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肉桂、石韦内生真菌的分离纯化及抑菌性研究
采 用 组 织 块 分 离 法 从 肉 桂(Cinnamomum cassia Pres1)、石韦(Pyrrosia lingua(Thunb)Farwell)组织中分别分离得到7、24株内生真菌,以大肠杆菌(Escherichia coli)、肺炎球菌(diplococcus pneumoniae)、金 黄 色 葡 萄 球 菌 (Staphylococcus aureus)为供试菌种,对所有肉桂(Cinnamomum cassia Pres1)内生真菌、所有石韦(Pyrrosia lingua(Thunb) Farwell)内生真菌进行菌饼法抑菌试验,有抑菌效果的菌株继续进行滤纸片法抑菌试验,结果显示,肉桂3株内生真菌至少对1株测试病原菌有抑制作用,1株内生真菌对3株测试病原菌都有抑制作用;石韦12株内生菌至少对一株测试病原菌有抑制作用, 4株内生真菌对3株测试病原菌都有抑制作用.
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两种芦荟抑菌效果的比较研究
在偏碱性环境中有抑菌效果,且在pH=8.0时抑菌效果明显(抑菌圈直径大达到29 mm).结论:木立芦荟和中华芦荟均有不同程度的抑菌效果,外界环境条件也对两种芦荟的抑菌效果产生一定的影响.
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滤纸片法低温冷冻保存菌种的实验室应用
在微生物检验工作中,成功进行细菌菌种保存,对于菌株的分子生物学特征和耐药性变迁监测,以及医院感染病原学调查、新药研究等至关重要[1].实验室保存菌种的方法很多[2,3]、有些方法简单易行,不需要特殊设备,但经常移植菌种易发生变异或污染杂菌,又增加工作强度;有些需要冷冻干燥机、真空泵,全自动化生物分析仪等特殊设备[4,5].本文采用干燥滤纸片低温冷冻保存菌种[6]的方法,保存2年后将菌种复苏进行鉴定,取得理想效果.结果报告如下.
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湖北省1998年洪灾后肾综合征出血热监测报告
监测内容及方法(1)监测点的选择:在1998年受灾较严重的发病较高或历史上有过暴发和流行的县(市)(松滋、蕲春、江夏、通城、天门、监利、赤壁、公安、洪湖、石首).(2)鼠肺和血清来源:从调查点内外捕获鼠类,无菌取鼠肺组织放冷冻管内,置-20℃保存待检.同时用滤纸片法采鼠全血[1],作EHF抗体检测.肾综合征出血热(HFRS)病人恢复期血清、正常人血清,采自各监测点病人及各监测点正常人群.(3)监测时间:标本采集时间为1998年12月～1999年元月,人血清及鼠血、鼠肺由省卫生防疫站统一检测.(4)检测方法:采用直接、间接免疫荧光(IFAT)检测鼠肺抗原、鼠血抗体,由预防医科院流研所出血热室提供.
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氧化苦参碱体外抑菌活性的研究
目的 评估氧化苦参碱对条件性致病菌——大肠埃希菌的抑菌活性.方法 采用滤纸片法和96孔板法对氧化苦参碱的抑菌活性进行检测,根据不同浓度氧化苦参碱对大肠埃希菌的抑菌率,利用origin 75拟合标准曲线计算氧化苦参碱对大肠埃希菌IC50.结果 滤纸片法检测结果发现,256、128、64、32 mg/mL的氧化苦参碱对大肠埃希菌的抑菌圈大小分别为7.75、7.25、6.50和6.00 mm,而阳性对照5 000 IU/mL庆大霉素的抑菌圈大小为27.00 mm.96孔板法检测结果发现,氧化苦参碱对大肠埃希菌的抑制率均随用药剂量的增加抑制率增大,呈“S”型曲线.用药后6、12、24、48和72 h时氧化苦参碱的IC50值分别为27.27、26.81、24.75、20.29和17.O1 mg/mL.结论 氧化苦参碱对大肠埃希菌生长有抑制作用,其抑菌作用随氧化苦参碱用药作用时间的延长而增强,但抑菌活性较低.
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三种简易菌种保藏方法的效果比较
目的：寻找一种即简便又经济实用的菌种保存方法。方法：将菌种分别用采用鲜牛奶法、滤纸片法和CRYOBANK菌种保存管保存3、6、9、12个月后，进行复苏鉴定，比较保藏质量。结果：苛氧菌的长期保存应选用CRYOBANK菌种保藏管或鲜牛奶法，苛氧菌的短期保存及非苛氧菌的保存采用三种方法效果一致。结论：从经济实用的角度出发，鲜牛奶法和滤纸片法尤其适合于基层实验室，具有推广应用价值。
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灵芝发酵川芎产物的抑菌性试验
目的 研究川芎和灵芎菌质粗提液对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、青霉和黑曲霉供试菌的抑菌作用.方法 用水、75％乙醇、95％乙醇、乙酸乙酯和丙酮等5种溶剂分别对川芎和灵芎菌质(灵芝发酵川芎产物)进行提取,以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉和青霉5种菌作为供试菌,采用滤纸片法测定川芎和灵芎菌质粗提液对供试菌的抑菌作用,并用平板稀释法测定低抑菌浓度(MIC).结果 灵芎菌质的水和95％乙醇提取液对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的抑菌作用极显著优于川芎(P＜0.01);75％乙醇和丙酮提取液对大肠杆菌的抑菌作用极显著优于川芎(P＜0.01),对枯草芽孢杆菌的抑菌作用优于川芎(P＜0.05);灵芎菌质的95％乙醇提取液对青霉的抑菌作用极显著优于川芎(P＜0.01),丙酮提取液对青霉的抑菌作用优于川芎(P＜0.05);灵芎菌质的丙酮和乙酸乙酯提取液对金黄色葡萄球菌的抑菌作用显著优于川芎(P＜0.01).结论 灵芎菌质对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和青霉都具有不同程度的抑制作用且相对优于川芎.
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大孔树脂分离纯化陈皮黄酮工艺及其抑菌活性
目的 研究大孔树脂纯化陈皮黄酮工艺,并评价其抑菌活性.方法 考察5种大孔树脂(HPD-100、HP-20、AB-8、X-5、NKA-Ⅱ)对黄酮的静态吸附、解吸作用,绘制动力学曲线.以上样液pH值、体积流量、质量浓度,洗脱液(乙醇)体积流量、体积分数为影响因素,黄酮回收率为评价指标,单因素试验优化分离纯化工艺.然后,滤纸片法进行抑菌活性试验.结果 佳条件为HP-20大孔树脂,上样液pH值3.5、体积流量2 mL/min、质量浓度0.682 3 mg/mL,乙醇体积分数60％、体积流量2 mL/min,黄酮回收率64.95％,纯化后其含有量较纯化前提高了5.81倍.0.5、1 mg/mL黄酮对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌均有一定抑制作用,其中纯化后该成分对大肠杆菌效果显著,金黄色葡萄球菌次之,均优于茶多酚,但对枯草芽孢杆菌作用相对较弱.结论 HP-20型大孔树脂更适合分离纯化陈皮黄酮,纯化后该成分抑菌活性明显提高.
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家蝇抗菌物质诱导研究
为探讨家蝇抗菌物质诱导表达的规律,选取室内饲养的家蝇第10代三龄幼虫,采用2号昆虫针针刺体壁,每虫1针,针刺处理后,分别于第0、24、48、72小时记录幼虫活率.剪头法提取上述不同时间的血淋巴,金黄色葡萄球菌为指示菌,采用平板滤纸片法作抑菌试验,用于显示家蝇抗菌物质的诱导表达,以抑菌圈直径表示抑菌活力的大小.提取家蝇诱导后48小时的血淋巴,设置不同的血淋巴加样量实验组,记录不同加样量对金黄色葡萄球菌和溶壁微球菌的抑菌效果.
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蜂蜜对茶多酚抑菌作用的影响
目的 检测蜂蜜是否能够增强茶多酚的抑菌作用,以更好地了解蜂蜜和绿茶的保健功效,进而为口腔炎症、溃疡等疾病的治疗提供新思路和方法.方法 以革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌和革兰氏阴性菌大肠杆菌为研究对象,采用滤纸片法测定枣花蜂蜜或槐花蜂蜜对不同浓度的茶多酚抑菌作用的影响.结果 枣花蜂蜜或槐花蜂蜜与茶多酚混合液抑菌效果无明显差别,但是均比茶多酚的抑菌效果明显.结论 蜂蜜茶多酚混合物具有很好的抑菌作用,可以作为优良的天然保健品,并为某些炎症的治疗提供新思路.
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大黄酸金属配合物的抑菌活性研究
目的:合成大黄酸的三种金属配合物并对其结构进行表征,对比研究配体和配合物对三种细菌的体外抑菌活性大小.方法:在无水乙醇中合成了大黄酸的三种金属配合物,采用紫外光谱法,红外光谱法,核磁共振氢谱法对产物结构进行表征,确定了配合物的组成及结构.采用二倍稀释法测定了配合物的小抑菌浓度(MIC),采用滤纸片法测定了配体及配合物对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、大肠杆菌的抑菌活性大小.结果:合成的配合物经结构表征后,初步确定了其可能结构式为2分子大黄酸和1分子金属离子配位,抑菌活性测试结果表明,配合物的抑菌活性强于配体,其中大黄酸锰对于金黄色葡萄球菌以及大肠杆菌抑制作用都强,抑菌圈大小分别达到了23.3、20.5 mm;而大黄酸钴对肺炎链球菌抑菌活性强,抑菌圈达22.5 mm.二倍稀释法得出了配合物和配体的MIC值(小抑菌浓度),根据该值大小可知,配合物抑菌活性总体上强于配体,但也有少部分与配体相当.结论:大黄酸和金属离子形成配合物后,抑菌活性增强.
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采用滤纸片法检测细菌对诊断糖尿病足创面感染的意义
目的 评价采用滤纸片法检测细菌对诊断糖尿病足创面感染的意义. 方法 选取2014年7月—2015年7月在华中科技大学同济医学院附属梨园医院住院治疗且符合入选标准的糖尿病足溃疡患者18例,按德州大学糖尿病溃疡分级系统对糖尿病足溃疡创面进行分级,比较不同分级创面对应患者一般情况.分别取创面渗出液、创面组织,采用滤纸片法和组织活检法进行创面细菌检测.以组织活检法检测结果为对照,滤纸片法为待评价方法,检验2种方法检测结果的关联性、差异性、一致性.计算滤纸片法检测细菌的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确度.根据18例患者滤纸片法检测细菌的特异度和敏感度,绘制受试者工作特征(ROC)曲线,评价滤纸片法的检测效果.对数据行单因素方差分析、Fisher确切概率法检验.针对经组织活检法检出细菌的患者,对组织活检法与滤纸片法检出细菌数进行Pearson相关分析. 结果 (1)德州大学糖尿病溃疡分级1、2、3级创面对应患者间年龄、糖尿病病程、创面病程、创面面积、踝肱指数、糖化Hb、空腹血糖、血小板计数、红细胞沉降率、C反应蛋白、AST、血肌酐、尿素氮差异均无统计学意义(F值为0.029～2.916,P值均大于0.05),白细胞计数、ALT差异有统计学意义(F值分别为4.688、6.833,P＜0.05或P ＜0.01).(2)组织活检法检测结果显示患者中有6例未检测出细菌;12例检测出细菌,其中10例细菌数大于1×105个/g,2例细菌数未达到1×105个/g.滤纸片法检测结果显示患者中有8例未检测出细菌;10例检测出细菌,其中7例细菌数大于1×105个/g,3例细菌数未达到1 × 105个/g.滤纸片法与组织活检法检测细菌同时阳性患者有7例,同时阴性患者有8例,滤纸片法阴性而组织活检法阳性患者有3例,组织活检法阴性的患者中未出现滤纸片法阳性.2种方法检测结果存在方向性关联(P =0.004),即组织活检法结果阳性,滤纸片法结果也可能是阳性;2种方法检测结果不存在明显差异(P =0.250);2种方法检测结果一致性一般(Kappa=0.68,P=0.002).(3)滤纸片法检测细菌的敏感度为70％、特异度为100％、阳性预测值为1.00、阴性预测值为0 73、准确度为83.3％.18例患者滤纸片法检测细菌ROC曲线下总面积为0.919(95％置信区间为0～1.000,P=0.030).(4)组织活检法共检出13株细菌,其中鲍氏不动杆菌5株,金黄色葡萄球菌5株,铜绿假单胞菌、牛链球菌及鸟肠球菌各1株.滤纸片法共检出11株细菌,其中鲍氏不动杆菌5株,金黄色葡萄球菌3株,铜绿假单胞菌、牛链球菌及鸟肠球菌各1株.除金黄色葡萄球菌外,滤纸片法检测其余4种细菌的敏感度、特异度均为100％.滤纸片法与组织活检法检测鲍氏不动杆菌的一致性较好(Kappa=1.00,P ＜0.01),检测金黄色葡萄球菌的一致性一般(Kappa=0.68,P＜0.05).(5)滤纸片法与组织活检法检出创面细菌数总体无明显相关(r =0.257,P=0.419),其中2种方法检出德州大学糖尿病溃疡分级1、2级创面细菌数均显著相关(r值均为0.999,P值均为0.001),检出德州大学糖尿病溃疡分级3级创面细菌数无明显相关(r=-0.053,P=0.947). 结论 滤纸片法检测结果在确定是否存在细菌感染方面与组织活检法检测结果具有一致性,对诊断糖尿病足创面局部感染具有重要意义.
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青蒿素抗菌作用研究
目的:青蒿中有多种药用成分,其中的青蒿素具有抗菌、抗寄生虫、解热及促进免疫等作用.且毒性极低,无副作用,青蒿素是重要生理活性之一.所以研究青蒿素的抗菌作用具有重要意义.方法:用恒温搅拌法提取出青蒿素的样品,然后选用两种典型细菌菌株通过滤纸片法对青蒿素的抗菌作用进行了定性和定量研究.结论:青蒿素对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌均有抑制作用.且随着浓度逐渐增大抑菌作用也随之加强.
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松针提取物抑制马拉色菌活性成分的工艺研究
目的:对马尾松松针的提取物抑制糠秕马拉色菌活性成分的工艺研究.方法:通过纸片法测定其抑菌效果,并以抑菌效果为指标,采用单因素试验确定较佳提取工艺.结果:当提取溶剂为60％乙醇,提取温度为60℃,提取时间为150 min,料液比为1:20(g:mL),所得提取物的抑菌效果较佳.结论:通过对实验结果的分析,推测松针抑菌的活性成分可能是多糖和黄酮类.通过体外测试法表明了松针提取物抑制糠秕马拉色菌活性较为优质,抑菌作用比较良好,值得将其进行逐渐开发,加以利用.
