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补阳还五汤对大鼠缺血再灌注视网膜损伤的保护作用
目的 观察补阳还五汤[buyang huanwu(补阳还五)decoction,BYHWD]对大鼠缺血再灌注视网膜是否具有保护作用.方法 用升高眼内压的方法制作大鼠实验性视网膜缺血再灌注损伤模型.将30只大鼠随机分成对照组、缺血再灌注组和BYHWD治疗组.再灌注3天后,用体视学方法测量视网膜形态学改变,用末端脱氧核苷酸缺口标记和免疫组化方法观察视网膜细胞凋亡及bcl-2表达,比较观察BYHWD对大鼠缺血再灌注视网膜的影响.结果 BYHWD组视网膜损伤明显轻于缺血再灌注组,视网膜厚度改变不明显,内核层细胞稠密,视网膜节细胞排列较规整.BYHWD组大鼠视网膜节细胞层未见明显的凋亡细胞,bcl-2表达明显增强,阳性反应集中在内界膜处和视网膜神经节细胞周围.结论 补阳还五汤复方可通过调节凋亡基因bcl-2的表达,阻断损伤后视网膜节细胞的凋亡;补阳还五汤对大鼠缺血再灌注视网膜损伤具有保护作用.
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RIR损伤后神经节细胞损伤及治疗机制的研究进展
视网膜缺血-再灌注(retinal ischemia reperfusion,RIR)损伤是在缺血性损伤的基础上发展而来的.视网膜血管阻塞所引起的缺血性眼病在血液再通后,通过一系列链式反应,造成视网膜神经节细胞凋亡的发生.如何减轻或防止缺血-再灌注引起的视神经节细胞损伤和凋亡,在视网膜缺血性疾病防治中具有重大意义.
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右美托咪定对小鼠视网膜缺血再灌注损伤的保护机制
目的 研究右美托咪定对小鼠视网膜缺血再灌注损伤的保护作用机制.方法 选取8周龄C57BL/6雄性小鼠48只,按照体重随机分为3组:假手术组、模型组和实验组,每组16只.制备小鼠视网膜缺血再灌注损伤(RIRI)模型.在缺血前15 min和再灌注前5 min,实验组小鼠分别腹腔注射右美托咪定25μg·kg-1,假手术组和模型组腹腔注射同等剂量的0.9％ NaC1.在模型建立成功后,于再灌注24 h处死并取材.取小鼠视网膜组织匀浆液,用四唑盐试剂(WST-1)法检测超氧化物歧化酶(SOD),用TBA法检测丙二醛(MDA),用比色法测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX),用酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、1-甲基环丙烯(1-MCP)及IL-10水平.结果 与假手术组比较,模型组小鼠视网膜组织中SOD为(45.47±8.16)U·mg-1、GSH-PX为(264.64±27.31)U· mg-1,均明显降低;而MDA为(1.56 ±0.41)nmol· mg-1、TNF-α为(2.67 ±0.23) ng·mL-1、IL-6为(2.84±0.34)ng·mL-1、MCP-1为(0.68±0.06) ng·mL-1和IL-10为(0.21 ±0.02)ng·mL-1,均明显升高,差异有统计学意义(均P ＜0.05).与模型组比较,实验组小鼠视网膜组织中SOD为(71.05±9.34)U·mg-1、GSH-PX为(382.20±31.56)U·mg-、IL-10为(0.44±0.07)ng·mL-1,均明显降低;而MDA为(1.02±0.23)nmol·mg-1、TNF-α为(1.53 ±0.20)ng·mL-1、IL-6为(1.64±0.07)ng· mL-1、MCP-1为(0.41±0.07)ng·mL-1,均明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 右美托咪定可以改善视网膜缺血再灌注损伤,其机制与抑制氧自由基所致的脂质过氧化损伤和抑制炎症因子的分泌有关.
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基质金属蛋白酶在视网膜缺血再灌注损伤中早期的表达及意义
目的:观察基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及其抑制剂-1(TMP-1)在大鼠视网膜缺血再灌注损伤(RIR)早期的表达,探讨MMP-9是否参与视-血屏障(RBR)病理损伤过程.方法:将38只无眼疾Wistar大白鼠随即分为两组:正常组和缺血再灌注对照组,采用前房灌注加压法建立视网膜缺血再灌注模型,其中缺血再灌注对照组分别按0、3、24h不同时间段处死动物,利用免疫组化法检测MMP-9、TIMP-1的表达;电镜观察BRB硝酸镧示踪.结果:正常组视网膜未见MMP-9及TIMP-1表达,对照组再灌注后3h MMP-9表达增高,24h呈强阳性表达且全层分布,TIMP-1呈微弱表达,再灌注后3h可发现硝酸镧颗粒,24h明显增多.结论:视网膜缺血再灌注后视-血屏障的损害与MMP-9活性表达增高呈正相关性(P＜0.01),提示细胞外基质降解、再塑可能是视网膜缺血再灌注病理损伤的又一个重要组成部分.
关键词： 基质金属蛋白酶MMP-9 视网膜缺血再灌注 动物模型 -
银杏叶制剂对大鼠视网膜缺血再灌注ICAM-1表达的影响
目的:观察大鼠视网膜缺血再灌注模型用银杏叶制剂干预后细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的变化,探讨银杏叶制剂在视网膜缺血再灌注中的作用机制.方法:48只Wistar大鼠,随机分为两组:缺血再灌注+生理盐水组(不加压眼为自身对照,列为A组,加压眼列为B组)和缺血再灌注+银杏叶制剂治疗组(加压眼列为C组).前房灌注加压左眼建立大鼠视网膜缺血再灌注模型.按不同再灌注时间又分为2h、6h、8h、12h、24h、48h组,各组随机分配4只大鼠,分别于相应时间点将大鼠处死快速取视网膜.用流式细胞仪测定视网膜组织ICAM-1阳性细胞数.结果:ICAM-1阳性细胞在A组可见一定的表达数量;B组ICAM-1阳性细胞数明显增多,至再灌注48h达高峰,自6h开始同A组比较,有显著性差异(P＜0.05);C组增量不明显,与A组比较均无显著性差异(P＞0.05),比B组增量少,自6h开始有显著性差异(P＜0.05).结论:银杏叶制剂可能通过下调ICAM-1的表达对缺血再灌注损伤视网膜具有保护作用.
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高眼压缺血-再灌注中脑组织c-fos的表达及神经营养因子对其表达的影响
目的观察视网膜缺血再灌注损伤过程中脑组织中c-fos的变化及神经营养因子对c-fos表达的影响,探讨c-fos在脑组织不同部位的改变及可能作用机制,进而为临床实践提供依据.方法建立眼缺血再灌注损伤动物模型,分为对照组、实验组(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组).实验Ⅰ组为缺血组(Ⅰ组),实验Ⅱ组为缺血2h+再灌注组(Ⅰ/R组),实验Ⅲ组在缺血再灌注前于右侧侧脑室注射神经营养因子(神经营养因子+Ⅰ/R组).采用HE常规染色切片光镜下观察大鼠高眼压脑外侧膝状体、嘴侧丘、视皮质结构神经细胞变化,采用免疫组织化学染色分别测定各组大鼠中脑组织以上三个部位cfos的变化.结果(1)脑组织不同部位(外侧膝状体、嘴侧丘、视皮质)中c-fos在对照组、缺血组、缺血再灌注组间无统计学差异(P>0.05).(2)在再灌注1d组脑组织不同部位的c-fos与缺血再灌注组有显著性统计学差异(P<0.01),其中在外侧膝状体中有明显改变.(3)在再灌注1d组与再灌注2d组间两者存在统计学差异.(4)在再灌注后5d组与2d组间c-fos无统计学差异(P>0.05).(5)在注射神经营养因子的实验Ⅲ组,脑组织中不同部位的c-fos与对照组无统计学差异.结论(1)c-fos在脑外侧膝状体、嘴侧丘、视皮质参与损伤的作用.(2)在外侧膝状体中c-fos的变化在中枢调节作用中起着中介作用,c-fos可能参与引起脑组织改变.(3)神经营养因子能明显减轻损伤反应.
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中药治疗视网膜缺血再灌注损伤研究进展
视网膜缺血再灌注损伤是临床常见疾病,目前仍然无有效可行的治疗方法.近年来国内许多学者根据中医药的优势,利用中医药治疗视网膜缺血再灌注损伤,并取得了一定的进展.文章对近几年不同中药治疗视网膜缺血再灌注损伤所取得的研究成果进行了总结.
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视网膜缺血再灌注后视网膜的病理变化及造模前后CREB的表达
目的 观察小鼠视网膜缺血再灌注后视网膜的病理变化及造模前后CAMP反应元件结合蛋白(CREB)的表达情况.方法 90只C57/BL6J小鼠分正常对照组及视网膜再灌注模型组.采用前房灌注法提升眼压使其高度至136 cm(110 mmHg)持续1h.各组分别于7、14、21 d取材,观察视网膜神经节细胞、Müller细胞的改变.Westemblot和Real-TimePCR检测CREB的表达情况.结果 视网膜缺血再灌注后,神经节细胞出现大量凋亡.与对照组相比,GFAP标记的Müller细胞增生明显.免疫切片显示,内核层与外核层发生相似比例损伤.Westernblot结果示视网膜缺血再灌注后CREB在7、14 d CREB表达下降,21 d表达上调.Real-timePCR结果显示RIR模型后CREB基因表达均下调.在14 d时低.结论 视网膜缺血再灌注会引起视网膜神经节细胞大量丧失,CREB呈现下调表现.
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人脐带间充质干细胞对视网膜缺血再灌注的保护作用
目的:探讨玻璃体腔注射人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)对实验性视网膜缺血再灌注损伤的治疗作用.方法:采用酶消化法进行人脐带间充质干细胞提取,前房加压法制作视网膜缺血再灌注模型.将SD大鼠随机分为正常组、缺血组和治疗组.损伤后即刻,治疗组大鼠玻璃体腔内注入5μl hUC-MSCs,缺血组注入5μl PBS;测量损伤后不同时间段视网膜内层厚度;通过使用在末端脱氧核酸转移酶介导下的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记(TUNEL)的方法检视网膜的细胞凋亡的情况.结果:视网膜缺血再灌注后1h,视网膜内层厚度的比较:缺血组大鼠明显高于正常组和实验对照组,两者差异均有显著意义(P＜0.05).从缺血再灌注后6h开始到7d,视网膜内层萎缩,缺血组内层厚度明显低于正常组及实验对照组大鼠视网膜内层厚度,两者差异均有显著意义.再灌注后7d,治疗组与正常组比较,差异无显著意义(P＞0.05). TUNEL染色显示再灌注6h时视网膜可见较多凋亡阳性表达的细胞,随时间依次增加,至24h达高峰, 3d时几乎未发现凋亡细胞,治疗组凋亡细胞数目明显低于缺血组(P＜0.05).结论:细胞凋亡可能在损伤过程中起重要作用,大鼠玻璃体腔内注射hHC-MSCs能抑制视网膜缺血再灌注病变大鼠视网膜细胞的凋亡,从而对其有治疗作用.
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急性高眼压视网膜缺血再灌注大鼠外侧膝状体突触损伤的研究
Wistar大鼠15只,随机分为三组各5只.以左眼为实验眼建立大鼠急性高眼压缺血再灌注模型,分别于1、2、4周时经左心室灌注内固定取材,对其外侧膝状体(LGB)突触末梢进行免疫组化检测.结果实验大鼠各时间点左LGB内突触素p38免疫反应阳性产物校正平均光密度值差异无统计学意义(P＞0.05);右LGB内p38的CA随缺血再灌注时间延长而减小,各时间点与左LGB比较差异有统计学意义(P＜0.01).表明急性高眼压视网膜缺血再灌注对大鼠LGB突触具有明显的损伤作用.
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银杏叶提取物对急性缺血再灌注后视网膜神经节细胞的保护作用
目的 探讨银杏叶提取物(EGb761)对大鼠急性高眼压诱导缺血再灌注模型中视网膜神经节细胞(RGCs)的保护作用.方法 60只SD大鼠随机分为5组,右眼为损伤眼,行前房穿刺灌注形成110 mmHg的眼压维持60 min,左眼未损伤,作为空白对照.损伤后2 h及此后每日1次灌胃给药,各组分别给予生理盐水5 mg/kg、1%灯盏细辛5 mg/kg、0.25%EGb761 5 mg/kg、1%EGb761 5 mg/kg和4%EGb761 5 mg/kg.动物损伤后第23天用荧光金行双上丘逆行标记,第28天取眼球标本做视网膜铺片并拍摄照片,计数RGCs并计算其的存活率.结果 生理盐水组、1%灯盏细辛组、0.25%EGb761、1%EGb761和4%EGb761组RGCs 存活率分别为66.58%、75.62%、74.92%、76.57%、79.87%.生理盐水组与各EGb761组之间差异均有统计学意义(q=0.00,q=0.19,q=0.10,P＜0.01),不同质量浓度EGb761组之间差异均无统计学意义(q=0.22,q=0.13,q=0.45,P＞0.05);1%灯盏细辛组与生理盐水对照组比较差异有统计学意义(q=0.16,P=0.02),与0.25% EGb761组、1% EGb761组、4% EGb761组比较差异均无统计学意义(q=0.20,q=0.01,q=0.50,P＞0.05).结论 在急性高眼压诱导缺血再灌注模型中,银杏叶提取物能有效地保护RGCs.
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急性高眼压对大鼠包含黑视素的视网膜神经节细胞的影响
目的 观察高眼压是否会对大鼠包含黑视素的视网膜神经节细胞(mcRGCs)产生损伤.方法 利用前房灌注制作急性高眼压诱导的视网膜缺血再灌注模型,利用免疫组织化学法显示mcRGCs及普通神经节细胞,观察其密度的改变.结果 急性高眼压后7 d,mcRGCs和其他神经节细胞的密度较正常组明显下降,密度分别为(23.36±2.22)、(33.36±1.53)、(3 353.02±114.38)个/mm2和(3 952.99±19.92)个/mm2,存活率分别为67.03%和84.82%.mcRGCs 2级及以上的细胞树突分支减少,树突野范围变小,部分损伤严重的细胞只有胞体着色.结论 缺血再灌注可以造成大鼠mcRGCs密度下降以及树突分支结构的改变,此类细胞的损伤程度重于其他的神经节细胞的损伤程度.
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灯盏花素注射液对实验性视网膜缺血再灌注损伤的保护作用
目的:探讨灯盏花素注射液对实验性视网膜缺血再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion,RIR)后的视神经保护作用及其可能的作用机理.方法:实验分组及给药:将健康新西兰兔54只随机分为正常对照组(18只),生理盐水对照组(18只),灯盏花素注射液组(18只),采用前房穿刺加压灌注使生理盐水对照组和灯盏花素注射液组眼内压升高至14.6kpa(110mmHg),维持60min,制作兔实验性视网膜缺血再灌注损伤(RIR)模型.造模后立即每日1次按体重分别以耳缘静脉注入灯盏花素注射液,生理盐水对照组同一时间以耳缘静脉给予等量生理盐水,正常对照组不予给药.分别于再灌注1d,3d,7d分别处死每组动物的6只兔子,光学显微镜下和电镜下观察第3d的组织学变化和超微结构,观察各组视网膜电图(ERG)b波振幅,免疫组织化学法测定各组视神经一氧化氮合酶(iNOS)的表达.结果:再灌注1d开始生理盐水对照组ERG的b波振幅缓慢升高,病理组织损害逐渐加重,视网膜中iNOS阳性表达增多,第3天达高峰,第7d开始下降,与正常对照组相比有显著差异(P＜0.01).与生理盐水对照组相比,灯盏花素治疗组电镜下病理组织损害减轻,ERG的b波振幅明显恢复(P＜0.01),iNOS阳性神经元明显减少(P＜0.01),第7d时灯盏花素治疗组与正常对照组的ERG的b波和iNOS阳性神经元差异无显著意义(P＞0.05).结论:灯盏花素注射液可以减轻视网膜缺血再灌注损伤对组织造成的损害,其机理是灯盏花素注射液可以减少细胞内Ca2+超载,清除自由基和增强抗氧化能力,从而对实验性视网膜缺血再灌注损伤有一定的保护作用.
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视网膜缺血再灌注后RGC凋亡分子机制研究进展
视网膜缺血再灌注(retinal ischemia reperfusion,RIR)损伤是常见的眼科疾病,主要表现为神经节细胞的凋亡,可造成视神经损害等严重的疾病,对患者的视觉功能和生活质量造成严重的影响.细胞凋亡是在基因控制下的自我消亡过程,受多种基因调控.我们结合文献,综述了不同基因在RIR后神经节细胞凋亡中的作用.
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视网膜缺血再灌注损伤中谷氨酸的兴奋毒性及其机制
视网膜缺血再灌注(retinal ischemia reperfusion,RIR)损伤是多因素综合作用的结果,兴奋性氨基酸学说是其机制之一.谷氨酸本是一种主要的神经兴奋递质,行使重要的生理功能,而RIR过程中,细胞间质内谷氨酸浓度明显升高,过度激活谷氨酸受体,引起兴奋毒性,其机制主要有钙离子超载、过多一氧化氮合成、细胞内氧自由基升高及细胞凋亡等方面.
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y-39983预处理对缺血-再灌注损伤大鼠视网膜的保护作用
目的:探讨ROCK抑制剂y-39983对缺血再灌注(ischemia reperfusion,IR)大鼠视网膜的保护作用.方法:SD大鼠60只随机分为正常组(n=15)、IR组(n=15)、生理盐水组(n=15)、y-39983治疗组(n=15).正常组不做任何处理,后三组制作视网膜IR模型(前房加压灌注法),其中生理盐水组和y-39983治疗组于造模前5min分别向实验眼玻璃体腔内注入无菌生理盐水和y-39983各10μL.采用免疫组化方法检测细胞间黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecules-1,ICAM-1)表达.荧光金逆行标记计数各组大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs).应用组织病理学方法和视网膜电流图评估视网膜损伤程度.结果:y-39983预处理能降低 ICAM-1 蛋白表达和视网膜水肿程度,并且显著提高了视网膜神经节细胞存活率及b波和O2相对恢复率,缓解IR损伤所致的内层视网膜变薄的情况.结论:y-39983能减轻视网膜IR损伤,而这一保护效应在一定程度上与其抑制ICAM-1异常表达增加有关,表明y-39983对IR损伤相关的视网膜疾病有治疗作用.
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单唾液酸神经节苷酯对兔视网膜缺血再灌注损伤的保护作用
目的:通过监测视网膜电流图(ERG)a,b波恢复的百分率,观察单唾液酸神经节苷酯(GM-1)球后注射给药在视网膜缺血再灌注损伤中的保护作用.方法:健康新西兰大耳白兔20只,随机分为实验组和治疗组,用眼内灌注方法制成视网膜急性缺血的动物模型,治疗组于撤压前5 min球后注射GM-1(1 mg/kg),实验组只加压不给药,均记录缺血前ERG,缺血期ERG及再灌注30,60,90 min时的ERG图形.结果:两组缺血前的a,b波振幅无显著差异(P＞0.05).a波振幅的恢复在再灌注30,60及90 min两组间相比均无显著差异(P＞0.05).b波振幅的恢复在再灌注30,60及90 min两组间相比均有显著性的差异(两组间30,60及90 min比较均P＜0.01),治疗组均高于实验组.结论:单唾液酸神经节苷酯对视网膜缺血再灌注损伤具有保护作用.
