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染色体数目异常相关因素的流行病学分析
染色体数目异常所致疾病主要是三体型患者的出生,其原因是由于生殖细胞成熟过程中的染色体不分离所致,少数为受精卵有丝分裂过程中染色体的不分离所致.染色体数目异常的发生受到多种因素的影响,其中,环境因素在染色体数目异常的发生中发挥着重要作用.
关键词： 染色体数目异常 流行病学 Logistic回归分析 -
自然流产胚胎绒毛中着丝粒蛋白-H的异常表达与染色体数目异常的相关性研究
目的 探讨自然流产胚胎绒毛中着丝粒蛋白-H (CENP-H)的异常表达与染色体数目异常的相关性. 方法 将96例早期自然流产患者的绒毛组织进行FISH检测,将其分为染色体正常组与染色体异常组,进而对两组患者CENP-H的mRHA及蛋白表达水平进行检测分析. 结果 96例早期自然流产患者绒毛标本的FISH检测成功率为100％,其中染色体正常53例,检出染色体异常43例,异常率为44.8％;其中常染色体数目异常26例,发生率为27.1％;性染色体数目异常10例,发生率为10.4％;性染色体合并常染色体异常3例,发生率为3.1％;三倍体及四倍体各2例,其发生率均为2.1％.相比染色体正常组,染色体异常组患者绒毛CENP-H基因mRNA及蛋白相对表达量均降低,两组差异有统计学意义. 结论 染色体数目异常自然流产胚胎绒毛中CENP-H的异常表达可能是引发胚胎染色体异常分离的因素之一.
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染色体数目异常自然流产胚胎有丝分裂关卡蛋白基因的研究
目的 讨染色体数目异常自然流产胚胎中有丝分裂关卡蛋白(hsMAD2)基因的功能.方法 分别用定量PCR和Westarn blotting在mRNA和蛋白水平检测染色体数目异常(实验组)和正常(对照组)的自然流产胚胎组织中目的 基因的表达;构建针对hsMAD2基因的shRNA表达载体,抑制胚胎细胞内源性hsMAD2基因的表达.用Western blotting和定量PCR方法评价shRNA的干扰效果;用MTT法测定细胞增殖率;流式细胞术检测细胞周期.结果 hsMAD2蛋白在实验组中的表达显著低于对照组.shRNA的重组质粒表达载体能明显抑制胚胎细胞中hsMAD2基因的表达.胚胎细胞转染有效干扰质粒48 h后,细胞增殖抑制率达58%.有效干扰质粒引起G0/G1期和S期细胞的明显降低,G2/M期细胞增多. 结论 hsMAD2基因表达下调可能在染色体数目异常的自然流产胚胎发生中起着很重要的作用,为寻找可靠的临床检测指标奠定了基础.
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染色体疾病的产前诊断
染色体病是指由染色体异常引起的疾病.据估计染色体异常占出生儿的1/150~1/120.产前诊断中常见的染色体异常有:染色体数目异常、染色体结构异常和微结构异常染色体疾病.据文献报道我国每年出生染色体异常的新生儿约10万人,在活婴儿中染色体异常者占0.3%[1].因此,普及染色体疾病的产前筛查和产前诊断,对降低出生缺陷的发生有着非常重要的意义.
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无创伤性产前诊断胎儿染色体非整倍体的研究进展
染色体非整倍体异常是指细胞中个别染色体的增多或减少形成的染色体数目异常.产前诊断中常见的胎儿非整倍体异常有21-三体、13-三体、18-三体以及性染色体综合征等.染色体整倍体改变多导致流产,而非整倍体改变可以出生能存活的出生缺陷儿.因此,检测胎儿非整倍体异常是许多孕妇接受产前诊断的主要原因.
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21三体综合征合并染色体平衡易位t(5;8)一例
染色体是遗传物质基因的载体.人类有3～4万个基因,分别位于23对染色体上,组成24个基因连锁群[1],如果染色体数目或结构发生异常,则会导致基因群的增减或位置转移,扰乱遗传物质或基因间的平衡,而产生多种畸形或异常综合征.现已发现人类染色体数目异常和结构畸变有1万多种,已确定或报道的染色体综合征100多种.近,我们发现1例罕见的染色体异常核型,现报告如下.
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利用微卫星诊断早期自然流产绒毛组织染色体数目异常的研究
目的 运用微卫星(短串联重复序列,STR)结合的多重定量荧光PCR 检测61 例流产绒毛染色体数目异常,以评价它与传统经典的核型分析方法的关系.方法 首先利用多重荧光定量PCR 扩增48份无关个体DNA 样本中的常见发生数目异常的染色体上19个STR 位点和一个AMXY 位点,扩增产物经毛细管电泳.计算出各位点的杂合度和正常杂合子峰面积比值范围.再对61例自然流产组织中这些位点进行扩增,判断染色体数目异常情况.染色体核型分析结果做为对照诊断标准.结果 ①核型分析成功率为65.6%;多重荧光定量PCR 扩增成功率为98.3%.核型分析成功的40例样本,多重荧光定量PCR 全部扩增成功,其中38例结果与核型分析结果相一致,以细胞遗传学作为诊断标准,诊断的符合率为95%.②运用核型分析方法,新鲜标本核型分析成功率为80.4%;不新鲜或者坏死标本的成功率为20%,P＜0.001.运用STR PCR 方法,新鲜标本扩增成功率为100%;不新鲜或者坏死标本的成功率为93.3%,P＝0.246.③ AMXY 和DXS8090、DXS8094联合诊断性别的成功率可达97.9%.结论 结合STR 的多重荧光定量PCR 在诊断染色体数目异常中敏感性强,特异度高,可以做为细胞遗传学的补充.对于稽留流产和坏死变性的绒毛组织,STR PCR 也可以进行诊断.AMXY 和DXS8090、DXS8094可用来进行性别诊断.
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多重连接依赖性探针扩增技术在产前诊断中的应用
产前诊断是在遗传咨询的基础上,主要通过遗传学检测和影像学检查,对高风险胎儿进行明确诊断,通过对患胎的选择性流产达到胎儿选择的目的,从而降低出生缺陷率,提高优生质量和人口素质.多重连接依赖性探针扩增(MLPA)技术是在多重扩增探针杂交(MAPH)技术的基础上改进而来,基本原理是针对基因组内拷贝数变异(CNV)对可与样本DNA正确杂交并被连接酶连接的探针进行扩增和半定量分析,具有精确度高、重复性好、操作简便及通量大等特点.MLPA已广泛应用于染色体数目异常、遗传性疾病基因缺失重复、单核苷酸多态性、甲基化等多个研究领域等.随着MLPA不断被改进,目前已成为临床上常用的产前诊断工具之一,因此本文就其在产前诊断中的应用做一总结.
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FISH 技术检测稽留流产组织中染色体异常的临床研究
目的：探讨稽留流产胎儿组织细胞中染色体异常总发生率及异常种类和各种异常的发生率。方法：采用18号、X 和 Y 染色体着丝粒探针及13、16、21、22号染色体单一序列探针,对105例稽留流产胎儿组织进行FISH 检测。结果：49.5%的稽留流产是由胎儿染色体异常引起的；染色体异常的前3位为三倍体,16号染色体三体,X 单体,分别占染色体异常总发生率的32.7%、15.4%和15.4%；高龄组(≥35岁)和非高龄组(<35岁)异常染色体检出率分别为60.7%和36.7%,差异有统计学意义(P<0.05)；有自然流产史和无自然流产史者异常染色体检出率分别为51.9%和49.0%,差异无统计学意义(P>0.05)；妊娠≤12wk和妊娠>12wk者染色体异常率分别为60.9%和31.7%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论：稽留流产多由遗传基因缺陷引起,应用 FISH 技术检测流产胚胎,可以快速、准确发现较常见的染色体异常,为下一胎妊娠进行遗传咨询提供资料。
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应用荧光原位杂交技术检测停育胚胎或绒毛染色体数目异常
目的:使用荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)对停育胚胎染色体数目异常进行快速检测并评估其临床应用价值.方法:使用第13、18、21、X和Y5条染色体特异性的FISH探针对66例停育胚胎绒毛进行分析.结果:13、18、21、X和Y数目异常20例,占46.97％,正常例数35例,间异例数11例.在所有异常胚胎中性染色体异常占75％,其中Turner's Syndrome 45X(TS 45X)所占比例高与其他任何一种异常的发生率相比差异显著(P＜0.05).结论:FISH检测停育胚胎第13、18、21、X和Y数目异常是简单、快速和准确的诊断方法.
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唐氏综合征的产前筛查及诊断现状
唐氏综合征(Down syndrome,DS)又称21三体综合征或先天愚型,是由于21号染色体数目异常引起的常染色体病,属新发突变,而不是基因遗传病,新生儿发病率为1/700～1/800.临床表现为智力低下、精神体格发育迟滞,并伴有其他严重的先天缺陷,目前对此病尚无有效的治疗手段.因此在孕期能及早、准确地诊断是防止患儿出生的关键.本文就DS的产前筛查及诊断现状作一综述.
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自然流产胚胎染色体数目异常的临床研究
目的:探讨染色体数目异常与自然流产的关系及其影响因素.方法:采用荧光原位杂交技术对100例早期妊娠自然流产绒毛进行染色体数目检测,分析其与自然流产的关系.结果:100例绒毛标本中,染色体数目异常42例,占42.00％;嵌合体16例,占16.00％.常见的染色体异常是三倍体,占35.71％；其次为45,X和16三体,分别占16.67％和14.29％.高龄组(＞35岁)和非高龄组(＜35岁)异常染色体检出率分别为45.46％ (10/22)和41.03％ (32/78),差异无统计学意义(P＞0.05)；有自然流产史和无自然流产史者异常染色体检出率分别为42.55％(20/47)和41.51％ (22/53),差异无统计学意义(P＞0.05)；妊娠≤1O周和妊娠＞10周者染色体异常率分别为45.00％ (27/60)和37.50％ (15/40),差异无统计学意义(P＞0.05).结论:染色体异常是早期自然流产主要的原因,无论孕母年龄大小、既往有无自然流产史及无论孕周大小,本次发生自然流产者均有可能与染色体异常有关.临床医师应重视染色体的检查,以便为再次妊娠做好遗传咨询指导.
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FISH 技术对自然流产患者胎盘绒毛染色体数目的检测结果分析
目的：观察自然流产患者胎盘绒毛染色体数目及荧光原位杂交（ FISH）技术在染色体数目检测中的应用情况。方法收集42例不明原因自然流产患者的胎盘绒毛，采用FISH技术以 GLP13/GLP21、GLP16/GLP22、CSP18/CSPX/CSPY三组探针进行染色体数目检测。结果42例中检测出染色体数目异常18例（42．85％），其中三体型8例（19．04％）、三倍体3例（7．14％）、四倍体2例（4．76％）、单倍体5例（11．91％）；29例首次流产和13例复发性流产者中分别有11例（37．93％）、7例（53．85％）检测出染色体数目异常，两者比较， P＜0．05（χ2＝5．153）。结论自然流产者胎盘绒毛染色体数目异常率较高（尤以复发性流产者为著），FISH技术检测染色体数目有助于某些疾病的产前诊断。
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纺锤体检查点蛋白Cenp-E过低表达与肝癌细胞染色体异常的关系
目的:探讨纺锤体检查点蛋白E(Cenp-E)基因在肝癌细胞中的定位和作用,为进一步阐明肝癌细胞染色体数目异常的机理奠定基础.方法:利用FQ-PCR检测Cenp-E基因在用Nocodazole(诺考达唑)同时处理HepG-2细胞和LO2细胞中mRNA的表达水平.用间接免疫荧光技术观察Cenp-E蛋白在用Nocodazole(诺考达唑)同时处理HepG-2细胞和LO2细胞中的定位及表达.在LO2细胞中用RNAi技术干扰Cenp-E基因后,用FQ-PCR检测Cenp-E基因在干扰前后mRNA表达水平.并利用间接免疫荧光进一步评价干扰后的细胞功能情况.结果:Nocodazole处理前Cenp-E基因和蛋白在LO2和HepG-2细胞中表达无显著差异,处理后Cenp -E基因和蛋白在两种细胞表达都增高,但LO2细胞上调水平大于HepG-2细胞,差异具有统计学意义.间接免疫荧光结果显示Cenp-E蛋白主要定位细胞核内,并且在出现异常分裂的细胞核内Cenp-E蛋白的表达明显低于正常分裂的细胞核.在干扰Cenp-E后,间接免疫荧光显示干扰后的LO2细胞中出现核异常比例明显高于正常细胞.结论:Cenp-E过低表达可能是肝癌细胞染色体数目异常重要原因之一.
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染色体异常核型59例及其临床分析
染色体数目或结构异常所致的疾病称为染色体病.染色体核型分析是确诊染色体病的主要方法.自Caspersson等于1970年发表第一张人类染色体显带照片以及1971年巴黎国际命名会议以来,现已发现人类染色体数目异常和结构畸变3000余种,染色体病综合征100余个.
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荧光原位杂交技术检测176例稽留流产绒毛组织染色体数目异常
目的 探讨荧光原位杂交(fluorescence in suit hybridization,FISH)技术对于检测染色体数目异常的价值以及染色体数目异常与稽留流产的关系.方法 应用FISH技术对未经培养的176例稽留流产胎儿绒毛组织进行13、18、21、X、Y号染色体数目异常检测.结果 在176例稽留流产绒毛标本的分裂间期细胞核中共发现染色体数目异常47例(26.7％),染色体数目异常嵌合体94例(53.4％),总体异常率为80.1％(141/176).47例染色体数目异常者中,13、21、18三体合并XXX或XXY或XYY 13例,X单体13例,18三体5例,21三体8例,21、13双三体和13三体各3例,21单体和21多体各1例.94例染色体数目异常嵌合体中,13、21四体嵌合体为89例,其他异常嵌合体5例.结论 染色体数目的异常是导致稽留流产的重要因素.FISH技术是检测染色体数目异常简单、快速和准确的方法,有较高的临床应用价值.
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染色体微阵列技术在自然流产病因诊断中的应用
目的：探讨自然流产与染色体异常的关系以及染色体微阵列(chromosomal microarray analysis,CMA)技术在自然流产病因诊断中的应用价值。方法收集自然流产样本440例,对其进行 CMA检测。结果在440例流产样本中,成功检测417例,成功率为94.7%。染色体异常的样本为209例(50.1%),其中染色体数目异常129例(61.7%),结构异常40例(19.1%),嵌合体38例(18.1%),纯合子区域2例(1.0%)。结论相较于染色体核型分析,CMA 可为流产物检测提供更全面的信息,为患者的病因诊断和再生育风险评估提供指导。
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FISH检测染色体数目异常在胚胎停育患者中的应用
目的 探讨FISH检测染色体数目异常在胚胎停育患者中的应用.方法 选取102例胚胎停育患者,获取绒毛,对7种染色体(13、16、18、21、22、X、Y)行FISH检测,同期行细胞培养核型分析作为对照.结果 FISH检测共检出异常核型40例,异常率39.22％;对照法传统细胞培养染色体核型分析共检出异常核型43例,异常率46.74％.染色体异常中染色体数目异常占染色体异常93.02％,其中常染色体三体多见,占60.47％.结论:FISH技术可对胚胎停育绒毛组织进行及时、有效检测分析,做出遗传学诊断;FISH技术较传统细胞培养方法更加方便、快捷,对胚胎停育的病因研究更实用、有效,可作为细胞培养法染色体核型分析的有效补充.
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染色体数目异常滋养层细胞中CENP-I基因的的异常表达
目的:探讨人胚胎滋养层细胞中染色体数目异常与着丝粒特异性蛋白质CENP-I表达水平的相关性.方法:T-A克隆制备CENP-I、GAPDH定量PCR标准品;用Niz+-NTA亲和层析柱纯化CENP-I重组蛋白,免疫兔制备抗人CENP-I多克隆抗体;采用FQ-PCR和Western-blot检测23例染色体数目异常的滋养层细胞(实验组)和30例具有正常核型的滋养层细胞(对照组)中CENP-I mRNA和蛋白表达水平.结果:成功制备CENP-I、GAPDH FQ-PCR标准品,表达和纯化CENP-I重组蛋白,获得兔抗人CENP-I多克隆抗体;FQ-PCR和Western-blot结果显示CENP-I在实验组和对照组中均有表达,但实验组中CENP-I的表达水平明显降低(P<0.05).结论:CENP-I表达的降低可能是导致人胚胎滋养层细胞中染色体数目异常的原因之一.
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用荧光原位杂交技术检测唐氏综合征
目的:探讨用荧光原位杂交技术在检测唐氏综合征中的应用价值.方法:以Biotin标记的DSCR21q22.3探针与经处理的20例唐氏综合征患者标本外周血中期染色体及其间期细胞核进行原位杂交,统计杂交信号数量.结果:14例唐氏综合征患者出现3个杂交信号的细胞,染色体和间期细胞核杂交平均出现率分别为98.79%和98.46%,与染色体检测的结果一致;其余染色体核型检测为嵌合体的6例患者,染色体和间期细胞核中3个杂交信号细胞平均出现率分别为75.33%和73.50%,2个杂交信号细胞平均出现率分别为22.67%和21.33%.结论:荧光原位杂交技术检测唐氏综合征具有快速、敏感度高、信号强、背景低、直观安全等优点,故FISH技术在临床遗传病检测领域中具有重要的应用价值和发展前景.
