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IL-2、IL-15增强免疫编辑后NK细胞NKG2D的表达及其对鼻咽癌CNE2细胞的杀伤活性
3.56)%、(40.18±2.94)%,IL-2再培养组、IL-15再培养组明显提高编辑后NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性(P＜0.01),IL-15的作用强于IL-2.结论:高剂量IL-2、IL-15可以上调免疫编辑后NK细胞表面NKG2D的表达,恢复编辑后NK细胞对鼻咽癌细胞CNE2的杀伤活性,IL-15的作用强于IL-2.
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去甲斑蝥素联合IL-12、IL-15处理增强PBMC对Raja细胞的杀伤效应
目的:探讨细胞因子IL-2、IL-15激活的人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)对去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)处理后的人Burkitt淋巴瘤Raji细胞的杀伤效应及其可能机制.方法:锥虫蓝拒染法检测NCTD对Raji细胞和PBMC细胞增殖的影响；LDH释放法检测IL-2、IL-15激活后的PBMC对K562细胞和Raji细胞的杀伤；流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测IL-2、IL-15诱导后PBMC表面NKG2D的表达,以及NCTD作用前后Raji细胞表面NKG2D配体(MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3)的表达.结果:NCTD抑制Raji细胞的增殖,具有剂量、时间依赖性(P＜0.05),但对PBMC增殖无影响(P＞0.05).在效靶比为10∶1、20∶1时,IL-2、IL-15激活的PBMC对K562细胞的杀伤率较未激活的PBMC明显增高[(52.42±3.89)％vs (15.82±5.12)％,(79.55±9.22)％vs(27.67±3.66)％,P＜0.05]；PBMC对NCTD处理后Raji细胞杀伤率较未经NCTD处理的Raji细胞明显增高[(23.63±6.20)％vs (5.04±1.25)％,(41.80±4.09)％ vs (8.59±2.19)％；P＜0.05],且IL-2、IL-15激活的PBMC对NCTD处理后Raji细胞的杀伤率较NCTD处理前明显提高[(38.97±2.76)％ vs(13.19±3.67)％,(63.09 ±7.30)％ vs(19.89 ±4.15)％；P＜0.05].激活后PBMC表面NKG2D表达率升高[(44.91±5.85)％vs (25.28±7.69)％,P＜0.05].NCTD作用后Raji细胞表面NKG2D的配体ULBP2表达显著升高[(12.69±3.99)％vs(1.03 ±0.42)％,P＜0.05],而其他配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP3的表达无明显变化(P＞0.05).结论:NCTD联合细胞因子IL-2、IL-15处理能增强PBMC对Raji细胞的杀伤效应,其机制与NCTD上调Raji细胞表面ULBP2表达和细胞因子上调PBMC表面NKG2D表达有关.
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可溶性NKG2D配体降低NK细胞对骨髓瘤细胞杀伤功能的研究
人自然杀伤细胞(NK细胞)是人体抗肿瘤免疫的第一道防线,NK细胞通过识别自我的MHCⅠ类分子或Ⅰ类分子样的独特受体,可以识别和杀伤体内的肿瘤细胞[1-2].体外实验[3-4]证实NK细胞对骨髓瘤细胞细胞具有很强的杀伤能力,但是肿瘤患者体内的肿瘤细胞可以逃逸免疫细胞的识别和杀伤,而且通过NK细胞输注治疗骨髓瘤患者并没有得到预期的效果,说明MM患者体内环境抑制NK细胞功能.作者以前的研究[5-6]表明NKG2D介导免疫细胞对骨髓瘤细胞的杀伤作用,作者通过检测MM患者血清中可溶性NKG2D配体水平变化,并通过细胞株模型探讨可溶性的NKG2D配体对NK细胞抗骨髓瘤能力的影响.
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阿霉素增强CIK细胞抗多发性骨髓瘤细胞的机制研究
目的:探讨阿霉素增强细胞因子诱导的杀伤性(CIK)细胞抗多发性骨髓瘤细胞的机制.方法:用阿霉素处理骨髓瘤细胞株U266以及患者骨髓瘤细胞,流式细胞仪(FCM)检测细胞表面NKG2D配体(MICA/B和ULBPs)表达的变化及CIK细胞对U266细胞杀伤作用的变化.结果:阿霉素处理后U266细胞表面MI-CA/B表达明显升高(P =0.002),而ULBPs的表达无明显变化.阿霉素亦能够诱导患者骨髓瘤细胞表面MICA/B的表达增加.CIK细胞对阿霉素处理过的U266细胞杀伤作用明显增加(P=0.01),这种杀伤作用可以被抗NKG2D抗体部分抑制(P=0.03).结论:化疗药物诱导骨髓瘤细胞表面MICA/B表达的增加,从而增强CIK细胞对骨髓瘤细胞的杀伤作用.
关键词： NKG2D配体 细胞因子诱导的杀伤性细胞 骨髓瘤细胞 -
肺癌细胞中NKG2D配体MICA及ULBP高表达及其在CIK介导的肿瘤细胞杀伤中的作用
目的:探索肺癌细胞中NKG2D配体的表达量及其与CIK细胞介导的肿瘤细胞毒性的关系.方法:在肺癌组织、癌旁组织及肺癌细胞株中用实时荧光定量PCR及蛋白质免疫印迹法检测NKG2D配体的表达量.应用流式细胞仪检测肿瘤细胞株A549和QG56表面NKG2D配体的表达情况.体外分离培养CIK细胞,比较NKG2D单克隆抗体预处理CIK细胞和无NKG2D单克隆抗体预处理CIK细胞介导的肿瘤细胞毒性.结果:NKG2D在肺癌组织及肺癌细胞株中高表达.CIK细胞对肺癌细胞株A549表现出较强的细胞毒性,但用NKG2D单克隆抗体预处理CIK细胞后可显著降低这种作用(P＜0.05).结论:NKG2D配体在肺癌组织和肺癌细胞株中高表达.对于CIK细胞介导的肺癌细胞杀伤作用,NKG2D与其配体的相互作用至关重要.
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紫杉醇增强肺癌细胞NKG2D配体表达和CIK细胞杀伤活性
目的 研究不同浓度紫杉醇作用人肺腺癌A549细胞48小时后NKG2D配体表达的改变及CIK细胞杀伤活性的变化.方法 采用MTT法测定紫杉醇对A549细胞24小时的50％抑制率(IC50)；流式细胞术检测IC50、1/2 IC50、1/4 IC50浓度紫杉醇作用A549细胞48小时后A549细胞表面NKG2D配体(MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3)表达的变化；乳酸脱氢酶释放法检测不同效靶比时,CIK细胞对IC50浓度的紫杉醇作用前及作用48小时后A549细胞的杀伤活性.结果 不同浓度紫杉醇作用48小时后A549细胞表面MICA、MICB、ULBP2、ULBP3表达显著升高,ULBP1表达降低(P＜0.05).效靶比10∶1、20∶1、30∶1时,CIK细胞对A549细胞的杀伤活性分别为(11.08±1.22)％、(36.22±0.91)％、(45.73±2.00)％；CIK细胞对IC50浓度紫杉醇作用48小时后的A549细胞杀伤活性分别为(20.79±3.33)％,(53.47±1.62)％、(66.39±0.77)％,与作用前比较均明显增强(P＜0.05).结论 紫杉醇作用后能提高A549细胞NKG2D配体(MICA、MICB、ULBP2、ULBP3)的表达,从而增强A549细胞对CIK细胞杀伤的敏感性.
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NKG2D及其配体在肿瘤免疫中的作用
1991年Houchins等人在对NKG2家族cDNA序列分析时,首次分离得到NKG2D[1].NKG2D是表达于大多数NK细胞、CD8+T细胞、γδT 细胞及活化的巨噬细胞的活化性受体[2,3],通过识别感染细胞及应激细胞表面诱导产生的配体, 并与之结合,从而杀伤靶细胞发挥免疫监视的作用.
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电离辐射对肿瘤细胞SCC25表面NKG2D配体表达的影响及对肿瘤细胞的杀伤作用
目的 探讨电离辐射对口腔鳞状细胞癌细胞SCC25表面NKG2D配体表达的影响及其对肿瘤细胞的杀伤作用.方法 SCC25细胞培养至对数生长期时,通过抽签的方式完全随机设计为对照组(未作处理)和实验组(2Gy电离辐射处理).对照组和实验组细胞培养24 h后,流式细胞术检测SCC25表面NKG2D配体主要组织相容性复合体Ⅰ类链相关分子(MIC)A、MICB、UL16结合蛋白(ULBP)1的表达量.实验组和对照组细胞培养24 h后,实时荧光定量PCR (RT-PCR)法检测SCC25细胞表面NKG2D配体mRNA表达的变化;制备细胞,将细胞分为空白对照组(NC)、2Gy电离辐射(R)组、NK1组(效靶比为5∶1)、NK2组(效靶比为20∶1)、NK1+R组(效靶比5∶1,2Gy电离辐射)、NK2+R组(效靶比20∶1,2Gy电离辐射),各组细胞培养24 h后,细胞增殖-毒性试验(CCK8)法检测电离辐射和自然杀伤(NK)细胞对口腔鳞状细胞癌SCC25细胞的杀伤能力.结果 流式细胞术结果显示,NKG2D配体MICA对照组和实验组的荧光值分别为21.04±0.39、22.90±0.40(江2.465,P=0.069),MICB荧光值分别为27.58±0.50、29.83±1.05(t=1.936,P=0.125),ULBP1的荧光值分别为21.04±0.40、21.78±0.50(t=1.154,P=0.313),表明SCC25经过电离辐射后,其表面NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1的表达量稍有上升,但差异无统计学意义.RT-PCR显示,MICB、ULBP1 mRNA表达对照组和实验组差异均有统计学意义(t=18.334,P=0.000;t=6.381,P=0.008),实验组的表达量分别是对照组的6.49、1.64倍;CCK8结果显示,NK1、NK2组和NC组相比,细胞杀伤能力的差异有统计学意义(F=344.600,P=0.000),表明NK细胞可以明显杀死肿瘤细胞,且提高NK细胞与SCC25的比例后杀伤作用更强.R组和NC组相比,细胞杀伤能力差异无统计学意义(P =0.567),NK1+R组和NK1组相相比,差异无统计学意义(P=0.915),NK2+R组和NK2组相比,差异亦无统计学意义(P =0.678),表明电离辐射杀伤作用不明显.结论 电离辐射可以使NKG2D配体MICB、ULBP1的mRNA表达增强,可能为肿瘤的免疫治疗提供新的途径.电离辐射对细胞的杀伤作用不明显,可能与辐射剂量低且细胞仅培养24h有关.
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蛋白酶体抑制剂Bortezomib对NK细胞杀伤肝癌细胞活性的影响
目的 探讨小剂量蛋向酶体抑制剂Bortezomib对肝癌细胞MHC Ⅰ类分子(MICA)的表达及NK细胞杀伤活性的影响.方法 应用流式细胞仪和半定量RT-PCR检测肝癌细胞经小剂量蛋白酶体抑制剂Bortezomib处理后MICA表达水平.应用细胞毒实验和胞内染色检测NK细胞功能.结果 肝癌细胞株或新鲜肝癌细胞经小剂量蛋白酶体抑制剂Bortezomib处理后MICA表达增加,进而促进经NKG2D途径介导的NK细胞杀伤活性.结论 联合小剂量蛋白酶体抑制剂Bortezomib和NK细胞为基础的免疫治疗有助于提高原发性肝细胞癌的综合治疗效果.
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厄洛替尼作用后表皮生长因子受体突变的人肺腺癌HCC827细胞对细胞因子诱导的杀伤细胞的杀伤敏感性
目的 观察表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂厄洛替尼及EGFR下游主要分子对人肺腺癌HCC827细胞表面NKG2D配体表达的影响,探讨厄洛替尼作用于肺腺癌HCC827细胞后,细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞对HCC827细胞杀伤活性的变化.方法 HCC827细胞分为空白对照组及厄洛替尼5、10 μmol·L-1组,应用流式细胞仪检测细胞表面NKG2D配体主要组织相容性复合体Ⅰ类链相关蛋白(MIC)A、B及UL16结合蛋白(ULBP)1、2、3的表达.HCC827细胞培养24h后,分别以EGFR下游分子磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂LY294002、丝裂原活化蛋白激酶抑制剂SB203580、信号传导及转录激活因子3抑制剂STAT21、蛋白激酶C抑制剂Rottlerin进行作用,应用流式细胞仪分析HCC827细胞表面NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3的表达,并与空白对照组进行比较.乳酸脱氢酶释放法检测CIK细胞对空白对照组和厄洛替尼组HCC827细胞的杀伤活性.结果 与空白对照组比较,厄洛替尼5、10 μmol·L-1组HCC827细胞表面NKG2D配体MICB、ULBP1表达显著增高(P＜0.05),MICA、ULBP2、ULBP3表达差异无统计学意义(P＞0.05);厄洛替尼5μmol·L 1组与10 μmol·L-1组比较,HCC827细胞表面NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3表达差异均无统计学意义(P＞0.05).与空白对照组比较,SB203580组的HCC827细胞表面NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3表达差异无统计学意义(P＞0.05),STAT21组的HCC827细胞表面NKG2D配体MICA、MICB表达显著增高(P＜0.05),LY294002组的HCC827细胞表面NKG2D配体MICA表达显著降低(P＜0.05),Rottlerin组的HCC827细胞表面NKG2D配体ULBP1表达显著增高(P＜0.05).同一效靶比时,CIK细胞对厄洛替尼作用后组HCC827细胞的杀伤率均显著高于未经药物作用组(P＜0.05).效靶比20∶1时经NKG2D单抗封闭后的CIK细胞对未经药物作用组和10 μmol·L-1厄洛替尼作用后组HCC827细胞的杀伤率比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 厄洛替尼能增高HCC827细胞表面NKG2D配体表达,增强CIK细胞的杀伤活性.
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NKG2D-NKG2D配体系统抗肿瘤作用研究进展
肿瘤的免疫治疗已经成为抗肿瘤治疗中的一个重要策略,越来越多的证据表明,NKG2D-NKG2D配体系统在机体的抗肿瘤免疫中发挥着重要作用.本文对NKG2D及其配体的表达、调节、信号传导、免疫治疗作一综述.
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5-氟尿嘧啶增强HeLa细胞对自然杀伤细胞敏感性研究
目的 用5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)处理HeLa细胞,检测其NKG2D 配体 MICA 的表达及其对NK92细胞杀伤敏感性的变化.方法 不同浓度的 5-FU处理 HeLa细胞,在不同时间点用半定量PCR及流式细胞术检测HeLa细胞表面的NKG2D配体MICA在RNA及蛋白水平的表达变化情况,用MTT法检测NKG2D抗体封闭NK92细胞的NKG2D受体前后, NK92 细胞对HeLa细胞的杀伤作用.结果 不同浓度的5-FU作用于 HeLa 细胞后,半定量RT-PCR结果显示MICA表达随5-FU作用浓度增加逐渐增高.而且40 μg/ml 5-FU作用于HeLa细胞后随着作用时间的延长(0、8、16、24 h)MICA表达增加,流式细胞术检测结果表明,MICA表达的增加主要依赖于未凋亡细胞的 MICA表达.在40μg/ml 5-FU作用24 h,效靶比为2.5∶ 1,5∶ 1,10∶ 1,20∶ 1时都检测到NK92细胞对HeLa细胞的杀伤增强,杀伤作用可部分被NKG2D抗体抑制.结论 5-FU 能够上调HeLa细胞表面NKG2D配体MICA的表达,增强HeLa细胞对NK92细胞的敏感性,提示化疗联合NK细胞免疫治疗宫颈癌可产生协同作用,提高治疗效果.
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苦参碱提高白血病KG1a细胞对NK细胞杀伤敏感性及其机制
目的 研究苦参碱(Matrine)作用前后白血病KG1a细胞对NK细胞杀伤细胞敏感性的变化,并初步探讨其机制.方法 应用CCK-8法检测苦参碱对KG1a细胞50%抑制量JC50,值,以此量的苦参碱作用于KG1a细胞,LDH释放法检测作用前后对NK细胞的杀伤敏感性.RT-PCR检测KG1a细胞NKG2D配体(MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3)五种基因的表达,流式细胞仪检测作用前后KG1a细胞表面NKG2D配体和HLA-Ⅰ类分子表达变化.结果 苦参碱作用前后在效靶比为5∶1、10∶1、20∶1时对NK细胞杀伤敏感性差异均有统计学意义(P<0.05).KG1a细胞在mRNA水平五种基因均表达.苦参碱作用前KG1a细胞表面NKG2D各配体几乎不表迭,作用后各配体显著升高,与作用前相比差异有统计学意义(P<0.05).HLA-Ⅰ类分子无明显变化(P>0.05).结论 苦参碱能提高KG1a细胞对NK细胞的杀伤敏感性,其机制可能与苦参碱提高KG1a细胞表面NKG2D配体的表达有关.
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顺铂对鼻咽癌细胞NKG2D配体表达和NK细胞杀伤活性的增强作用
目的 研究顺铂(Cisplatin,DDP)作用前后人鼻咽癌细胞CNE2 NKG2D配体和HLA-I类分子表达的改变及NK细胞杀伤活性的变化.方法 MTT法测定DDP对CNE2细胞的50%抑制量(IC_(50));以此浓度DDP作用CNE2细胞24h,乳酸脱氢酶释放法检测效靶比20:1时,NK细胞对DDP作用前后的CNE2细胞的杀伤活性;流式细胞仪检测DDP作用前后的CNE2细胞表面NKG2D配体(MI-CA/B、ULBP1、ULBP2、ULBP3)和HLA_I类分子表达的变化.结果 DDP对CNE2细胞的IC_(50)为5mg/L.效靶比20:1时,NK细胞对5 mg/L DDP作用前后的CNE2细胞的杀伤活性分别为(38.11±1.41)%,(47.71±1.53)%,差异有统计学意义(P<0.05),DDP作用后CNE2细胞表面MICA/B、ULBP1、ULBP3表达显著升高,与作用前相比差异有统计学意义(P<0.05).ULBP2、HLA-I类分子无明显变化(P>0.05).结论 DDP能提高CNE2细胞NKG2D配体(MICA/B、ULBP1、ULBP3)的表达,从而增强CNE2细胞对NK细胞杀伤的敏感度.
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HSV-tk和H60基因重组逆转录病毒载体的构建及鉴定
目的:构建携带自杀基因HSV-tk和免疫相关基因H60的逆转录病毒载体pIRES-H60、pIRES-TK和pTK-IRES-H60.方法:以质粒pUC19-H60为模板,用PCR方法扩增H60基因,并亚克隆至pMD18-T载体,构建中介载体pMD18-H60.双酶切质粒pMD18-H60和tgCMV/HyTK,获得H60和TK基因片段,再克隆至逆转录载体pIRES,构建重组载体pIRES-H60和pIRES-TK.然后把H60基因片段克隆至载体pIRES-TK,构建重组载体pTK-IRES-H60.转染重组载体至包装细胞PA317进行病毒包装,用病毒液感染NIH3T3细胞,检测病毒液的滴度.结果:测序结果显示PCR扩增的H60基因序列正确,重组载体经PCR和酶切鉴定得到相应的基因片段.经筛选得到稳定的产病毒细胞株PA317/pIRES-H60、PA317/pIRES-TK和PA317/pTK-IRES-H60,病毒滴度分别为8×104、1×105、7.1×104cfu/mL.结论:成功构建逆转录病毒载体pIRES-H60、pIRES-TK和pTK-IRES-H60,建立了稳定的病毒细胞株,所产生的假病毒颗粒具备一定的感染力.
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姜黄素提高白血病KG1a细胞对同种异体NK细胞杀伤的敏感性及其分子机制探讨
目的:研究姜黄素作用前后白血病KG1a细胞对同种异体自然杀伤(NK)细胞杀伤的敏感性变化,并初步探讨其分子机制.方法:以对同种异体NK细胞杀伤高度敏感的白血病K562细胞为对照,乳酸脱氢酶释放法检测KG1a细胞对同种异体NK细胞杀伤的敏感性,流式细胞仪检测细胞表面NKG2D配体(MICA/B、ULBP1、ULBP2、ULBP3)和HLA-Ⅰ类分子蛋白表达,逆转录PCR法检测细胞表面NKG2D配体和HLA-Ⅰ基因mRNA的表达水平.CCK-8法检测姜黄素对KG1a细胞半数抑制量(IC50),以此含量作用KG1a细胞,再次乳酸脱氢酶释放法检测姜黄素作用后的KG1a对同种异体NK细胞杀伤的敏感性,流式细胞仪检测姜黄素作用后的KG1a细胞表面NKG2D配体和HLA-Ⅰ类分子蛋白表达水平.结果:与K562细胞比较,KG1a细胞对同种异体NK细胞杀伤呈低度敏感,KG1a细胞表面NKG2D各配体蛋白表达阳性率均明显低于K562细胞(P＜0.01),HLA-Ⅰ蛋白表达阳性率则明显高于K562细胞(P＜0.01)；在mRNA水平两种白血病细胞表面均有NKG2D配体和HLA-Ⅰ基因表达.当效靶比为5∶1、10∶1、20∶1时,姜黄素作用后NK细胞对KG1a细胞杀伤率明显高于作用前(P＜0.01)；作用后KG1a细胞各NKG2D配体表达率均明显升高(P＜0.05或0.01),HLA-Ⅰ类分子无明显变化(P＞0.05).结论:姜黄素能提高KG1a细胞对同种异体NK细胞杀伤的敏感性,其机制可能与姜黄素提高KG1a细胞表面NKG2D配体的表达有关.
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三氧化二砷提高多发性骨髓瘤ARH-77细胞对NK细胞杀伤敏感性的研究
目的 研究三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)前后人多发性骨髓瘤ARH-77对NK细胞杀伤细胞敏感性的变化,并初步探讨其机制.方法 分别应用CCK-8法和台盼蓝染色法测算ATO对ARH-77细胞株的50%抑制量(IC50)和细胞活性;乳酸脱氢酶释放法检测ATO作用前后ARH-77细胞对NK细胞的杀伤敏感性.流式细胞仪检测ARH-77细胞表面NKG2D配体(MICA/B、ULBP1、ULBP2、ULBP3)和HLA-Ⅰ类分子表达以及ATO作用前后的细胞周期变化.结果 ATO对ARH-77细胞的IG50为5.0μmol/L.NK 细胞杀伤ATO作用前后ARH-77细胞的活性有显著差异(P＜0.05).ATO作用后,ARH-77细胞发生G1/S期阻滞,同时其表面MICA/B、ULBP1、ULBP3表达显著升高,二者之间差异有统计学意义(P＜0.05).ULBP2和HLA-Ⅰ类分子无明显变化(P＞0.05).结论 ATO能提高ARH-77细胞NKG2D配体(MICA/B、ULBP1、ULIBP3)表达;从而使其对NK细胞的杀伤敏感性增强.
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NKG2D配体的表达直接影响NK细胞对不同发育阶段DC的杀伤
目的:探讨NKG2D配体在不同发育阶段树突状细胞(DC)表面的表达及其对自然杀伤(NK)细胞杀伤活性的影响.方法:用细胞因子(rh IL-4、rhGM-CSF、TNF-α)体外诱导培养单核细胞来源的未成熟树突状细胞(iDC)和成熟树突状细胞(mDC)并鉴定形态和表型,免疫磁珠法分离纯化NK细胞.流式细胞术(FCM)检测iDC和mDC表面NKG2D配体MICA/B、ULBP1-3的表达.用LDH释放法检测NK细胞对iDC和mDC的杀伤活性以及抗NKG2D单克隆抗体(mAb)阻断NK细胞后的杀伤活性.结果:培养的iDC和mDC具有典型的细胞形态和免疫表型特征.iDC表面表达MICA、MICB、ULBP1、ULBP3,表达率分别为(32.39±8.30)%、(17.75±3.40)%、(26.71±6.48)%、(38.37±6.89)%;mDC表面表达MICA 、ULBP3,表达率分别为(7.82±2.67)%、(8.36±2.42)%,比iDC表面相应配体表达率低(P<0.01).各效靶比NK细胞对iDC的杀伤活性均比对mDC的杀伤活性高,差异有统计学意义(P<0.01).抗NKG2D mAb阻断NK细胞后对iDC杀伤活性比阻断前减弱(P<0.05);对mDC的杀伤活性与阻断前相比无统计学意义(P>0.05).结论:NKG2D配体在iDC表面表达高,介导了NK细胞对iDC的杀伤,而对mDC的杀伤无影响,是NK细胞对iDC选择性高杀伤的分子机制之一.
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自然杀伤细胞对高与低表达ABCG2的人耐药鼻咽癌细胞杀伤作用
目的:探讨自然杀伤(NK)细胞对高与低表达三磷酸腺苷(ATP)结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)人多药耐药鼻咽癌CNE2/DDP细胞(ABCG2High细胞、ABCG2Low细胞)的杀伤活性差异.方法:利用免疫磁珠技术分离ABCG2High及ABCG2LowCNE2/DDP细胞、NK细胞,LDH释放测定法检测NK细胞对K562细胞、ABCG2High<及ABCG2LowCNE2/DDP细胞的杀伤活性,流式细胞技术(FCM)检测两种靶细胞NKG2D配体表达率及杀伤后靶细胞凋亡率.结果:ABCG2High、AB-CG2Low CNE2/DDP细胞分离后ABCG2表达率分别为(91.40±2.32)%、(1.70 ±0.24)%,分选后NK细胞CD3-CD16+CD56+细胞的纯度达90%以上,LDH释放测定法检测结果显示,在效靶比为10 vs 1、20 vs 1时,NK细胞对ABCG2Low细胞、ABCG2High细胞及K562细胞的杀伤率以ABCG2High曲细胞高,凋亡率检测结果显示ABCG2HighCNE2/DDP细胞的凋亡率为(12.90±1.51)%,ABCG2LowCNE2/DDP细胞的凋亡相率为(6.13±0.85)%,NKG2D配体表达率检测结果显示AB.CG2High CNE2/DDP细胞5种NKG2D配体(MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3)表达率高于ABCG2LowCNE2/DDP细胞.结论:ABCG2HighCNE2/DDP细胞比ABCG2LowCNE2/DDP细胞更容易被NK细胞杀伤,其初步的机制是ABCG2HighCNE2/DDP细胞NKG2D配体表达率高于ABCG2LowCNE2/DDP细胞,导致了ABCG2HighCNE2/DDP细胞对NK的杀伤敏感性增强.
关键词： 三磷酸腺苷结合盒G超家族成员2 自然杀伤细胞 NKG2D配体 多药耐药 鼻咽癌 -
NKG2D配体表达及其介导NK细胞抗肝细胞癌作用的研究进展
人自然杀伤细胞家族2成员D(NKG2D)配体包括主要组织相容性复合体Ⅰ类肽相关序列A(MICA)、MICB、UL16结合蛋白(ULBP),均定位于6号染色体上;由胞外结构域、跨膜区和胞质结构域三部分组成,在肝细胞癌等多种肿瘤细胞既能单独表达又可共同表达.其与NKG2D相互结合的亲和力从高到低依次为ULBP1、MICA、MICB,通过激活磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)等信号通路,使自然杀伤(NK)细胞分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)、颗粒酶增加,并使肝癌细胞Fas配体(FasL)、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)表达上调,促进靶细胞溶解.诱导肝癌细胞表达MICA、MICB、ULBP1,可显著增强NK细胞对其的敏感性,多途径发挥对肝癌细胞的细胞毒性效应.
