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复方君子汤对抑制白血病K562细胞生长增殖和诱导凋亡的作用
目的 研究分析复方君子汤(FFJZ)对抑制白血病K562细胞生长增殖和诱导凋亡的作用.方法 应用台盼蓝拒染法、细胞形态学等对细胞生长状态进行观察,应用四氮甲唑蓝对细胞的增殖情况进行检测,应用流式细胞术对细胞的凋亡率进行检测.结果 在浓度为2 mg/mL复方君子汤作用下,其细胞抑制率和诱导凋亡效果不明显,与空白对照组对比无统计学意义(P＞0.05),在浓度为4 mg/mL作用下,细胞抑制率和凋亡发生率上升,与空白对照组对比差异显著,差异有统计学意义(P＜0.05),发生凋亡主要为早凋.随着浓度的不断增高,细胞抑制率和凋亡发生率逐渐上升,差异有统计学意义(P＜0.05),发生凋亡晚期增多.结论 实施复方君子汤可有效抑制白血病K562细胞生长增殖,并对其起到有效的诱导导致白血病K562细胞凋零,大大提高患者生命质量,值得在临床医学中推广使用.
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芒果苷对白血病K562细胞周期分布及细胞周期素A、细胞周期素B1表达的影响
目的:观察芒果苷对白血病K562细胞周期分布及细胞周期素A(CyclinA)、细胞周期素B(CyclinB1)表达的影响,以进一步探讨芒果苷抗白血病的分子作用机制.方法:应用流式细胞仪检测细胞周期的分布,用RT-PCR方法检测Cyclin A及Cyclin B1 mRNA表达水平.结果:芒果苷作用24 h后,K562细胞G2/M期细胞增多,出现G2/M期阻滞,并呈现剂量依赖性;Cyclin A mRNA和Cyclin B1 mRNA的表达随作用浓度的增加而逐渐增强,呈显著的剂量依赖性.结论:芒果苷阻滞白血病K562细胞周期于G2/M期,明显上调K562细胞Cyclin A和Cyclin B1 mRNA表达水平,芒果苷诱导K562细胞G2/M期阻滞可能是其抗白血病作用的分子机制之一.
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曼宋酮E对白血病K562细胞增殖和凋亡的影响
目的 观察曼宋酮E对K562细胞增殖的影响,探讨其诱导凋亡作用及可能机制.方法 台盼蓝拒染实验检测曼宋酮E对K562细胞的生长抑制作用;荧光显微镜观察细胞核形态的变化;流式细胞仪测定细胞凋亡率;免疫印迹法测定caspase-3、caspase-8、caspase-9及PARP的活性及Bcl-2、Bax和Bcl-XL的表达.结果 曼宋酮E抑制K562细胞增殖呈时间和浓度相关性;12.5μg/mL的曼宋酮E处理K562细胞0、12、24、48 h细胞凋亡率分别为(2.1±0.8)%、(3.2±1.6)%、(15.3±8.9)%、(25.1±11.4)%;在曼宋酮E诱导K562细胞凋亡过程中,caspase-3和caspase-8以及PARP出现活化断裂,casepase-9表达无明显变化;Bel-2家族蛋白Bcl-2、Bax和Bcl-L表达无显著改变.结论 曼宋酮E可抑制诱导K562细胞增殖,并通过caspase-8途径介导凋亡.
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川芎嗪对白血病K562细胞增殖和凋亡的影响
目的:探讨川芎嗪对K562细胞端粒酶活性及凋亡的影响,进一步研究川芎嗪抗白血病作用的分子机制.方法:用光学显微镜及透射电镜观察经川芎嗪作用后K562细胞具有的凋亡形态学改变,采用流式细胞仪检测Fas蛋白的表达;采用多聚酶链式反应-酶联免疫测定法(PCR-ELISA)检测白血病细胞端粒酶活性.结果:川芎嗪能抑制K562细胞端粒酶活性,随药物浓度增加和利用时间的延长,其抑制作用增强,并能诱导K562细胞凋亡,使Fas蛋白水平上调.结论:川芎嗪能显著抑制K562细胞端粒酶活性,其作用可能与诱导细胞凋亡有关.在此过程中,Fas也可能参与了细胞凋亡的调节.
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桑寄生有效部位对白血病细胞株K562抑制作用的研究
目的 筛选桑寄生对白血病细胞株K562的抑制作用的有效部位.方法 采用MTT法和细胞形态学观察的方法,测定桑寄生不同溶剂萃取物体外对K562细胞的抑制作用,确定其有效部位.结果 桑寄生正丁醇部位、氯仿部位、乙酸乙酯部位、乙醚部位及桑寄生水提物显示显著的抑制作用,且呈时间-剂量依赖性,其中乙酸乙酯部位400μg/mL浓度作用72h的抑制作用明显,对白血病细胞株K562的抑制率迭80.07%.结论 桑寄生的多种溶剂的萃取物在体外对K562细胞有抑制增殖的作用.
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Apollon siRNA联合川芎嗪对白血病细胞增殖及凋亡的影响
目的 观察Apollon siRNA靶向沉默Apollon基因联合川芎嗪(TMP)对人慢性粒细胞白血病细胞株K562增殖及凋亡的影响.方法 根据前期实验筛选出的干扰效果佳的Apollon siRNA片段,构建pGPHI-GFP-Neo-Apollon真核表达载体,并将构建成功的载体转染至K562细胞.将实验分为细胞对照组(未行任何处理)、阴性对照组(转染阴性质粒载体)和RNA干扰组(转染pGPHI-GFP-Neo-Apollon质粒载体),利用RT-PCR法和细胞免疫荧光法分别检测各组细胞Apollon mRNA及蛋白的表达情况;再于上述分组基础上新增TMP组(施加320 μg/mL TMP)、TMP+阴性对照组和TMP+RNA干扰组,应用MTT法和流式细胞术分别检测各组K562细胞的增殖能力和细胞凋亡率.结果 构建的pGPHI-GFP-Neo-Apollon载体能在K562细胞内稳定表达;RNA干扰组Apollon mRNA及其蛋白的相对表达水平明显低于细胞对照组和阴性对照组(均P＜0.05);RNA干扰组K562细胞的增殖抑制率和凋亡率高于细胞对照组(P＜0.05),与RNA干扰组及TMP组比较,siRNA转染联合TMP能显著提高K562细胞的增殖抑制率和凋亡率(均P＜0.05).结论 Apollon siRNA转染能显著抑制K562细胞增殖并促进其凋亡,且与TMP联合使用对提高K562细胞的增殖抑制率和凋亡率具有显著协同作用,提示siRNA技术联合药物在白血病治疗中具有重要的潜在价值.
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芒果甙对白血病K562细胞端粒酶活性和凋亡的影响
目的:探讨芒果甙对K562细胞端粒酶活性及凋亡的影响,以进一步研究芒果甙抗白血病作用的分子机制.方法:用光学显微镜及透射电镜观察经芒果甙作用后K562细胞具有的凋亡形态学改变;采用流式细胞仪检测Fas蛋白的表达;采用多聚酶链式反应-酶联免疫测定法(PCR-ELISA)检测白血病细胞端粒酶活性.结果:芒果甙能抑制K562细胞端粒酶活性,随药物浓度增加和利用时间的延长,其抑制作用增强;并能诱导K562细胞凋亡,使Fas蛋白水平上调.结论:芒果甙能显著抑制K562细胞端粒酶活性,其作用可能与诱导细胞凋亡有关.在此过程中,Fas也可能参与了细胞凋亡的调节.
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PDCD4基因小干扰RNA的筛选及其对人白血病细胞药物敏感性的研究
目的:筛选出PDCD4 siRNA的有效序列,并研究其对白血病K562细胞药物敏感性的影响.方法:利用生物信息学的方法设计并合成3条PDCD4 siRNA候选序列,将PDCD4 siRNA候选序列分别转染K562细胞,用实时定量RT-PCR的方法(Real-time RT-PCR)筛选出能有效沉默PDCD4基因mRNA表达的序列,并用蛋白印迹法(Western blotting)检测该有效序列对细胞内PDCD4蛋白表达水平的影响.将有效序列转染k562细胞6h后,分别与常用的抗白血病药物三氧化二砷(As2O3)、阿糖胞苷(Ara-c)、小檗碱(BB)联合作用72 h,用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测PDCD4 siRNA对细胞药物敏感性的影响.结果:用实时定量PCR成功筛选出一条有效干扰PDCD4mRNA表达的序列,用Western blotting法检测该序列可显著降低PDCD4蛋白的表达水平(P＜0.05)；与ATO,Arac,BB联合作用72 h后,PDCD4表达的下调降低了细胞的药物敏感性(P＜0.05).结论:沉默PDCD4能够显著降低白血病细胞的药物敏感性,PDCD4 siRNA能够显著挽救药物作用后的细胞活性.
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姜黄素提高白血病KG1a细胞对同种异体NK细胞杀伤的敏感性及其分子机制探讨
目的:研究姜黄素作用前后白血病KG1a细胞对同种异体自然杀伤(NK)细胞杀伤的敏感性变化,并初步探讨其分子机制.方法:以对同种异体NK细胞杀伤高度敏感的白血病K562细胞为对照,乳酸脱氢酶释放法检测KG1a细胞对同种异体NK细胞杀伤的敏感性,流式细胞仪检测细胞表面NKG2D配体(MICA/B、ULBP1、ULBP2、ULBP3)和HLA-Ⅰ类分子蛋白表达,逆转录PCR法检测细胞表面NKG2D配体和HLA-Ⅰ基因mRNA的表达水平.CCK-8法检测姜黄素对KG1a细胞半数抑制量(IC50),以此含量作用KG1a细胞,再次乳酸脱氢酶释放法检测姜黄素作用后的KG1a对同种异体NK细胞杀伤的敏感性,流式细胞仪检测姜黄素作用后的KG1a细胞表面NKG2D配体和HLA-Ⅰ类分子蛋白表达水平.结果:与K562细胞比较,KG1a细胞对同种异体NK细胞杀伤呈低度敏感,KG1a细胞表面NKG2D各配体蛋白表达阳性率均明显低于K562细胞(P＜0.01),HLA-Ⅰ蛋白表达阳性率则明显高于K562细胞(P＜0.01)；在mRNA水平两种白血病细胞表面均有NKG2D配体和HLA-Ⅰ基因表达.当效靶比为5∶1、10∶1、20∶1时,姜黄素作用后NK细胞对KG1a细胞杀伤率明显高于作用前(P＜0.01)；作用后KG1a细胞各NKG2D配体表达率均明显升高(P＜0.05或0.01),HLA-Ⅰ类分子无明显变化(P＞0.05).结论:姜黄素能提高KG1a细胞对同种异体NK细胞杀伤的敏感性,其机制可能与姜黄素提高KG1a细胞表面NKG2D配体的表达有关.
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汉防己碱对白血病K562细胞生长的促进耐药作用
目的 考察汉防己碱(Tet)对白血病K562细胞生长的影响.方法 采用体外细胞培养,即在37℃、5％CO2、饱和湿度的培养箱中培养,培养液为含10％热灭活NBS的完全RPMI1640细胞培养基.待K562细胞与药物作用48 h后,收集并处理细胞,结合MTT和Western blot法研究Tet对K562细胞生长的作用特点.结果 Tet在0.33～1.00 μg/ml仅使K562及K562/ADM细胞的存活率降低至75％ ～ 80％,低浓度Tet(0.33 μg/ml)使阿霉素(ADM)和顺铂(cDDP)对K562细胞生长的IC50增加(P＜0.01),1.0 μg/ml Tet则降低IC50,使ADM对K562/ADM细胞的IC50增加,cDDP的IC50无明显变化.0.33μg/ml Tet有提升2种细胞的P-gp和MRP1表达的作用(P＜0.05).Tet各浓度对LRP表达无明显影响.结论 Tet对K562及K562/ADM细胞生长抑制作用具浓度依耐性,低浓度具加速耐药的作用,其促进耐药细胞发展的机制至少与提升P-gp和MRP1表达有关.
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芒果甙对K562细胞端粒酶活性和细胞周期的影响
目的:研究芒果甙对白血病K562细胞端粒酶活性及其细胞周期的影响. 方法:采用端粒重复序列扩增(telomeric repeat amplification protocol,TRAP) PCR-ELISA方法检测K562细胞经芒果甙作用前后端粒酶活性的变化,应用流式细胞仪检测细胞周期的分布. 结果:经芒果甙作用后,K562细胞端粒酶活性下降,随药物浓度增加和作用时间的延长,其抑制作用增强;芒果甙作用24小时后,K562细胞G2/M期细胞增多,S期细胞减少,出现G2/M期阻滞,并呈现剂量依赖性. 结论:芒果甙能抑制K562细胞的端粒酶活性,其机制可能与其细胞周期阻滞作用有关.
