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乙酰胆碱对人表皮细胞冷存的影响
目的：探讨乙酰胆碱（Ach）对人表皮细胞冷存活力的影响。方法：应用人表皮细胞的分离、培养技术，并进行MTT检测、病理切片以及电镜检测等手段进行观察。结果：不同浓度的Ach对冷存的表皮细胞均有一定的保存活力作用，其中以10－8～10－10mol/L的浓度为佳。结论：认为Ach对冷存中的人表皮细胞有一定的保护作用，它可提高表皮细胞的保存活力。
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鬼臼毒素固体脂质纳米粒的制备及对人表皮细胞体外增殖的影响
目的 研究鬼臼毒素固体脂质纳米粒(POD-SLN)对人表皮细胞增殖的影响.方法 采用超声乳化法制备POD-SLN混悬液,采用扫描电镜观察其粒径大小和形态,粒径分析仪测定其粒径和电位,高效液相法测定其包封率,并观察其稳定性.用POD-SLN作用于体外培养的人表皮细胞,并于6、12、24、48h检测细胞的生长情况.实验设POD-SLN组、鬼臼毒素普通脂质体组、鬼臼毒素(POD)组、空白固体脂质纳米粒(SLN)组、空白对照组,MTT法测定各组对人表皮细胞增殖的抑制作用.结果 制备的POD-SLN呈圆球形或椭圆形,稳定性好,粒径为87.2±10.3nm,电位25.3±0.8mV,包封率为83.2%±2.5%.POD-SLN对人表皮细胞增殖的抑制作用呈浓度和时间依赖性.POD-SLN、POD普通脂质体及POD作用48h对人表皮细胞的抑制率高分别为91.05%、77.02%、68.46%,IC50分别为2.11、16.65、101.42μg/L.空白SLN对人表皮细胞增殖无影响.结论 该制备工艺可行,所制备的POD-SLN在体外能有效抑制人表皮细胞增殖,且作用强于POD及普通POD脂质体.
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几种生物材料对人表皮细胞DNA合成的影响
目的探讨Ⅰ型胶原、壳聚糖和海藻酸钠对人表皮细胞DNA合成的影响,为其在创伤创面的应用提供实验依据.方法采用正交试验方法,以体外培养的人表皮细胞为实验模型,用3H-TdR掺入法分别测定各实验组3H-TdR掺入值,以反应其DNA合成水平的变化.结果Ⅰ型胶原、壳聚糖、海藻酸钠处理组3H-TdR掺入值均较对照组明显升高(P＜0.01),Ⅰ型胶原、壳聚糖与海藻酸钠合用可显著提高人表皮细胞3H-TdR掺入值(P＜0.05).结论Ⅰ型胶原、壳聚糖和海藻酸钠对人表皮细胞DNA合成具有促进作用,Ⅰ型胶原、壳聚糖与海藻酸钠合用对人表皮细胞DNA合成具有协同作用,提示Ⅰ型胶原、壳聚糖和海藻酸钠在皮肤创伤创面的治疗中具有应用前景.
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氯化钇对人表皮细胞生长及凋亡的影响
目的探讨稀土化合物氯化钇(YCl3)对人表皮细胞生长及凋亡的影响.方法在无血清培养条件下,用MTT法检测人表皮细胞增殖功能.采用Tunel法检测紫外线照射后人表皮细胞凋亡.结果YCl3＜1.0mmol/L时对人表皮细胞生长无明显抑制作用(P＞0.05),而YCl3＞2.0mmol/L时对人表皮细胞生长有明显抑制作用(P＜0.01).低浓度YCl3(0.1mmol/L)对紫外线诱导的人表皮细胞凋亡有抑制作用(P＜0.05),而高于0.5mmol/L YCl3对紫外线诱导的人表皮凋亡无明显影响(P＞0.05).结论低浓度的YCl3对表皮细胞生长无影响,对紫外线诱导的表皮细胞凋亡有一定的保护作用.
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寻常型银屑病的观察及护理
Psoriasis俗称牛皮癣,是一种常见的慢性复发性炎症性皮肤病.基本损害为多层银白色鳞屑性丘疹或斑块,病程较长,易于复发,故对患者的身体健康和精神因素影响较大.正常人表皮细胞的生长周期约28d左右,而银屑病缩短至3d～4d,致使表皮细胞的正常角化过程发生障碍,导致临床特殊的皮肤损害出现.
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使用旋转式生物反应器体外扩增人表皮细胞
目的:使用Cytodex-3微载体和高截面纵横比的旋转式生物反应器容器作为培养系统大规模扩增人表皮细胞(hECs).方法:使用中性蛋白酶和胰蛋白酶-EDTA两步骤法从人皮肤中分离出人表皮细胞,使用DIL标记细胞后结合微载体后在旋转式生物反应器(RCCS)中培养,细胞贴附微载体的生长状态使用倒置显微镜,扫描电镜观测.并且分析细胞群体倍增时间来比较微重力培养与平面培养的体外增殖能力差异.结果:在旋转式生物反应器的微重力培养体系中,人表皮细胞能快速贴附到微载体表面,在培养过程中达到很大的细胞密度,并且表现出很强的增殖能力和细胞活性.结论:使用旋转式生物反应器和微载体悬浮培养人表皮细胞,是大量制备皮肤组织工程种子细胞的一种有效方法.
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寻常型银屑病受累表皮细胞在增殖与终末分化中DNA量的变化
我们已应用吖啶橙标记组织切片细胞DNA通过粘附式细胞仪(ACAS570)测试了正常人表皮细胞DNA在各层中的变化[1],现采用同样的方法对银屑病受累表皮各层细胞DNA含量、浓度、分布范围等作了初步的测试,试图揭示银屑病表皮细胞在增殖分化各阶段中DNA的异常变化规律.
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纳米碳酸钙对人表皮细胞氧化应激和凋亡的影响
目的：通过分析纳米碳酸钙对人表皮细胞（HaCaT）氧化应激和凋亡的影响，初步研究纳米碳酸钙对人表皮细胞的毒性效应。方法根据《纳米碳酸钙》（GB／T19590－2011）的要求对纳米碳酸钙进行表征鉴定和成份分析；MTT法检测纳米碳酸钙对HaCaT细胞的剂量－反应关系和时间－反应关系；比色等方法检测纳米碳酸钙染毒后HaCaT细胞谷胱甘肽过氧化物酶（GSH－Px）、超氧化物歧化酶（SOD）的活力和丙二醛（MDA）含量；Western blot法检测纳米碳酸钙对 HaCaT细胞 BAX 蛋白表达的影响。结果纳米碳酸钙平均粒径为（71．16±18．34）nm，30．00～100．00 nm占92．9％，100．00～150．00 nm占7．1％，碳元素的原子百分比是66．58％，氧元素的原子百分比是22．64％，钙元素的原子百分比是8．67％；纳米碳酸钙对HaCaT细胞的增殖抑制作用明显，半数致死浓度（IC50）为（235．544±29．198）μg／ml；半数致死浓度条件下纳米碳酸钙对HaCaT细胞GSH－Px、SOD活力、MDA活力和BAX蛋白表达影响与对照组相比差异无统计学意义（P＞0．05）。结论纳米碳酸钙对HaCaT细胞有增殖抑制性作用，对HaCaT细胞氧化应激和凋亡作用不显著。
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IL-17对人表皮细胞增殖过程中DNA含量的影响
目的:探讨IL-17对人表皮细胞增殖过程中DNA含量的影响.方法:将正常人皮肤移植于裸鼠,建立人皮肤-裸鼠嵌合模型60只;按配对设计要求随机分成实验组30只和对照组30只,实验组使用IL-17 0.1 mL (10 ng/mL) 注射于裸鼠移植皮肤内,对照组使用0.9%氯化钠0.1 mL注射于裸鼠移植皮肤内,每日1次,均连续使用28天后,以激光扫描共聚焦显微镜测试移植皮肤组织的人表皮细胞DNA荧光强度值.结果:与对照组相比,注射IL-17组人表皮细胞DNA荧光强度值明显增加,差异具有统计学意义(t=3.08,P<0.05).结论:IL-17可促进人表皮细胞增殖过程中DNA含量升高.
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IL-10对人表皮细胞增殖分化过程中DNA含量影响的实验研究
目的 探讨IL-10对人表皮细胞增殖分化过程中DNA含量的影响.方法 将正常人皮肤移植于裸鼠,建立人皮肤-裸鼠嵌合模型60只;按配对设计要求随机分成实验组和对照组各30只,实验组使用IL-10 0.1 ml (10 ng/ml)注射于裸鼠移植皮肤内,对照组使用0.9％氯化钠0.1ml注射于裸鼠移植皮肤内,均每天1次、连续使用28天,后以激光扫描共聚焦显微镜测试移植皮肤人表皮细胞DNA荧光强度值.结果 IL-10可使人表皮细胞DNA荧光强度值显著降低[实验组(353 928.93±11 672.33) vs.对照组(369 649.30±8576.48),t=5.97,P＜0.05].结论 IL-10能减少人表皮细胞增殖分化过程中DNA含量.
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IL-17对人表皮细胞DNA荧光密度的影响
目的 探讨IL-17对人表皮细胞DNA荧光密度的影响.方法 将正常人皮肤移植于裸鼠,建立人皮肤-裸鼠嵌合模型60只；按配对设计要求随机分成实验组30只和对照组30只,实验组注射IL-17 0.1 ml(10 ng/ml)于裸鼠移植皮肤内,对照组注射0.9％氯化钠0.1 ml于裸鼠移植皮肤内,均1次/d,连续使用28 d,后以激光扫描共聚焦显微镜测移植皮肤人表皮细胞DNA荧光密度值.结果 IL-17可使人表皮细胞DNA荧光密度值显著增加[实验组(2414.1667±309.4520)μm2 vs.对照组(1865.8667±244.8843)μm2,t=7.6102,P＜0.05].结论 IL-17可促进人表皮细胞增殖过程中DNA含量升高.
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白细胞介素-17及白细胞介素-10对人表皮细胞DNA增殖影响的析因研究
目的:探讨白细胞介素-17(IL-17)及白细胞介素-10(IL-10)对人表皮细胞DNA增殖的影响.方法:建立人皮肤-裸鼠嵌合模型64只,按析因设计要求,使用不同时间和浓度IL-17及IL-10注射于裸鼠移植皮肤内,再以激光扫描共聚焦显微镜测试移植人表皮细胞DNA综合荧光值数据进行分析.结果:随着IL-17使用浓度增加和使用时间加长可致人表皮细胞DNA综合荧光值显著增高(P＜0.05),IL-10使用浓度增加和使用时间加长可致人表皮细胞DNA综合荧光值显著降低(P＜0.05).结论:IL-17对人表皮细胞DNA增殖有促进作用,IL-10对人表皮细胞DNA增殖有抑制作用.
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间接抗原递呈途径在同种异体表皮细胞移植排斥反应中的作用研究
目的探讨间接同种异型识别在体外培养的同种异体表皮细胞移植排斥反应中的作用.方法体外分离培养人表皮细胞(Epidermal cells, EC)、异体人外周血淋巴细胞(Peripheral bloo lymphocytes, PBL)和单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells, PBM,含单核细胞).将毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA4Ig)腺病毒载体转染EC.转染与未转染的EC中均加入异体PBL或PBM共同培养,应用氚标记胸腺嘧啶脱氧核苷(3H-TdR)掺入法,测定各培养系中PBL、PBM增殖情况.结果 CTLA4Ig腺病毒载体能成功转染EC并表达相应蛋白.未转染的EC刺激异体PBL轻度增殖(P＜0.05),以及刺激含单核细胞的PBM明显增殖(P＜0.01);经CTLA4Ig腺病毒载体转染的EC刺激PBL、PBM增殖则明显减弱(P＜0.05).结论间接同种异型识别在EC排斥中发挥了重要作用,CTLA4Ig能明显减轻该作用.
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重组人表皮细胞生长因子对人皮肤细胞增殖作用的研究
目的:观察重组人表皮生长因子(recombinant human epidermlal glowth factor,rhEGF)对人表皮细胞增殖的变化.方法:运用包皮环切术后收集培养角质细胞,不同浓度的重组人表皮细胞生长因子处理细胞,MTT法测细胞生长率;流式细胞仪检测细胞周期以及蛋白的表达.结果:5～10 ng·ml-1重组人表皮细胞生长因子可促进人表皮细胞细胞生长.流式细胞仪检测10 ng·ml-1重组人表皮细胞生长因子处理后细胞增殖明显,S和G2/M期细胞数明显增加.结论:重组人表皮细胞生长因子可促进细胞生长以及切口愈合.
关键词： 重组人表皮细胞生长因子 人表皮细胞 增殖 -
不同接种密度对人表皮细胞培养融合的实验研究
目的:研究不同密度接种对人表皮细胞体外培养融合的影响.方法:外科切取无菌皮肤或包皮环切手术标本,经两步酶消化处理后,制备单个表皮细胞悬液.以不同细胞密度接种于含有3T3滋养细胞的培养瓶中,实验室体外原代培养扩增.结果:观察不同接种密度表皮细胞的体外培养增殖,结果表明人表皮细胞具较高的生长、增殖、融合能力.2×106cell/75cm2培养瓶密度接种人表皮细胞于含3T3滋养细胞培养瓶中,表皮细胞贴壁良好,细胞融合时间较短.结论:鼠3T3细胞能促进人表皮细胞贴壁,仍不失为较好的表皮细胞培养滋养层.适宜的表皮细胞接种密度为2×106cell/75cm2培养瓶.
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腺病毒介导的人表皮生长因子基因转染对人表皮细胞生物学特性的影响
目的 观察腺病毒介导的人EGF(Ad-hEGF)基因转染人表皮细胞的合适条件及转染对该细胞生物学特性的影响. 方法 取包皮环切术后弃用的新鲜人体包皮组织,通过酶消化法分离人表皮细胞,传代培养,采用第3代细胞进行以下实验.(1)按随机数字表法(分组方法下同)将细胞分为未转染组及5、20、50、100、150、200倍转染组,每组3孔.未转染组不转染Ad-hEGF基因,后6组分别按感染复数(MOI)5、20、50、100、150、200转染Ad-hEGF基因.转染24、48、72 h,倒置相差显微镜下观察细胞形态,倒置荧光显微镜下观察细胞绿色荧光蛋白表达.(2)另取3个批次细胞,分别同前分组处理,分别于转染24、48、72 h,流式细胞仪检测Ad-hEGF基因转染率(样本数为3),ELISA法检测收集的细胞培养上清液中EGF质量浓度(样本数为6),细胞计数试剂盒8(CCK8)及酶标仪检测细胞增殖活性(样本数为6).(3)另取细胞分为未转染组和转染组,每组6 孔.未转染组用未转染细胞的细胞培养上清液孵育,转染组用以佳MOI(50)转染Ad-hEGF基因细胞的细胞培养上清液孵育,分别于孵育1、3、5 d,CCK8及酶标仪检测细胞分泌的EGF生物活性.(4)另取细胞分为未转染组和转染组,每组12孔.未转染组不转染Ad-hEGF基因,转染组以佳MOI(50)转染Ad-hEGF基因.转染24 h,免疫荧光染色法检测细胞角蛋白14(CK14)、CK19表达.(5)另取细胞,同(4)分组(每组6孔)处理,于划痕后0(即刻)、12、24、48 h,倒置相差显微镜下观测细胞迁移距离.对数据行析因设计方差分析、重复测量方差分析、LSD检验. 结果 (1)转染24、48 h,各转染组细胞形态与未转染组比较,无明显改变;转染72 h,200倍转染组的细胞碎片较未转染组明显增多.转染24、48、72 h,未转染组细胞未见绿色荧光蛋白表达,各转染组绿色荧光蛋白阳性细胞数随转染时间延长逐渐增多.(2)各转染组细胞Ad-hEGF基因转染率随转染时间延长逐渐增高.转染72 h,50～ 200倍转染组细胞Ad-hEGF基因转染率均大于90％;未转染组及5、20倍转染组细胞Ad-hEGF基因转染率则分别为(0.51±0.20)％、(62.44±6.23)％、(75.00±5.43)％,明显低于50倍转染组的(93.12±2.55)％,P值均小于0.01.随着转染时间的延长,各转染组细胞培养上清液中EGF质量浓度逐渐增高;转染72 h,50倍转染组细胞培养上清液中EGF质量浓度明显高于其余各组(P值均小于0.01).转染24、48 h,各组细胞增殖活性相近(P值均大于0.05);转染72 h,200倍转染组细胞增殖活性明显低于其余各组(P值均小于0.05).(3)孵育1d,2组细胞分泌的EGF生物活性相近(P＞0.05);孵育3、5d,转染组细胞分泌的EGF生物活性明显高于未转染组(P值均小于0.01).(4)转染24 h,转染组细胞CK14、CK19表达较未转染组增强.(5)划痕后0h,2组细胞划痕宽度基本一致.划痕后12～48 h,转染组细胞迁移距离明显长于未转染组(P值均小于0.01). 结论 Ad-hEGF基因转染人表皮细胞的合适MOI为50～ 150,以50为佳,以此MOI转染既能高效表达目的基因,又可保持细胞良好的增殖、分化和迁移能力.
