首页 > 文献资料
-
钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ在大鼠生后海马发育中的表达
目的 探讨Wistar大鼠生后海马发育过程中钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的表达.方法 应用免疫荧光方法检测CaMKⅡ在生后不同时期大鼠海马CA1、CA3区和齿状回(DG)中的表达情况(n=48). 结果 CaMKⅡ于生后各期海马CA1区和DG的表达逐渐增强,生后第10天(P10)达高峰期,此后逐渐减弱；于CA3区的表达在P4和P10时均较高.其中,CaMKⅡ在CA3区的表达高于在CA1区和DG的表达,在多形层和分子层的表达高于在锥体细胞层或颗粒细胞层的表达. 结论 CaMKⅡ在CA1、CA3区和DG中的表达具有特异性的时空分布模式,这可能与其在生后发育过程中的突触发生,树突、轴突形成,海马的成熟以及学习记忆功能相关.
关键词： 钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ 海马 发育 免疫荧光 大鼠 -
钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ与心血管疾病的研究进展
钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca2 +/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)是一种主要表达于心脏的多功能丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,通过磷酸化和氧化调节心肌细胞的活性,广泛参与心血管系统生理活动及病理变化的信号转导,与多种心血管疾病密切相关.新近研究表明,活性氧簇激活的CaMKⅡ在许多心血管疾病的发生发展中发挥关键作用,包括心律失常、缺血性心脏病、心肌肥大以及心力衰竭等.对氧化CaMKⅡ信号系统的研究可为临床心血管疾病的治疗提供重要策略和潜在靶点.
关键词： 钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ 活性氧簇 心血管疾病 -
电压门控钙通道钙依赖性易化和失活的分子机制
电压门控钙通道受钙依赖性易化和失活两种相互对立的反馈机制调节.不同浓度的钙离子,通过作为钙感受器的钙调蛋白的介导,主要与钙通道α1亚基羧基端的多个不连续片段发生复杂的相互作用,分别引发钙依赖性易化和失活.钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ及其它钙结合蛋白等也参与此调节过程.新近研究表明,钙通道的钙依赖性调节机制失衡与心律失常等的发病机制密切相关.
关键词： 钙通道 钙依赖性易化 钙依赖性失活 钙调蛋白 钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ -
鞘内注射AIP对神经病理性痛大鼠的镇痛作用及脊髓背角神经元磷酸化CREB的影响
目的:探讨钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(calcium/calmodulin-dependent protein kinase Ⅱ,CaMK Ⅱ)在神经病理性疼痛中的作用.方法:坐骨神经选择性损伤(SNI)大鼠模型,随机分为4组(n=8):SNI组,Sham组,NS组,AIP组,后两组分别于术前20 min鞘内注射10μl的生理盐水或10%的AIP.于术后1d、2d、3d、4d、6d、8d、10d、14d测定大鼠机械缩足反射阈值(mechanical with-drawal threshold,MWT).分别于术后1d、3d、7d取大鼠脊髓腰段,用免疫组织化学法(n=6)检测脊髓背角磷酸化pCaMKⅡ的表达;Western blot法(n=4)检测脊髓背角神经元细胞核内pCREB的表达.结果:术后1～3d AlP组大鼠MWT较NS组明显升高(P<0.01);术前鞘内注射AIP在术后1d、3d能够使脊髓背角pCaMKⅡ的表达减少,同时脊髓背角神经元细胞核内pCREB的表达也明显减少.结论:CaMK Ⅱ参与了神经病理性痛的形成,其作用部分通过CREB介导.
-
皮质酮对原代培养的海马神经元及其[Ca2+]i和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ表达的影响
目的:探讨皮质酮(CORT)对培养的海马神经元及其[Ca2+]i和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)表达的影响和可能的机制.方法:海马神经元被分为不同终浓度的CORT处理组、CORT+MK-801或高浓度葡萄糖组.采用MTT法、流式细胞术、荧光标记和免疫细胞化学法,观察海马神经元活力、死亡方式、[Ca2+]i和CaMKⅡ表达的变化规律.结果:10-6和10-5mol/L CORT组,其海马神经元的活力明显降低,分别以凋亡和坏死为主,并使海马神经元[Ca2+]i显著升高;CaMKⅡ的表达明显减少.MK-801和高浓度葡萄糖均能拮抗10-6mol/L CORT对海马神经元的损伤作用.结论:在CORT的作用下,海马神经元发生凋亡和坏死;[Ca2+]i升高可能既是海马神经元损伤的结果,又是引起其发生凋亡和CaMKⅡ表达下降的原因.
关键词： 皮质酮 海马 神经元 [Ca2+]i 钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ -
钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ在抑郁症中的作用机制研究
钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)在调节突触可塑性、谷氨酸受体和环腺苷磷酸反应元件结合蛋白(CREB)磷酸化等方面均起到关键作用,而这些生物学现象与抑郁症相关.文章就CaMKⅡ在抑郁症中可能的相关机制进行综述.
-
氧化应激和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ参与β肾上腺素受体持久激动引起的大鼠心肌肥厚
持久激动β肾上腺素受体(β adrenergic receptor,βAR)可导致病理性心肌肥厚,但其机制尚不明确.本研究观察抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导的心肌肥厚大鼠的心肌氧化应激水平及钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ (calcium/calmodulin-dependent protein kinase Ⅱ,CaMKⅡ)表达的影响,探讨βAR持久激动诱发心肌肥厚机制中CaMKⅡ和氧化应激的作用.健康雄性Wistar大鼠,随机分成4组:正常对照组(CTRL),ISO处理组(ISO),正常NAC组(CTRL+NAC)和ISO处理+NAC组(ISO+NAC),每组6只.ISO及ISO+NAC组动物每天腹腔注射3 mg/kg ISO,CTRL及CTRL+NAC组腹腔注射相同体积的生理盐水；CTRL+NAC及ISO+NAC组动物每日自由饮用含15 g/L NAC的饮用水.每周用无创动脉血压仪检测鼠尾动脉血压,连续2周；以心重指数(HW/BW)和左心室组织HE染色检测心肌肥厚情况；荧光测定法检测心肌线粒体活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平；Western blot检测左室心肌NADPH氧化酶4(NADPH oxidase 4,NOX4)以及有活性的CaMKⅡ (p-CaMKⅡ/CaMKⅡ)的表达变化.结果显示,与CTRL组相比,ISO组大鼠出现明显的心肌肥厚,心肌线粒体ROS水平升高(P＜0.05),心肌组织NOX4和p-CaMKⅡ的表达均显著增加(分别为CTRL组的1.4倍和1.6倍,P＜0.05); NAC显著改善了ISO诱导的心肌肥厚,降低了ISO诱导的心肌线粒体ROS过度生成(P＜ 0.05 vs ISO),有效抑制了ISO诱发的NOX4及p-CaMKⅡ表达上调(P＜ 0.05 vs ISO); CTRL+NAC组各项指标与CTRL组大鼠无差异；各组动物尾动脉血压亦无显著性差异.上述结果提示,氧化应激和CaMKⅡ在βAR持久兴奋诱发心肌肥厚机制中起重要作用,NAC可以通过抑制心肌细胞线粒体及NADPH氧化酶应激途径降低氧化应激水平,抑制CaMKⅡ激活,从而改善βAR持久激动引起的心肌肥厚.
关键词： 氧化应激 钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ β肾上腺素受体 心肌肥厚 -
血管性痴呆大鼠海马N-甲基-D-天冬氨酸-2B亚基受体水平和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ活性以及美金刚干预作用的研究
2周明显高于VD组(P<0.01～0.05);总CaMK Ⅱ活性与VD组比较,差异无统计学意义.结论 VD大鼠海马NR2B水平和总CaMK Ⅱ活性降低;美金刚能上调海马NR2B表达及改善VD大鼠的认知功能,但对CaMK Ⅱ活性的影响有限.
-
钙／钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ抑制剂K N-93加重大鼠离体心脏钙超载损伤
目的观察钙／钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）抑制剂KN-93对大鼠离体心脏钙超载损伤的影响。方法采用Langendorff装置进行离体心脏灌流，利用钙反常现象诱发胞内钙超载。32只SD ♂大鼠随机分为正常对照组、药物KN-93对照组、钙反常组和KN-93处理组。实验全程记录左心室内压的变化，以左心室舒张末压（LVEDP）和发展压（LVDP）评价心功能，于不同时间点收集冠脉流出液，并测定乳酸脱氢酶（LDH）的含量。实验结束后，采用2，3，5-氯化三苯基四氮唑染色检测心肌梗死面积的变化。结果与正常对照组相比，KN-93（2.5μmol·L－1）对正常心脏的左室功能、冠脉流量和心肌梗死面积没有明显影响（P＞0.05）；与正常对照组相比，钙反常组在复钙灌注结束时LVEDP抬升、LVDP降低，梗死面积达（18±7.2）％，冠脉流量减少，LDH含量增加（P＜0.01）；KN-93（2.5μmol·L－1）处理组与钙反常组相比，心肌梗死面积为（90±4.8）％，LVEDP进一步升高，LVDP消失，冠脉流量明显减少，LDH含量明显增多（P＜0.01）。结论 CaMKⅡ抑制剂KN-93加重急性钙超载引起的心肌损伤，这一作用可能与影响CaMKⅡ活性有关。
-
钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ在突触可塑性和神经精神疾病中的作用
钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)是一种重要的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,参与脑内多种神经活动的调节,并被认为是一个“记忆分子”,在突触可塑性和学习记忆中发挥关键作用.CaMKⅡ的功能正常对于大脑的正常生理活动是必需的.近年来研究发现,许多神经精神疾病的发生都与脑内CaMKⅡ的功能异常有关.该文对CaMKⅡ在突触可塑性以及神经精神疾病中的作用做一综述.
-
盐酸利多卡因神经毒性损伤大鼠脊髓钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ的表达
目的 观察大鼠鞘内注射盐酸利多卡因神经损伤后脊髓钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(calcium/calmodulin dependent protein kinase Ⅱ,CaMK Ⅱ)的表达变化.方法 鞘内成功置管的雄性SD大鼠48只,体质量(230±20)g,用随机数字表法将大鼠分成4组(n=12,其中行为学检测大鼠8只,免疫印迹实验大鼠4只):正常组(C组)、假手术组(S组)、溶媒组(D组)、10％利多卡因组(L组).分别于给药前、给药后2h、4h、8h、12h、1d、2d、3d、4d、5d等时点检测大鼠机械缩腿阈值(Mechanical withdrawal threshold,MWT)和热缩腿潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL).并于给药后12h取4只大鼠脊髓腰膨大,免疫印迹检测大鼠脊髓腰膨大CaMKⅡ的表达.结果 C组、S组和D组大鼠MWT的基础值分别为(11.2±3.1)g、(11.8±2.2)g和(11.4 ±2.4)g,其余各时间点与基础值比较差异无统计学意义(n=8,P＞0.05)；L组大鼠MWT在给药后2h、4h、8h、12h、1d、2d、3d、4d时点显著增加(n=8,P＜0.01),分别为(22.0±6.6)g、(22.2 ±5.3)g、(20.5 ±5.8)g、(18.5 ±4.3)g、(16.7 ±3.2)g、(15.2 ±3.1)g、(15.5 ±3.5)g、(13.7±2.4)g.与MWT结果相似,C组、S组和D组大鼠TWL的各时间点比较差异无统计学意义(n=8,P＞0.05)；L组大鼠TWL在给药后2h、4h、8h、12h、1d、2d、3d时点显著增加(n=8,P＜0.01).C组、S组、D组及L组大鼠脊髓CaMK Ⅱ表达分别为0.17±0.03、0.16 ±0.03、0.19 ±0.05、0.42 ±0.11,L组大鼠表达显著增加(n=4,P＜0.01).结论 鞘内注射盐酸利多卡因可致脊髓CaMK Ⅱ表达显著增加,提示CaMK Ⅱ可能与盐酸利多卡因所致的神经损伤有关.
关键词： 利多卡因 脊髓 神经损伤 钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ -
脊髓钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ-NR2B信号通路参与小鼠骨癌痛的形成
目的 探讨鞘内注射钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ( CaMKII)抑制剂KN93对骨癌痛小鼠脊髓NR2B蛋白表达的影响及机制.方法 SPF级雄性C3 H/HeJ小鼠36只,采用随机数字表法分为3组:假手术组(S组n=8)、骨癌痛组(BP组n=8)和KN93组(K组n=20).BP组和K组采用股骨远端骨髓腔注射20μl含NCTC 2472纤维肉瘤细胞的α-MEM的方法制备骨癌痛模型,S组骨髓腔注入不含NCTC 2472细胞的同体积α-MEM.K组于接种肿瘤细胞后14d鞘内注射溶于20％ DMSO的KN93 60 nmol/5μl,BP组和S组鞘内注射20％ DMSO 5μl.分别于肿瘤细胞接种前1d、鞘内注射KN93或溶媒前1 h、注射后1,2,4,24h(T0～5)时各组随机取8只小鼠,采用von Frev丝测定机械痛阈,并于各时点随机取3只小鼠处死取脊髓L3～5节段,采用Western blot法测定NR2B蛋白的表达.结果 与S组[机械痛阈(1.78 ±0.31)g、NR2B(0.33 ±0.04)]相比,除K组T3时机械痛阈差异无统计学意义(P＞0.05)外,BP组[(0.50±0.11)g]和K组[ (0.52 ±0.10)g]机械痛阈均降低(P＜0.05),BP组(1.78±0 34)和K组T2～5[分别为(1.11±0.14)、(0.73±0.03)、(1.11±0 15)、(1.89±0.32)]脊髓组织NR2B蛋白表达均上调(P＜0.05)；与BP组相比,K组T2～4机械痛阈升高,NR2B蛋白表达下调；与给药前T1相比,除K组T2～4机械痛阈升高外,各组各时点该指标差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 鞘内注射KN93缓解小鼠骨癌痛的同时降低小鼠脊髓NR2B蛋白表达,CaMKII-NR2B信号通路可能参与了骨癌痛的形成.
-
美金刚改善血管性痴呆大鼠认知功能及相关作用机制的研究
目的 研究美金刚对血管性痴呆(VD)大鼠认知功能及海马N-甲基D-天(门)冬氨酸-2B亚基受体(NMDAR-2B)水平、突触后致密物质95(PSD-95)表达和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)活性的影响.方法 采用结扎双侧颈总动脉方法制备VD大鼠模型,将144只Wistar大鼠随机分为假手术组、VD模型组(VD组)和美金刚治疗组(美金刚组).于术后4、8、12、16周用Morris水迷宫检测各组大鼠的学习记忆水平,用RT-PCR法检测大鼠海马NMDAR-2B水平,用免疫组织化学法检测PSD-95的表达,用32P掺入法检测大鼠海马CaMK Ⅱ的活性.结果 与假手术组比较,VD模型组大鼠术后各时间点的学习记忆能力均显著下降(均P<0.01);海马NMDAR-2B的水平和PSD-95的表达在术后4周时明显增高(P<0.05或0.01),术后8～16周显著降低(均P<0.01);海马总CaMKⅡ活性术后4周时明显增高(P<0.01),术后8周下降(P>0.05),术后12、16周明显降低(均P<0.01).美金刚组术后4周时上述各项检测结果与假手术组差异无统计学意义,术后8、12周时学习记忆水平、NMDAR-2B水平和PSD-95的表达明显高于VD模型组(P<0.01或0.05);而总CaMKⅡ活性与VD模型组差异无统计学意义.结论 VD发生发展过程中,NMDAR-2B水平、PSD-95的表达和总CaMK Ⅱ活性先过度激活后明显降低,美金刚能拮抗或上调海马NMDAR-2B表达并改善VD大鼠的认知功能,但对CaMKⅡ活性的影响有限.
-
脊髓背角长时程增强中CaMKⅡ磷酸化水平的变化
目的 探讨长时程增强诱导和维持过程中脊髓背角钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)磷酸化水平的变化.方法 (1)细胞外记录脊髓腰膨大部背角浅层神经元C-纤维诱发电位;(2)免疫组化技术观察脊髓背角CaMKⅡ磷酸化水平的变化.结果 (1)LTP 30 min、LTP 3 h脊髓背角CaMKⅡ Thr286的磷酸化水平明显高于对照组;(2)强直刺激前30 min脊髓局部给予KN-93(CaMKⅡ选择性抑制剂,100 μmol/L),LTP的诱导被完全阻断,CaMKⅡ磷酸化水平与对照组无明显差别;(3)强直刺激后30min给予KN-93,明显抑制LTP,CaMKⅡ的磷酸化水平也显著降低;(4)LTP 3 h后给予KN-93,LTP幅度和CaMKⅡ磷酸化水平与用药前相比,差异没有统计学意义.结论 CaMKⅡ磷酸化可能在脊髓背角C-纤维诱发电位长时程增强诱导和早期维持中发挥重要作用.
关键词： 长时程增强 钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ 脊髓背角 -
精氨酸加压素对大鼠视前区GABAA受体 亚单位磷酸化的影响
目的:研究精氨酸加压素(AVP)对大鼠视前区γ-氨基丁酸(GABA)A型受体(GABAA受体)亚单位(α、β和γ2)表达和磷酸化的影响.方法:实验分为对照组、AVP组、V1a受体抑制剂+AVP组和V1a受体抑制剂组(均n=10);腹腔注射AVP或V1a受体抑制剂0.5 h后,采用RT-qPCR和Western blot法检测视前区GABAA受体亚单位(α、β和γ2)表达及磷酸化的变化.结果:与对照组相比,AVP或V1a受体抑制剂组大鼠视前区GABAA受体亚单位表达均无显著变化;AVP能显著上调视前区GABAA受体γ2亚单位的磷酸化水平(P<0.05);AVP显著增加蛋白激酶C(PKC)和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)表达和磷酸化(P<0.01).结论:外源性AVP不影响GABAA受体亚单位(α、β和γ2)表达,但主要通过V1a受体激活PKC和CaMKⅡ,影响γ2亚单位磷酸化水平,从而调制视前区GABAA受体介导的抑制性突触传递.
关键词： 视前区 精氨酸加压素 γ-氨基丁酸 蛋白激酶C 钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ -
钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ通过介导凋亡加重 H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤
目的:探讨钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca2+/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)在H9c2心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤中的作用.方法:H9c2心肌细胞随机分为4组:正常对照(control)组、CaMKII特异性抑制剂KN-93(1μmol/L)对照(KN-93)组、H/R组和KN-93+H/R组,其中KN-93组及KN-93+H/R组先用1μmol/L KN-93预处理2 h后,再进行其它处理.倒置显微镜观察各组H9c2心肌细胞的形态变化,CCK-8法检测各组H9c2心肌细胞的活力,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)试剂盒检测各组培养基中LDH的活性,Western blot法检测CaMKII及其底物受磷蛋白(phospholamban,PLN)的磷酸化水平以及凋亡相关蛋白cleaved caspase-3的表达,TUNEL染色和流式细胞术观察细胞凋亡.结果:与control组相比,KN-93组各项指标均无显著性差异;H/R组细胞皱缩,大量死亡,细胞活力明显降低,培养基中LDH活性明显升高(P<0.01),CaMKII及PLN的磷酸化水平和cleaved caspase-3的蛋白水平显著增加(P<0.01),TUNEL染色阳性细胞数和流式细胞凋亡率显著增加(P<0.01);1μmol/L KN-93干预H/R可明显改善细胞形态,增加细胞活力,降低培养基中LDH活性(P<0.01),减少CaMKⅡ和PLN的磷酸化水平以及cleaved caspase-3的蛋白水平(P<0.05),降低TUNEL染色阳性细胞数和流式细胞凋亡率(P<0.01).结论:CaMKⅡ通过介导细胞凋亡参与H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤.
关键词： 钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ 受磷蛋白 H9c2细胞 细胞凋亡 缺氧/复氧损伤 -
CaMKⅡ在瑞芬太尼诱导痛觉过敏中作用的研究进展
瑞芬太尼是现代临床麻醉中非常重要的一部分,由于其独特的药理学作用,术后镇痛作用消失快,不仅造成患者主观感觉上痛苦,也可能产生显著的痛觉过敏.钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)对于伤害性刺激信号的传导具有重要作用,但其在瑞芬太尼诱导痛觉过敏中的机制尚未完全清楚,临床中缺乏有针对性的预防治疗措施.本研究简要阐述CaMKⅡ在瑞芬太尼诱导痛觉过敏中的作用,并归纳出部分针对CaMKⅡ的治疗药物,为围术期疼痛管理提出参考依据.
关键词： 钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ 瑞芬太尼 痛觉过敏 -
钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ在心律失常中作用的研究进展
钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ已成为许多心脏疾病特别是心律失常的关键酶,尽管近年来已经阐明了导致钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ激活的许多途径,但几乎没有任何影响钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ活性的临床上可行的化合物从基础体外研究发展到体内研究.现重点介绍抑制钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ的抗心律失常策略的新进展.并将详细论述钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ抑制剂在心房颤动、遗传综合征、窦房结功能障碍中的抗心律失常作用及具有潜在临床应用的新型钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ抑制剂.
关键词： 钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ 心律失常 抑制剂 兰尼碱受体 Ca2+泄漏
