体促成骨作用的体外研究
目的 研究大鼠脂肪间充质干细胞(ASC)条件培养基及其外泌体的体外促成骨作用.方法 分离培养原代大鼠ASC和骨髓间充质干细胞(BMSC)并进行鉴定;超速离心法收集/去除条件培养基中的外泌体,采用透射电镜法及粒径分析法鉴定所获取的外泌体;细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测其对细胞增殖的影响;Transwell检测其对细胞迁移的影响;碱性磷酸酶(ALP)活性实验和实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测其对成骨的影响.SPSS 20.0软件、Bonferroni检验进行统计学分析.结果 实验所获取的原代BMSC和ASC符合间充质干细胞鉴定标准.透射电镜及粒径分析结果表明所获取的外泌体具有典型的外泌体形态特征.CCK-8实验表明培养7 d后,各处理组中A450值存在差异(F=157.74,P=0.001),BMSC增殖条件培养基组A450值(2.71 ± 0.15)高于对照组(1.95 ± 0.11);去外泌体组的A450值(2.28 ± 0.34)低于条件培养基组.Transwell实验结果表明,培养24 h后各处理组中的迁移细胞数存在差异(F=46.79,P=0.001),条件培养基组迁移细胞数(51.6 ± 1.3)高于对照组(28.6 ± 1.4),去外泌体组迁移的细胞数(37.2 ± 2.2)低于条件培养基组.ALP活性实验结果表明,培养7 d后各处理组中的ALP活性存在差异(F=78.43,P=0.001),条件培养基组ALP活性为(310 ± 11),高于对照组(200 ± 24),去外泌体组ALP活性为(240 ± 19)低于条件培养基组.实时荧光定量PCR检测成骨相关基因的表达,各处理组中的基因表达存在差异(FALP=32.30,PALP=0.001;FRUNX2=26.78,PRUNX2=0.001).结论 成骨诱导后大鼠ASC条件培养基及其中的外泌体能够有效的促进BMSC增殖、迁移和成骨向分化,具有体外促成骨作用.
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白色念珠菌烯醇化酶诱导产生中性粒细胞外网
目的 通过重组白色念珠菌烯醇化酶(enolase),研究其对人中性粒细胞的作用.方法 采用分子克隆法,构建质粒、克隆、表达、纯化白色念珠菌重组enolase,密度梯度离心法提取人中性粒细胞,通过2,7-二氯二氢荧光素二醋酸酯(DCFH-DA)法、Sytox green染色和免疫荧光观察白色念珠菌重组enolase(500 nmol/L)对人中性粒细胞的刺激作用.中性粒细胞加入白色念珠菌SC5314(中性粒细胞:白色念珠菌=5:1)作为阳性对照组(SC5314组),未加刺激的作为阴性对照组.采用单因素方差分析(One-Way ANOVA)及Tukey′s检验对数据进行统计分析.结果 成功得到重组enolase,分子量为46 kDa.重组enolase可以刺激人中性粒细胞产生细胞内活性氧(ROS), enolase组与SC5314组产生ROS的量均无明显差异.Sytox green对胞外DNA定量及免疫荧光观察,均显示重组enolase可以刺激人中性粒细胞产生中性粒细胞外网(NETs).NETs定量结果显示, enolase组[(11.0 ± 2.5)%]与SC5314组[(12.4 ± 2.0)%]在2 h时无明显差异(F=6.13,P=0.0886),在4 h时enolase组[(22.2 ± 2.0)%]显著低于SC5314组[(31.4 ± 3.1)%],差异有统计学意义(F=9.745, P=0.0370).结论 白色念珠菌enolase可以诱导人中性粒细胞形成NETs.
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实时荧光定量PCR法检测口腔鳞状细胞癌组织和癌旁组织中幽门螺杆菌核酸
目的 了解口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织和癌旁组织中幽门螺杆菌(Hp)的感染情况.探讨Hp与OSCC发生、发展的相关性.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测37例OSCC患者的癌组织和癌旁组织和32例正常口腔黏膜组织中的Hp核酸,并对实时荧光定量PCR阳性产物进行DNA测序分析.结果 37例OSCC患者的癌组织和癌旁组织中Hp核酸阳性9例(24.32%),正常口腔黏膜组织均为阴性,两者差异有统计学意义(χ2=6.935,P=0.008).在9例Hp核酸阳性的OSCC患者样本中,有8例癌旁组织检出Hp核酸,2例癌组织检出Hp核酸,差异有统计学意义(P=0.015).结论 部分OSCC组织和癌旁组织存在Hp感染,是否与OSCC的发生、发展存在相关性需进一步研究.
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不同电动牙刷对邻面菌斑生物膜的影响
目的 研究体外模型中不同运动模式和不同频率的电动牙刷对邻面菌斑生物膜的影响.方法 培养变异链球菌(S.mutans)、血链球菌(S.sanguis)和内氏放线菌(A.naeslundii)形成三菌种生物膜.实验分为4组,其中3组分别用高频率声波型电动牙刷、振动旋转型电动牙刷和低频率声波型电动牙刷在体外模型中对邻面生物膜进行非接触去除,另1组为对照组,不处理.结晶紫吸附实验半定量计算各组邻面生物膜去除量,激光共聚焦扫描显微镜观察菌斑生物膜,Comstat 2.1软件测量生物膜的总生物量、平均厚度、平均扩散距离.单因素方差分析及LSD-t检验对数据统计分析.结果 结晶紫吸附实验结果显示,高频率声波型组的生物膜去除量(0.40 ± 0.08)大于振动旋转型组的生物膜去除量(0.24± 0.09),差异有统计学意义(t=4.289,P<0.001),同时也大于低频率声波型组的生物膜去除量(0.24 ± 0.05),差异有统计学意义(t=4.407,P<0.001).高频率声波型电动牙刷组的生物膜总生物量[(7.54 ± 1.35)μm3/μm2]小于振动旋转型电动牙刷组[(11.86 ± 1.56)μm3/μm2]和低频率声波型电动牙刷组[(11.84 ± 1.42)μm3/μm2],差异有统计学意义(t振动旋转型组=3.373,P振动旋转型组=0.005;t低频率声波型组=3.215,P低频率声波型组=0.007).高频率声波型电动牙刷组的生物膜平均扩散距离[(0.23 ± 0.02)μm]小于振动旋转型电动牙刷组[(0.76 ± 0.10)μm]和低频率声波型电动牙刷组[(0.71 ± 0.13)μm],差异有统计学意义(t振动旋转型组=2.852,P振动旋转型组=0.014;t低频率声波型组=2.470,P低频率声波型组=0.028).结论 在体外模型中,相比振动旋转型电动牙刷和低频率声波型电动牙刷,高频率声波型电动牙刷可更高效去除邻面菌斑生物膜,降低生物膜密度.
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前扣带回皮质注射钙调磷酸酶对大鼠牙移动疼痛的镇痛作用及机制
目的 探索前扣带回皮质(ACC)注射钙调磷酸酶(CaN)溶液对实验性牙移动大鼠的镇痛作用及机制.方法 将60只200~250 g SD大鼠采用随机数字表法分为4组(假处理组10只、单纯加力组10只、0.9%氯化钠溶液组20只、CaN溶液组20只),分别给予建立大鼠正畸牙移动模型不加力、建模并加力、加力并注射0.9%氯化钠溶液、加力并注射CaN溶液的处理,观察比较ACC埋管前、建模前、建模后2d、给药后30min、2h、4h、24h、3d、5d、7d大鼠挠嘴时间及面部表情评分(RGS)来评价疼痛状态,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测ACC区脑组织α-氨基羟甲基异恶唑丙酸(AMPA)受体亚基GluA1的磷酸化情况及磷酸化蛋白激酶A(pPKA)、磷酸化蛋白激酶Cγ(pPKCγ)的表达变化.应用SPSS 23.0软件进行统计分析.结果 建模后2 d,假处理组和单纯加力组的平均挠嘴时间分别为(43 ± 9)、(158 ± 21)s,RGS值分别为19 ± 3、53 ± 6.与假处理组相比,单纯加力组疼痛行为显著增加(t挠嘴=15.876,P挠嘴<0.001;tRGS=16.250,PRGS<0.001),ACC区pGluA1-831和pPKCγ表达增加,差异具有统计学意义(t831=3.060,P831=0.013;tPKCγ=2.831,PPKCγ=0.011).ACC区给药后2、4、24 h,CaN溶液组的挠嘴时间分别为(64 ± 26)、(67 ± 18)、(93 ± 21)s,相比于0.9%氯化钠溶液组的(147 ± 31)、(136 ± 29)、(119 ± 30)s显著减少;同时给药后30 min、2 h、4 h、24 h、3 d,CaN溶液组的RGS值相比于0.9%氯化钠溶液组亦显著减少,差异均有统计学意义.给药后2 h,ACC区pGluA1-831和pPKCγ表达量减少,差异具有统计学意义(t831=7.916,P831<0.001;tPKCγ=3.230,PPKCγ=0.005).结论 大鼠正畸牙移动疼痛引起AMPA受体亚基GluA1在Ser831位点磷酸化增加,其可能由蛋白激酶Cγ介导.CaN溶液可通过引起GluA1去磷酸化而缓解正畸牙移动疼痛.
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载银氧化石墨烯对变异链球菌生长及生物膜形成的影响
目的 探讨载银氧化石墨烯(GO/Ag)纳米复合物对变异链球菌(S.mutans)生长及生物膜形成的抑制作用.方法 应用梯度稀释法检测GO/Ag、氧化石墨烯(GO)、纳米银(AgNPs)对变异链球菌的小抑菌浓度(MIC);菌落形成单位计数法比较GO/Ag、GO、AgNPs对变异链球菌的抑制作用;采用结晶紫染色法和XTT法测定变异链球菌24 h生物膜的生成量和活性;激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)观察生物膜形态和计算24 h生物膜的活菌比例.数据以单因素方差分析(One-Way ANOVA)和LSD-t检验进行统计分析.结果 GO/Ag对变异链球菌的MIC为0.16 mg/mL.0.64 mg/mL GO/Ag对变异链球菌的抑菌率为(82.90 ± 4.87)%,与对照组间的差异有统计学意义(t=30.804,P<0.001).而GO和AgNPs材料浓度提升至2.56 mg/mL时,肉眼观察细菌仍未见明显减少.在0.16 mg/mL GO/Ag浓度下,变异链球菌生物膜生成量和活性的减少率分别为(25.12 ± 0.01)%和(38.90 ± 3.42)%,活菌比例为(42.76 ± 19.48)%,与空白对照组间的差异均有统计学意义(t生成量=7.274,P生成量<0.001;t活性=7.765,P活性<0.001;t活菌比例=10.412,P活菌比例<0.001).结论 与AgNPs和GO相比,GO/Ag新型纳米复合物对变异链球菌的生长具有较好的抑制作用,并能抑制其生物膜形成.
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粪肠球菌脂磷壁酸对巨噬细胞自噬的影响
目的 通过研究粪肠球菌脂磷壁酸(LTA)对巨噬细胞自噬功能的影响,为后续进一步深入探讨顽固性根尖周炎的发病机制提供实验依据.方法 体外培养小鼠巨噬细胞系RAW 264.7,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测LTA的细胞毒性作用;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测LTA作用下巨噬细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、Beclin1的表达水平;实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测自噬相关基因LC3、Beclin1 mRNA表达水平的变化;构建稳定表达自噬双荧光慢病毒载体HBLV-mRFP-GFP-LC3-PURO的巨噬细胞系,激光共聚焦显微镜观察自噬情况;SPSS 20.0统计软件进行数据分析.结果 CCK-8结果表明,选用20 μg/mL LTA及其以下浓度处理巨噬细胞24 h均未见明显毒性作用(t=2.102,P=0.1106);Western blot结果表明,LTA刺激巨噬细胞后:LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值表达量(0.42 ± 0.04)与对照组(0.04 ± 0.02)相比显著提高,差异有统计学意义(F=14.25,P<0.001), Beclin1蛋白表达量(0.56 ± 0.11)与对照组(0.28 ± 0.08)相比呈上升趋势(F=3.459,P=0.0258),均存在剂量依赖效应;实时荧光定量PCR结果表明,LTA刺激巨噬细胞后,LC3基因表达水平(5.94 ± 0.85)与对照组(1.03 ± 0.28)相比显著提高(F=12.93,P<0.001);Beclin1基因表达水平(2.22 ± 0.21)与对照组(1.02 ± 0.28)相比呈上升趋势(F=6.036,P<0.001),存在剂量依赖效应;成功构建稳定表达HBLV-mRFP-GFP-LC3-PURO的巨噬细胞系,激光共聚焦显微镜下观察显示,LTA作用组自噬体形成量(58 ± 6)与对照组(18 ± 8)相比差异有统计学意义(F=12.36,P=0.0021).结论 粪肠球菌LTA可诱导巨噬细胞产生自噬,且存在剂量依赖效应.
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面动脉切断后近、远心端动脉压力的测定和意义
目的 研究面动脉切断后近、远心端动脉是否具有恒定的血压,其远心端动脉血压能否为皮瓣的存活提供足够的血流基础.方法 选择2017年3—7月中山大学孙逸仙纪念医院口腔癌患者25例(临床检查均已排除颈部淋巴结转移),所有患者术前告知此实验内容并同意接受此实验.于下颌骨下缘解剖充分暴露面动脉,并结扎沿途分支.于面动脉远心端距离下颌骨下缘下方约1 cm处剪断面动脉,置入动脉导针并连接动脉血压换能器,分别记录数值.此后结扎下唇动脉,观察血压变化情况,采用t检验评价面动脉近、远心端收缩压及舒张压两组数据间的差异性.结果 远心端收缩压平均值为(88.00 ± 17.46)mmHg(1 mmHg=0.133 kPa),远心端舒张压平均值为(60.33 ± 7.49)mmHg,近心端收缩压平均值为(113.36 ± 21.22)mmHg,近心端舒张压平均值为(68.80 ± 11.63)mmHg.远心端收缩压为近心端77.68%,远心端舒张压为近心端88.43%,近、远心端收缩压(t=10.210,P<0.001)及近、远心端舒张压(t=6.643,P<0.001),两者差异均具有统计学意义.结扎下唇后面动脉远心端血压无明显波动.结论 面动脉远心端的压力较近心端虽有所下降,但仍具有足够血压能够为组织瓣存活提供良好的血运.
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第一、二鳃弓综合征诊疗进展
第一、二鳃弓综合征的发病率在颌面部发育不全中位列第二,仅次于唇腭裂.它的发病机制并不明确,目前主要有基因学说、中胚层发育缺陷、镫骨动脉发育缺陷学说等,多数学者倾向于镫骨动脉发育缺陷学说.其临床表现包括下颌骨发育不全、眼眶、耳、神经、肌肉、软组织异常等,甚至还包括颌面部以外的发育不全.其表型差异较大,目前对于第一、二鳃弓综合征的临床诊断并没有一个标准,多依靠临床表现进行诊断.它的综合分型多采用OMENS分型法,近来又增加一些改良的OMENS+分型.第一、二鳃弓综合征的治疗需要多学科综合序列治疗.本文概述第一、二鳃弓综合征的发病机制、临床表现、分型、诊断与鉴别诊断、临床治疗方法,为该疾病的治疗提供帮助.
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石墨烯及其衍生物作为基因载体的研究进展
基因组学和基因治疗的快速发展为许多难以治愈的疾病提供了解决方案,但如何设计安全有效的基因载体是阻碍其临床应用的关键.石墨烯及其衍生物因其独特的物理化学、热学、电学、光学等优良性能,被众多学者认为是一种具有潜在利用价值的基因载体.本文就石墨烯及其衍生物作为基因载体所具有的性能和常见的功能化类型进行综述.
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远程手术指导与示教系统在口腔修复教学中的应用
远程手术指导与示教系统是利用通讯技术和计算机多媒体技术,通过网络和高效的视音频编解码技术远程传输高清视音频图像的技术平台.将该系统应用于中山大学光华口腔医学院口腔修复学的教学中,对培养学生的学习兴趣、形成良好的临床思维习惯等均有促进作用,为临床教学的改革提供实践基础.
