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人精子细胞膜结合型透明质酸酶在乳腺癌的表达及临床病理意义
目的研究人精子细胞膜结合型透明质酸酶(PH20)在人原发、转移乳腺癌中的蛋白及mRNA表达,探讨其在肿瘤转移中的作用.方法合成两个高抗原性人PH20多肽,免疫于兔皮下,检测、鉴定、纯化抗PH20抗体.应用免疫组织化学抗生物素蛋白-生物素复合物(ABC)法检测53例乳腺癌原发及淋巴结转移灶PH20的表达;Western印迹法检测5例新鲜乳腺癌组织PH20的表达.合成两条PH20寡核苷酸探针,应用原位杂交检测乳腺组织芯片,包括28例乳腺癌组织,5例乳腺癌旁组织,15例正常乳腺组织.结果PH20免疫组织化学示:正常乳腺组织无表达(0/3),53例乳腺癌中31例呈阳性表达(58.4%),其中乳腺癌不伴有淋巴结转移阳性率48.2%,乳腺癌伴有淋巴结转移原发癌70.8%,转移癌83.3%.Western印迹法示5例乳腺癌均有PH20相应阳性条带的表达.寡核苷酸探针原位杂交显示75%(21/28)乳腺癌中有PH20mRNA表达.17例正常乳腺组织中2例乳腺小叶呈弱阳性表达.结论PH20的表达似乎与乳腺癌的浸润转移行为呈正相关,提示透明质酸酶可能消化乳腺癌周围组织,并释放纤维母细胞生长因子-2而促进其肿瘤生长和转移.
关键词： 乳腺肿瘤 透明质酸葡糖胺酶 有丝分裂素激活蛋白激酶类 肿瘤转移 -
改良固定底物膜法对精子顶体透明质酸酶检测的研究
目的 研制一种检测人精子透明质酸酶的改良底物膜法,以提高临床对男性不育的诊断水平.方法 根据精子顶体透明质酸酶能溶解卵丘基质透明质酸的生化特性,通过改良透明质酸钠-明胶底物膜法,后进行孵育及染色来显示透明质酸酶的活性.本研究检测了70例人精子透明质酸酶活性,并结合临床精液常规检查结果选择和分组标本(生育组26例,不育A组13例,不育B组31例),对生育组与各不育组之间的平均酶活性进行统计学分析.结果 在普通光镜下即可观察到在阳性反应区以深紫蓝色底膜为背景的清晰明亮的消化晕环,晕环数量及直径的大小与透明质酸酶活性成正比.生育组透明质酸酶平均阳性率为70.84%,酶活性亮区平均直径为78.17 μm;不育A组酶平均阳性率为60.02%,酶活性亮区平均直径为76.92 μm;不育B组酶平均阳性率为29.11%,酶活性亮区平均直径为8.22 μm;经t检验,生育组酶活性两项指标均高于不育B组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 本研究检测方法简便、可靠,并可连续观察单个精子顶体透明质酸酶活性反应,很适合作为临床评价精子功能的有效指标,并提高对男性不育的诊断水平.
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siRNA沉默HYAL1基因表达对人乳腺癌细胞侵袭力的影响
目的 研究RNA干扰对透明质酸酶基因HYAL1的表达以及对人乳腺癌细胞侵袭力的影响.方法 体外化学合成HYAL1序列特异性双链RNA(dsRNA),在脂质体(SiPORT Lipid)的介导下转染入人乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MDA-MB-453S、ZR-75和ZR-75-30.荧光共聚焦显微镜下观察转染效率,RT-PCR分析HYAL1 mRNA的表达,体外实验测定肿瘤细胞穿透matrigel的能力.结果 4种乳腺癌细胞株的HYAL1基因的表达均被HYAL1-siRNA有效封闭,HYAL1 mRNA相对水平明显降低(P＜0.05).转染48 h后4种人乳腺癌细胞的侵袭力均明显降低(P＜0.01).结论 HYAL1-siRNA能有效抑制人乳腺癌细胞株HYAL1基因的表达,降低人乳腺癌细胞的侵袭力.
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糖尿病大鼠药物性玻璃体松解术的研究
目的 研究在糖尿病大鼠中能否采用药物性玻璃体松解术诱导完全性玻璃体后脱离(PVD).方法 实验研究.成年SD大鼠用链脲佐菌素(STZ)腹腔注射诱发糖尿病,4周后用视觉电生理、视网膜血管铺片、透射电镜观明确视网膜病变的发生.发病4周后将糖尿病大鼠分为4组:A组10只,右眼玻璃体内注射透明质酸酶5 U;B组10只,右眼玻璃体腔内注射纤溶酶0.5 U;C组10只,右眼玻璃体腔内注射纤溶酶0.5 U+透明质酸酶5 U;D组10只,右眼玻璃体注射BSS 2 μl.注射后一周内观察眼部一般情况并检查视觉电生理变化(F-ERG).一周时取各组大鼠视网膜做扫描电镜检查和组织切片,观察视网膜组织结构及玻璃体后脱离的发生情况.对数据采用t检验进行统计学分析.结果 糖尿病大鼠发病4周时已经有视觉电生理的改变,血管铺片显示周细胞的减少(t=6.1,P<0.01);Ops振幅降低、峰时延迟(t=2.8,3.4;P<0.05);透射电镜显示毛细血管周细胞水肿变性.玻璃体腔注射药物一周后,通过扫描电镜观察A组和D组无PVD发生(0/10);B组发生部分性PVD 6/10,完全性PVD 4/10;C组发生完全性PVD 10/10.视觉电生理检查各组与注射前相比差异均无统计学意义(P>0.05),组织切片检查未显示视网膜组织结构的异常改变.结论 STZ诱导糖尿病4周大鼠视网膜已经出现了病理改变,在其玻璃体腔中注射0.5 U的纤溶酶加5 U的透明质酸酶能够稳定地诱发出完全性PVD,而单独使用纤溶酶仅能诱发出部分性PVD,透明质酸酶不能诱发出PVD.各组未见药物对视网膜的结构和功能造成明显的毒性反应.
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兔眼玻璃体视网膜交界面酶溶解分离研究
目的探讨玻璃体腔内注射纤维蛋白溶解酶、透明质酸酶以及两酶联合使用时的安全用药剂量,并评价其造成玻璃体后脱离的程度.方法新西兰大耳白兔48只,随机均分为6个组,每只兔任意1只眼为实验眼,另1只眼为对照眼.每组实验眼于视乳头前玻璃体后1/3注射不同的药物及剂量:1组:透明质酸酶20 IU、平衡盐溶液(BSS)0.1 ml;2组:透明质酸酶30 IU、BSS 0.1 ml;3组:纤维蛋白溶解酶1 IU、BSS 0.1 ml;4组:纤维蛋白溶解酶2 IU、BSS 0.1 ml;5组:纤维蛋白溶解酶3 IU、BSS 0.1 ml;6组:透明质酸酶20 IU、BSS 0.05 ml,联合纤维蛋白溶解酶1 IU、BSS 0.05 ml.所有对照眼相同部位注入BSS 0.1 ml.注药后进行裂隙灯、+90D前置镜、间接检眼镜、视网膜电流图(ERG)、B超及相干光断层扫描检查,观察2周后,眼球组织标本做光镜及扫描电镜观察.结果1组、3组以及6组兔实验眼未发生眼内炎性反应及视网膜毒性反应;2组和4组兔实验眼均发生眼内轻微炎性反应,视网膜组织结构未见明显异常,但后者ERG显示有可逆性降低;5组兔实验眼发生较严重的眼内炎性反应,且ERG及视网膜组织学出现改变.1～5组均未发生完全性玻璃体后脱离,6组成功诱导出完全性玻璃体后脱离.结论玻璃体内注射透明质酸酶20 IU和(或)纤维蛋白溶解酶1 IU对视网膜及其他眼内组织安全、可靠、无毒副作用.玻璃体腔内联合注射透明质酸酶20 IU和纤维蛋白溶解酶1 IU可诱导完全性玻璃体后脱离.(中华眼科杂志,2004,40:459-464)
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药物玻璃体溶解术的研究进展
近年来,人们认识到玻璃体与视网膜粘连可引发多种眼底病变.以往我们使用玻璃体切除术解除玻璃体与视网膜的粘连,但玻璃体切除术时会遇到玻璃体与视网膜粘连分离不完全、玻璃体残留和手术并发症的限制.然而,药物玻璃体溶解术给我们提供了治疗持续病理性玻璃体黄斑粘连的另一个治疗途径.本文对玻璃体分子组织结构、玻璃体后脱离的基本原理,以及当前药物玻璃体溶解术的研究进展进行综述.
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玻璃酸酶混合液宫颈局部封闭在晚期妊娠引产中的应用
目的 研究玻璃酸酶混合液宫颈局部封闭在晚期妊娠引产中的应用,分析其风险性和可行性.方法 将299例晚期妊娠需引产孕妇随机分为观察组和对照组,应用玻璃酸酶混合液宫颈局部封闭及缩宫素引产为观察组;单纯应用缩宫素引产为对照组.观察两组引产效果及分娩并发症发生情况.结果 观察组潜伏期、活跃期、总产程分别为(6.0±0.5)、(2.5±0.5)、(9.5±0.5)h,对照组分别为(8.0±0.5)、(4.0±0.5)、(13.0±0.5)h,观察组均较对照组明显缩短;观察组宫颈撕裂、不协调性官缩、新生儿窒息发生率分别为3.03%、7.27%、2.42%,对照组分别为11.94%、26.87%、14.18%,观察组均明显低于对照组.结论 应用玻璃酸酶混合液宫颈局部封闭促宫颈成熟后,潜伏期、活跃期及总产程明显缩短,宫颈撕裂、不协调性宫缩、新生儿窒息发生率明显降低,是一种安全、有效的局部促宫颈成熟方法.
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三种方法治疗耳垂瘢痕疙瘩的疗效比较
耳垂瘢痕疙瘩多发于中青年女性,多由扎耳环孔引起.传统单纯手术切除的复发率高.我科自1980年以来,采用单纯手术切除,术后加局部注射氢化泼尼松、透明质酸酶3种方法,治疗耳垂瘢痕疙瘩50例(60只耳),报告如下.
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局部注射透明质酸酶复合曲安奈德对大鼠肌腱粘连的影响
目的 评价局部注射透明质酸酶复合曲安奈德对大鼠肌腱粘连形态学的影响.方法 48只SD纯种雄性大鼠,制作跟肌腱粘连模型后,随机分为3组(n=16):A组(对照组)、B组和C组.术后1周3组分别跟肌腱注射利多卡因1 mg、利多卡因1 mg+曲安奈德0.2mg和利多卡因1 mg+透明质酸酶15 IU+曲安奈德0.2 mg,容量均为0.2ml.3组分别于注射后7、14 d各处死8只大鼠,取右后肢损伤区标本,评价肌腱粘连程度,并进行肌腱粘连范围评分、电镜观察及成纤维细胞计数.结果 与A组比较,B组和C组肌腱粘连等级(14 d)、肌腱粘连范围评分以及成纤维细胞计数降低(P＜0.05);与B组比较,C组肌腱粘连等级(14 d)、肌腱粘连范围评分以及成纤维细胞计数降低(P＜0.05).电镜下B组和C组成纤维细胞增殖活跃程度低于A组.结论 复合透明质酸酶局部注射可增强曲安奈德抗大鼠肌腱粘连的效果.
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屎肠球菌透明质酸酶全长基因的克隆表达和免疫原性
目的 构建屎肠球菌透明质酸酶(hyaluronidase,hy1)基因重组表达质粒,在大肠埃希菌中表达获得重组蛋白,探讨Hy1蛋白经口服免疫小鼠后,机体产生的免疫应答.方法 PCR扩增hy1基因片段,克隆至pQE-30质粒上,构建重组质粒pQE-hy1,转化E.coli DH5α,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白Hy1;Western印迹分析其免疫反应性.融合蛋白经镍离子柱纯化后,Hy1和屎肠球菌全菌蛋白TX0016分别给小鼠灌胃进行免疫,ELISA法检测小鼠血清IgG、IgA、小肠黏液sIgA和粪便sIgA.用TX0016进行腹腔攻击已免疫的小鼠,观察其免疫保护性.结果 经测序hy1基因全长1 662 bp,为编码553个氨基酸残基的多肽.经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析相对分子质量约为60 000.可溶性表达占全菌的38%以上,经亲和层析后可获得纯度为92%以上的重组蛋白.Western印迹证实了其免疫反应性.灌胃免疫小鼠后,ELISA法检测结果Hy1组血清IgA、IgG、粪sIgA、肠黏液sIgA分别为0.365±0.048、0.431±0.064、0.743±0.056和1.112±0.113,对照组则分别为0.051±0.013、0.098±0.019、0.102±0.032和0.187±0.051,差异有统计学意义(P＜0.01).用半数致死量(LD50)的细菌量攻击后,Hy1免疫组小鼠的存活率为70%,而对照组为50%.结论 融合蛋白Hy1经口服免疫可有效诱导黏膜免疫应答,产生高水平的sIgA,发挥局部黏膜免疫作用.
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人增生性瘢痕组织中肥大细胞分离的条件优化
目的 探讨分离人增生性瘢痕组织中肥大细胞(MC)所用的I型胶原酶和透明质酸酶的佳浓度;获取MC,用于瘢痕瘙痒研究.方法 用不同浓度的I型胶原酶和透明质酸酶消化分离MC;甲苯胺蓝染色和番红复染,鉴定并计数MC.结果 MC体积大、核呈蓝色,胞浆内含紫红色分泌颗粒.当透明质酸酶浓度为1 mg/ml时,与I型胶原酶浓度为1、2 mg/ml组比较,Ⅰ型胶原酶浓度为3、4 mg/ml组分离出的MC占有核细胞的百分比明显增加,差异均有显著性(P<0.01);但3 mg/ml组与4 mg/ml组之间的差异不明显(P>0.05).当Ⅰ型胶原酶浓度为3 mg/ml时,与透明质酸酶浓度为0.5 mg/ml组比较,透明质酸酶浓度为1、2 mg/ml组分离出的MC占有核细胞的百分比明显增加,差异均有显著性(P<0.01);但1 mg/ml与2 mg/ml组之间的差异不明显(P>0.05).培养12 h的细胞悬液中大部分黏附能力强的细胞已贴壁、溶解,而MC黏附性较差,轻轻摇动就可重新悬浮于培养液中.结论 用Ⅰ型胶原酶和透质酸酶可以成功分离出人增生性瘢痕组织中的MC,佳浓度分别为3、1 mg/ml.分离的MC存活时间较长,可满足实验需求.
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血清学指标对肝硬化程度的预测分析
目的 探讨不同程度肝硬化患者临床血清学指标,评价和判断在诊断中的应用价值.方法 肝硬化代偿期和失代偿期患者各50例,对照组50例,对其相关血清学指标进行统计分析.结果 失代偿期肝硬化总胆红素(TBIL)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)分别为(69.5 ±7.0)μmol/L、(143.1±14.2)U/L,高于代偿期肝硬化[(44.6±5.8) μmol/L、(77.4±8.6) U/L,P＜0.05]；两组均高于对照组(P＜0.05)；失代偿期肝硬化血清白蛋白(Alb)和胆碱酯酶(ChE)分别为(28.2±3.7)g/L和(2 024.39±211.40) U/L,均低于对照组(36.1±3.7) g/L、(6 169.36 ±607.42) U/L和代偿期肝硬化[(34.7±4.3)g/L(3 571.27±310.01) U/L] (P＜0.05)；代偿期肝硬化组ChE低于对照组(P＜0.05).失代偿期肝硬化和代偿期肝硬化前白蛋白(PA)和腺苷脱氨酶(ADA)分别为(0.14±0.04) mg/L、(16.17±1.94) U/L和(0.21 ±0.05) mg/L、(34.20±3.29) U/L,差异有统计学意义(P＜0.05).失代偿期肝硬化和代偿期肝硬化A/G分别为(0.64±0.29)和(1.06±0.30),均低于对照组(1.51±0.21) (P＜0.05),且失代偿期肝硬化低于代偿期肝硬化(P＜0.05).失代偿期肝硬化Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)和层黏连蛋白(LN)分别为(97.4± 9.8) μg/L和(205.7±20.1) μg/L,均高于代偿期肝硬化(68.7±7.5)μg/L和(124.1±11.8) μg/L和对照组[(52.3±6.1)μg/L和(83.8±7.6)μg/L],且代偿期肝硬化组高于对照组(P＜0.05)；失代偿期肝硬化透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)分别为(211.3±16.4) μg/L和(168.1±16.2) μg/L,均高于对照组(51.2± 5.3) μg/L和(79.1±8.0)μg/L(P ＜0.05).结论 丙氨酸氨基转移酶等几项血清学指标对于不同肝硬化程度临床诊断和预后判断有重要的参考价值.
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自拟中药汤剂联合阿德福韦酯治疗肝硬化的疗效及其对血清肝纤维化指标的影响
目的 探讨自拟中药汤剂联合阿德福韦酯治疗肝炎肝硬化的疗效以及对血清肝纤维化指标的影响.方法 收集98例肝炎肝硬化患者,按信封法随机分为研究组与对照组,研究组患者应用自拟中药汤剂联合阿德福韦酯治疗,而对照组单用阿德福韦酯治疗,观察随访半年,比较治疗前后两组患者肝功改善情况、HBV DNA转阴率及血清肝纤维化指标变化情况.结果 研究组治疗后ALT(59.13±4.92)U/L、AST(81.26±6.17) U/L,明显低于对照组的(104.58±3.81)U/L、(127.83±9.02) U/L(P ＜0.05),且治疗后HBV DNA转阴率(55.10％)明显高于对照组(30.61％)(P＜0.05),而血清肝纤维化的各项指标水平两组差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 自拟中药汤剂联合阿德福韦酯治疗肝硬化疗效肯定,并对血清肝纤维化指标有明显改善作用,值得进一步研究.
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尿中透明质酸和透明质酸酶诊断膀胱肿瘤的研究进展
膀胱肿瘤占泌尿系肿瘤首位,初次治疗后易复发,需定期随访.目前常用的方法为膀胱镜检,其具有一定的损伤.虽然也有一些非创伤方法,但其敏感性和特异性较低或不稳定.透明质酸(HA)和透明质酸酶(HAase)检查对各级和各期膀胱肿瘤具有很高的敏感性和特异性,可能是膀胱肿瘤诊断和随访的有效方法,有可能在临床发现肿瘤前做出诊断.
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病毒性肝炎病人血清透明质酸酶水平检测及其意义
目的 探讨病毒性肝炎病人血清透明质酸酶(HA)的水平及其临床意义.方法 采用电化学发光法测定132例各种病毒性肝炎病人及100例正常对照组血清HA水平.比较各组病毒性肝炎之间及与正常对照组血清HA水平差异.结果 急性黄疸性肝炎组血清HA水平与正常对照组比较差异无显著性(P>0.05),两组血清HA水平与慢性肝炎轻度组、慢性肝炎中度组、慢性肝炎重度组及肝炎后肝硬化组比较差异有显著性(F=168.01,q=6.47～39.04,P<0.05).结论 动态测定血清HA水平,可作为反映慢性病毒性肝炎病人病情严重程度和预后的指标.
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透明质酸酶用于治疗肌筋膜疼痛综合征
目的 观察透明质酸酶用于肌筋膜疼痛综合征治疗的临床效果.方法 40例腰背部肌筋膜疼痛综合征患者,随机分为两组(每组20例),均采用痛点筋膜下阻滞.药物配制:A组利多卡因100mg、地塞米松5mg;B组利多卡因100mg、地塞米松5mg、透明质酸酶1 500单位,均用生理盐水稀释至20 ml.每周注射1次,连续治疗3周,治疗结束后1周评定疗效.结果 B组全部有效,总有效率100%,明显好于A组(16例,总有效率80%)(P＜0.05).结论 肌筋膜疼痛综合征采用阻滞疗法时,复合透明质酸酶有利于提高治疗效果.
