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6-硫鸟嘌呤与6-巯嘌呤治疗儿童急性淋巴细胞白血病的研究进展
急性淋巴细胞性白血病(ALL)是儿童常见的恶性肿瘤,现如今已取得较好的治愈率,然而患儿仍面临很大的复发风险.研究发现,巯嘌呤类药物作为持续治疗的一部分是防止复发的关键.通常6-巯嘌呤(6-MP)用于长期维持治疗,而6-硫鸟嘌呤(6-TG)仅用于强化治疗部分,在治疗过程中并没有一个佳的选药方案.为探究6-TG是否比6-MP更适用于儿童ALL治疗,本文就其相关临床治疗研究进展作一综述.
关键词： 急性淋巴细胞性白血病 6-巯嘌呤 6-硫鸟嘌呤 硫鸟嘌呤核苷酸 巯嘌呤甲基转移酶 -
巯嘌呤甲基转移酶基因多态性分析方法探讨
建立以PCR为基础的位点特异性PCR、限制性内切酶消化、变性高效液相色谱分析和SNaPshot定点的序列分析等方法,并结合DNA直接测序检测巯嘌呤甲基转移酶(TPMT)基因的5个单核苷酸多态性(SNP)位点的多态性频率.在实验过程中还探讨基因多态性检测的方法学,比较几种方法的可信度、可行性及其优劣.研究结果显示,限制性内切酶消化法能准确地检测TPMT基因外显子区的SNP,变性高效液相色谱分析技术能快速筛选出TPMT第5和第10外显子区的SNP,但不能检测出第7外显子的SNP;位点特异性PCR不能检测出TPMT基因外显子区的SNP, SNaPshot定点的序列分析检测TPMT基因外显子和启动子区的SNP准确率高.通过比较几种SNP检测方法后获得的结论是,TPMT基因SNP位点的检测应根据标本量和实验条件首选限制性酶切消化法、DNA测序或SNaPshot定点序列分析,有时一种技术不能完全满足检测的需要,必须几种方法的相互补充.
关键词： 巯嘌呤甲基转移酶 巯嘌呤甲基转移酶基因 单核苷酸多态性 基因多态性 -
6-巯基嘌呤减量治疗3例急性白血病患儿基因突变分析及临床表现
目的：分析6-巯基嘌呤（6-MP）减量化疗的急性白血病（AL）患儿维持治疗阶段临床资料及其巯嘌呤甲基转移酶（TPMT）、次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（HGPRT）基因突变情况，探讨其基因型和临床表型的相关性。方法分别提取3例AL患儿骨髓液及77例对照组儿童外周血总RNA并逆转录成cDNA，PCR特异性扩增TPMT和HGPRT基因蛋白质编码区序列并测序。采用美国国立癌症研究所第3版常规毒性判定标准（NCI CTC 3．0）对维持治疗阶段药物不良反应进行评价和分级，应用国家食品药品监督管理局（SFDA）推荐的药物不良反应关联性评价标准评价6-MP与不良反应发生的相关性。结果1例AL患儿为TPMT*3C（Try240Cys）纯合突变基因型，减少6-MP剂量至常规剂量1/3～2/3可使骨髓抑制及肝脏毒性等重度不良反应转为轻度。对照组发现2例TPMT*3 C杂合突变，该位点在人群中的等位基因频率为1.3％。以上两组均未发现HGPRT基因突变。结论 TPMT*3 C纯合突变患儿可出现与6-MP剂量相关的不耐受现象，中断或减量治疗能够减少维持期间严重药物不良反应的发生。提示TPMT*3 C基因型的检出可能有利于提高6-MP用药的安全性。
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巯嘌呤甲基转移酶基因多态性与巯嘌呤类药物治疗关系的研究进展
硫嘌呤甲基转移酶(TPMT)是巯嘌呤类药物代谢的关键酶,也是具特征性的及具有基因多态性的酶之一.TPMT基因多态性与其酶活性下降有关,携带突变的个体在服用常规剂量的巯嘌呤类药物后,可以导致毒性增加.检测TPMT酶活性或基因型,有助于预测其不良反应发生的风险.本文综述TPMT基因多态性及与巯嘌呤类药物治疗关系的新进展.
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人红细胞中巯嘌呤甲基转移酶活性的HPLC测定法
目的建立人红细胞中巯嘌呤甲基转移酶(thiopurine methyltransferase,TPMT)活性的HPLC测定法,为初步考察汉族健康人及自身免疫病患者TPMT活性分布状况及TPMT遗传多态性对硫唑嘌呤药动学影响提供方法学基础.方法以S-腺苷-L-甲硫氨酸(S-adenosyle-L-methionine,SAM)作为甲基供体,6-巯基嘌呤(6-mercaptopurine,6-MP)作为酶反应底物,TPMT催化6-MP生成6-甲基巯基嘌呤(6-methylmercaptopurine,6-MeMP),采用二氯甲烷-异丙醇(80:20)萃取6-MeMP,常温下氮气吹干,120 μL流动相复溶,10～50 μL进样分析.色谱条件:Shim-pack CLC-ODS(6 mm×150 mm,5μm)柱;流动相:甲醇-水-三乙胺(24:75.6:0.4),磷酸调至pH 7,流速为1.0 mL·min-1;紫外检测,λ=290 nm.结果该方法在50～2 000 ng·mL-1内线性良好,相关系数r=0.999 6,斜率变异系数RSD=4.73%(n=7);高、中、低浓度质控样本的批内、批间RSD在1.11%～4.29%之间,回收率在94.9%～103.2%之间(n=7).结论该方法灵敏、准确、重现性好,满足临床研究需要.
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巯嘌呤甲基转移酶活性对硫唑嘌呤中间代谢物6-巯基嘌呤药动学的影响
目的通过对硫唑嘌呤中间代谢物6-巯基嘌呤(6-mercaptopurine,6-MP)药动学的研究,初步探讨巯嘌呤甲基转移酶(thiopurine methyltransferase,TPMT)活性对6-MP药动学的影响.方法根据红细胞中TPMT活性,受试者分成高酶活性组[(14.52±2.10)μmol·h-1·L-1RBCs,n=16]和低酶活性组[(7.02±2.44)μmol·h-1·L-1RBCs,n=4].受试者早晨空腹口服硫唑嘌呤100mg,8 h动态采集静脉血,HPLC测定血浆中6-MP浓度,采用WinNonlin程序进行房室模型拟合及药动学参数计算.结果:6-MP药动学符合一室模型特点,6-MP血浆浓度较低,高酶活性组和低酶活性组ρmax分别是(0.048 3±0.024 3)和(0.039 1±0.010 8)mg·L-1;两组AUC分别是(0.132 0±0.047 2)和(0.093 2±0.012 5)mg·h·L-1;6-MP半衰期短,分别是(1.09±0.65)和(1.25±1.05)h;6-MP表观分布容积大,两组Vd/F分别是(625.63±258.82)和(949.83±670.27)L.高酶活性组和低酶活性组在tmax和tlag存在显著性差异(P＜0.05),而Ka,ρmax,AUC,Ke,t1/2,Vd/F,CL/F等药动学参数无显著性差异(P＞0.05).结论由于6-MP代谢的复杂性及独特的组织分布特性,使得TPMT活性对6-MP药动学的影响变得不明显,目前还不能借助6-MP药动学来推测硫唑嘌呤的治疗效果和毒性情况.
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巯嘌呤甲基转移酶遗传多态性对硫唑嘌呤药动学和药效学影响的研究概况
目的总结近年来巯嘌呤甲基转移酶(thiopurine methyltransferase,TPMT)遗传多态性对硫唑嘌呤药动学和药效学影响的研究概况.方法查阅近年来国内外有关文献资料,进行分析、整理和归纳.结果 TPMT是硫唑嘌呤代谢过程中的重要代谢酶,TPMT活性和硫唑嘌呤活性代谢物--6-鸟嘌呤核苷酸稳态浓度成负相关;TPMT遗传多态性与硫唑嘌呤的治疗效果及毒副作用密切相关.结论 TPMT活性测定和基因型分析具有潜在的临床应用价值;除TPMT缺陷外,临床用药过程中应关注导致骨髓抑制的其他因素,如药物相互作用、药物或病原体引起的骨髓抑制等.
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儿童急性淋巴细胞白血病的个体化治疗——TPMT和MTHFR基因多态性
用药个体化因遗传药理学的提出而在理论上得到阐明,药物代谢基因多态性的发现使药物的个体差异找到了根源,而巯嘌呤甲基转移酶(TPMT)和亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)的基因多态性研究进展使儿童急性淋巴细胞白血病个体化治疗得以实现,并将得到进一步拓展.
关键词： 急性淋巴细胞白血病 儿童 巯嘌呤甲基转移酶 亚甲基四氢叶酸还原酶 基因多态性 -
6-巯基嘌呤致严重骨髓抑制的遗传分析
文献报道6-MP的疗效和毒性与其代谢过程相关酶的基因多态性相关[1],TPMT是6-MP代谢过程的关键酶之一,能特异地催化6-MP甲基化而失活,从而影响其主要活性代谢产物TGNs的形成.为了研究患儿应用6-巯基嘌呤产生严重骨髓抑制的原因,我们对参与6-MP代谢的巯嘌呤甲基转移酶(TPMT)基因进行了测序和TPMT酶活力测定.
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新疆地区汉族及维吾尔族居民巯嘌呤甲基转移酶基因多态性研究
目的 研究新疆地区巯嘌呤甲基转移酶基因型分布及新疆地区汉族与维吾尔族基因突变频率的差异.方法 采用等位基因特异性的聚合酶链反应(allele specific-PCR,AS-PCR)方法和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-restrition fragment length polymophism,PCR-RFLP)方法检测新疆地区健康人群4种常见TPMT突变等位基因TPMT*2(G238C) 、TPMT* 3A (A719G/G460A)、TPMT*3B(G460A)和TPMT* 3C(A719G)进行检测.结果 192名新疆地区人群中发现8例TPMT*3C(A719G)杂合子,其中汉族5人,维吾尔族3人,没有发现TPMT*2、TPMT*3A、TPMT*3B.新疆地区人群中杂合子TPMT*3C的基因突变频率为2.08％.结论 TPMT*3C是新疆地区主要的突变类型,其等位基因频率2.08％；新疆地区汉族和维吾尔族人群中TPMT等位基因的频率差异无统计学意义.
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TPMT基因型在中国人群中的分布
目的 总结TPMT基因型在中国人群中的分布,为硫嘌呤类药物的个体化用药提供参考.方法 通过系统检索PubMed、Embase和CBM数据库中(截止到2015年4月10日)有关TPMT基因型在中国人群中分布的研究文献,对TPMT基因型和等位基因在中国人群中的分布做一整理归纳.检索词分别为"硫嘌呤甲基转移酶","TPMT","thiopurine S-methyltranferase","polymorphism","hepalotype"等.结果 共有30篇中文文献和14篇英文文献关于TPMT基因型在中国人群中的分布,共纳入10 458人.中国人群中TPMT基因型总体变异率为2.91％(304/10 458),常见的变异基因型为TPMT*1/* 3C(96.71％,294/304).TPMT* 1/* 3A基因型主要出现在哈萨克斯坦族和维吾尔族人群中,TPMT* 1/*6和TPMT* 1/*2基因型在中国人群极少出现;主要的变异等位基因为TPMT* 3C,占总体变异等位基因的97.05％(296/305).结论 根据我国不同地区和民族选择性进行TPMT基因型检测,不但可有效的指导硫嘌呤类药物的个体化用药,而且可节约医疗成本,减轻患者经济负担.
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汉族儿童TPMT基因全蛋白编码区SNP检测与分析
目的 分析汉族儿童巯嘌呤甲基转移酶(TPMT)基因的蛋白质编码区(CDS)突变,探讨其在急性白血病(AL)患儿中的单核苷酸多态性(SNP).方法 变性梯度凝胶电泳结合DNA测序检测103例AL患儿及111例对照组儿童的TPMT基因CDS碱基位点突变情况.结果 汉族儿童TPMT基因筛查出2个蛋白编码区单核苷酸多态性(cSNPs),分别为TPMT* 3C(A719G)和*1S(C474T).TPMT* 3C AA、AG、GG基因型频率在AL患儿组中分别为95.1％、3.9％和1.0％,在对照组中分别为97.3％、2.7％和0,其G等位基因频率分别为2.9％和1.4％；TPMT* 1S CC、CT、TT基因型频率在AL患几组分别为5.8％、24.3％和69.9％,在对照组中分别为8.1％、28.8％和63.1％,其C等位基因频率分别为18.0％和22.5％.2个cSNPs基因型及等位基因频率在两组中分布差异无统计学意义(P＞0.05).对照组筛查出C210T和TPMT* 26 (T622C)基因突变.结论 汉族儿童存在TPMT* 26突变基因型,且TPMT* 3C、TPMT* 1S可能均与儿童AL易感性无关.
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巯嘌呤甲基转移酶基因多态性对成人急性淋巴细胞白血病6-MP治疗个体化的意义
目的检测使用6-巯基嘌呤(6-MP)维持治疗的成人急性淋巴细胞白血病( ALL)患者巯嘌呤甲基转移酶( TPMT)基因型和酶活性,并应用至临床以指导6-MP维持治疗。方法提取白细胞基因组DNA,以PCR结合限制性片断长度多态性( PCR-RFLP)等技术检测TPMT基因型；以高效液相色谱法( HPLC)检测TPMT酶活性,对使用6-MP和甲氨蝶呤( MTX)维持化疗的69例成人ALL患者,监测化疗药物的临床和血液学毒性。结果69例成人ALL患者中有4例酶活性较低的TPMT*1/*3C杂合子,未发现TPMT*2、TPMT*3A、TPMT*3B。成人ALL患者使用6-MP治疗后,TPMT酶活性较治疗前上升。 TPMT突变型组与野生型组观察到的临床药物毒性反应相近,但前者维持治疗期间6-MP的使用量明显低于后者[42.17 mg/( m2· d )和69.36 mg/( m2· d), P<0.01]。结论TPMT基因多态性对6-MP治疗的药物毒性有实质性影响。成人ALL患者使用6-MP治疗前监测TPMT基因型和活性,有助于减少6-MP药物不良反应,实现临床治疗个体化。
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成人急性淋巴细胞白血病患者巯嘌呤甲基转移酶活性研究
目的 应用简易的HPLC方法检测血红细胞中巯嘌呤甲基转移酶(TPMT)的活性,并研究健康汉族成年人群和成人急性淋巴细胞白血病(ALL)患者TPMT活性分布.方法 以非放射性S-腺苷-L-甲硫氨酸(SAM)为甲基供体,完成6-巯基嘌呤(6-MP)向6-甲基巯基嘌呤(6-MeMP)的甲基化转变.6-MeMP经乙酸苯汞混和物抽提,采用高效液相色谱法分析.TPMT的活性用37℃时每小时每毫升红细胞生成多少纳摩尔的6-MeMP来表示.结果 健康汉族成人和成人ALL患者TPMT活性均呈正态分布,男性和女性相比,TPMT活性没有显著性差异.健康汉族成人与成人ALL患者服用6-MP前TPMT活性相比没有显著性差异.而TPMT*3C杂合子TPMT平均活性低于野生型TPMT基因(TPMT*1)纯合子,差异有显著性.结论 TPMT活性在健康汉族成人和成人ALL患者均呈正态分布,TPMT基因型和表型存在相关性,TPMT*3C杂合子平均酶活性低于野生型TPMT基因(TPMT*1)纯合子.在开始6-MP等药物维持治疗前检测TPMT活性对成人ALL患者有益.
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TPMT基因多态性与儿童ALL的6-MP个体化治疗
6-巯基嘌呤(6-MP)是儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)维持治疗阶段的关键化疗药物.巯嘌呤甲基转移酶(TPMT)作为巯嘌呤类药物在体内代谢过程中的关键酶之一,其基因多态性及酶活性与急性淋巴细胞白血病患儿对6-巯基嘌呤的剂量耐受性有一定的相关性,从而进一步影响急性淋巴细胞白血病患儿服用6-巯基嘌呤后不良反应的发生程度和远期预后.此外,巯嘌呤甲基转移酶基因型也可能与继发恶性肿瘤有关.因此,检测巯嘌呤甲基转移酶活性或基因型,有助于预测巯嘌呤类药物不良反应的严重程度,及时调整给药剂量,制订安全合理的个体化用药方案.
关键词： 巯嘌呤甲基转移酶 基因多态性 6-巯基嘌呤 儿童急性淋巴细胞白血病 继发恶性肿瘤 -
HPLC法检测人红细胞中巯嘌呤甲基转移酶的活性
目的:建立一种测定巯嘌呤甲基转移酶(TPMT)活性的高效液相色谱法.方法:以S-甲基-14C-腺苷-甲硫氨酸(SAM)作为甲基供体,6-硫鸟嘌呤(6-TG)作为反应底物,TPMT催化6-TG生成6-甲基硫鸟嘌呤(6-MTG),高氯酸沉淀后进样分析.采用Hypersil BDS C18(250 mm×4.6 mm,5μm)柱;流动相为磷酸钾缓冲液-乙腈-四氢呋喃(94∶4∶2),流速1 ml·min-1;荧光检测器激发波长:315 nm,发射波长:390 nm.结果:标准曲线方程为Y=0.093 3X-0.002 2,r=0.999 3,线性范围为7.5～300.0 pmol.日内RSD小于5.0%,日间RSD小于13.0%,高、中、低浓度的平均方法回收率分别为94.42%,99.90%,103.94%,平均提取回收率分别为94.42%,81.85%,91.62%.结论:该法操作简便,回收率稳定,灵敏度高,适于临床常规检测.
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高效液相色谱法测定急性淋巴细胞白血病患者巯嘌呤甲基转移酶活性
目的:建立一种简易的非放射性方法检测成人急性淋巴细胞白血病患者血红细胞中巯嘌呤甲基转移酶(TPMT)活性.方法:以非放射性S-腺苷-L-甲硫氨酸(SAM)为甲基供体,完成6-巯基嘌呤(6-MP)向6-甲基巯基嘌呤(6-MeMP)的甲基化转变.孵育结束时,6-MeMP经醋酸苯汞混和物抽提.色谱柱为hypersil ODS C18(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇-水(加入三乙胺并以磷酸调至pH 3.2)(70:30,v/v),流速为1 mL·min-1,检测波长为290nm.结果:线性范围为20～1 280 μg·L-1(r=0.999 5,n=7),高、中、低3种浓度的平均回收率为92.3%.结论:该法简便、快速、准确,适用于TPMT药动学研究和临床监测要求.
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6-巯基嘌呤致急性淋巴细胞白血病患儿不良反应及其与TPMT基因多态性的关系
目的 分析6-巯基嘌呤(6-MP)维持治疗急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿不良反应的发生情况,探讨巯嘌呤甲基转移酶(TPMT)基因多态性与6-MP毒副作用的关系.方法 提取46例ALL患儿骨髓细胞总RNA并逆转录成cDNA.应用变性梯度凝胶电泳(DGGE)结合DNA测序,对ALL患儿TPMT* 1S和*3C基因型进行检测.采用美国国立癌症研究所第3版常规毒性判定标准(NCI CTC 3.0)行药物毒性分级,分析TPMT基因多态性与6-MP不良反应发生的关系.结果 在维持治疗阶段,22％(10/46)患儿因6-MP所致严重不良反应停药,不良反应主要表现为骨髓抑制、肝脏毒性和胃肠道反应.2例TPMT*3C突变基因型(AG+GG)患儿均出现重度不良反应,其中1例纯和突变患儿出现与6-MP剂量相关的骨髓抑制和肝脏毒性.TPMT* 1S各基因型与6-MP所致的重度骨髓抑制及肝脏毒性无明显相关性(P＞0.05).结论 TPMT*3C多态性可能与6-MP所致严重不良反应发生有关.
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巯嘌呤治疗儿童急性淋巴细胞白血病相关毒副作用及其与TPMT基因多态性关系的研究
目的:观察CCLG-08方案中含有巯嘌呤的巩同和维持阶段急性淋巴细胞白血病(Acute lymphoblastic leukemia,ALL)简称急淋.患儿毒副作用的发生情况,检测急淋患儿巯嘌呤甲基转移酶(Thiopurine S-methyltransferase,TPMT)基因多态性,研究其与巯嘌呤相关药物毒副作用的关系.方法:观察急淋患儿巩固和维持阶段发生的以外周血白细胞显著减少、肝脏损害为主的毒副作用；采用等位基因特异性聚合酶链反应、限制性片断长度多态性和时间飞行质谱技术检测TPMT基因G238C、G460A、A719G多态性.结果:急淋患儿巩固化疗阶段外周血白细胞显著减少的血液系统毒副作用发生率是19.35%(n=24)；维持治疗1个月以上,外周血白细胞显著减少的血液系统毒副作用发生率是13.82%(n=13),肝脏损害的发生率是10.64%(n=10);维持治疗Ⅰ和Ⅱ组急淋患儿的血液系统毒副作用和肝损害发生率没有显著的统计学差异.没有发现急淋患儿TPMT基因型与其巯嘌呤相关毒副作用间的相关性.结论:研究显示急淋患儿可以良好耐受CCLG-08方案中的巩同和维持治疗；汉族急淋患儿TPMT基因G238C、G460A、A719G位点总突变率为0.67%；研究没有发现急淋患儿巯嘌呤相关的白细胞减少和肝脏损害与TPMT基因型的相关性；CCLG-08方案维持治疗Ⅰ组(连续服用巯嘌呤)较之维持治疗Ⅱ组(连续服用3周间断1周)不会导致更多和更严重的外周血白细胞减少以及肝损害的发生.
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MTHFR及TPMT基因多态性对儿童急性淋巴细胞白血病化疗不良反应的影响
目的 探讨亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)及巯嘌呤甲基转移酶(TPMT)单核苷酸基因多态性(SNP)对急性淋巴细胞白血病(ALL)儿童化疗后不良反应的影响.方法 选择2014年1月至2016年10月对该院儿内血液科收治的98例ALL患儿,采用梯度PCR及DNA测序技术,检测MTHFR C677T、A1298C及TPMT A719G、G460A的基因型,比较不同SNP与化疗后不良反应的关系.结果 ALL患儿MTHFRC677T和A1298C的突变率分别为66.33％和44.90％,TPMT A719G、G460A的突变率分别为12.24％及9.18％.MTHFR A1298AC发生血小板降低的比例(28.13％)高于A1298AA基因型(7.41％)与A1298CC基因型(8.33％),比较差异有统计学意义(P＜0.05).MTHFR A1298AA发生黏膜损伤的比例(9.26％)低于A1298AC基因型(43.75％)与A1298CC基因型(50.00％),比较差异有统计学意义(P＜0.05).MTHFRC677T、TPMT A719G、G460A等基因型与化疗后不良反应比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 MTHFR A1298C与ALL患儿MTX化疗后不良反应的发生有关.
关键词： 急性淋巴细胞白血病 儿童 亚甲基四氢叶酸还原酶 巯嘌呤甲基转移酶 不良反应
