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Egb761对迟发性运动障碍模型大鼠的预防和治疗作用及可能机制
目的:分析银杏叶提取物Egb761对迟发性运动障碍(TD)模型大鼠行为学和血清脑源性营养因子(BDNF)和总抗氧化能力(TAC)水平的影响,探索TD可能的防治机制.方法:将32只雄性Sprague-Dawley (SD)大鼠随机分为对照组[腹腔注射生理盐水(NS)2 mL/kg+第5周始灌胃5mL/kgNS]、TD组[腹腔注射氟哌啶醇(Hal)2 mg/kg+第5周始灌胃5mL/kgNS]、Egb761预防组(P-Egb761组)(腹腔注射Hal 2 mg/kg同时灌胃5 mL/kgEgb761溶液)、Egb761治疗组(T-Egb761组)(腹腔注射Hal 2 mg/kg+第5周始灌胃5mL/kgEgb761溶液).每组8只,共观察10周,每周第7天评定大鼠口周不自主运动(VCM)的严重程度.第10周末采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清BDNF浓度,采用分光光度法检测血清TAC水平.结果:与对照组相比,第3周末TD和T-Egb761组VCM评分显著增加(P＜0.05),第5周末达峰值;第6周后T-Egb761组VCM评分逐步下降;第10周末T-Egb761组VCM评分(4.1±2.0)显著低于TD组(27.9±5.8) (P＜0.001),与对照组(3.5±1.9)无差异(P＞0.05);P-Egb761组与对照组10个评估点VCM评分无差异;第10周末,TD组血清BDNF水平[(6.9±1.0)pg/mL]低于对照组[(8.6±2.5) pg/mL]、T-Egb761组[(8.9±1.5) pg/mL]和P-Egb761组[(9.6±1.4) pg/mL];TD组TAC水平[(11.9±3.2) U/mL]低于对照组[(18.2±5.5) U/mL]和T-Egb761组[(19.4±4.4) U/mL] (P＜0.05),与P-Egb761组差异无统计学意义(P＞0.05).结论:Egb761可预防和显著缓解TD模型大鼠VCM症状,神经元的保护因素和自由基代谢异常可能在TD发生、发展过程中作用关键.
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EGb761对慢性低氧低糖培养的大鼠海马神经元β分泌酶的影响
目的 研究银杏叶制剂EGb761(金钠多)对慢性低氧低糖培养大鼠海马神经元D分泌酶的影响,探讨其防治痴呆的可能机制.方法 取新生24h的Wistar大鼠海马神经元原代培养,培养第7d行低氧低糖培养和Egb 761(金纳多100ug/ml)药物干预,以荧光法检测D分泌酶活性,Western blot检测13分泌酶BACEI蛋白表达.结果 低氧低糖培养12 h、24 h、56 h组海马神经元较正常培养对照组β分泌酶活性升高(P＜0.05);金纳多药物干预12 h、24 h、56 ha与相应时间非药物干预组相比海马神经元β分泌酶活性降低(P＜0.05).低氧低糖培养12 h、24 h、56 h组海马神经元β分泌酶BACE1表达水平升高(P＜0.05);金纳多药物干预12 h、24 h、56 ha与相应时间非药物干预组相比β分泌酶BACE1表达水平降低(P＜0.05).结论 金钠多对慢性低氧低糖培养海马神经元D分泌酶活性和表达的影响是其防治痴呆的可能机制之一.
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银杏叶提取物对迟发性运动障碍大鼠模型的干预研究
目的 观察银杏叶提取物(ginkgo biloba extract,Egb761)对迟发性运动障碍(tardive dyskinesia,TD)模型大鼠行为学和血清脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor, BDNF)、总抗氧化能力(total antioxidant capacity,TAC)水平的影响,探索可能的治疗机制.方法 将32只雄性Sprague-Dawley大鼠采用随机数字表法随机分为生理盐水组(腹腔注射生理盐水2 ml/kg+第5周始灌胃生理盐水5 ml/kg)、TD组(腹腔注射氟哌啶醇2 mg/kg+第5周始灌胃生理盐水5 ml/kg)、Egb761组(腹腔注射氟哌啶醇2 mg/kg+第5周始灌胃Egb761溶液5 ml/kg)、VitE组(腹腔注射氟哌啶醇2 mg/kg+第5周始灌胃VitE溶液5 ml/kg),每组8只,观察10周.每周第7天评定大鼠空嚼运动(vacuous chewing movements)的严重程度.第10周末采用酶联免疫吸附法检测血清BDNF浓度,采用分光光度法检测TAC水平.结果 (1)空嚼运动比较:与生理盐水组相比,第2周末TD组、Egb761组、VitE组空嚼运动评分显著增加(F=8.96,P<0.05),第5周末达峰值;第6周后,Egb761组、VitE组空嚼运动评分逐步下降;第10周末2治疗组空嚼运动评分[(4.1±2.0)、(6.5±3.3)分]显著低于TD组[(27.9±5.8)分](F=164.44,P<0.01),与生理盐水组[(3.5±1.9)分]相比差异无统计学意义(F=1.22,P>0.05);(2)BDNF和TAC比较:第10周末,TD组血清BDNF[(6.9±1.0) ng/L]、TAC[(11.9±3.2) mU/L]水平显著低于生理盐水组[(8.6±2.5) ng/L、(18.2±5.5) mU/L]、Egb761组[(8.9±1.5) ng/L、(19.4±4.4) mU/L]和VitE组[(8.7±2.0) ng/L、(18.6±5.9) mU/L],Egb761与VitE治疗后BDNF和TAC水平高于TD组(F=4.21,F=6.67,P<0.05),与生理盐水组差异无统计学意义(F=0.25,F=0.88,P>0.05);(3)生理盐水组大鼠血清BDNF与TAC水平显著相关(r=0.689,P<0.05),另外3组未发现两者存在显著相关.结论 Egb761与VitE均可显著缓解TD模型大鼠空嚼运动症状,神经营养因子降低和自由基代谢异常可能在TD发生过程中作用关键.
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银杏叶提取物对大鼠视神经挫伤后视网膜形态及视神经GAP-43表达的影响
目的 观察银杏叶提取物(EGb761)对大鼠视神经夹挫伤后视网膜形态学及视神经GAP-43表达的影响.方法 SD大鼠60只随机分为正常组12只、对照组24只、治疗组24只.后两组建立视神经不完全损伤模型,从伤后1 h开始,隔日1次,对照组给予生理盐水球后注射,治疗组给予ECb761球后注射.在伤后3 d、7 d、14 d、28 d取材,HE染色观察两组视网膜形态学改变;RT-PCR检测两绀视神经中GAP-43 mRNA的表达水平.结果 各时间点视网膜病理学改变治疗组轻于对照组,GAP-43 mRNA的表达治疗组较埘照组高(P<0.05).结论 EGb761可以抑制神经节细胞的损伤,使视神经组织中GAP-43 mRNA表达增加,促进视神经夹挫伤后视神经的再生.
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银杏叶提取物对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用与机制
目的:考察银杏叶提取物( EGb761)对佐剂性关节炎(AA)大鼠的治疗作用,初步探讨银杏叶提取物治疗AA的作用机制.方法:将大鼠随机分为正常对照组,模型组,雷公藤多苷组,EGb761低、中、高(50,100,200 mg· kg -1)剂量组.弗氏完全佐剂致AA后d12,大鼠出现继发性炎症,分别灌胃给予雷公藤多苷和E Gb761,连续16d；在不同的时间点检测大鼠继发侧关节肿胀度；致炎d 28处死大鼠,酶联免疫法检测血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6( IL-6)、白细胞介素-4(IL-4)和白细胞介素-10 (IL-10)含量；光学显微镜观察关节病理变化.结果:EGb761可明显减轻继发性AA大鼠足爪的肿胀度；降低大鼠血清中IL-1β和IL-6含量；升高大鼠血清中IL-4和IL-10含量.结论:EGb761对大鼠继发性AA具有显著的治疗作用,其作用机制可能与抑制促炎因子IL-1β和IL-6的产生和释放以及促进抑炎因子IL-4和IL-10的表达相关.
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慢性脑缺血大鼠脑星形胶质细胞反应性增生及EGb761的影响
目的 探讨EGb761(银杏叶提取物)对慢性脑缺血损伤后大鼠脑组织星形胶质细胞反应性增生的影响.方法 将雄性SD大鼠随机分为假手术组、单纯缺血组、EGb761干预组.制备慢性脑缺血大鼠模型,药物干预12周后,免疫组化方法检测各组大鼠脑组织中星形胶质细胞的表达.结果 EGb761干预组大鼠海马、胼胝体、皮质GFAP阳性细胞表达明显低于单纯缺血组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 EGb761可减少慢性脑缺血损伤后反应性星形胶质细胞增生.
关键词： Egb761 慢性脑缺血 反应性星形胶质细胞增生 大鼠 -
欧盟新银杏叶专论详细解读及对银杏叶产品在欧盟注册的影响分析
2014年1月,欧洲药品监督管理局(EMEA)发布了新的欧盟银杏叶专论的征求意见稿.自此,讨论了近2年的银杏叶专论在欧盟终于尘埃落定.概述了银杏叶专论的基本内容,介绍了植物药在欧盟进行传统注册的2种途径和各自的注册要求,详细解读了新银杏叶专论.分析新专论对银杏叶产品在欧盟注册的影响,该专论的出台将为银杏叶产品在欧盟的传统植物药注册提供重要的参考和依据.
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银杏叶提取物EGb761神经保护作用研究进展
从提高痴呆病人认知能力到促进神经损伤后的恢复,银杏叶提取物EGb761对神经系统疾病的治疗具有广阔的应用前景.研究证实EGb761的神经保护机制包括抗凋亡、抗氧化、清除淀粉样蛋白的聚集和影响神经递质转运.这些研究成果使得对EGb761神经保护作用有了进一步的理解,也为探讨神经系统疾病和损伤的治疗提供了新的策略.
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德国典型植物药专利保护策略及启示
植物药和中国的中药、日本的汉方药、澳大利亚的传统药物等现己成为世界医药的重要组成部分,并且植物药和汉方药的专利保护策略在国际上已经相当成熟.然而,我国中药知识产权的专利保护经验不足,明显落后于植物药专利保护较早的欧洲国家,尤其是德国.以Tebonin(R)为例,立足研发技术角度,较为深入剖析了德国植物药Tebonin(R)的专利申请与保护策略.并结合中国中药专利保护现状,给国内制药企业的中药新药研发提供参考和借鉴.
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EGb761对阿尔茨海默病大鼠脑内ChAT活性及神经元凋亡的影响
目的 观察EGb761(商品名:金纳多)对β淀粉样蛋白(Aβ)所致阿尔茨海默病(AD)大鼠模型脑内胆碱乙酰转移酶(ChAT)活性及神经元凋亡的影响.方法 2004年6～11月,在中国医科大学基因工程研究中心将48只大鼠随机分为Aβ-AD模型组、EGb761早期治疗组、EGb761晚期治疗组和对照组,每组12只.采用Aβ脑室内注射方法制作AD大鼠模型,EGb761早期治疗组同时开始EGb761治疗,EGb761晚期治疗组在2周后开始EGb761治疗,均连续14 d.在第30天每组取6只对海马、基底节、额叶皮层、顶叶皮层进行ChAT活性测定,另6只相同部位脑组织进行TUNEL细胞凋亡染色,计算凋亡指数(NAI).结果 Aβ-AD大鼠模型脑组织ChAT活性下降,NAI升高,EGb761早期治疗组和晚期治疗组ChAT活性均高于模型组,NAI较模型组明显降低,差异有显著性意义(P＜0.01);EGb761早期治疗组ChAT活性高于晚期治疗组,早期治疗组NAI低于晚期治疗组,差异亦有显著性意义(P＜0.01).结论 EGb761治疗可使AD大鼠脑内ChAT活性升高,神经元凋亡减少,有预防和治疗AD作用;早期治疗效果优于晚期治疗.
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EGb 761联合经颅磁刺激穴位刺激对皮层下动脉硬化性脑病神经精神功能障碍及同型半胱氨酸的影响
目的: 观察EGb 761联合经颅磁刺激穴位刺激对皮层下动脉硬化性脑病神经精神功能障碍及同型半胱氨酸的影响.方法: 将 60 例皮层下动脉硬化性脑病患者,随机分为治疗组30 例和观察组30例.治疗组在常规治疗的基础上给予EGb 761联合经颅磁刺激,选取神门、合谷等穴位作为刺激靶点进行干预,对照组给予灯盏花素注射液治疗,并对两组患者HDS、ADL、 MMSE评分及Hcy值进行比较.结果: 治疗组、对照组HDS、MMSE评分均显著提高(P<0.05),且治疗组显著高于对照组(P<0.05);ADL评分均显著下降(P<0.05),且治疗组显著低于于对照组(P<0.05);Hcy值治疗后两组均有下降,组间没有显著性差异(P>0.05).结论: EGb 761联合经颅磁刺激穴位刺激可显著改善皮层下动脉硬化性脑病神经精神功能,降低血清同型半胱氨酸含量.
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EGb761对LPS诱导THP-1细胞释放HMGB1蛋白表达的调节
目的:探讨EGb761对LPS诱导THP-1细胞释放HMGB1蛋白表达的调节,为EGb761的临床运用提供可行的依据.方法:LPS(1 μg/mL)诱导不同时间后,western blotting检测THP-1细胞上清液中HMGB1蛋白含量变化及不同浓度EGb761对LPS诱导THP-1细胞释放HMGB1蛋白的表达和NF-κB的活性;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量.共聚焦显微镜观察EGb761对LPS诱导THP-1细胞释放HMGB1蛋白核转位变化.结果:(1)LPS组IL-1β、IL-6、TNF-α的含量在刺激6-12h后明显高于空白对照组,而EGb761 +LPS组IL-1β、IL-6、TNF-α的含量均显著低于LPS组(P＜0.05).(2)EGb761处理LPS诱导THP-1细胞6h后细胞上清液NF-κB活性表达量较空白对照组低,随着处理时间延长至12h,NF-κB的活性表达量呈明显下降趋势(P＜0.05).(3)LPS诱导THP-1细胞18h后,细胞上清液中HMGB1蛋白含量呈明显升高趋势(P＜0.05).(4)不同浓度EGb761对LPS诱导THP-1细胞18h后,HMGB1蛋白含量较空白对照组有下降趋势,HMGB1蛋白含量随着EGB761浓度增加至100 μg/mL呈下降趋势并呈浓度依赖效应(P＜0.05).(5)LPS诱导THP-1细胞后,在共聚焦显微镜下可见胞浆中大量HMGB1蛋白标记分布,而EGb761 +LPS共同诱导THP-1细胞后胞浆中可见少量HMGB1蛋白分布.结论:LPS可诱导THP-1细胞IL-1β、IL-6、TNF-α表达增多及NF-κB活化,导致HMGB1蛋白表达增多及核转位,而EGB761能抑制THP-1细胞Ⅱ-1β、IL-6、TNF-α表达及NF-κB活化,调节HMGB1蛋白的表达及核转位.
关键词： LPS THP-1细胞 Egb761 HMGB1 NF-κB(P-65) -
Egb761对大鼠海马神经细胞缺血再灌注损伤保护作用的形态学研究
目的:从形态学探讨Egb761对大鼠海马神经细胞缺血再灌注损伤保护作用.方法:用四血管法建立大鼠全脑缺血再灌注模型.24只大鼠随机分为3组(分别为假手术组,缺血再灌注组和Egb761治疗组).观察海马神经元缺血再灌注后HE染色、TUNEL染色及透射电子显微镜下改变.结果:海马神经原水肿、凋亡等改变在缺血再灌注组明显高于假手术组,Egb761组介于上述两组之间.结论:缺血再灌注后神经细胞发生水肿、凋亡、坏死等形态学改变,Egb761对大鼠海马神经细胞缺血再灌注损伤具有保护作用.
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银杏叶提取物EGb761通过caspase-3抑制TNF-α诱导HeLa细胞凋亡
目的探讨caspase-3的活化在银杏叶提取物EGb761对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导HeLa细胞凋亡中的影响.方法采用流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测caspase-3 p20活性片段,Caspase-3 Colorimetric Assay试剂盒测定caspase-3活性.结果流式细胞术分析结果显示,EGb761在10～40 mg/L终浓度范围内对重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)诱导的HeLa细胞凋亡均有显著的抑制作用(P＜0.01),呈剂量依赖关系;Western blot检测显示,rhTNF-α诱导的HeLa细胞caspase-3 p20活性片段水平增高,能被不同剂量EGb761(10～40 mg/L)明显抑制,且随EGb761浓度增加抑制效果增强;caspase-3活性测定结果显示,EGb761对rhTNF-α诱导的caspase-3活化有显著的抑制作用,且随剂量增加抑制作用增强.结论结果提示,EGb761抑制TNF-α诱导的HeLa细胞凋亡可能与其抑制caspase-3活化有关.
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Egb761对脑慢性低灌注老龄大鼠海马β-分泌酶活性的影响
目的:探讨脑慢性低灌注老龄大鼠海马β-分泌酶活性的改变及银杏叶制剂(Egb761)对其的影响.方法:将大鼠随机分为假手术组、低灌注组和Egb761组,后两组永久性阻断双侧颈总动脉(2VO),Egb761组术后用Egb761灌胃.采用荧光法于术后1、2、4和16周检测双侧海马β-分泌酶的活性.结果:和假手术组相比,2VO组术后各时间点β-分泌酶活性均上调(P＜0.05);Egb761组的β-分泌酶活性在用药期间低于2VO组(P＜0.05).结论:脑慢性低灌注可致β-分泌酶活性升高,Egb761可以抑制这种变化.
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以小鼠大脑皮质血管内皮细胞研究EGb761舒张血管机制
目的 探讨银杏叶提取物EGb761对小鼠大脑皮质血管内皮细胞(bEnd3)一氧化氮合酶、前列腺素I2、血栓素A2活性和细胞内钙离子浓度等水平的影响.方法 在体外培养的bEnd3系细胞培养液中加入EGb761(质量浓度分别为25、50、100、200 mg·L-1),比较各用药组及空白对照组的一氧化氮合酶、6-酮-前列腺素F1a、血栓素B2活性和细胞内钙离子浓度等水平的变化.结果 与空白对照组比较,用药组细胞悬液中一氧化氮合酶的活性和细胞内钙离子浓度均有明显升高,并呈剂量依赖性;细胞培养液上清中的6-酮-前列腺素F1a水平略有升高,但无统计学意义;血栓素B2水平略有下降,也无统计学意义.结论 EGb761舒张血管机制与其增加血管内皮细胞一氧化氮合酶的活性,进而增加一氧化氮的生成有关;其进一步机制与其升高血管内皮细胞内钙离子浓度,进而增加内皮型一氧化氮合酶的活性有关.
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银杏叶提取物EGb761对大鼠脑缺血再灌注后细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响
目的:探讨EGb761对大鼠局灶性脑缺血再灌注后细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响.方法:48只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、EGb761低剂量组及EGb761高剂量组,每组12只.应用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血模型,TTc染色法测定脑梗死体积,应用TUNEL法检测神经元凋亡,应用Western blot方法检测Bcl-2及Bax蛋白表达.结果:与模型组比较,EGb761高低剂量组脑梗死体积显著减少(P＜0.05),神经元凋亡数显著减少(P＜0.01),Bax蛋白表达明显减少(P＜0.05,P＜0.01),Bcl-2/Bax比值明显升高(P＜0.01)；EGb761高剂量组Bcl-2蛋白表达明显增多(P＜0.01).EGb761高低剂量组间Bcl-2/Bax比值差异有统计学意义(P＜0.05).结论:EGb761能显著增加脑缺血再灌注后Bcl-2蛋白表达,减少Bax蛋白表达,抑制神经元凋亡,减少脑梗死体积,对脑缺血再灌注损伤发挥保护作用.
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EGb761对缺氧无血清模拟心肌缺血微环境诱导BMSCs凋亡的影响
目的体外以缺氧无血清条件模拟心肌缺血微环境,观察银杏叶标准提取物(EGb761) 能否抑制缺氧无血清诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)凋亡并探讨其机制.方法分离培养BMSCs,用EGb761预处理30 min后,缺氧无血清培养12 h,应用Hochest 33258染色及膜联蛋白V/PI双染流式细胞术观察BMSCs凋亡,采用Western blot方法检测Procaspase- 3表达.结果流式细胞仪检测结果显示,与缺氧对照组比较,低剂量(10~100 mg/L)EGb761处理组细胞凋亡率明显增高(P<0.01),高剂量(500~2 000 mg/L)EGb761组细胞凋亡率明显降低(P<0.01);Western blot检测结果显示,与缺氧对照组比较,低剂量EGb761组细胞Procaspase-3表达降低(P<0.05),高剂量EGb761组Procaspase-3表达显著增高(P<0.05).结论 EGb761对缺氧无血清诱导的BMSCs凋亡具有双重作用,其可能是通过caspase-3活化实现的.
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Egb761对大鼠局灶脑缺血/再灌注诱导JNK1/2活化的影响
目的 观察大鼠局灶性脑缺血/再灌注后丝裂原活化蛋白激酶家族中JNK1/2(c-Jun氨基末端激酶1/2)的活化情况以及银杏叶提取物Egb761对其影响.方法 雄性成年SD大鼠随机分成3组(n=5):假手术组、生理盐水对照组和Egb761组.分别于缺血前6天每天用生理盐水4 ml和Egb761 150 mg/kg(Egb761用4 ml生理盐水溶解)灌胃.采用线栓法致大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,在脑缺血再灌注后处死大鼠,对缺血侧海马进行免疫印迹法检测JNK1/2磷酸化水平.结果 局灶脑缺血/再灌注可以诱导JNK1/2激活,30 min达第1个高峰,3天达第2个高峰;Egb761可显著抑制脑缺血再灌注后JNK1/2的激活(P＜0.05),JNK1/2的蛋白表达量在以上不同处理条件下没有明显变化.结论 局灶性脑缺血再灌注可诱导缺血侧海马JNK1/2活化,Egb761干预可使缺血侧海马JNK1/2活化受到抑制,减轻缺血侧海马的损伤.
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Egb761抑制谷氨酸受体拮抗大鼠海马神经元兴奋毒损伤
目的 观察银杏叶提取物Egb761对海马神经元谷氨酸(Glu)兴奋毒性损伤的保护作用及其机制.方法 采用DAPI染色和TUNEL法检测Glu诱导的海马神经元细胞凋亡及Egb761的保护作用,采用全细胞膜片钳技术记录Egb761对大鼠海马神经元Glu受体电流的抑制作用.结果 Egb761拮抗Glu孵育诱导的海马神经元凋亡样死亡,其分子机制可能是抑制N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)型和海人酸(KA)型Glu受体.结论 银杏叶提取物Egb761通过抑制Glu离子通道而拮抗Glu对海马神经元的兴奋毒作用.
