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氧化应激可选择性诱导细胞的NKG2D配体的表达
目的 探讨氧化应激与细胞NKG2D配体表达的关系,分析氧化应激对NK细胞功能的影响.方法 加H2O2诱导培养的肿瘤细胞处于氧化应激状态.用RT-PCR、Real-time PCR和流式细胞仪等方法 分析细胞多种NKG2D配体的表达.用CcK-8法检测NK92细胞对肿瘤细胞的杀伤活性.结果氧化应激可诱导肿瘤细胞多种NKG2D配体的表达,不同的肿瘤细胞诱导表达的NKG2D配体不同;NKG2D配体表达上调可有效提高NK细胞的细胞毒活性,此效应可被抗NKG2D抗体所阻断.结论 NKG2D配体可能在机体的免疫应答中发挥正向的调节作用.
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MULT1转基因小鼠的基因型鉴定和表型的初步分析
目的 对高亲和力NKG2D配体MULT7转基因小鼠进行基因型的鉴定和表型分析,并进行MULT1的初步功能研究.方法 提取转基因小鼠的基因组DNA,PCR以鉴定转基因小鼠的基因型.提取小鼠尾部组织mRNA进行实时定量PCR,榆测其基因转录情况.应用流式细胞分析仪及免疫组化对MULT1转基因小鼠多种组织细胞进行初步分析.结果 获得鉴定阳性的MULT1转基因小鼠3'S品系25只,4'S品系13只.3'S和4'S品系的MULT1转基因小鼠的基因转录产物阳性,可用于进行下一步研究.MULT1主要表达在胸腺和小肠上皮间淋巴细胞(ilELs),且在胸腺和iIELs表面的表达与小鼠的年龄有关,而在脾脏细胞上基本不表达.iIELs流式细胞仪分析结果显示,CD8~+T细胞比例降低,而CD4~+CD25~+调节性T细胞比例升高.结论 经过基因型和表型的鉴定,表明已经成功构建MULT1转基因小鼠.对转基因小鼠表型的初步分析表明,MULT1可能与胸腺的发育、老化以及免疫调节相关.
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苦参碱对白血病细胞NKG2D配体表达的作用研究
本研究旨在探讨人白血病细胞表面NK细胞活化性受体NKG2D配体分子的表达水平及中药苦参碱对白血病细胞NKG2D配体表达的作用.流式细胞术检测白血病细胞表面MICA/B和ULBP1、2、3四种NKG2D配体的表达.苦参碱处理白血病细胞株K562、OUN-1、U937和K562/AO2及原代培养的人白血病细胞,流式细胞术分析药物处理后细胞表面NKG2D配体的表达改变.结果表明,几株常见人白血病细胞及原代人白血病细胞表面均有NKG2D配体分子的表达,多数有ULBP分子的高表达或ULBP表达明显高于MICA/B,但不同细胞表面NKG2D配体的表达模式明显不同.苦参碱处理可上调白血病细胞表面部分NKG2D配体的表达水平,提示苦参碱对不同白血病细胞NKG2D配体分子的表达调节不同.K562细胞表面NKG2D配体ULBP2和ULBP3分子的高表达可能是介导NK细胞对其高杀伤性的重要原因.结论:人白血病细胞及原代人白血病细胞表面均有NKG2D配体的表达,但不同细胞NKG2D配体的表达模式不同.苦参碱可上调白血病细胞表面部分NKG2D配体分子的表达.
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地西他滨增强allo-NK细胞杀伤白血病干细胞敏感性研究
目的:探讨地西他滨增强allo-NK细胞杀伤白血病干细胞(LSC)的作用及其机制.方法:应用免疫磁珠法从KG1a细胞中分选LSC.从健康供者的外周血分离纯化同种异体反应性自然杀伤(allo-reactive natural killer,allo-NK)细胞;LDH法检测allo-NK细胞对LSC的杀伤作用,流式细胞术检测allo-NK细胞诱导LSC凋亡及LSC表面NKG2D配体MICA/B和ULBP1-3的表达.结果:地西他滨10 μmol/L处理LSC 24 h后,allo-NK细胞对LSC的杀伤率明显增高,在效靶比为5∶1、10∶1、20∶1时分别为(60.52％ ±3.52％ vs 22.08％ ±2.07％、73.93％±2.33％ vs 28.99％ ±3.13％、83.08％±1.32％ vs 36.44％±2.40％),差异有统计学意义(P＜0.05);地西他滨10μmol/L处理LSC 24 h后,在效靶比为10∶1时,allo-NK细胞诱导LSC的凋亡率为7.84％±0.34％,明显高于LSC未处理组(3.33％±0.64％),差异有统计学意义(P＜0.05);地西他滨10 μmol/L处理LSC 24 h后,LSC表面NKG2D配体(MICA/B、ULBP1、ULBP2、ULBP3)的表达上调,高于未处理组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:地西他滨可能通过上调NKG2D配体增强allo-NK细胞对LSC的杀伤作用.
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NKG2D在细胞因子诱导的杀伤性细胞(CIK)抗血液肿瘤细胞的作用
本研究探讨细胞因子诱导的杀伤性细胞(CIK)通过NKG2D受体和配体相互作用杀伤血液肿瘤细胞的机制.用含有rhIL-2,抗CD3抗体,IFN-y的培养液培养健康人的外周血单个核细胞(PBMNC)2周后,用流式细胞仪分析CIK细胞的细胞亚群以及细胞表面NK细胞受体,同时检测血液肿瘤细胞株表面NKG2D配体的表达水平.CAM标记靶细胞,用流式细胞仪检测CIK细胞对血液肿瘤细胞的杀伤作用.结果表明,大部分CIK细胞为CD3+细胞(97.85±1.95％),CD3+ CD8+细胞和CD3+ CD56+细胞的比率较培养前明显升高(P ＜0.001;P=0.033);约86％的CIK细胞表达NKG2D受体,几乎不表达CD158a,CD158b和NCR受体;血液肿瘤细胞株U266、K562和Daudi均表达一定水平的NKG2D配体,CIK细胞对这3种血液肿瘤细胞株均具有较高的杀伤作用,这种杀伤作用可以被抗NKG2D抗体部分抑制(U266 52.67 ±4.63％ vs 32.67±4.81％,P=0.008;K562 71.67±4.91％ vs 50.33±4.91％,P=0.007; Daudi 68.67±5.04 vs 52.67±2.60％,P=0.024).结论:大多数的CIK细胞表达NKG2D受体,NKG2D受体和配体的相互作用可能是CIK细胞杀伤血液肿瘤细胞的作用机制之一.
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同种异体NK细胞对AML细胞体外杀伤活性及初步机制
目的 探讨同种异体自然杀伤细胞(NK细胞)对急性髓系白血病(AML)细胞株KG1a的杀伤活性及其分子机制.方法 以NK敏感的K562细胞株为对照,免疫磁珠法分离5例健康志愿者NK细胞,乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定在不同效靶比时NK细胞对KG1a细胞的杀伤活性,并用流式细胞仪检测KG1a细胞表面人类白细胞抗原I(HLA-I)类分子和NKG2D的配体主要组织相容性复合体(MIC)A/B、ULBP1-3的表达情况.结果 效靶比1∶1、5∶1、10∶1、20∶1时NK细胞杀伤K562和KG1a细胞的活性不同,NK细胞对KG1a细胞的杀伤活性较K562细胞明显减低(P＜0.01);K562细胞低表达HLA-I类分子,高表达NKG2D配体MIC可溶性Ⅰ类分子相关蛋白A(MICA)、MICA有亲源性的蛋白(MICB)、ULBP1、ULBP2、ULBP3,而KG1a细胞高表达HLA-I类分子,低表达NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3.结论 同种异体NK细胞对AML细胞株KG1a的杀伤率低于K562细胞;其杀伤率不同的分子基础与其分子表面配体表达差异和HLA-I分子表达率不同有关.
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血清胸苷激酶1和可溶性NKG2D配体与结直肠癌患者预后的关系
目的 探讨血清胸苷激酶1(thymidine kinase,TK1)和可溶性自然杀伤细胞活化性受体(natural killer cell group 2D,NKG2D)的配体可溶性MHC-Ⅰ类链相关蛋白A(soluble major histocompatibility complex class Ⅰ-related chain A,sMICA)与结直肠癌患者预后的关系.方法 检测南通市第二人民医院接受根治术的45例结直肠癌患者手术前后的血清TK1和NKG2D配体水平,并以45例健康受试者作为对照组.结果 45例结直肠癌患者术前和术后血清TK1水平分别为(4.42±1.42) pmol/L和(2.98±0.54) pmol/L,sMICA水平分别为(135±79) pg/ml和(100±81) pg/ml;对照组血清TK1水平分别为(1.13±0.24) pmol/L和(1.15±0.78)pmoL/L,sMICA水平分别为(69±23) pg/ml和(73±24) pg/ml,患者手术前后血清TK1和sMICA水平均高于对照组(均P=0.000).患者术后血清TKI和sMICA水平均有降低(P=0.000、0.042).高TK1组患者的3年和5年累积生存率分别为84％和34％,低TK1组患者分别为90％和75％ (P =0.023);高sMICA组患者的3年和5年的累积生存率分别为61％和31％,低sMICA组患者分别为71％和52％ (P =0.148).结论 结直肠癌患者血清TK1水平与其预后呈负相关.
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高频热疗对人肿瘤细胞NKG2D配体表达影响的研究
目的:探讨高频热疗(HFH)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞和肺癌XWLC-05细胞NKG2D配体表达的影响.方法:用工作频率为13.56 MHz HFH仪处理人乳腺癌MDA-MB-231细胞和肺癌XWLC-05细胞,参数为温度43℃,大输出功率1 200 W,维持输出功率60％～80％.每次处理时间为40 min,1次/d.分别提取未处理、HFH处理1次和3次的肿瘤细胞mRNA,逆转录成cDNA,用荧光定量PCR检测NKG2D配体mRNA的表达,并用流式细胞术检测肿瘤细胞表面NKG2D配体蛋白质表达.结果:荧光定量PCR结果显示,MDA-MB-231细胞表达MICA、MICB、ULBP2和ULBP3 mRNA,HFH处理1次后,MICA、MICB、ULBP2和ULBP3表达分别上调1.44、1.43、1.88和2.06倍,其中MICB表达上调差异有统计学意义,P＜0.05；处理3次后,分别上调1.78、2.00、2.13和2.91倍,差异均有统计学意义,P＜0.05.在HFH处理前后,MDA-MB-231细胞都不表达ULBP1；HFH处理3次后,XWLC-05细胞MICA、MICB、ULBP2和ULBP3 mRNA的表达增加,其中,ULBP1和ULBP3的mRNA表达显著上调18.54和2.67倍,P＜0.05.HFH处理后,流式细胞分析结果表明,MDA MB-231和XWLC-05细胞表面NKG2D配体蛋白含量与对照组相比差异无统计学意义.结论:人MDA-MB-231和XWLC-05细胞表达NKG2D配体mRNA,HFH上调其NKG2D配体mRNA表达,并且细胞株间有差异性.HFH对这两种细胞表面的NKG2D配体蛋白质影响不明显,其机制需要进一步研究.
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顺铂与CIK细胞对A549细胞杀伤协同作用机制的初步研究
目的:探讨不同浓度顺铂作用人肺腺癌A549细胞24 h后,NKG2D配体表达的改变及细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)杀伤活性的变化.方法:MTT法测定顺铂作用A549细胞24 h的50％抑制浓度(IC50)；流式细胞仪检测IC50、1/2 IC50和1/4 IC50浓度顺铂分别作用A549细胞24 h后,A549细胞表面NKG2D配体表达的变化,配体包括MHC-I类链相关分子MICA和MICB以及人巨细胞病毒糖蛋白UL16结合蛋白ULBP1、ULBP2和ULBP3；乳酸脱氢酶释放法检测不同效靶比时,CIK细胞对IC50浓度的顺铂作用前及作用24 h后A549细胞的杀伤活性.结果:不同浓度顺铂作用24 h后,A549细胞表面MICA(F=12.490,P=0.002)、MICB(F=41.492,P＜0.001)、ULBP2(F=375.773,P＜0.001)和ULBP3(F=59.594,P＜0.001)表达均显著升高；ULBP1表达降低,F=55.693,P＜0.001.效靶比10∶1时,IC50浓度顺铂作用24 h前、后的A549细胞的杀伤活性分别为(11.88±1.57)％和(17.64±1.44)％,F=21.770,P=0.010;20∶1时分别为(35.56士1.98)％和(46.39±3.51)％,F=21.653,P=0.010;30∶1时分别为(45.03±1.74)％和(73.81±1.62)％,F=439.578,P＜0.001.结论:顺铂提高A549细胞NKG2D配体MICA、MICB、ULBP2和ULBP3的表达,增强A549细胞对CIK细胞杀伤的敏感性.
关键词： 肺癌 顺铂 细胞因子诱导的杀伤细胞 NKG2D配体 化疗 -
NKG2D介导正常人NK细胞对白血病细胞的杀伤作用
目的 探讨诱导白血病细胞NK细胞表面活性受体(NKG2D)配体表达增加,增强NKG2D与其配体相互作用介导的NK细胞对白血病细胞杀伤活性.方法 用羟基脲处理慢性髓性白血病细胞系OUN-1及白血病患者原代白血病细胞24 h,用流式细胞术检测培养前后其表面NKG2D配体的表达水平.取正常人外周血分离NK细胞并在含IL-2的培养液中培养72 h作为效应细胞,用羟基尿培养前后的OUN-1细胞作为靶细胞,用51Cr释放实验检测NK细胞对OUN-1 细胞的杀伤作用.结果 用羟基脲处理后的OUN-1细胞表面NKG2D配体MIC A/B 和ULBP2表达[平均荧光强度(MFI)值分别为23.5±3.4和33.5±4.8]较未处理的OUN-1细胞(MFI值分别为8.9±0.9和14.5±0.6)明显增加(P\%值分别为0.01和0.03),而ULBP1和ULBP3的表达无明显变化.羟基脲亦能诱导白血病患者原代白血病细胞表面NKG2D配体表达增加.正常人NK细胞对羟基尿处理过的OUN-1细胞杀伤作用明显增强[杀伤率为(62.0±5.6)%对(76.0±5.3)%,P\%=0.02],这种杀伤作用可以被抗NKG2D抗体部分抑制[(76.0±5.3)%对(46.0±4.5)%,P\%=0.00].结论 羟基脲可以诱导白血病细胞系OUN-1细胞表面NKG2D配体表达增加,从而增强NKG2D和其配体的相互作用介导的NK细胞对白血病细胞杀伤作用.
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顺铂和紫杉醇对CIK细胞杀伤食管癌细胞活性的影响及其分子机制研究
目的：研究紫杉醇、顺铂对人食管癌EC9706细胞NKG2D配体表达及CIK细胞杀伤活性的影响，探讨相关分子机制。方法：MTT法测定紫杉醇、顺铂对EC9706细胞的24 h半数抑制浓度（IC50）。流式细胞仪检测1/2 IC50浓度紫杉醇、顺铂作用前、后EC9706细胞NKG2D配体的表达。乳酸脱氢酶释放法检测效靶比20：1、30：1时，CIK细胞对1/2 IC50浓度紫杉醇、顺铂作用前、后EC9706细胞的杀伤活性。荧光定量PCR法检测1/2 IC50浓度紫杉醇、顺铂作用EC9706细胞24 h前、后DNA损伤修复基因（ATM、ATR、CHK1、CHK2、P53）表达的变化。结果：紫杉醇、顺铂的24 h半数抑制浓度分别为10、5μg/mL。1/2 IC50浓度紫杉醇作用24 h后，EC9706细胞MICB、ULBP2、ULBP3表达均明显增强（P<0.05），MICA、ULBP1表达无显著性变化（P>0.05）；1/2 IC50浓度顺铂作用24 h后，EC9706细胞MICA、MICB、ULBP2、ULBP3表达均明显增强（P<0.05），ULBP1表达无显著性变化（P>0.05）。效靶比20：1、30：1时，CIK细胞对1/2 IC50浓度紫杉醇、顺铂作用后的EC9706细胞的杀伤活性均明显增强（P<0.05）。1/2 IC50浓度紫杉醇作用24 h后，DNA损伤修复基因表达均无显著性变化（P>0.05）；1/2 IC50浓度顺铂作用24 h后，ATM、ATR、CHK1、CHK2基因表达均明显增加（P<0.05），P53基因表达无显著性变化（P>0.05）。结论：顺铂、紫杉醇均可增强CIK细胞的杀伤活性，其分子机制可能与激活DNA损伤修复基因，进而增加NKG2D配体表达有关。
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苦参碱提高胶质瘤细胞U251对NK细胞杀伤敏感性的实验研究
目的:观察苦参碱(Matrine)对人胶质瘤细胞U251生长抑制作用及作用前后U251细胞对NK细胞杀伤敏感性的变化.方法:CCK-8法和台盼蓝染色法检测苦参碱对U251细胞生长抑制作用和细胞存活率;流式细胞仪法检测作用前后U251细胞周期变化及表面NKG2D配体(MICA/B、ULBP1-3)和HLA-Ⅰ类分子表达;乳酸脱氢酶释放法检测苦参碱作用前后U251细胞对NK细胞杀伤敏感性的变化.结果:苦参碱能抑制U251细胞生长,随着药物浓度增大和作用时间延长,抑制率逐渐升高、存活率逐渐下降;苦参碱作用后细胞发生G1/S期阻滞;细胞表面NKG2D各配体表达率明显升高,与作用前相比差异有统计学意义(P＜0.05),HL A-Ⅰ类分子的表达率无明显变化(P＞0.05);效靶比5:1、10:1、20:1时.作用前后U251细胞对NK细胞杀伤敏感性差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:苦参碱能押刺U251细胞的生长.改变其周期,上调U251细胞表面NKG2D各配体表达率,增强其对NK细胞的杀伤敏感性.
关键词： 菩参碱 白血病细胞株U251 NK细胞 NKG2D配体 杀伤活性 -
AS2O3对CD34+白血病细胞NKG2D配体表达及NK杀伤活性的影响
目的:观察AS2O3对CD34+早期急性髓系白血病细胞NKG2D配体表达及NK细胞杀伤活性的影响.方法:流式细胞仪检测KGla细胞表面CD34抗原表达率,MTF法确定AS2O3的基本工作浓度,以不同浓度的AS2O3处理KGla细胞,流式细胞仪测定处理前后KGla细胞NKG2D配体的表达情况;MACS法分离5例健康个体的NK细胞,LDH释放法检测NK细胞对AS2O3处理前后KGla细胞的杀伤活性.结果:10 nmol/ml的AS2O3作用KGla细胞后,能使KGla细胞表面ULBP1的表达水平显著上调(P<0.05),同时也激发了NK细胞对KGla细胞的杀伤活性(P<0.05).结论:AS2O3能上调CD34+白血病细胞表面NKG2D配体的表达水平,诱导NK细胞对其的杀伤活性,启示AS2O3可与NK细胞组成过继性免疫化疗方案,提高急性白血病的疗效.
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氧化苦参碱提高乳腺癌MCF-7细胞对NK-92MI细胞杀伤作用的敏感性
目的:探讨氧化苦参碱(OMT)处理前后MCF-7细胞对NK-92MI细胞敏感性的变化及其分子机制.方法:采用CCK-8法检测OMT对MCF-7细胞的毒性作用,采用LDH法和流式细胞术检测NK-92MI细胞对OMT处理后MCF-7细胞的杀伤活性,采用流式细胞术检测OMT处理后MCF-7细胞表面ULBP1、ULBP2和MICA/B蛋白的表达,采用Western blot法检测MCF-7细胞中p65蛋白的磷酸化水平,采用ELISA法检测培养液上清中TNF-α和IFN-γ的含量.结果:OMT对乳腺癌MCF-7细胞活力具有显著的抑制作用,且呈剂量和时间依赖性(P<0.05);在不同效靶比(5:1、10:1和20:1)下,低浓度OMT可显著提高MCF-7细胞对NK-92MI细胞杀伤作用的敏感性(P<0.05);低浓度OMT处理后的MCF-7细胞,ULBP1、ULBP2和MICA/B蛋白的表达水平以及p65蛋白的磷酸化水平都显著上调(P<0.05),可促进NK-92MI细胞分泌更多的TNF-α和IFN-γ(P<0.05),但该作用可被NF-κB抑制剂PDTC抑制(P<0.05).结论:低浓度OMT在体外提高乳腺癌MCF-7细胞对NK-92MI细胞杀伤作用的敏感性,这可能与其激活NF-κB信号通路有关,进而上调MCF-7细胞表面ULBP1、ULBP2和MICA/B蛋白表达,以及促进NK-92MI细胞分泌TNF-α和IFN-γ有关.
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白藜芦醇提高CD34+CD38-KG1a白血病细胞对人外周血单个核细胞的杀伤敏感性
目的:研究白藜芦醇(Resveratrol)作用前后CD34+CD38-KG1a白血病细胞对IL-15介导的人外周血单个核细胞(PBMC)杀伤敏感性的变化及机制的初步探讨.方法:应用CCK-8法检测白藜芦醇对白血病细胞的IC50值,以此量的白藜芦醇作用于白血病细胞.,并用LDH释放法检测白藜芦醇作用前后,效靶比分别为5∶1、10∶1、20∶1的IL-15介导的PBMC对CD34+CD38-KG1a细胞杀伤能力.流式细胞仪(FACS)检测IL-15介导前后PBMC表面NKG2D的表达.流式细胞仪(FACS)检测作用前后CD34+CD38-KG1a细胞表面NKG2D配体(MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3)表达.结果:白藜芦醇作用前后在不同效靶比时对IL-15介导的PBMC杀伤敏感性差异有统计学意义(P＜0.05).IL-15介导PBMC前后表面NKG2D的表达有显著变化,差异有统计学意义.白藜芦醇作用前后CD34+CD38-KG1a细胞表面NKG2D各配体中MICA、MICB无显著变化(P＞0.05),ULBP1、ULBP2、ULBP3有显著变化,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:白藜芦醇可以提高CD34+CD38-KG1a细胞对IL-15介导PBMC的杀伤敏感性,其机制可能与白藜芦醇提高CD34+CD38-KG1a细胞表面NKG2D配体的表达有关.
关键词： 白藜芦醇 CD34+CD38-KG1a 白血病 NKG2D配体 -
NKG2D及其配体研究进展
NKG2D是较为独特的NK细胞活化性受体,其配体具有多样性,因而其识别机制较独特;其表达范围不仅局限于NK细胞,还在T细胞、巨噬细胞、树突状细胞中有表达,功能上,不仅有直接刺激作用,还能作为协同刺激分子传递第二信号.NKG2D及其配体的研究对抗肿瘤免疫、抗感染免疫、自身免疫病的认识具有重要意义.本文对NKG2D及其配体的研究进展作一综述.
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实时荧光定量PCR检测人肿瘤细胞NKG2D配体基因表达
目的:建立人肿瘤细胞NKG2D配体基因(MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3)表达的实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR)检测方法.方法:根据NCBI基因库中NKG2D配体基因序列,设计合成引物.用Trizol法从培养的肿瘤细胞(BEC-7402、HeLa、MDA-MB-435、XWLC-05)中提取总RNA,逆转录成cDNA,建立实时荧光定量PCR检测NKG2D配体基因表达的方法,并检测NKG2D配体在肿瘤细胞株中的表达.结果:经过琼脂糖凝胶电泳、熔解曲线和标准曲线分析,用所设计的引物和SYBR GreenⅠ能够特异扩增和定量检测NKG2D配体基因的表达.该方法成功检测4种肿瘤细胞NKG2D配体基因的表达.结论:建立了人NKG2D配体基因表达的实时荧光定量PCR检测方法,为进一步研究人NKG2D配体在肿瘤免疫中的作用提供了有效手段.
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顺铂和紫杉醇对CIK细胞杀伤肺癌A549细胞的影响及其可能的机制
目的:研究顺铂、紫杉醇分别对CIK细胞杀伤肺癌A549细胞的影响并初步探讨其可能的分子机制.方法:MTT法分别检测顺铂、紫杉醇处理A549细胞24 h的半数抑制浓度(IC50),LDH释放法检测IC50的顺铂,紫杉醇分别作用24 h对CIK细胞杀伤A549细胞能力的影响;流式细胞术检测顺铂、紫杉醇作用24h对A549细胞表面NKG2D配体(MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3)表达的影响,荧光定量PCR检测顺铂、紫杉醇作用对A549细胞内DNA损伤修复基因(ATM、ATR、CHK1、CHK2、P53)表达的影响.结果:顺铂和紫衫醇对A549细胞作用24 h的IC50分别为70、39 μg/ml.IC50的顺铂、紫杉醇分别作用24h后,CIK细胞对A549细胞的杀伤活性均明显增强(P＜0.05);同时A549细胞表面MICA、MICB、ULBP2、ULBP3表达均明显增加(P＜0.05),ULBP1表达降低(P＜0.05);顺铂诱导A549细胞ATM基因表达明显增加[(3.23±1.62) ×10-6vs (5.49±3.91)×10-s,P＜0.05],紫杉醇诱导A549细胞P53基因表达明显增加[(14.90 ±5.49)×10-6vs(3.68±2.82)×10-6,P ＜0.05].结论:顺铂、紫杉醇均可增强CIK细胞对A549细胞的杀伤活性,其分子机制可能与激活DNA损伤修复基因,进而增加NKG2D配体表达有关.
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去甲斑蝥素增强IL-15活化的PBMC对白血病KG1a细胞的杀伤作用
目的:探讨去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)是否能增强IL-15活化的人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)对人急性髓系白血病KG1a细胞的杀伤作用及其可能机制.方法:锥虫蓝拒染法、CCK-8法检测NCTD对KG1a细胞增殖的影响,流式细胞术检测NCTD对KG1a细胞周期的影响,LDH释放法检测IL-15活化的PBMC(IL-15-PBMC)对NCTD处理后KG1a细胞的细胞毒活性,流式细胞术检测KG1a细胞表面NKG2D(natural killer group 2 member D)配体的表达.结果:NCTD有效抑制白血病KG1a细胞的增殖,呈时间(r=0.398,P=0.000)和剂量依赖性(r=0.861,P=0.000),并阻滞KG1a细胞周期于G2/M期；4μg/ml以下的NCTD对IL-15-PBMC没有明显的增殖抑制作用(P＞0.05).当效靶比为10∶1和20∶1时,IL-15-PBMC对0.125 μg/ml NCTD处理后KG1a细胞的杀伤率较对照组明显增加[志愿者A:(37.44±5.78)％ vs (9.33±1.69)％,(38.33±3.07)％vs (16.75 ±1.20)％；P＜0.05].NCTD不影响KG1a细胞表面NKG2D配体蛋白的表达(P＞0.05).结论:NCTD能增强IL-15-PBMC对白血病KG1a细胞的杀伤作用,可能与抑制细胞增殖、阻滞细胞周期于G2/M期有关.
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NK细胞杀伤人骨髓瘤RPMI8226细胞的活性及其可能的机制
目的:研究同种异体NK细胞对人骨髓瘤RPMI 8226细胞的杀伤活性及其可能的机制.方法:LDH释放法检测NK细胞对RPMI 8226细胞和人白血病K562细胞的杀伤活性,流式细胞术和RT-PCR法分别检测K562和RPMI 8226细胞中NKG2D配体和HLA-I类分子的表达;阻断K562和RPMI 8226细胞中NKG2D配体的表达后,检测NK细胞的杀伤活性.结果:NK细胞对RPMI 8226靶细胞的杀伤活性明显低于对K562靶细胞的杀伤(P<0.01).K562细胞高表达NKG2D配体,不表达HLA-I类分子;RPMI 8226细胞低表达NKG2D配体,高表达HLA-I类分子,其HLA基因型为A 01,66;B 58,58;Cw 03,06.阻断NKG2D配体后NK细胞杀伤K562细胞的活性明显降低(P<0.01),而杀伤RPMI 8226细胞的活性无明显改变;阻断HLA-I类分子,NK细胞杀伤K562细胞的活性无变化,而杀伤RPMI 8226细胞的活性明显提高(P<0.01).结论:NK细胞杀伤RPMI 8226细胞的活性较低,其机制与RPMI 8226细胞高表达HLA-I类分子、低表达NKG2D配体有关.
