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电针内关穴及列缺穴对心肌缺血大鼠心肌细胞蛋白激酶表达的影响
目的 研究电针内关穴及列缺穴对心肌缺血大鼠心肌细胞蛋白激酶表达的影响.方法 健康雄性SD大鼠按照随机数字表随机分为对照组、模型组、内关组、列缺组、非经非穴组,每组10只.采用注射盐酸异丙肾上腺素(85 mg/kg)制作大鼠心肌缺血模型,针刺内关、列缺、非经非穴进行干预,通过Western blot检测技术,观察电针前后各组大鼠心肌细胞蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)、蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)及蛋白激酶G(protein kinase G,PKG)表达量的变化情况.结果 与对照组比较,模型组PKA、PKC、PKG的表达明显升高(P＜0.01).与模型组比较,内关组和列缺组PKA、PKC、PKG蛋白表达量均降低(P ＜0.01,P＜0.05),非经非穴组PKA蛋白表达量降低(P＜0.01);与内关组比较,列缺组、非经非穴组PKA、PKC、PKG的表达量明显升高(P ＜0.01,P＜0.05);与列缺组比较,非经非穴组PKA、PKC、PKG表达量升高(P ＜0.01,P＜0.05).结论 电针内关穴和列缺穴均可以降低心肌缺血大鼠心肌细胞蛋白激酶的表达量,且内关穴的针刺效应优于列缺穴.
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NP-cGMP-PKG信号通路在D型钠尿肽抑制延迟整流型钾电流中的作用
目的:探讨NP-cGMP-PKG信号通路在D型钠尿肽(DNP)抑制豚鼠胃窦环形肌细胞上延迟整流型钾电流中的作用及其相关机制.方法:用全细胞模式的膜片钳技术记录豚鼠胃窦环形肌上延迟整流型钾电流(IK(V)).并观察NP-cGMP-PKG信号通路在DNP抑制豚鼠胃窦环形肌细胞上延迟整流型钾电流中的作用.结果:DNP抑制豚鼠胃窦环形肌上IK(V)并呈现剂量依赖关系.0.01,0.1和1 μmol/L的DNP在去极化到60 mV时使IK(V)抑制到原来的83.5%±2.1%,71.8%±2.3%和63.8%±2.2%.鸟苷酸环化酶抑制剂LY83583减弱这种抑制作用,0.1μmol/L的LY83583使1 μmol/L的DNP抑制IK(V)的程度由原来抑制到63.8%±2.2%减弱为抑制到76.8%±2.3%.而cGMP敏感的磷酸酯酶抑制zaparinast却能增强这种作用.1 μmol/L的zaparinast使1 μmol/L的DNP抑制IK(V)的程度由原来抑制到63.8%±2.2%增强为抑制到56.8%±2.1%.DNP对IK(V)的抑制作用可完全被cGMP依赖的蛋白激酶G(PKG)抑制剂KT5823所消除,但不受cGMP依赖的蛋白激酶A(PKA)抑制剂的影响.结论:NP-cGMP-PKG途径参与DNP抑制豚鼠胃窦环形肌细胞上IK(V)过程,而cAMP-PKA途径并不参与此过程.IK(V)在维持豚鼠胃窦环形肌细胞静息电位中起重要作用.
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重组人松弛素对舒张性心力衰竭模型兔心肌组织蛋白激酶G活性的调控
目的 探讨重组人松弛素(RLX)对舒张性心力衰竭(DHF)模型兔心肌组织蛋白激酶G(PKG)活性的调控作用.方法 采用腹主动脉缩窄术建立DHF模型兔,新西兰家兔28只随机分为假手术组6只、DHF组6只、RLX小剂量组8只[30 tμg/(kg·d)]、RLX大剂量组8只[98 μg/(kg·d)],给药2周.术后第10周,取血清标本,分别采用ELISA法检测钠尿肽、RLX,制备10％心肌匀浆液样本ELISA法测3-硝基酪氨酸(3-NT)、NO、环磷酸鸟苷(cGMP)、PKG.结果 与假手术组比较,DHF组、RLX小剂量组、RLX大剂量组血清钠尿肽、心肌匀浆3-NT水平明显升高,NO、cGMP、PKG活性明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).与DHF组比较,RLX大剂量组心肌匀浆中NO、cGMP、PKG活性明显升高[(18.70±0.27)μmol/L vs (16.38±0.16)μmol/L,(10.63±0.34) nmol/Lvs(9.15±0.27) nmol/L,(528.58±3.66)U/L vs (493.26±5.68) U/L,P＜0.05],3-NT水平明显降低(239.98±2.75)μmol/L vs (261.79±4.48)μmol/L,P＜0.05].结论 大剂量RLX减轻家兔左心室舒张功能可能是通过NO-cGMP-PKG通路减轻DHF模型兔氧化应激反应,提升NO生物学利用度、PKG活性,从而桔抗心肌纤维化,进而减轻左心室的舒张功能障碍.
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PKA和PKG信号通道对平滑肌细胞 Kv亚型1.5表达的影响
目的 研究PKA(蛋白激酶A)和PKG(蛋白激酶G)信号通道对人气道平滑肌细胞(HASMCs)电压依赖延迟整流钾通道(Kv)亚型Kv1.5表达的影响.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blotting技术,观察PKA激活剂8-brom-cAMP和阻断剂Rp-cAMP及PKG激活剂8-brom-cGMP对HASMCsKv1.5 mRNA和蛋白质表达的影响.结果 PKA激活剂8-brom-cAMP显著增强Kv1.5亚型的表达,该效应可被PKA阻断剂Rp-cAMP显著逆转.PKG激活剂8-brom-cGMP显著增强Kv1.5亚型的表达.结论 活化PKA和PKG促进Kv1.5亚型的表达,抑制HASMCs兴奋性.推测可能为这两条信号通道引起HASMCs舒张反应的作用机制之一.
关键词： 电压依赖延迟整流钾通道 人气道平滑肌 蛋白激酶A 蛋白激酶G -
蛋白激酶G对心肌再灌注损伤及左室重构的影响
心力衰竭（心衰）是21世纪心血管领域的三大疾病之一，心衰常见原因之一是心肌梗死，心梗后发生心室重构是心力衰竭的病理基础，心室重构和心功能障碍均属于可逆过程，早期干预与防治心室重构有助于延缓心梗后心衰的进展，能够有效改善心梗患者的预后。心室重构的机制是多因素的，许多生物反应参与到缺血事件后心室重构的过程中，而cGMP/PKG通路可以调解类似cAMP依赖性蛋白激酶A的磷酸化。同时，PKG下调心肌细胞分化和PKG抑制作用产生更显著的心肌细胞分化效率。cGMP/PKG调节通路诱使PKG活化并发挥抗凋亡效应。PKG调节更是参与到了心脏重构中。
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血管外膜慢性损伤通过CNP影响大鼠颈动脉舒缩功能的实验研究
目的：探讨血管外膜慢性损伤对动脉血管舒缩反应性影响的可能机制。方法以硅胶管为实验研究工具，将大鼠颈动脉进行包裹，构建血管外膜慢性损伤介导早期动脉硬化动物模型以及血管收缩性增强动物模型，详细观察正常组与模型组血管组织中，CNP、cGMP、PKGⅠα和PKGⅠβ这四项指标之间的表达变化。结果就包管侧右颈动脉血管组织来讲，在CNP、cGMP、PKGⅠα表达上，模型组较正常组双侧颈动脉明显减少，有显著的统计学差异（P＜0.01）；对于模型组中的包管侧右颈动脉血管组织而言，其中PKGⅠβ这项表达与其他组比较呈下降趋势，但是组间对比差异无显著统计学意义（P=0.254）。结论血管外膜慢性损伤早期阶段可以引起血管慢性痉挛，血流量下降，血管对5-HT的反应敏感性增加，局部血管组织中CNP的蛋白表达下调是血管外膜慢性损伤引起血管收缩反应性增强的重要机制之一，并且CNP的降低血管收缩反应性的作用同局部血管组织中PKGⅠα的表达密切相关，同局部血管组织中PKGⅠβ的表达关系不密切。
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MCI-154对失血性休克大鼠血管平滑肌钙敏感性的影响及其机制
目的探讨新型钙增敏剂MCI-154对失血性休克大鼠血管平滑肌钙敏感性的影响及其可能的机制.方法取失血性休克大鼠肠系膜上动脉(SMA),利用离体血管环张力测定技术,用去极化状态下(120 mmol/L K+)血管环对梯度浓度Ca2+的反应来反映钙敏感性.实验分两部分:第一部分观察MCI-154对失血性休克大鼠血管平滑肌钙敏感性的影响,第二部分观察MCI-154影响失血性休克血管平滑肌钙敏感性与Rho-激酶、蛋白激酶C(PKC)、蛋白激酶G(PKG)的关系.结果失血性休克后SMA血管环对Ca2+的量-效曲线明显右移,大收缩力(Emax)较正常组显著降低(P<0.01),MCI-154可使休克SMA血管环对Ca2+的量-效曲线进一步右移,且呈一定的剂量依赖关系,提示休克后SMA存在钙失敏,MCI-154进一步降低休克后SMA血管环的钙敏感性.MCI-154可使具有Rho-激酶激动作用的血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和PKC激动剂佛波醇-12-豆蔻酸13-乙酸酯(PMA)作用下Ca2+的量-效曲线明显右移,Emax显著降低(P<0.01);PKG的拮抗剂KT-5823可使MCI154对Ca2+的量-效曲线明显左移,Emax显著升高(P<0.01),提示MCI-154降低休克后血管平滑肌钙敏感性可能与Rho-激酶、PKC、PKG有关.结论失血性休克可使血管平滑肌钙敏感性降低,MCI-154可进一步降低这种钙敏感性,其机制可能通过Rho-激酶、PKC、PKG来调节失血性休克血管平滑肌的钙敏感性.
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eNOS-NO-cGMP-PKG信号转导通路在心血管系统缺血再灌注损伤中的作用及研究进展
近年来我国心血管疾病（CCVD）位列各种疾病死因的第一位，缺血性心血管疾病（ICCVD）是临床心血管疾病的主要发病类型。心血管疾病的发病机理较复杂，目前其机制尚未完全阐明，研究表明它的发病与多种因素有关，其中缺血再灌注损伤（ischemia- reperfusion，IR）是缺血性心血管疾病主要的病理过程[1]。已有研究显示,缺血再灌注过程中，通过激活eNOS-NO系统，从而激活下游的cGMP-PKG信号通路，实现对缺血性组织的保护。本文就eNOS-NO-cGMP-PKG信号通路在心血管系统缺血再灌注损伤中的作用及研究进展作一综述。
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大鼠背根节慢性压迫或急性分离引起的cGMP-PKG信号通路持续激活介导背根节神经元的异常兴奋性和痛觉过敏
背根节(dorsal root ganglion,DRG)损伤或炎症可导致DRG神经元兴奋性异常增强和痛觉过敏.我们近期研究显示,长期慢性在体压迫(chronic compression of DRG,CCD)或急性离体分离(acute dissociation of DRG,ADD)背根节导致的神经元兴奋性异常增强和痛觉过敏受环鸟苷酸(cGMP)-蛋白激酶G(PKG)信号通路活动的调控.本研究采用大鼠CCD模型和ADD模型,直接在DRG上检测cGMP浓度和PKG mRNA及其蛋白质的表达,进一步证明了cGMP-PKG信号通路活动在CCD和ADDDRG所致神经元兴奋性异常增强和痛觉过敏中的重要作用.酶联免疫吸附测定(ELISA)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的实验结果显示,CCD或ADD明显增高DRG内的cGMP浓度,上调Ⅰ型PKG mRNA和PKG蛋白质表达.电生理膜片钳全细胞记录结果显示,CCD和ADD显著增强伤害特异性DRG细胞的兴奋性及其对cGMP-PKG信号通路激动剂的反应强度.增强的细胞兴奋性可以被cGMP-PKG通路阻断剂所抑制.在体压迫DRG的椎间孔内注射cGMP-PKG抑制剂显著减轻痛觉过敏.以上研究结果表明,CCD和ADD可以激活DRG细胞内的cGMP-PKG信号通路,而损伤的DRG细胞的超兴奋性和痛觉过敏的维持则需要cGMP-PKG信号通路处于持续的激活状态.
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榄香烯对HLE-B3内PKC和PKG蛋白表达的影响
目的 探讨中药单体榄香烯(Ele)对人晶状体上皮细胞系(HLE-B3)内蛋白激醇C(PKC)和蛋白激酶G(PKG)表达的影响.从而探讨Ele抑制HLE-B3增殖的信号转导机制.方法实验分为空白组、rhbFGF组及Ele组.采用流式细胞术检测各组HIE-B3内PKC和PKG蛋白的表达.结果 rhbFGF组HIE-B3内PKC表达为(50.652±2.068)%,较空白组的(35.575±1.937)%明显升高(P<0.01),Ele组为(28.012±2.789)%,较thbFGF组明显降低(P<0.01);rhbFGF组HIE-B3内PKG表达为(86.562±1.325)%,较空白组的(63.838±0.486)%明显升高(P<0.01),Ele组为(55.125±2.126)%,较rhbFGF组明显下降(P<0.01).结论下调HIE-B3内PKC或PKG表达、干预细胞内PKC或PKG信号转导途经都可能是Ele抑制HLE-B3增殖的作用机制.
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心肌L型钙通道结构、调节及与心脏疾病关系
心肌L型钙通道CaV1. 2是维持心肌细胞兴奋和兴奋-收缩偶联的多亚基跨膜蛋白. 多种信号通路参与CaV1. 2的调节, 其中主要包括蛋白激酶A、 蛋白激酶G和蛋白激酶C途径. CaV1. 2基因突变或调节异常导致心律失常、 心肌肥大和心衰等心脏疾病的发生.
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蛋白激酶G在调节血管通透性信号转导中的进展
蛋白激酶G(PKG)在微血管通透性升高的细胞内信号转导中是一个重要的信号分子,其组成的Ca2+-NO-cGMP-PKG级联反应在微血管通透性的调节中起重要作用.PKG的作用底物有血管扩张剂刺激的磷蛋白(VASP)、热休克蛋白27(HSP27)等.
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蛋白激酶GIa基因在血性脑脊液致大鼠脑动脉平滑肌细胞增殖中的作用
目的 观察血性脑脊液对大鼠脑动脉平滑肌细胞蛋白激酶Gia mRNA及其蛋白表达水平变化与增殖的关系,探讨蛋白激酶Gla基因在蛛网膜下腔出血后继发慢性脑血管痉挛分子机制中的调控作用.方法 组织块法原代培养脑动脉平滑肌细胞.采用半定量逆转录多聚酶链反应技术检测对照组、血性脑脊液处理24 h组、血性脑脊液处理48 h组蛋白激酶Gia基因mRNA的表达水平;采用蛋白质印迹技术检测相应的蛋白的表达水平.采用甲基噻唑基四唑法、氚标记胸腺嘧啶核苷掺入法检测脑动脉平滑肌细胞增殖改变.结果 血性脑脊液诱导脑动脉平滑肌细胞不断增殖.各组均检测出蛋白激酶Gia基因的mRNA以及蛋白表达的变化,图像定量分析光密度值显示各组表达的mRNA以及蛋白表达与细胞增殖改变密切相关.结论 蛋白激酶Gia基因可能在蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛中调节脑动脉平滑肌细胞增殖.
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血管平滑肌细胞增殖中蛋白激酶G与钙调磷酸酶信号通路的交互调节
目的 探讨血管平滑肌细胞增殖过程中蛋白激酶G与钙调磷酸酶信号通路之间是否存在交互调节作用.方法 植块法原代培养Wistar大鼠血管平滑肌细胞.Western blot测定钙调磷酸酶和蛋白激酶G Iα蛋白的表达.定磷法测定钙调磷酸酶活性,MTT法测定血管平滑肌细胞的增殖.结果 苯肾上腺素刺激诱发的平滑肌细胞钙调磷酸酶的表达和活性可被一氧化氮供体S-亚硝基-N-乙酰青霉胺和Sp-8-pCPT-cGMP抑制,但可被Rp-8-pCPT-cGMP增强.应用环孢素A干预增殖细胞后蛋白激酶G Iα蛋白表达量较对照组明显提高(P＜0.01),而加入苯肾上腺素刺激后蛋白激酶G Iα蛋白的表达较对照组也有明显提高(P＜0.05),但较5 mg/L环孢素A干预组减少了36.7%,两组之间差异有统计学意义(P＜0.01).经0.5 mg/L环孢素A预处理后,苯肾上腺素刺激诱发的平滑肌细胞吸光度降低36.67%,S-亚硝基-N-乙酰青霉胺、Sp-8-pCPT-cGMP或Rp-8-pCPT-cGMP并不能进一步抑制或升高已升高的吸光度.结论 蛋白激酶G介导钙调磷酸酶信号抑制血管平滑肌细胞增殖,并且蛋白激酶G与钙调磷酸酶能够交互调节影响血管平滑肌细胞增殖进程.
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蛋白激酶G对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞炎症因子分泌的影响
目的：探讨蛋白激酶G（PKG）对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞中炎症因子[白介素-6（IL-6）、白介素-10（IL-10）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）]分泌的影响。方法：THP-1单核细胞用160 nmol/L的佛波酯诱导分化成巨噬细胞，再以50 mg/L氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）处理形成泡沫细胞，油红“O”染色，镜下观察细胞形态。以PKG激动剂100μmol/L 8-Br-cGMP和抑制剂2μmol/L KT-5823分别处理巨噬细胞和泡沫细胞，同时设立巨噬细胞正常对照组和泡沫细胞模型对照组，24 h后收集细胞上清液，ELISA检测各组细胞IL-6、IL-10、TNF-α的分泌。结果：ox-LDL处理巨噬细胞48 h后，成功构建为泡沫细胞。泡沫细胞中IL-6、TNF-α分泌显著增加（P＜0．05）。8-Br-cGMP处理巨噬细胞后，IL-6分泌显著减少（P＜0．05），IL-10分泌显著增加（P＜0．05）；KT-5823处理巨噬细胞后，IL-10分泌显著减少（P＜0．05）。8-Br-cGMP处理泡沫细胞后，IL-6和TNF-α分泌显著减少（P＜0．05），IL-10分泌显著增加（P＜0．05）；KT-5823处理泡沫细胞后，IL-6和TNF-α分泌显著减少（P＜0．05）。结论：PKG可能通过上调抗炎因子IL-10的表达、下调促炎因子IL-6和TNF-α的表达，抑制炎症的发生发展；PKG可作为潜在的抗动脉粥样硬化的新思路和新靶点。
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加减枳实薤白桂枝汤对大鼠心肌缺血再灌注过氧化损伤的影响
目的:探讨加减枳实薤白桂枝汤对大鼠心肌缺血再灌注过氧化损伤的保护作用.方法:将60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、枳实薤白桂枝汤组(4.59g/kg)和加减枳实薤白桂枝汤组(6.48g/kg),使用对应剂量的药物预处理大鼠,假手术对照组和模型对照组给予蒸馏水,14天后采用冠状动脉结扎缺血30min再灌注120min的方法,建立心肌缺血再灌注模型,假手术组开胸不结扎.伊文斯蓝-TTC双染色法测定心肌梗死面积,HE染色观察组织形态学变化,Elisa检测血清中NO、MDA、SOD的含量及心肌组织中MDA、SOD的含量,Western blot检测心肌组织中Akt、p-Akt、eNOS、p-eNOS、cGK1蛋白的含量;免疫组化检测心肌组织p～eNOS蛋白的表达.结果:与假手术组相比,模型组的心脏梗死面积增大,心肌组织形态紊乱,血清及心肌组织中MDA的含量升高,SOD、NO的含量降低,心肌组织中p-Akt、p-eNOS、eGK1蛋白的含量降低;与模型组相比,枳实薤白桂枝汤(4.59g/kg)和加减枳实薤白桂枝汤(6.48g/kg)预处理组的心脏梗死面积减小,组织形态学改变较小,血清及心肌组织中MDA的含量降低,SOD、NO的含量升高,心肌组织中p-Akt、p-eNOS、cGK1蛋白的含量升高.结论:加减枳实薤白桂枝汤能减轻缺血再灌注出现的心肌梗死,减轻心肌过氧化损伤,其机制可能与PI3K-Akt-eNOS上调NO/cGMP/PKG信号通路有关.
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血管平滑肌细胞钙敏感性调控与休克血管低反应性发生的关系
血管平滑肌细胞钙敏感性调节是血管平滑肌舒缩调节的重要途径,Rho激酶、蛋白激酶C(PKC)和蛋白激酶G(PKG)是参与其中的关键分子.在休克等病理条件下,上述分子的活性发生变化,引起钙敏感性降低,从而导致了血管对缩血管物质的反应性降低,即血管的低反应性.
