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慢性乙型肝炎患者阿德福韦酯治疗前后血清Th1和Th2细胞因子水平变化及其与HBeAg的关系
目的 观察HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者阿德福韦酯治疗前后不同时相点血清IFN-γ和IL-4水平及其与HBeAg的关系,探讨阿德福韦酯治疗对机体免疫状态的影响.方法 采集30例阿德福韦酯治疗前、治疗16周、52周和132周患者血清,其中完全应答组14例,部分应答组16例及健康对照组10例,ELISA检测IFN-γ和IL-4水平,乙型肝炎病毒血清标志物定量检测采用美国Abbott公司微粒子酶免疫法,HBeAg≤1.0 S/CO为阴性,抗-HBe ≤1.0 S/CO为阳性.结果 完全应答组各时相点IFN-γ水平显著高于部分应答组(P＜0.05)及正常对照组(P＜0.05),部分应答组与健康对照组相比无显著差异(P＞0.05);完全应答组IL-4水平在治疗后逐渐下降,部分应答组变化不大;各组在治疗前HBeAg水平与IFN-γ及IL-4水平均无明显相关性;完全应答组在治疗后各时相点HBeAg水平下降,且与IFN-γ升高程度呈负相关、与IL-4水平下降程度呈正相关,与部分应答组相比有显著差异(P＜0.05).结论 阿德福韦酯治疗后慢性乙型肝炎患者细胞免疫应答有一定程度的恢复,其恢复程度与HBeAg水平下降幅度呈正相关.
关键词： 慢性乙型肝炎 乙型肝炎病毒核心抗原 阿德福韦酯 γ干扰素 白细胞介素-4 -
慢性HBV感染自然史各期肝组织HBcAg演变规律的探讨
目的：通过观察肝组织HBcAg分布在慢性HBV感染自然史各期的演变，进一步揭示HBV感染过程中免疫状态的规律。方法按照《慢性乙型肝炎防治指南（2010年版）》描述的慢型乙型肝炎自然史分期的血清学特征，将慢性HBV感染者分为免疫耐受期、免疫清除期、非活动或低（非）复制期以及再活动期。分别统计慢性HBV感染各个阶段肝组织HBcAg分布的情况。结果共纳入637例患者，其中男性501例（78.6%），女性136例（21.4%）。处于免疫耐受期患者101例，免疫清除期248例，非活动或低（非）复制期119例，再活动期169例。各阶段患者肝组织HBcAg分布差异均具有统计学意义（χ2=347.975，P ＜0.0001）。免疫耐受期肝组织HBcAg分布以核型与混合型为主（89.1%）；免疫清除期以混合型与浆型为主（74.6%）；非活动或低（非）复制期以阴性为主（89.1%）；再活动期以浆型与阴性为主（73.4%）。结论在慢型乙型肝炎自然史过程中，肝组织HBcAg经过了以核型为主→浆型为主→阴性→浆型为主的规律性变化。HBcAg的分布特征是HBV自然史阶段中机体免疫功能与病毒之间相互作用的重要标志。
关键词： 慢性HBV感染 自然史 乙型肝炎病毒核心抗原 演变规律 -
373例乙型肝炎患者HBV-DNA定量与乙型肝炎病毒核心抗原及肝脏酶学指标的相关性分析
目的 探讨HBV-DNA定量和乙型肝炎病毒核心抗原在诊断乙型肝炎和评价病情中的意义.方法收集373例乙型肝炎患者的HBV-DNA定量、HBeAg与丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、谷氨酰转移酶(GGT)等实验室诊断指标,进行相关性分析.结果 (1)HBV-DNA定量与HBeAg具有相关性(P < 0.01).(2)HBV-DNA定量与ALT、AST、GGT结果具有相关性(P < 0.01).(3)HBeAg与ALT、AST、GGT结果无相关性(P > 0.05).结论 (1)HBeAg一定程度上反映了病毒在体内的复制情况,但HBV-DNA定量是评价体内病毒复制更直接的指标.(2)HBV-DNA定量结果与肝功能受损情况相关,高病毒载量是肝功能受损的危险因素.
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肝炎肝硬化患者肝组织中HBcAg、HBVDNA表达的初步探讨
观察乙型肝炎引起的肝炎肝硬化患者肝组织中HBcAg和HBVDNA的表达.随机采取100例乙型肝炎肝硬化患者,行肝活检术取肝组织,采用免疫组织化学和原位分子杂交法,检测其中HBcAg和HBVDNA.肝组织中HBcA卧HBVDNA的检出率分别为64%和62%(P》0.05).血清HBV呈高复制时,肝组织中HBcAg和HB-VDNA的阳性表达,有较好的一致性;HBcAg颗粒在肝呈弥漫的浆、膜型分布者,其肝组织中HBVDNA呈高表达;其肝组织病变是活动的(P《0.05).乙型肝炎肝硬化患者肝组织中有较高的HBV复制率;肝组织中HBcAg和HBVDNA的分布类型与其中的HBV的复制状况和组织病变的活动性有关.
关键词： 乙型肝炎病毒核心抗原 肝炎硬肝化 乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸 -
高压氧治疗慢性肝炎对患者免疫功能和肝组织中HBsAg、HBcAg影响的研究
观察慢性肝炎(CH)高压氧(HBO)治疗前后患者的免疫功能和肝组织中HBsAg、HBcAg的变化.用纯氧单仓治疗(0.25 MPa,1.5h/d,10d/cyc,6cyc)60例CH,治疗前后用Array TM Protein System Array 160测静脉血A/G、r、lgA、lgG、lgM、C1、C4;肝穿刺活检,SP法检测肝组织中HBsAg、HBcAg.HBO治疗后CH患者静脉血r、IgA、lgG、lgM、C1、C4明显降低,A明显升高,治疗前后差异显著(P＜0.05);CH患者肝组织中HBsAg、HBcAg治疗前后差异不显著(P＞0.05).HBO治疗CH,可降低患者的免疫反应,对CH肝组织中HBsAg、HBcAg抑制作用不明显.
关键词： 高压氧 慢性肝炎 免疫 乙型肝炎病毒表面抗原 乙型肝炎病毒核心抗原 -
外分泌型的乙型肝炎病毒核心抗原核酸疫苗的构建与体外表达
目的:构建含有组织型纤溶酶原激活剂(tPA)信号肽的乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)核酸疫苗.方法 将HBcAg基因用PCR方法扩增并分别引入相应的限制性内切酶酶切位点,然后克隆入pJW4303载体中获得相应的核酸疫苗,经筛选鉴定后,用上述核1酸疫苗与野生型HBcAg核酸疫苗及空载体质粒pJW4303分别用脂质体瞬时转染293T细胞,应用蛋白印迹法检测核心抗原的表达.结果 成功构建以pJW4303为载体的含tPA信号肽的HBcAg核酸疫苗,体外表达证实含tPA信号肽的HBcAg在293T细胞胞内和胞外均能表达,含tPA信号肽的HBcAg核酸疫苗的核心抗原表达水平较高.结论 以pJW4303为载体的含tPA信号肽的HBcAg核酸疫苗能够将细胞内的HBcAg分泌到细胞外,为进一步研究其免疫原性打下了基础.
关键词： 乙型肝炎病毒核心抗原 组织纤溶酶原激活剂 质粒构建 核酸疫苗 -
活化B淋巴细胞诱导健康人外周血HBcAg 短肽特异性细胞毒性T淋巴细胞
目的 探讨负载乙型肝炎病毒核心抗原18-27(HBcAg 18-27)序列肽的活化B淋巴细胞诱导自体外周血单个核细胞(PBMC)产生HBcAg 18-27特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的能力.方法 免疫磁珠法分选B淋巴细胞,与CpG寡核苷酸(CpG-ODN)(2 μg/mL)和白细胞介素-4(IL-4)(2 ng/mL)共培养48 h,再加入人工合成的HBcAg 18-27肽(50 μg/mL),继续温育12 h.将负载抗原肽的活化B淋巴细胞与自体PBMC进行混合淋巴细胞培养5 d,采用Pro5TM MHC Pentamers技术检测HBcAg 18-27特异性CTL.结果 免疫磁珠法分选B淋巴细胞纯度为89.60%.荧光显微镜观察到HBcAg 18-27抗原肽进入活化B细胞,流式细胞仪定量检测抗原负载率为41.3%.以此作为HBcAg 18-27特异性抗原递呈细胞(APC)能够从自体PBMC中诱导出HBcAg 18-27特异性CTL.对照组(不加APC)HBcAg 18-27特异性CTL为(0.20±0.10)%,实验组(加APC)为(0.50±0.19)%,2组差异有统计学意义(P<0.01).结论 负载了HBcAg 18-27肽的活化B淋巴细胞能够诱导自体PBMC产生HBcAg 18-27特异性CTL.
关键词： CpG寡核苷酸 B淋巴细胞 乙型肝炎病毒核心抗原 细胞毒性T淋巴细胞 -
高压氧对慢性肝炎患者体液免疫及肝组织中HBsAg、HBcAg的影响
目的观察慢性肝炎(CH)高压氧(HBO)治疗前后患者的体液免疫功能和肝组织中HB-sAg、HBcAg的变化.方法用单人纯氧舱治疗(0.25 MPa,1.5 h/d,10 d/course,6 courses)60例CH,用Array TM Protein System Array160测定治疗前后静脉血α-白蛋白、γ-球蛋白,IgA、IgG、IgM,补体C1、C4;肝穿刺活检,SP法检测肝组织中HBsAg、HBcAg.结果HBO治疗后CH患者静脉血γ-球蛋白、IgA、IgG、IgM、补体C1、C4明显降低,α-白蛋白明显升高,治疗前后差异显著(P＜0.05);CH患者肝组织中HBsAg、HBcAg变化不明显,治疗前后差异不显著(P＞0.05).结论HBO治疗CH,可降低患者的体液免疫反应,对CH肝组织中HBsAg、HBcAg抑制作用不明显.
关键词： 高压氧 慢性肝炎 免疫 乙型肝炎病毒表面抗原 乙型肝炎病毒核心抗原 -
慢性乙型肝炎肝组织ICAM-1、HBsAg、HBcAg的表达及分析
目的探讨ICAM-1、HBsAg、HBcAg在慢性乙型肝炎肝组织中的表达及其在发病机制中的意义.方法免疫组化SABC法检测慢性乙型肝炎肝组织中ICAM-1、HBsAg、HBcAg的表达.结果在慢性乙肝中,随着炎症活动度的增高,ICAM-1表达增强,HBcAg表达减弱,HBsAg表达由胞浆显色为主逐渐转为胞膜显色为主.结论肝细胞ICAM-1、HBcAg的表达在慢性乙肝的炎症反应中起重要作用.肝细胞中HBsAg的表达在一定程度上反映了病毒的复制活动.
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乙型肝炎病毒核心抗原及Flt3配体双表达核酸疫苗的构建与体外表达
目的:构建可同时表达乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)和Flt3配体(FL)胞外段的双表达核酸疫苗.方法:将HBcAg和FL胞外段的基因用PCR方法扩增并分别引入相应的限制性内切酶酶切位点,然后克隆入真核双表达载体pIRES,获得含双基因片段的表达质粒;再取该表达质粒中的内部核糖体切入位点(IRES)序列和基因片段克隆入pJW4303载体中,获得相应的双表达核酸疫苗,经筛选鉴定后,以293T细胞瞬时表达检测两基因的表达水平.结果:构建成功以pIRES、pJW4303为载体的4种HBcAg和FL胞外段的双表达核酸疫苗,体外表达证实HBcAg和FL胞外段均能高效表达,基因位于IRES上游时表达水平较高.结论:用IRES元件实现了HBcAg和FL胞外段双表达核酸疫苗的构建,pJW4303为载体的核酸疫苗两基因表达水平优于pIRES为载体的核酸疫苗.
关键词： 乙型肝炎病毒核心抗原 Flt3配体 双表达载体 核酸疫苗 -
HBeAg、HBcAg与HBV-DNA阳性结果相关分析
目的统计HBeAg、HBcAg与HBV-DNA阳性结果相关性,探讨其临床意义.方法采用ELISA和荧光-PCR方法对部分HBsAg阳性标本检测HBcAg和HBV-DNA,并对HBeAg、HBcAg及HBV-DNA阳性结果进行统计分析;并对我实验室2002年至2005年HBeAg与HBV-DNA阳性相关率进行回顾性分析.结果①HBeAg、HBcAg及HBV-DNA三者同时阳性占72.07%,HBeAg阳性、HBcAg及HBV-DNA阴性占10.51%,HBeAg及HBV-DNA阳性、HBcAg阴性占3.5%,HBeAg阴性、HBcAg及HBV-DNA阳性占10.14%,HBeAg及HBcAg阴性、HBV-DNA阳性占3.78%.②2002年至2005年HBeAg与HBV-DNA同时阳性占HbeAg和/或HBV-DNA阳性总和的百分比分别是2002年87.63%、2003年85.15%、2004年80.76%、2005年75.57%.结论HBeAg、HBcAg及HBV-DNA三者高度正相关,但HBeAg及HBcAg操作简便,易于开展;HBeAg与HBV-DNA阳性相关率呈逐年下降趋势.
关键词： 乙型肝炎病毒 e抗原 乙型肝炎病毒核心抗原 乙型肝炎病毒核酸 -
乙型肝炎病毒e抗原与核心抗原调节靶基因的比较
目的利用基因表达谱芯片技术筛选、比较乙型肝炎病毒e抗原和核心抗原调节靶基因.方法利用分子生物学技术和生物信息学技术相结合,克隆HBeAg和HBcAg的编码基因,常规分子生物学技术构建相应的真核细胞表达载体pcDNA3.1-HBeAg和pcDNA3.1-HBcAg脂质体技术转染肝母细胞瘤细胞系HepG2,利用基因表达谱芯片技术筛选转染细胞的差异表达cDNA的类型.结果对于2个基因转染细胞系差异表达基因谱的分析,HBeAg和HBcAg共同上调的基因1条;HBeAg和HBcAg共同下调的基因1条;未发现HBeAg上调,而HBcAg下调;或HBeAg下调,而HBcAg上调的基因类型;还有一些靶基因,或只受到HBeAg的调节,或只受到HBcAg的调节.结论应用基因表达谱芯片技术对于HBeAg和HBcAg反式调节的靶基因进行分析,可以发现HBeAg和HBcAg可引起体内多个系统相关的基因表达改变,两者在体内所调节的基因种类方面还有很大差异.
关键词： 乙型肝炎病毒e抗原 乙型肝炎病毒核心抗原 基因 -
慢性乙型肝炎病毒携带儿童血清及外周血单个核细胞培养上清干扰素γ和白细胞介素-10的水平及其意义
目的 探讨慢性乙型肝炎病毒(HBV)携带儿童血清及外周血单个核细胞(PBMC)经乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)刺激后培养上清干扰素γ(IFN-γ)和IL-10水平及临床意义.方法 HBeAg阳性慢性HBV携带儿童21例(A组)、抗-HBe阳性慢性HBV携带儿童20例(B组)及正常儿童19例(C组),每例采集外周静脉血5mL,分离血清及PBMC,PBMC体外单独培养或与HBcAg共培养72 h后,检测血清及培养上清IFN-γ和IL-10水平.结果 血清IFN-γ在各组间无明显差异,A和B组血清IL-10较C组显著增高.经HBcAg处理后PBMC培养上清中,IFN-γ水平在B和C组较A组显著增高.同时,经HBcAg处理后A和B组PBMC培养上清中IL-10水平均较C组显著增高,尤以A组明显.结论 IL-10水平及PBMC对HBcAg应答低下在儿童HBV携带者发病机制中起一定作用.
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乙型肝炎核心抗原基因的合成及其原核表达载体的构建
目的:合成乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)基因并构建原核表达载体.方法:根据大肠杆菌偏嗜性密码子,利用Synthetic Gene Designer软件对HBcAg基因进行密码子优化,分成24条相互重叠的寡核苷酸片段,采用PCR法扩增获得完整的HBcAg基因,经BamH I和Xho I双酶切后定向克隆到pET30a(+),得pET30a(≠)-HB-cAg,经PCR扩增、酶切及测序鉴定后,定点突变法改正错误位点.之后将重组子转入BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析表达情况,Western Blot检测蛋白抗原性.结果:成功构建了重组质粒pET30a(≠)-HBcAg,SDS-PAGE分析显示目的蛋白主要以包涵体的形式在大肠杆菌表达,表达效率64%左右;Wesbern Blot显示表达产物具有较好的抗原性.结论:成功合成HBcAg基因并构建了原核表达载体.
关键词： 乙型肝炎病毒核心抗原 基因合成 定点突变 原核表达 -
强制泛素化乙肝病毒核心抗原融合基因表达质粒的构建
目的 构建强制泛素化乙肝病毒核心抗原(HBcAg)融合基因真核表达质粒.方法 以HBV adr亚型全基因质粒pADR.为模板,PCR扩增HBcAg基因片段;无茵操作下分离Balb/C小鼠肝脏,提取mRNA,RTPCR扩增小鼠泛素基因片段.PCR产物经测序鉴定后双酶切,插入真核表达质粒pcDNA 3.1(-),构建重组真核表达质粒ub-HBcAg-pcDNA 3.1(-)酶切鉴定和基因测序.结果 扩增的泛素基因片段和HBcAg基因片段经测序证实序列正确;将上述基因双酶切后插入质粒pcDNA 3.1(-)中,构建强制泛素化rmcAg融合基因表达质粒ub-HBcAg-pcDNA3.1(-);融合基因真核表达质粒ub-HBcAG-pcDNA 3.1(-)经酶切、基因测序等鉴定证实目的基因序列和插入方向正确,与预期结果一致.结论 成功构建了强制泛素化乙肝病毒核心抗原融合基因真核表达质粒,为进一步研究强制泛素化HBcAg诱导HBV特异性CTL奠定了实验基础.
关键词： 乙型肝炎病毒核心抗原 泛素 融合基因 逆转录-聚合酶链反应 -
乙型肝炎病毒核心抗原HBcAg基因重组杆状病毒的构建及鉴定
目的利用杆状病毒表达系统(BEVS)构建含乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)基因的重组杆状病毒.方法采用PCR法从含乙型肝炎病毒全基因序列(adw)的质粒pHBV1中扩增出HBV C基因,亚克隆到pGEM-T载体,然后将HBV C基因插入载体pAcGHLT-A中,构建含有HBV C基因的重组质粒pAcGHLT-HBcAg,与苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcNPV)联合转染秋粘虫细胞(Sf9),获得含有HBV C基因的重组杆状病毒.采用限制性内切酶酶切和DNA序列分析对重组病毒进行鉴定.结果利用杆状病毒表达系统,成功地构建了含HBV C基因的重组杆状病毒,感染昆虫细胞Sf9后,PCR检测可以扩增出相应大小的片段.结论利用BEVS成功构建了含有HBV C基因的重组杆状病毒,为进一步的研究奠定了基础.
关键词： 乙型肝炎病毒 乙型肝炎病毒核心抗原 杆状病毒表达系统 秋粘虫细胞 -
密码子优化的乙型肝炎病毒C基因在毕赤酵母中的高效表达
目的 合成适合酵母表达的乙型肝炎病毒C基因,在毕赤酵母中高效表达重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg).方法 选用酵母的偏爱密码子对野生型乙型肝炎病毒C基因进行优化改造,采用基因搭桥及聚合酶链反应,制备合成基因,插入酵母表达载体pPICZA.携带有合成C基因的重组载体转化毕赤酵母菌株KM71H,经甲醇诱导表达HBcAg.结果 酶切电泳及DNA测序证实合成的C基因正确克隆到表达载体中;聚丙烯酰胺凝胶电泳及ELISA显示优化后的乙型肝炎病毒C基因在毕赤酵母中的重组蛋白表达量远高于野生型基因.结论 密码子优化的C基因能明显提高HBcAg在毕赤酵母表达系统中的表达量.
关键词： 乙型肝炎病毒核心抗原 偏爱密码子 毕赤酵母 -
慢性乙型肝炎病人HBcAg特异性CTL的体外诱导及活性
目的从慢性乙型肝炎病人外周血单个核细胞(PBMC)中诱导和扩增乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL).方法含乙型肝炎病毒重组逆转录病毒载体转染病人自身永生化的B细胞作为抗原递呈细胞,联合重组HBcAg和IL-2,从病人PBMC中诱导和扩增HBcAg特异性CTL,51Cr释放法检测其细胞毒活性.结果此方法诱导的CTL可以有针对性的杀伤靶细胞,而不能够杀伤空载体转染及未经转染的B细胞.结论所建立的方法可以在慢性乙型肝炎病人的PBMC中诱导出HBcAg特异性CTL活性.
关键词： 细胞毒性T淋巴细胞 乙型肝炎病毒核心抗原 体外诱导 -
HBcAg病毒样颗粒与疫苗设计
寻找有效的疫苗来治疗肿瘤和微生物感染性疾病一直是人们追求的目标.近年来,基于乙型肝炎病毒核心抗原的颗粒疫苗在该领域取得了一些新的进展.本文就这些新的进展作一综述.
关键词： 病毒样颗粒 乙型肝炎病毒核心抗原 疫苗设计
