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节律基因hBmal1在人结肠癌中的表达及临床意义
目的：检测hBmal1在人结肠癌中的表达，探讨其临床意义。方法应用免疫组织化学方法检测湖北省肿瘤医院30例人结肠癌患者中hBmal1的表达，以图像分析软件进行相关测定，并分析其表达与临床及病理常用指标的关系。结果人结肠癌组织和癌旁正常对照组织中hBmal1表达阳性率为76.67%（23/30） vs26.67%（8/30）（χ2=15.016，P＜0.01）；hBmal1在人结肠癌Dukes分期 B、C期中强阳性表达率为46.15%（6/13） vs88.24%（15/17）（χ2=6.212，P=0.013）。结论hBmal1在人结肠癌组织中有高表达，可能与癌症的发生发展侵袭转移有关。
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节律基因mPeriod2过表达对体外Lewis肺癌细胞γ射线敏感性的影响
目的 评价mPeriod2(mPer2)基因转染后过表达对小鼠Lewis肺癌细胞(LLCs)60Co-γ射线放射敏感性的影响. 方法 采用脂质体介导方法将mPer2基因转染至LLC细胞,以空白组及空载体质粒pcDNA3.1为对照,采用RT-PCR及流式细胞术检测mPer2基因在LLC细胞中的表达,给予60Co-γ射线4 Gy单次照射后,流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡,采用增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化、细胞集落形成实验检测细胞增殖及存活情况. 结果 60Co-γ射线照射后,与转染空载体质粒组及空白组比较,转染mPer2基因细胞表现为G2/M期阻滞,凋亡率下降(control: 8.10±0.03; pcDNA3.1-vector:11.20±0.07; pcDNA3.1-mPer2: 4.40±0.02; P＜0.05),细胞克隆形成增加(control: 14%; pcDNA3.1-vector: 11%; pcDNA3.1-mPer2: 32%; P＜0.01)及PCNA阳性表达增加(control: +, pcDNA3.1-vector:+, pcDNA3.1-mPer2:+++,P＜0.05). 结论 节律基因mPer2过表达使60Co-γ射线照射的小鼠Lewis肺癌细胞凋亡下降,细胞增殖明显,降低了该细胞对放射损伤的敏感性.
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小鼠钟基因Period2(Per2)抑制乳腺癌细胞生长的研究
目的研究小鼠节律基因Period2(Per2)对小鼠乳腺癌细胞(EMT6)的生长抑制及诱导凋亡的作用.方法将pcDNA3.1(+)-Per2转导入EMT6细胞内,同时设立转染空质粒pcDNA3.1(+)入细胞的对照组.以RT-PCR、Western blot、流式细胞技术来检测Per2基因和蛋白的表达;采用MTT、细胞生长曲线、细胞平板集落形成实验检测Per2过表达后对小鼠乳腺癌细胞的生长抑制作用;通过流式细胞技术、DNA 梯形带、hochst33258荧光染色和电镜技术检测Per2过表达后对小鼠乳腺癌细胞凋亡的影响.结果小鼠节律基因Per2过表达抑制EMT6细胞的生长和增殖,诱导细胞凋亡率增加.结论本研究发现小鼠节律基因Per2可能通过使EMT6细胞阻滞于G1 期,并诱导细胞凋亡来实现对该肿瘤细胞的生长抑制作用.
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吗啡依赖及戒断小鼠脑内节律基因mPeriod1表达的研究
目的研究吗啡依赖和吗啡戒断小鼠脑组织内节律基因mPeriod1(mPer1)表达的变化.方法以雄性BALB/C小鼠的吗啡条件性位置偏爱为指标,观测吗啡依赖组、吗啡戒断组小鼠与正常盐水组小鼠的药物精神依赖的变化;应用免疫组化SP法检测3组小鼠脑内mPer1的表达情况;利用图像软件对免疫组化结果进行分析和处理.结果吗啡依赖组的小鼠脑内mPer1表达峰值相位较正常盐水组有明显改变.而吗啡戒断组小鼠脑内mPer1表达峰值相位较正常盐水组没有显著性差异.结论研究结果表明吗啡成瘾影响了以mPer1为重要部件的近日钟的自激振荡过程,使近日节律发生了改变.
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核酶阻断per1表达对吗啡成瘾小鼠海马c-fos转录及表达的影响
目的研究用特异性核酶阻断生物节律基因per1的表达对吗啡成瘾小鼠海马c-fos基因转录及表达的影响.方法制备吗啡成瘾小鼠模型,向小鼠脑室内注射脂质体包裹的重组质粒pcDNA 3.1-per1 RZ DNA,在脑内产生特异性核酶-per1 RZ,阻断小鼠脑内生物节律基因per1的表达.作脑组织冰冻切片,用原位杂交和免疫组化法测定小鼠海马c-fos基因转录及表达的变化.结果 per1RZ能使吗啡成瘾小鼠海马的c-fos基因转录及表达明显减弱.结论重组质粒表达的per1RZ可以干扰生物节律基因per1的表达,抑制海马c-fos基因的转录和表达,从而控制吗啡成瘾的发生.
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节律基因Period1对吗啡依赖效应的影响
目的研究节律基因Period1在药物精神依赖形成中的作用. 方法设计针对节律基因Period1 mRNA的核酶 (per1RZ),构建以真核表达质粒pcDNA 3.1为基础的per1RZ表达质粒 (pcDNA 3.1-per1RZ);体外转录切割实验检测核酶对Period1 RNA的切割作用;脑室注射pcDNA 3.1-per1RZ,调节动物节律基因Period1的表达;以BALB/C 小鼠的吗啡条件性位置偏爱(CPP)为指标,观察pcDNA 3.1-per1RZ对吗啡精神依赖形成的影响. 结果体外切割实验发现per1RZ对Period1 RNA的切割效率达到60%;动物实验证实 per1RZ能有效干扰小鼠中枢神经系统Period1基因的表达,阻断吗啡条件性位置偏爱的形成.结论 节律基因Period1与药物精神依赖的形成有关,提示per1RZ可以阻断动物药物精神依赖的形成.
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节律基因mPeriod2对Lewis肺癌细胞生长的影响
目的研究节律基因mPeriod2 (mPer2)对肿瘤细胞的生长抑制及诱导分化凋亡的作用. 方法体外培养Lewis肺癌细胞,使用脂质体包裹法将真核表达质粒pcDNA 3.1为基础的mPer2表达质粒(pcDNA 3.1-mPer2)转导入Lewis肺癌细胞内;以免疫组化及流式细胞技术检测mPer2表达;通过流式细胞技术检测稳定转染的mPer2阳性表达的Lewis肺癌细胞的生长及凋亡. 结果 mPer2表达质粒(pcDNA 3.1-mPer2) 转染的Lewis肺癌细胞表达PERIOD2蛋白;与对照组比较,其增殖指数下降及凋亡率增加.结论节律基因mPer2可以抑制肿瘤细胞的生长,增加肿瘤细胞的凋亡率.
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时钟基因、近日节律与抑郁症关系的研究进展
临床研究已经发现抑郁症具有近日节律的变化,其中为突出的就是睡醒周期的改变.随着对节律基因的深入研究,这种近日节律的变化与抑郁症的关系正日益受到广泛关注.
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节律基因hClock及hBmal1对胃癌化疗敏感性的影响
目的：探讨节律基因hClock、hBmal1对胃癌细胞SGC-7901化疗敏感性的影响。方法：体外持续黑暗条件下培养SGC-7901，用实时定量PCR法检测两种主要的节律基因hClock、hBmal1在SGC-7901中不同时间点的表达，分别在节律基因hClock、hBmal1表达的高峰及低谷给予化疗药物多西他赛，CCK-8法检测化疗药物对肿瘤细胞的抑制率。结果：实时定量CR结果显示节律基因hClock、hBmal1在胃癌细胞SGC-7901中不同时间点表达不同，存在时相性波动，表达高峰在20：00，而表达低谷在08：00。CCK-8法显示在节律基因hClock、hBmal1表达高峰时，多西他赛对肿瘤细胞的抑制率低于其在低谷时的抑制率。结论：节律基因hClock、hBmal1过表达可以降低胃癌细胞SGC-7901对多西他赛的敏感性。
关键词： SGC-7901细胞 节律基因 hClock hBmal1 化疗敏感性 -
急性冠状动脉综合征患者外周血单个核细胞节律基因与病变严重程度的相关性
目的 分析急性冠状动脉综合征(ACS)患者外周血单个核细胞(PBMCs)节律基因表达水平的变化及其与冠状动脉病变严重程度的相关性.方法 选择2011年9月-2012年2月疑诊为冠状动脉性心脏病并行冠状动脉造影检查的85例住院患者,按临床症状、心电图、心肌酶谱及冠状动脉造影检查结果分为稳定型心绞痛(SAP)组(40例)和ACS组(45例),所有患者留取全血,经Ficoll离心分离PBMCs,体外培养过程中经血清撤离诱导节律性；采用定量聚合酶链反应检测相关节律基因的表达情况,再经Chronos-fit软件评估其节律性.采用Gensini积分评价冠状动脉病变严重程度.结果 与SAP组比较,ACS组的PBMCs节律性表现为峰值时间改变且整体表达水平降低.Gensini积分与PBMCs节律基因Perl的峰值时间呈正相关(r=0.855,P＜0.01),与其表达水平呈负相关(r=-0.753,P＜0.05),与节律基因Rev-erbα的相关性则相反(r值分别为-0.721和0.832,P值均＜0.05).结论 ACS患者PBMCs的节律性明显异常,且与冠状动脉病变的严重程度密切相关,这可能是患者整体节律性紊乱的表现,其将可能应用于临床患者冠状动脉病变的早期预测.
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胃癌组织中节律基因 Period1和 Period2的表达变化及意义
目的：观察节律基因 Period1和 Period2在胃癌组织中的表达变化，并探讨其临床意义。方法选择138例胃癌患者，术中留取胃癌及癌旁组织，采用免疫组化法检测胃癌及癌旁组织中的 Period1和 Period2，实时荧光定量PCR 法检测胃癌及癌旁组织中的 Period1和 Period2 mRNA。结果胃癌组织中 Period1和 Period2阳性表达率分别为23．2％、31．2％，均低于癌旁组织中的44．9％、64．5％（P 均＜0．01）；胃癌组织中 Period1 mRNA 和 Period2 mRNA 相对表达量分别为1．05±0．10、1．09±0．12，均低于癌旁组织中的1．31±0．13、1．47±0．16（P 均＜0．01）；Period1 mRNA 表达与胃癌组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移和 Lauren 分型有关（P 均＜0．05），Period2 mRNA 表达与胃癌组织分化程度、浸润深度、TNM分期、淋巴结转移和 Lauren 分型均有关（P 均＜0．05）；相关性分析显示，胃癌组织中 Period1与Period2表达呈正相关（r ＝0．285，P ＜0．05），Period1 mRNA 与 Period2 mRNA 表达呈正相关（r ＝0．379，P ＜0．05）。结论胃癌组织中节律基因 Period1和 Period2呈低表达，可能在胃癌的发生、发展中起重要作用。
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clock基因在脑胶质瘤组织中的表达变化
目的 探讨生物钟基因clock在脑胶质瘤发生、发展中的作用.方法 采用RT-PCR及免疫组化方法检测67例不同级别的脑胶质瘤(胶质瘤组)和周围正常组织(对照组)clock的转录活性及表达强度.结果 两组clock基因均有表达,胶质瘤组Ⅲ～Ⅳ级者clock基因mRNA及蛋白表达均高于Ⅰ～Ⅱ级者及对照组(P均＜0.05).结论 生物钟基因clock在高级别脑胶质瘤组织中呈高表达,clock表达强度与脑胶质瘤的恶性程度呈正相关.
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胶质瘤组织中Per2和PCNA的表达及其相关性
[目的]观察胶质瘤组织中节律基因Per2和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达变化,探讨其相关性及二者与胶质瘤临床病理特征的关系.[方法]采用免疫组化ABC法检测37例胶质瘤组织及瘤周组织中的Per2和PCNA.[结果]胶质瘤组织中,Per2阳性表达率为29.7％(11/37),明显低于瘤周组织的62.2％(23/37)；PCNA阳性表达率为100％,明显高于瘤周组织的0(P均＜0.05).高分化胶质瘤组织中Per2、PCNA强阳性表达率分别为16.7％、88.9％,低分化者分别为42.1％、26.1％,二者Per2、PCNA的表达差异具有统计学意义(P均＜0.05).胶质瘤组织中Per2与PCNA的表达呈负相关(r=-0.492,P ＜0.05).[结论]胶质瘤组织中Per2的表达下调、PCNA 表达上调,Per2与PCNA的表达呈负相关关系；Per2、PCNA与胶质瘤分化程度有关.
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节律基因Per2对小鼠肿瘤细胞增殖和凋亡的影响
我们通过体外诱导节律基因Per2的过表达,观察Per2对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响;同时通过小鼠体内实验观察Per2对肿瘤生长的影响,探讨Per2表达对卵巢癌细胞的肿瘤抑制作用.
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缺氧缺血新生大鼠神经元自噬基因表达节律及调控机制
目的 通过新生大鼠缺氧缺血脑损伤后神经元自噬基因和节律基因的表达,探讨缺氧缺血引起神经损伤的新机制.方法 将12只Sprague-Dawley大鼠随机分为缺氧缺血组和假手术组,每组6只.采用结扎并切断大鼠右侧颈总动脉并给予低氧处理的方法建立体内缺氧缺血脑损伤模型.Western blot检测两组大鼠大脑皮层和海马组织节律蛋白Clock表达情况.体外培养大鼠神经元细胞,随机分为氧糖剥夺(OGD)组和对照组,OGD组加入无糖无血清DMEM培养基模拟细胞缺血状态,并给予低氧处理建立体外缺氧缺血脑损伤模型.采用Western blot检测两组不同时间点自噬相关蛋白Beclin1和LC3,以及节律基因Clock蛋白表达情况.应用siRNA技术抑制神经元Clock蛋白表达后,检测Beclin1和LC3的表达变化.结果 体外培养神经元Beclin1和LC3Ⅱ的表达呈现节律性波动;OGD处理后,体外培养神经元Beclin1和LC3Ⅱ的表达随着时间的延长逐渐升高,不再呈现节律性波动;与假手术组相比,缺氧缺血引起大鼠皮层和海马组织Clock表达降低(P<0.05);体外培养神经元经OGD处理后,Clock表达也较对照组显著降低(P<0.05);与阴性对照组相比,抑制神经元节律基因Clock表达后,自噬相关蛋白Beclin1和LC3Ⅱ的表达均显著下降(P<0.05).结论 缺氧缺血引起神经元Beclin1和LC3Ⅱ表达节律紊乱,其机制可能与Clock参与调控Beclin1和LC3Ⅱ的表达有关.
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节律基因Bmal1对胃癌细胞增殖的影响
目的：研究人节律基因Bmal1对胃癌细胞增殖的影响及对相关基因表达的影响。方法：以RNA干扰特异沉默Bmal1的胃癌细胞BGC823作为实验组，以正常BGC823细胞为对照组；采用MTT检测Bmal1干扰前后对胃癌细胞生长的影响；采用实时定量 RT-PCR 检测两组细胞 p53、c-Fos 和 c-Jun 基因的表达。结果：MTT 结果显示与对照组相比，6、12和24 h 后实验组增殖率分别为5．78％（P ＝0．001）、9．20％（P ＝0．00）和83．08％（P＝0．00），同时发现p53较对照组表达显著减少（P＝0．09），与对照组比较有统计学差异，而c-Fos和c-Jun增高，但与对照组比较无显著差异（P值分别为0．125和0．269）。结论：节律基因Bmal1可能通过p53诱导胃癌增殖异常，可作为调节胃癌治疗敏感性的新靶点。
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成纤维细胞端粒酶重建对生物节律的调控
为探讨衰老对生物节律调控的分子机理,以青龄、衰老和端粒酶重建的皮肤成纤维细胞作为细胞模型,检测节律基因Per2,BMAL1和Clock表达.衰老细胞中节律基因表达受损,端粒酶重建细胞恢复了节律基因的节律性表达,提示端粒酶重建细胞可望用于衰老细胞的替代治疗.
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节律基因家族在恶性肿瘤中的研究进展
节律基因是一组以24 h为周期节律性表达的基因.它广泛存在于原核和真核细胞中,使大多数细胞活动,如激素分泌、细胞增殖和细胞内代谢等呈现周期性、有序性和协同性.近年来,节律基因在恶性肿瘤的发生、发展中的关系成为研究热点,节律基因表达异常与恶性肿瘤有着密切关系.
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节律基因在肿瘤中的研究进展
生物昼夜节律是生物体内具有自我调节功能、以生命活动24 h为周期的一种生理节律系统，因其节律特性类似于钟表而被叫做生物钟。生物昼夜节律依照周期的长短分为亚日节律（ultradian rhythm），周期短于1 d ，如呼吸、心跳等；近日节律（circadian rhythm），周期接近于24 h ，如体温、血压、血细胞数量、激素分泌等；超日节律（infradian rhythm），周期超过1 d ，以月、年为周期，如迁徙、繁殖和冬眠等。近日节律是研究、应用多的节律行为。生物昼夜节律调控着生物的生理、代谢和行为，与人类健康有着密切的关系，其异常可导致疾病或肿瘤的发生。近几年来随着科学技术的发展和人类认知水平的提高，兴起了研究生物昼夜节律的学科--时间生物学（Chronobiol‐ogy）。时间生物学不断与多种学科交叉，为生命科学的探索注入了新鲜的血液。从20世纪70年代开始，随着分子生物学和蛋白质组学的发展，调控生物昼夜节律的基因相继被发现和研究应用，生物节律及其机制研究有了突破性的进展，其在肿瘤发生和进展中的作用也不断显现。现就生物昼夜节律基因的分子生物学机制及其在肿瘤中的研究进展作一综述。
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妊娠时间生物学的研究进展
与妊娠相关的时间生物学研究不断涌现,这些研究成果渐成系统,催生了时间生物学新的亚领域妊娠时间生物学.本文从妊娠的各个时间段对众多的研究成果加以综述,并探讨该领域前景及临床可研究的方向.
