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腺苷A3受体调控低氧血管反应性的实验研究
目的 探讨腺苷A3受体(A3AR)是否参与低氧血管反应性的调节,为寻找调节创伤/休克时阻力血管对血管活性物质反应性的药物调控靶位提供依据.方法 采用低氧孵育离体大鼠肠系膜上动脉血管环模型,观察A3AR激动剂IB-MECA及阻断剂MRS1523对低氧血管收缩反应性及钙敏感性的影响.结果 缺氧3h可诱导大鼠肠系膜上动脉对NE的收缩反应性及钙敏感性显著降低;缺氧前30min使用IB-MECA对缺氧诱导的大鼠肠系膜上动脉对NE的收缩反应性及钙敏感性均无明显影响;缺氧同时或缺氧后30min使用IB-MECA均可明显改善缺氧低反应血管对NE的收缩反应性并部分改善其钙敏感性;缺氧同时使用MRS1523可使缺氧低反应血管对NE的收缩反应性进一步降低,但MRS1523对缺氧低反应血管钙敏感性无明显影响.PKC抑制剂stausoprine (1×10-7mol · L-1)及Rho激酶抑制剂Y-23187 (1×10-5mol · L-1)均可明显拮抗A3AR激动剂IB-MECA对低氧血管反应性及钙敏感性的恢复作用.结论 A3AR参与大鼠低氧血管对NE收缩反应性的调节,其机制与A3AR部分改善低氧血管钙敏感性有关,PKC及Rho激酶可能参与了A3AR对低氧血管收缩反应性及钙敏感性的调节.
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6-[4-(4′-吡啶)氨基苯]-4,5-二氢-3(2H)哒嗪酮对大鼠胸主动脉环收缩功能的影响
目的 研究新型钙增敏强心剂6-[4-(4′-吡啶)氨基苯]-4,5-二氢-3(2H)哒嗪酮(MCI-154)的扩血管作用机制.方法 采用生物张力换能器及生理记录仪测定大鼠离体胸主动脉环和蜕膜胸主动脉环的收缩张力.结果 MCI-154可浓度依赖性抑制1 nmol·L-1～10 μmol·L-1 去甲肾上腺素(pD2′为4.21±0.23)和80 mmol·L-1 KCl(IC50为7 μmol·L-1)引起的血管环收缩,提示其可通过抑制血管平滑肌细胞膜上受体操纵性和电压依赖性钙通道而减少胞外钙内流.在无Ca2+ K-H液中,MCI-154预处理可浓度依赖性降低3 μmol·L-1苯肾上腺素(IC50为5 μmol·L-1)及20 mmol·L-1 咖啡因(IC50为16 μmol·L-1)引起的血管环收缩张力,提示其可抑制血管平滑肌细胞胞内钙释放.在1 μmol·L-1 Ca2+溶液中,MCI-154可显著降低蜕膜血管环收缩张力(IC50为10 μmol·L-1),提示其可降低血管平滑肌对Ca2+的敏感性.结论 MCI-154可通过抑制血管平滑肌胞外钙内流、胞内钙释放和降低其对Ca2+敏感性来降低血管平滑肌收缩张力,体外具有扩血管效应.
关键词： 6-[4-(4′-吡啶)氨基苯]-4 5-二氢-3(2H)哒嗪酮 主动脉 胸 肌 平滑 血管 血管收缩 钙敏感性 -
β3肾上腺素能受体通过降低钙敏感性介导正常和心衰大鼠心脏的负性肌力作用
目的 探讨β3肾上腺素能受体在正常和心衰大鼠心脏中的作用机制.方法 100只(SD)大鼠(体重180～220 g)随机分成假手术组(30只)和心脏衰竭组(70只),结扎冠状动脉制成心衰模型,4周后假手术组和心衰组再随机分为β3受体激动剂BRL37344组和β3受体拮抗剂SR59230A组进行实验.结果 与假手术组相比:①4周、8周、12周后心衰组大鼠心质量指数HW/BW(心重/体重)和LVW/BW(左心重/体重)均明显升高(P＜0.05),左室舒张末期内径(LVEDD)和左室收缩末期内径(LVESD)均明显增大(P＜0.05),左室射血分数(LVEF)和短轴缩短率(LVFS)均明显减小(P＜0.05).②阻断β1、β2受体给予β3受体激动剂BRL37344后,心衰组的心率(HR)、左心室收缩压(LVSP)、左室等容收缩期室内压大上升速率(+dp/dtmax)及左室等容舒张期室内压大下降速率(-dp/dtmax)均下降(P＜0.05),左心室舒张压(LVEDP)升高(P＜0.05);阻断β3受体后以上心功能检测指标明显改善.③心衰大鼠的左心室壁β3受体表达增加.④急性分离的单个心衰大鼠心肌细胞,给予BRL37344后肌小节收缩幅度(bl％peak h)、钙瞬变(F340/380)幅度均明显下降(从0.33±0.09到0.25±0.07,P=0.074),钙敏感性降低(P＜0.05).结论 心衰大鼠心脏β3受体表达显著增加.阻断β1和β2肾上腺素能受体的情况下给予BRL37344,大鼠离体心脏功能受到抑制;心衰大鼠给予BRL37344后负性肌力作用更明显.激动β3受体使心肌细胞收缩幅度和钙瞬变幅度下降,钙敏感性降低.
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精氨酸血管加压素恢复失血性休克大鼠血管反应性和钙敏感性与蛋白激酶C亚型的关系
目的 探讨精氨酸血管加压素(AVP)对失血性休克大鼠血管反应性和钙敏感性的恢复作用与蛋白激酶C(PKC)亚型的关系.方法 取失血性休克大鼠肠系膜上动脉(SMA)并去除内皮,利用离体血管环张力测定技术,观察了AVP(5×10-11、5×10-10和5×10-9 mol/L)调节对休克SMA对去甲肾上腺素(NE)反应性和钙敏感性的作用及其与PKCα、δ亚型的关系.结果 AVP(5×10-11、5×10-10和5×10-9 mol/L)可明显恢复休克后的血管反应性和钙敏感性,使SMA对NE和Ca2+的量一效曲线明显左移,血管环产生的大收缩张力(Emax)升高(P均＜0.01),且呈一定的剂量依赖关系,各剂量组间比较差异均有统计学意义(P均＜0.05).而特异性的PKCα、δ亚型抑制剂G66976(5×10-6 mol/L)和Rottlerin(10-5 mol/L)均可拮抗AVP(5×10-10 mol/L)诱导的休克后血管反应性和钙敏感性升高,抵消了AVP诱导的NE和Ca2+的量一效曲线左移,使NE的Emax明显降低(P＜0.05或P＜0.01).结论 AVP能剂量依赖性地升高失血性休克大鼠的血管反应性和血管平滑肌钙敏感性,其机制可能与PKCα、δ亚型激活有关.
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失血性休克大鼠血管平滑肌钙敏感性变化及其在休克双相血管反应性变化中的作用
目的观察失血性休克后血管平滑肌钙敏感性是否存在双相变化,以及钙敏感性的双相变化与血管反应性双相变化的关系.方法取失血性休克大鼠肠系膜上动脉(SMA),采用离体血管环张力测定技术,观察在失血性休克后不同时间点(休克即刻、休克30 min、休克1 h、休克2 h)大鼠SMA血管环对梯度浓度去甲肾上腺素(NE)的收缩反应性,以及在去极化状态下(120 mmol/L K+)血管环对梯度浓度钙的收缩反应性变化(钙敏感性),分析血管反应性变化与钙敏感性变化的关系;同时观察钙敏感性增强剂血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和钙敏感性抑制剂胰岛素对血管反应性的影响.结果休克早期(即休克即刻和休克30 min时)SMA对NE和钙的反应性明显升高,量-效曲线明显左移,大收缩力(Emax)明显升高(P均<0.05);随着休克时间的延长,血管环对NE和钙的反应性均逐渐下降,到休克2 h均已明显降低,其量-效曲线明显右移,Emax明显降低(P<0.05或P<0.01);休克后不同时间点血管反应性变化与钙敏感性变化呈显著正相关(r=0.962 4,P<0.05).具有钙敏感性增强作用的AngⅡ(1×10-9 mol/L)可明显升高休克2 h血管环对NE和钙的反应性(P<0.05或P<0.01),而有钙敏感性抑制作用的胰岛素则可降低休克早期(休克即刻)血管环对NE和钙的反应性(P<0.05或P<0.01).结论失血性休克血管平滑肌细胞存在钙敏感性的双相变化,血管平滑肌细胞钙敏感性双相变化在失血性休克血管反应性的双相变化中起重要作用.
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蛋白激酶C和蛋白激酶G对失血性休克大鼠血管平滑肌细胞钙敏感性的调节作用
目的 探讨蛋白激酶C(PKC)、蛋白激酶G(PKG)对失血性休克大鼠血管平滑肌细胞钙敏感性的调节作用.方法 经股动脉放血使平均动脉压维持在40 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)2 h制备失血性休克大鼠模型.采用离体血管环张力测定技术,测定在失血性休克大鼠肠系膜上动脉(SMA)血管环去极化状态下(120 mmol/L K+)对梯度浓度Ca2+的收缩反应性(钙敏感性)变化;同时观察PKC、PKG活性调节剂对钙敏感性的影响.测定大鼠SMA的PKC、PKG活性变化,分析PKC、PKG活性变化与血管钙敏感性变化间的关系.结果 休克2 h SMA血管环对钙敏感性明显降低,其量-效曲线明显右移,大收缩力(Emax)明显降低(P均＜0.01).PKC激动剂PMA 1×10-7 mol/L可明显提高休克血管环对钙敏感性,PKC拮抗剂staurosporine 1×10-7 mol/L可降低休克血管环对钙敏感性(P＜0.05或P＜0.01);PKG激动剂8Br-cGMP 1×10-4 mol/L可使休克血管钙敏感性降低,其拮抗剂KT-5823 1×10-6 mol/L可提高休克血管钙敏感性(P均＜0.05).休克2 h SMA的PKC活性明显降低,PKG活性明显升高(P＜0.05和P＜0.01),分别与休克血管钙敏感性变化呈正相关和负相关(P均＜0.01).结论 PKC和PKG参与了失血性休克血管平滑肌细胞钙敏感性的调控,PKC可上调血管平滑肌细胞的钙敏感性,PKG可下调其钙敏感性.
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钙失敏在大鼠失血性休克血管低反应性中的作用
目的观察血管平滑肌钙失敏在大鼠失血性休克(HS)血管低反应性中的作用.方法取失血性休克大鼠肠系膜上动脉(SMA),利用离体血管环张力测定技术,以血管环对梯度浓度去甲肾上腺素(NE)的收缩力反映血管反应性,用去极化状态下(120 mmol/L K+)血管环对梯度浓度Ca2+的收缩力反映血管的钙敏感性,观察失血性休克低反应血管是否存在钙敏感性降低以及钙敏感性调节剂血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、胰岛素以及Rho-激酶特异性抑制剂Fasudil是否可以通过调节钙敏感性来调节血管反应性.结果失血性休克后SMA对NE的反应性和钙敏感性均显著下降,表现为NE的量-效曲线明显右移,NE的大收缩力(Emax)和-lg[EC50](pD2)降低(P<0.05或P<0.01);Ca2+的量-效曲线明显右移,Ca2+的Emax和pD2降低(P<0.05或P<0.01).具有钙敏感性增强作用的AngⅡ(10-9 mol/L)可使NE和Ca2+的量-效曲线左移,使NE和Ca2+的Emax增高(P<0.05或P<0.01),而具有钙敏感性抑制作用的胰岛素(100 nmol/L)可使NE和Ca2+的量效曲线右移,NE和Ca2+的Emax降低(P<0.05或P<0.01),Fasudil预处理可消除AngⅡ对NE诱导的血管收缩反应的增强效果,降低钙敏感性.结论失血性休克血管平滑肌细胞存在钙敏感性降低,血管平滑肌细胞钙敏感性降低在失血性休克血管低反应性的发生中起重要作用.
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蛋白激酶Cε对失血性休克大鼠血管反应性和钙敏感性的调节作用
目的 观察蛋白激酶Cε(PKCε)对失血性休克血管反应性和钙敏感性的调节作用.方法 取失血性休克大鼠肠系膜上动脉,利用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)测定休克即时、0.5、1、2和4 h PKCε mRNA的表达;取大鼠肠系膜上动脉一级分支,利用离体血管张力测定技术,测定不同休克时间点的血管环反应性和钙敏感性,并观察PKCε的激动剂和抑制剂对休克2 h血管反应性和钙敏感性的影响.结果 ①大鼠血管反应性和钙敏感性在休克早期增高,晚期进行性降低;正常组织PKCε mRNA表达量低,失血性休克后表达逐渐增加,于1 h达到峰值(P＜0.01),4 h时仍维持在较高水平(P＜0.01).②PKCε的激动剂可增高休克2 h的血管反应性和钙敏感性,PKCε的抑制剂可降低休克2 h的血管反应性和钙敏感性(P均＜0.01).结论 PKCε对失血性休克血管反应性和钙敏感性有重要的调节作用,可能是一种重要的内源性保护分子.
关键词： 失血性休克 血管低反应性 钙敏感性 蛋白激酶Cε 反 反 -
MCI-154对失血性休克大鼠血管平滑肌钙敏感性的影响及其机制
目的探讨新型钙增敏剂MCI-154对失血性休克大鼠血管平滑肌钙敏感性的影响及其可能的机制.方法取失血性休克大鼠肠系膜上动脉(SMA),利用离体血管环张力测定技术,用去极化状态下(120 mmol/L K+)血管环对梯度浓度Ca2+的反应来反映钙敏感性.实验分两部分:第一部分观察MCI-154对失血性休克大鼠血管平滑肌钙敏感性的影响,第二部分观察MCI-154影响失血性休克血管平滑肌钙敏感性与Rho-激酶、蛋白激酶C(PKC)、蛋白激酶G(PKG)的关系.结果失血性休克后SMA血管环对Ca2+的量-效曲线明显右移,大收缩力(Emax)较正常组显著降低(P<0.01),MCI-154可使休克SMA血管环对Ca2+的量-效曲线进一步右移,且呈一定的剂量依赖关系,提示休克后SMA存在钙失敏,MCI-154进一步降低休克后SMA血管环的钙敏感性.MCI-154可使具有Rho-激酶激动作用的血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和PKC激动剂佛波醇-12-豆蔻酸13-乙酸酯(PMA)作用下Ca2+的量-效曲线明显右移,Emax显著降低(P<0.01);PKG的拮抗剂KT-5823可使MCI154对Ca2+的量-效曲线明显左移,Emax显著升高(P<0.01),提示MCI-154降低休克后血管平滑肌钙敏感性可能与Rho-激酶、PKC、PKG有关.结论失血性休克可使血管平滑肌钙敏感性降低,MCI-154可进一步降低这种钙敏感性,其机制可能通过Rho-激酶、PKC、PKG来调节失血性休克血管平滑肌的钙敏感性.
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番泻甙对小肠平滑肌细胞收缩功能的影响
目的:探讨大黄的主要有效成分番泻甙对小肠平滑肌细胞收缩的影响.方法:酶解法获取大鼠小肠环行平滑肌细胞,图像分析仪检测不同浓度的番泻甙对小肠环行平滑肌细胞的收缩作用,激光扫描共聚焦显微镜测定番泻甙对细胞内游离钙离子浓度[Ca2+]i的影响,然后测定番泻甙对Ach刺激的小肠环行平滑肌细胞收缩反应和细胞内[Ca2+]i变化的影响作用,通过免疫荧光实验检测番泻甙对RhoA的活化和空间转位的影响.结果:不同浓度的番泻甙对小肠环行平滑肌细胞没有直接收缩作用,对环行平滑肌细胞的[Ca2+]i也没有升高作用,但经番泻甙作用后,Ach引起的小肠环行平滑肌细胞的收缩剂量-反应曲线明显左移(P＜0.05).番泻甙可以促使RhoA的活化,从胞浆转位至胞膜,提高平滑肌细胞收缩的钙敏感性.结论:番泻甙没有直接收缩小肠平滑肌的作用,但可通过活化RhoA,提高小肠环行平滑肌的钙敏感性,与其他激动剂协同增强小肠的运动功能.
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活性氧与 RhoA/ROCK 信号通路对血管平滑肌细胞钙浓度及钙敏感性的影响
活性氧(ROS)是体内一类重要的第二信使，能在缺血缺氧的诱导下大量产生。缺氧信号能通过 ROS 调节血管平滑肌细胞内的钙浓度，从而引起其收缩反应；缺氧还有可能通过 ROS 激活 RhoA/ROCK 信号通路，对钙敏感性进行调节。对 ROS 以及 RhoA/ROCK 信号通路进行深入的研究，可以阐明缺氧性肺血管收缩以及肺动脉高压的发病机制，为缺氧性肺动脉高压的治疗提供新的思路。
关键词： 活性氧 RhoA/ROCK 信号通路 钙敏感性 细胞浆内游离钙离子浓度 -
失血性休克大鼠PKCα mRNA表达变化规律及对血管低反应性的调节作用
目的 观察PKCot在大鼠失血性休克血管平滑肌中mRNA表达变化规律,及其对失血性休克血管反应性和钙敏感性的调控作用.方法 采用PCR技术测定大鼠肠系膜上动脉不同休克时间点(休克即时、30 min、1 h、2 h、4 h)的PKCct mRNA表达;用离体血管环张力测定技术观察不同休克时间点的肠系膜上动脉一级分支的血管环反应性和钙敏感性变化,以及PKCa激动剂和抑制剂对休克2 h血管反应性、钙敏感性的影响.结果 ①失血性休克后大鼠血管反应性和钙敏感性早期增高、晚期降低,PKCot mRNA表达逐渐增高,于1 h达到峰值(P<0.01),4 h时仍处于较高水平(P<0.01).②PKCa激动剂和抑制剂可分别增高和降低休克2 h大鼠的血管反应性和钙敏感性.结论 PKCct在失血性休克血管反应性和钙敏感性调控中起重要作用,可能是休克血管功能的重要保护性分子.
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阻断肠淋巴液回流提高休克大鼠血管钙敏感性的作用与蛋白激酶C有关
本研究旨在观察蛋白激酶C (protein kinase C,PKC)是否参与了肠淋巴管结扎或肠淋巴液引流对失血性休克大鼠血管钙敏感性的调节作用.Wistar雄性大鼠分为假手术组(Sham)、失血性休克组(Shock)、休克+肠淋巴管结扎组(Shock+Ligation,休克手术前行肠淋巴管结扎)、休克+肠淋巴液引流组(Shock+Drainage,休克手术前行肠淋巴液引流),在休克3h时间点,分离出肠系膜上动脉(superior mesenteric artery,SMA)组织,检测PKC蛋白水平与磷酸化PKC (p-PKC)活性；制备SMA血管环,检测各组SMA血管环对梯度[Ca2+]的敏感性,其指标包括收缩性、大收缩力(Emax)和50％大反应时的[Ca2+]负对数(pD2),另取Shock+Ligation与Shock+Drainage组SMA血管环分别与PKC调节剂PMA和Staurosporine孵育后,观察钙敏感性变化.结果显示,Shock组SMA的PKC水平、p-PKC活性、对梯度[Ca2+]的收缩性均显著低于Sham组,而Shock+Ligation组与Shock+Drainage组的以上指标均显著高于Shock组.PKC激动剂PMA提高了Shock+Ligation和Shock+Drainage组大鼠SMA血管环对梯度[Ca2+]的收缩性与Emax值；而PKC抑制剂Staurosporine则显著降低了Shock+Ligation和Shock+Drainage组大鼠SMA血管环对梯度[Ca2+]的收缩性和Emax值.以上结果提示,PKC参与了阻断肠淋巴液回流对休克大鼠血管钙敏感性的增强作用.
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心血管缺血再灌注损伤钙调控的研究进展
缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury,IRI)是治疗缺血性心、脑血管疾病亟待解决的关键问题.钙调控是目前IRI研究中的重要课题.本文就心血管IRI的钙信号调节,包括IRI与钙超载的关系以及IRI与钙敏感性的关系作一综述.其中重点阐述了IRI钙信号调节的关键环节,包括生物膜受损通透性增加使外Ca2+内流增加、Na+-Ca2+交换蛋白逆向转运增强使大量Ca2+摄入细胞、肌浆网Ca2+-ATP酶活性下降导致Ca2+摄取功能障碍、收缩调控蛋白Rho激酶活性增加等.对IRI钙信号调节的关键环节的研究可为临床心血管IRI的防治提供重要策略和潜在靶点.
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肾血管性高血压对大鼠心肌细胞舒缩功能、钙瞬变及其钙敏感性的影响
目的 探讨高血压对大鼠心肌细胞舒缩功能、钙瞬变及钙敏感性的影响.方法 制备一肾一狭窄(1klc)大鼠高血压模型,以酶解法急性分离左室心肌细胞,采用可视化动缘探测系统同步观察肾血管性高血压大鼠心肌细胞的收缩力、钙瞬变以及不同浓度CaCl2对肾血管性高血压大鼠心肌细胞收缩力和钙瞬变的影响.结果 与假手术大鼠心肌细胞相比,肾血管性高血压大鼠心肌细胞收缩幅度明显增加,收缩和舒张速度明显加快,而其收缩期和舒张期细胞内钙、钙瞬变幅度及胞内钙动力学参数无明显变化.在不同浓度外钙作用时,高血压大鼠心肌细胞的收缩幅度-荧光强度比值曲线左移.结论 在高血压的代偿期肾血管性高血压大鼠心肌细胞收缩力增加,其机制可能与高血压增加心肌细胞对钙的敏感性有关.
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糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道特性及开放动力学的变化
目的 研究糖尿病时冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(BK通道)的电压依赖性、钙敏感性及其开放动力学变化,探讨糖尿病时冠状动脉损伤的细胞电生理机制.方法 采用链脲霉素腹腔内注射建立糖尿病大鼠模型(糖尿病组,n=30),对照组相应注射生理盐水(n=30);采用酶消化法急性分离大鼠冠状动脉平滑肌细胞;采用膜内向外型单通道膜片钳实验技术记录BK单通道电流;采用Clampfit 10.4软件分析单通道数据.结果 在电极外液钙离子浓度为1 mmol/L,刺激电位分别为0,20,40,60,80,100,120和140 mV时,随着刺激电位增加,正常组BK通道的NPo逐渐增加,其半数有效激活电压(V1/2)为(88.45±1.72) mV;糖尿病组BK通道NPo亦逐渐增加,V1/2为(104.29±1.09) mV,其电压-NPo曲线较正常组向左下移动o在刺激电位60 mV,电极外液钙离子浓度分别为0,0.01,0.1,0.5,1,5,10和50 mmol/L时,随着电极外液钙离子浓度增加,正常组BK通道NPo逐渐增加,其半数有效激活浓度(EG0)为(2.26±0.27) mmol/L;糖尿病组BK通道NPo亦逐渐增加,EC50为(3.15±0.20)mmol/L,其浓度-NPo曲线较正常组向左下移动.在电极外液钙离子浓度为1 mmol/L,刺激电位60 mV时,与正常组比较,糖尿病组BK通道NPo明显减少,电流幅度与平均开放时间无明显变化,而平均关闭时间显著延长[(451.35±113.71)ms vs (107.58±15.99)ms,P＜0.05].结论 糖尿病时冠状动脉平滑肌细胞BK通道电压依赖性与钙敏感性均受损,开放概率减少,通道平均关闭时间延长,这可能是糖尿病冠状动脉功能损伤的重要原因之一.
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内皮源性表氧化二十烷烯酸在门脉高压症内脏动脉扩张的作用及机制
目的 观察肠系膜血管血浆表氧化二十烷烯酸(EETs)水平在门静脉高压症(PHT)鼠的变化,探讨其表达与肠系膜小动脉血管张力及肌球蛋白轻链磷酸酶(MLCP)活性、肌球蛋白轻链(MLC20)的磷酸化水平之间关系.方法 采用CCl4导致肝硬化门静脉高压症鼠为模型,正常对照组(20只)、PHT模型组(40只).于25、45、65 d取标本,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测肠系膜动脉血浆EETs水平;离体肠系膜小动脉对NE、Ca2+梯度浓度的血管反应性、钙敏感性及MLCP活性、MLC20的磷酸化水平改变,以及抑制剂indo、L-NAME、ODQ、IbTx、Glibenclamide、miconazole在其中的影响.结果 PHT模型组鼠肠系膜动脉血浆内EETs的产生明显增高,于45 d明显增高,65 d达到高峰;同步离体肠系膜小动脉对NE、Ca2+梯度浓度的血管反应性、钙敏感性明显降低,且MLCP活性增强、MLC20的磷酸化水平下降;给予EETs抑制剂miconazole肠系膜小动脉MLCP活性降低、MLC20磷酸化水平提高,差异有统计学意义(P＜0.05);相关分析PHT肠系膜动脉血浆内EETs水平与NE-pD2、Ca2-pD2及MLCP活性、MLC20磷酸化水平变化呈正相关(r=0.751,P＜0.01;r=0.772,P＜0.01;r =0.641,P＜0.01;r=0.561,P＜0.01).结论 内皮源性EETs通过肠系膜小动脉平滑肌血管反应性、钙敏感性下降,引起内脏动脉扩张,参与内脏动脉高动力循环.
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腺苷受体与血管反应性调节
腺苷是严重创伤及组织缺血缺氧时释放的重要内源性调质,主要通过腺苷受体发挥作用.血管平滑肌上主要有4种腺苷受体亚型(A1AR,A2aAR,A2bAR及A3AR),其中A1AR和/或A3AR活,巨及其偶联信号活性的抑制,或A2aAR和/或A2bAR活性及其偶联信号活性的上调,或两者同时发生,通过Rho激酶和/或PKC依赖信号通路,参与对血管MLC磷酸化及钙敏感性调节,并在休克血管低反应性中起重要作用.
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脑血管痉挛发病机制:激酶与钙敏感性
多种激酶参与钙敏感性调节机制,其中较为重要的有BhoA激酶、酪氨酸激酶和蛋白激酶C.BhoA激酶主要通过抑制肌球蛋白轻链磷酸酶的活性上调肌球蛋白轻链磷酸化水平;酪氨酸激酶可以激活鸟苷酸转换因子,后者促进肌球蛋白轻链19位丝氨酸磷酸化;蛋白激酶C可以促进CPI-17磷酸化,磷酸化的CPI-17可以抑制肌球蛋白磷酸酶.以上情况均可以增加血管平滑肌细胞钙敏感性.在脑血管痉挛的慢性痉挛期,脑血管平滑肌钙敏感性增加与脑血管痉挛的发生发展密切相关.本文对钙敏感性机制和以上三种激酶在脑血管痉挛发病机制中的作用做一综述,以期为防治此类疾病提供新的思路.
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大鼠肠系膜细动脉血管平滑肌大电导钙激活钾通道的特性
目的探讨肠系膜细动脉血管平滑肌细胞膜上大电导钙激活钾通道(large-conductance calcium-activated potassiumchannel,BKCa)的电生理特性及其与张力调节的可能机制.方法木瓜酶、胶原酶两步消化法急性分离大鼠肠系膜细动脉血管平滑肌细胞,膜片钳的内面向外式记录法记录BKCa.结果(1)在浴槽液和电极液均为高钾的条件下,BKCa通道的单通道电导为(221±6)pS,反转电位为-0.12mV;(2)BKCa通道的电流幅度无细胞内钙依赖性,而开放概率(NPo)则同时具有电压依赖性和细胞内钙依赖性.在细胞内钙浓度为0.1 μmol/L时,使NPo增加e倍的电压增加为(13±1)mV,达到大开放概率一半的电压(V1/2)为(22±2)mV;(3)在细胞内钙浓度为1μmol/L时,可记录到通道长时间的关闭和失活现象,这种现象称为钙依赖性失活.结论肠系膜细动脉血管平滑肌细胞膜上的BKCa具有大电导、高钾选择性、强电压依赖性和高度的细胞内钙敏感性.BKCa高度的钙敏感性可能与血管平滑肌病理情况下的代偿调节有关.
