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人乳头瘤病毒衣壳蛋白L1病毒样颗粒疫苗免疫机制及其应用效果进展
目前国内外已公认高危型人乳头瘤病毒( human papilloma virus,HPV)持续感染是宫颈癌发生的必要条件,约90％的宫颈癌由HPV感染所致[1].据统计,全世界每年大约有50万例新发宫颈癌患者,约27.4万死亡,其中80％的死亡病例发生在发展中国家,是因为在这些国家筛查和健康体检很难普及,且年轻妇女宫颈癌的发病率呈上升趋势[2].另外HPV也可以引起男性阴茎及肛门周围恶性肿瘤.2006年研制成功的预防性HPV疫苗通过重组DNA技术表达L1蛋白,诱导机体产生中和性抗体可有效预防HPV感染,临床应用已取得良好效果.
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炭疽芽孢杆菌中和性抗体的研究进展
炭疽芽孢杆菌的中和性抗体在炭疽的被动免疫和治疗中有着重要的意义.抗保护性抗原(protective antigen,PA)抗体既能够抑制芽孢出芽又具有中和毒素的作用.抗致死因子(lethal factor,LE)/水肿因子(edema factor,EF)抗体能阻断致死毒素(lethal toxin,LT)/水肿毒素(edema toxin,ET)发挥活性,荚膜抗体能结合补体导致细菌繁殖体裂解.同时中和性抗体的水平也可以作为保护性免疫的评价标准.另一方面中和性单克隆抗体可以作为分析确定PA的中和性表位的有力工具.对中和性表位的分析既有利于探索炭疽毒素致病机制,也可以为现有炭疽疫苗的使用和发展表位疫苗等新型炭疽疫苗提供理论依据.该文综述了炭疽芽孢杆菌中和性抗体的研究进展.
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参与评价抗人促红细胞生成素单克隆抗体参考品国际协作国内部分的研究
目的 通过不同的检测平台和实验方法对9种抗人重组人促红细胞生成素(rhEPO)单克隆抗体的测试结果的比较,评价其在临床单纯红细胞再生障碍性贫血(pure red cell aplasia,PRCA)rhEPO免疫原性研究中应用的可行性.方法 中国食品药品检定研究院(中检院)和沈阳三生制药有限责任公司(三生制药)采用直接ELISA评价待测参考品的结合性抗体性质,厦门特宝生物工程股份有限公司(特宝生物)采用间接ELISA评价待测参考品的结合性抗体性质;3家单位均采用EPO依赖细胞株UT7/EPO细胞的增殖抑制法评价待测参考品的中和性抗体性质.结果 不同检测平台和检测技术均能对抗rhEP0单克隆抗体参考品的性质进行有效评价.结论 多种检测平台和检测方法的应用,对rhEP0在临床研究和上市后的免疫原性评价或PRCA的监测具有重要意义.
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抗痘苗病毒基因工程抗体的研究
痘苗病毒(Vaccinia virus,VACV)属于痘病毒科、正痘病毒属,是迄今所知结构为复杂的一类病毒,曾是预防天花病毒的一种有效疫苗.1980年世界卫生大会正式宣布天花被完全消灭,天花病毒在自然界已不存在,并推荐不需再接种痘苗.然而非法保存的天花病毒有可能成为生物武器而用于生物恐怖,停止种痘使得多数人暴露于感染天花的危险之中.为了预防和治疗天花及其它痘病毒感染、应付突发事件,上述这些重新唤起了人们对痘苗病毒作为一种疫苗及其相关诊断、治疗性制剂的研究开发兴趣.中和性抗体在抗感染治疗及紧急被动免疫预防方面一直扮演着重要的角色.由此可见,研制特异性针对痘苗病毒的中和性抗体以用于紧急预防和治疗是十分必要和可行的.
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脊髓背角基质细胞衍生因子1对皮肤肌肉切口牵拉术致持续性疼痛大鼠中枢敏感化及痛觉过敏的影响
目的 观察脊髓背角基质细胞衍生因子1(SDF-1)对皮肤肌肉切口牵拉术(SMIR)致持续性疼痛大鼠中枢敏感化及痛觉过敏的影响,为探讨术后慢性疼痛的发生机制和治疗靶点提供依据.方法 采用SMIR后持续性疼痛大鼠模型.将36只雄性SD大鼠随机分为假手术组(仅切开皮肤)和SMIR后1、5、10、20 d组以及SMIR+鞘内注射SDF-1中和性抗体组,每组6只大鼠.用up-down法测定术后大鼠痛行为学,用蛋白质印迹法检测各组大鼠脊髓组织中SDF-1的表达.再取18只雄性SD大鼠随机分为假手术组、SMIR组和SMIR+脊髓表面给予SDF-1中和性抗体组(每组6只大鼠),检测3组大鼠脊髓背角C纤维诱发场电位长时程增强(LTP)的变化.结果 与假手术组大鼠相比,SMIR后第5、10、20天大鼠脊髓组织SDF-1表达均增加(P均<0.05),且SMIR后大鼠痛阈降低(P<0.01),鞘内注射SDF-1中和性抗体可部分逆转SMIR引起的痛阈下降(P<0.05).SMIR后1 h脊髓背角LTP升高(P<0.01),脊髓表面给予SDF-1中和性抗体可抑制SMIR导致的LTP升高(P<0.01).结论 脊髓背角SDF-1参与了SMIR致持续性疼痛大鼠中枢敏感化及痛觉过敏,但具体机制有待进一步研究.
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肝癌细胞系DcR3的表达及意义
目的 探讨肝癌细胞系诱捕受体3(DcR3)的表达变化及意义. 方法 分别取人肝癌细胞HepG2、HepB3、SMMC-7721、bel-7402、bel-7405及癌旁肝细胞QSG-7701和正常肝细胞HL-7702,RT-PCR和EnVision法分别检测其DcR3 mRNA和蛋白;MTT法检测加入DcR3中和性抗体后的肝癌细胞存活率. 结果 DcR3在5种肝癌细胞中均有mRNA和蛋白的表达,QSG-7701及HL-7702均无表达.加入DcR3中和性抗体后肝癌细胞存活率下降. 结论 肝癌细胞高表达DcR3,DcR3中和性抗体可抑制肝癌细胞的生长.
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热休克蛋白B6中和性抗体对脉络膜血管内皮细胞管腔形成的影响及其机制
背景 血管内皮细胞的增生和迁移是血管发生的主要环节.新近的研究发现,热休克蛋白B6(HspB6)可促进多种与血管新生相关因子的分泌,导致病理状态下新生血管的发生,研究HspB6中和性抗体对人脉络膜血管内皮细胞增生、迁移和管腔形成能力的影响对于脉络膜新生血管相关疾病的靶向治疗具有重要意义. 目的 探讨HspB6中和性抗体对人脉络膜血管内皮细胞管腔形成能力的影响及其机制.方法 对人脉络膜血管内皮细胞株进行培养和传代,取对数生长期细胞用于实验.应用逆转录PCR(RT-PCR)和流式细胞术检测HspB6 mRNA及其蛋白在人脉络膜血管内皮细胞中的表达.将基质胶铺于96孔板中,凝固后加入细胞悬液,细胞密度为2×104个/孔,将不同质量浓度(100 μg/L、500 μg/L)HspB6中和性抗体分别加入培养孔,未加入HspB6中和性抗体的细胞作为对照组(0μg/L HspB6中和性抗体组),每组设3个复孔.细胞孵育12h后,采用体外三维成型法检测各组完整管腔形成的数量,以评价HspB6中和性抗体对人脉络膜血管内皮细胞的管腔形成能力.96孔板培养人脉络膜血管内皮细胞,培养液中加入不同质量浓度(0、50、100、500 μg/L)HspB6中和性抗体孵育24 h,然后采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞的增生值.采用Transwell小室法检测HspB6中和性抗体作用24 h后各组穿过小室膜的“贴壁”细胞数目,以评估人脉络膜内皮细胞的增生和迁移情况.收集HspB6中和性抗体干预后的人脉络膜血管内皮细胞,流式细胞术检测HspB6中和性抗体作用后各组人脉络膜血管内皮细胞的凋亡率. 结果 人脉络膜血管内皮细胞在基因和蛋白水平均可表达HspB6分子.0、100、500 μg/L HspB6中和性抗体组管腔形成数目分别为(67.25±5.75)、(60.39±6.41)和(39.76±10.73)个/视野,总体比较差异有统计学意义(F=10.210,P=0.012),其中500 μg/L HspB6中和性抗体组管腔形成数目明显少于0 μg/L HspB6中和性抗体组,差异有统计学意义(P=0.005).随着HspB6中和性抗体质量浓度的增加和作用时间的延长,其对细胞增生和迁移的抑制率均明显增加,差异均有统计学意义(F质量浓度=7.485,P=0.002;F时间=16.684,P=0.001).Transwell小室法检测显示,0、50、100、500 μg/L HspB6中和性抗体组细胞迁移数目分别为(14.0±2.5)、(11.1±0.8)、(6.6±0.1)、(6.7±0.2)个,其中100 μg/L、500 μg/L HspB6中和性抗体干预24 h后细胞迁移数目较0μg/L HspB6中和性抗体组明显减少,差异均有统计学意义(均P=0.000).流式细胞术检测结果发现,HspB6中和性抗体组人脉络膜血管内皮细胞的凋亡率为(22.73±2.53)％,对照组为(13.33±2.08)％,差异有统计学意义(t=4.967,P=0.008). 结论 HspB6中和性抗体对脉络膜血管内皮细胞的管腔形成有抑制作用,可能通过抑制血管内皮细胞的增生、迁移以及促进细胞的凋亡等途径发挥效应.
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干扰素中和性抗体研究进展
干扰素(interferon,IFN)是机体免疫细胞分泌的一种细胞因子,是一种广谱抗病毒剂,它并不直接杀伤或抑制病毒,而主要是通过细胞表面受体作用使细胞产生抗病毒蛋白,从而抑制乙肝病毒的复制.同时它还可增强自然杀伤细胞(NK细胞)、巨噬细胞和T淋巴细胞的活力,起到免疫调节作用,并增强抗病毒能力.70年代中期人们发现慢性乙型肝炎患者自身产生干扰素的能力低下,在应用外源性干扰素后,不仅产生了上述抗病毒作用,同时还增加了肝细胞膜上人白细胞组织相容性抗原的密度,促进T细胞溶解感染性肝细胞的效能.临床上将干扰素用于治疗慢性乙肝和急慢性丙型肝炎已有20余年,其疗效已得到广泛的认可.研究显示,成人注射(2～5)×106单位干扰素后,3 h血清中干扰素活性开始测出,6 h达高峰,48 h基本消失.
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不同浓度IL-17A中和性抗体对CIA小鼠血清中炎症细胞因子表达的影响
目的 通过建立胶原诱导关节炎(CIA)小鼠模型,探讨不同浓度的IL-17A中和性抗体对CIA小鼠血清中炎症细胞因子表达.方法 将48只SPF级C57BL/6雄性小鼠随机分为4组:A(空白对照)组、B(CIA+生理盐水)组、C (CIA+高浓度)组、D(CIA+低浓度)组;采用鸡Ⅱ型胶原加氟氏完全佐剂乳化制备抗原尾部多点皮下注射;初次免疫2周后以同样方法加强免疫,诱导CIA小鼠模型出现后在小鼠腹腔注射细胞因子中和性抗体或生理盐水,观察2周并记录小鼠关节及关节外表现,检测血清TNF-a、IL-17、IL-6表达水平.结果 C、D与B比较TNF-a、IL-17、IL-6表达水平显著降低,并且IL-17A中和性抗体高浓度组较低浓度组血清中炎症细胞因子表达水平降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 IL-17A中和性抗体可显著降低CIA小鼠模型血清中炎症细胞因子TNF-a、IL-17、IL-6表达水平,且以高浓度组较低浓度组改善骨关节功能更显著,其作用机制可能是通过调节Thl7细胞参与介导的细胞因子-破骨细胞损伤免疫机制,抑制炎症细胞因子表达,进一步影响破骨细胞因子来实现.
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异种免疫诱导中和性抗体抑制小鼠肺癌生长
目的 研究异种固定化完整细胞作为肿瘤疫苗的潜力,初步探讨其诱导的免疫反应的抗肿瘤机制.方法 分别使用固定的人肺癌细胞免疫小鼠,再接种小鼠自发肺腺癌鼠肿瘤进行肿瘤挑战,观察肿瘤细胞免疫后对小鼠肿瘤生长的影响.采用免疫组织化学法观察小鼠肿瘤浸润T细胞的情况,采用MTT法检测小鼠免疫血清对人肺癌细胞生长的影响.结果 采用人肺腺癌和鳞癌固定的完整细胞免疫小鼠后均明显地抑制小鼠肺腺癌肿瘤的生长(P＜0.05),抑瘤率分别为40.8％及49.2％,显著优于采用人肺腺癌和鳞癌细胞碎片免疫的效果.小鼠免疫血清在体外可抑制人肺癌细胞的生长.结论 异种人肺癌固定的完整细胞诱导了有效的小鼠抗鼠肺癌的体液免疫反应,显著抑制肿瘤生长,其抑制作用可能与诱导小鼠产生抗肺癌中和性抗体有关.
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DcR3对乳腺癌细胞凋亡的影响及其在乳腺癌血清中的表达
目的 研究诱捕受体3(DcR3)单克隆中和性抗体对乳腺癌细胞生长和凋亡的影响,以及DcR3在乳腺癌患者血清中的表达及临床意义.方法 将DcR3单克隆中和性抗体作用于体外培养的人乳腺癌细胞系MCF-7,检测细胞增殖情况及Caspase 3/7活性变化,应用Hoechst 33342及碘化丙啶双重染色荧光显微镜下观察细胞凋亡形态及计算凋亡率.应用ELISA检测乳腺癌患者血清中DcR3的表达.结果 DcR3中和性抗体可抑制MCF-7细胞生长并可诱导细胞凋亡(P＜0.05).乳腺癌患者血清DcR3水平明显高于健康对照组(P＜0.01)；DcR3表达水平与肿瘤大小及临床TNM分期有关(P＜0.05).结论 DcR3对人乳腺癌细胞增殖具有抑制作用,其机制与诱导肿瘤细胞凋亡有关.DcR3与乳腺癌的发生及恶性进展有关,检测DcR3血清表达有助于乳腺癌诊断及预后判断.
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诱捕受体3中和性抗体在HepG2细胞凋亡中的作用
诱捕受体3(decoy receptor 3,DcR3)又称为TR6,在多种恶性肿瘤存在着过度表达[2].该基因表达产物可与相关配体结合,从而阻断由这些配体介导的细胞凋亡,而且还能调控免疫细胞的活性与分化,下调机体免疫系统,与肿瘤免疫逃逸密切相关131.我们在前期研究中发现,在原发性肝细胞癌(HCC)组织及非癌肝组织中DcR3阳性者的凋亡率均低于DcR3阴性者,DcR3表达与凋亡率呈负相关[4].
