5种淫羊藿对软骨组织生长和软骨细胞增殖影响的对比研究

目的:对比研究心叶淫羊藿、箭叶淫羊藿、朝鲜淫羊藿、巫山淫羊藿和川西淫羊藿对软骨生长和软骨细胞增殖活性的影响.方法:以鸡胚股骨组织为研究对象,采用配对试验设计,把同一鸡胚的两个股骨组织分别分入对照组或实验组,每组共10个股骨组织.对照组股骨组织在不含中药的培养液中培养,实验组股骨组织在含3%淫羊藿提取物的培养液中培养.以软骨长度、软骨重量、软骨细胞增殖(MTT法)为指标观察5个品种淫羊藿的软骨生物活性.结果:心叶淫羊藿和箭叶淫羊藿实验组的股骨长度、股骨湿重、股骨干重及细胞增殖量指标均高于对照组(P＜0.01),而朝鲜淫羊藿、巫山淫羊藿和川西淫羊藿实验组的股骨长度、股骨湿重、股骨干重及细胞增殖指标与对照组结果相近,差异无显著性.结论:心叶淫羊藿和箭叶淫羊藿具有明确的促进体外软骨生长和软骨细胞增殖的作用,而朝鲜淫羊藿、巫山淫羊藿和川西淫羊藿品种没有表现出这种生物活性.

碱性成纤维细胞生长因子对兔甲状软骨细胞增殖的影响

1995年Cao等 [1]将牛关节软骨细胞植入预先塑形的生物可降解材料,再移植到裸鼠背部皮下,成功地制造出了组织工程人耳廓软骨.本实验研究碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)对兔甲状软骨细胞体外扩增的影响,旨在探索软骨细胞体外扩增的方法.

以多糖为主要部位的6种腰痛宁衍生方对巨噬细胞中炎症因子表达及软骨细胞增殖的影响

目的 以腰痛宁胶囊组方药材有效部位为基础,考察6种以多糖活性部位为主的腰痛宁衍生方的细胞药理活性,为风湿骨病处方候选药物筛选提供依据.方法分别以甘草多糖、苍术多糖、川牛膝多糖、麻黄多糖、淫羊藿多糖、桑寄生多糖为主要部位(组方中比例50％)组成6种腰痛宁衍生方,酶联免疫方法测定脂多糖(LPS)诱导的Ana-1细胞中前列腺素E2 (PGE2)及Ana-1细胞中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-a)水平,CCK8法检测软骨细胞增殖活性.采用半数抑制浓度(IC50)及半数有效浓度(EC50)评价各样品的活性,通过比较各组方实验EC50/IC50与其理论叠加值的差异,分析样品中活性部位间的相互作用.结果6个腰痛宁衍生方中,以桑寄生多糖或淫羊藿多糖为主的2个组方抑制LPS诱导的Ana-1细胞分泌PGE2、促进Ana-1细胞分泌IL-6、IL-1β及TNF-α及促进软骨细胞增殖的活性显著弱于腰痛宁全方,其余由腰痛宁处方药材多糖为主的4个组方的相关活性优于腰痛宁全方或与腰痛宁全方相当,无统计学差异.其中川牛膝多糖占50％的组方在抑制LPS诱导的Ana-1细胞分泌PGE2、促进Ana-1细胞分泌IL-6、IL-1β及促进IL-1β诱导的软骨细胞增殖方面均具有良好效果.结论 以川牛膝多糖为主的腰痛宁衍生方具有良好的细胞抗炎、免疫调节和促进软骨细胞增殖活性,可作为风湿骨病处方中多糖的优选部位.

成纤维细胞生长因子2、18与软骨细胞增殖的研究进展

软骨组织工程主要通过对软骨种子细胞、软骨支架、细胞因子的研究,来解决修复关节软骨损伤、退变这一难题[1].多肽生长因子如转化生长因子(TGF)-β、骨形态发生蛋白(BMP)、甲状旁腺相关蛋白(PTHrP)、成纤维细胞生长因子(FGF)等对关节软骨的内环境稳态及修复起十分重要作用.经典的FGF信号通路包含18个信号蛋白与4个酪氨酸激酶分子蛋白受体(FGFRs)[2].在胚胎发育时期FGFs在大多数组织中差异表达,在器官形成与功能发育的早期阶段具有重要调节作用.在成年个体不同组织中,FGFs主要承担调节生长与组织修复再生的作用.目前FGF-2、FGF-18等在调节软骨细胞分化、维持关节软骨内环境稳态及促进骨关节炎(OA)发生发展中起重要作用.本文总结以上细胞因子在关节软骨中的作用.

痛痹方血清对体外培养乳兔关节软骨细胞增殖和MMP-3与TIMP-1的影响

目的观察痛痹方含药血清对体外培养的乳兔关节软骨细胞和MMP-3与TIMP-1的影响.方法采用体外培养的乳兔软骨细胞为干预对象,并加入10μg/L IL-1建立变性软骨细胞损伤模型,制备痛痹方含药血清作为干预措施,培养48 h后,采用MTT比色法检测软骨细胞增殖,ELISA法测定分离的上清培养液中MMP-3和TIMP-1含量.结果不同浓度的痛痹方含药血清均能拮抗IL-1抑制软骨细胞增殖,降低MMP-3/TIMP-1,与空白血清对照均有显著性差异(P＜0.01).结论痛痹方血清能拮抗IL-1抑制软骨细胞增殖,下调软骨细胞MMP-3/TIMP-1.

骨关节炎软骨细胞增殖相关信号通路研究进展

骨关节炎的发病率逐年升高,近年来通过信号通路探讨骨关节炎发病机制的研究逐渐深入.在目前的研究中与软骨细胞增殖相关信号通路较为成熟,其中主要包括Notch信号通路和Wnt信号通路,研究发现这些信号通路对骨关节炎的影响主要表现在对于细胞的成软骨及成骨分化、软骨细胞的增殖及肥大化、MMPs的合成、破骨细胞的增殖及分化等过程的调控,本文综述了这些信号通路与骨关节炎发病的相关机制,从而为骨关节炎的研究及治疗提供新的思路.

自体镶嵌式骨软骨移植修复关节软骨损伤

关节软骨的修复能力极其有限,一旦发生损伤,很难自行修复,终会发生不可逆的病理改变,演变为创伤性关节炎或骨性关节炎,严重影响患者的生活质量.目前,治疗关节软骨损伤的方法主要有软骨下骨板钻孔术、微骨折术、关节削磨成形术、骨膜软骨膜移植术、自体软骨细胞移植术,并且有学者运用电流、电磁波、激光、超声、微波等刺激软骨细胞增殖,虽然取得了一定的疗效,但这些方法均不能产生形态、功能、力学性质和正常软骨一样的修复组织[1].20世纪90年代,Hangody等报道了自体骨软骨移植治疗关节软骨损伤以来,该技术随后在欧洲得到广泛的开展[2].之后,Hangody等报道了152例软骨损伤的病例,面积1.0～8.5cm2,进行了关节软骨移植,随访57例,修复率达90.7%,组织学证明60%～80%由透明软骨修复,20%～40%由纤维软骨修复.说明骨软骨移植与其他治疗方法相比有其优越性[3,4].现就几方面综述如下:

细胞内钙离子在碱性成纤维细胞生长因子调节软骨细胞增殖分化过程中的作用

组织工程的发展,为软骨缺损的修复提供了新的方法[1].然而,软骨细胞在体外培养容易发生去分化而失去原有的表型[2].

灵仙通络方对C518大鼠膝关节退变软骨细胞增殖、Ⅱ型胶原及基质金属蛋白酶-13表达的影响

目的：探讨灵仙通络方对C518大鼠膝关节退变软骨细胞增殖、Ⅱ型胶原（COL-Ⅱ）及基质金属蛋白酶-13（MMP-13）的影响。方法选取C518大鼠膝关节软骨细胞株，随机分为中药组（灵仙通络方）、西药组（氨糖美辛）和对照组（氯化钠溶液），进行培养、诱导退变等处理，于给药后第1、2、3 d，分别检测中药组、西药组和对照组不同浓度下对软骨细胞增殖、COL-Ⅱ及MMP-13表达的影响。结果同一时间点的中药组、西药组不同浓度之间噻唑蓝（MTT）值差异有统计学意义（P＜0.01）。对照组不同浓度氯化钠溶液的MTT值差异不具有统计学意义（P＞0.05）。在COL-Ⅱ免疫组化染色中，中药组与西药组和对照组相比差异有统计学意义（P＜0.01），且中药组优于西药组（染色指数χ2=16.26，df=2，P＜0.01）。在 MMP-13免疫组化染色中，对照组较中药组、西药组差异有统计学意义（P＜0.01），且中药组优于西药组（染色指数χ2=54.31，df=2，P＜0.01）。结论 C518大鼠膝关节退变软骨细胞经灵仙通络方干预后能够促进其增殖，调节COL-Ⅱ、MMP-13的表达，延缓膝关节骨性关节炎疾病的发展进程。

腰痛宁及其衍生方中几种皂苷有效部位的抗炎、免疫调节与骨细胞修复活性的比较

目的：研究腰痛宁及其衍生方中几种皂苷有效部位的细胞抗炎、免疫调节与骨细胞修复活性，为风湿骨病处方候选药物筛选提供依据。方法在马钱子、麻黄生物碱与甘草等5种药材黄酮混合物的基础上，分别加入50%的甘草皂苷、三七皂苷、人参皂苷、川牛膝皂苷组成新的中药有效部位组方。采用半数有效浓度（EC50）或半数抑制浓度（IC50）评价各样品对巨噬细胞Ana-1分泌白介素（IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的促进作用；对脂多糖（LPS）诱导的Ana-1释放前列腺素（PG）E2的抑制作用；对IL-1β诱导的软骨细胞增殖的影响。同时采用小二乘优化方法，计算各样品的EC50或IC50叠加值，根据EC50或IC50叠加值与实验值之间的差异分析各有效部位间的相互作用关系。结果25%生物碱+25%黄酮+50%甘草皂苷组方的细胞抗炎、免疫和促进骨细胞修复活性优于其他组方，且该方中的各有效部位之间产生了较强的协同增效作用。结论以甘草皂苷为主的I号样品有良好的细胞抗炎、免疫调节及骨细胞修复活性，提示甘草皂苷可作为生物碱+黄酮+皂苷的风湿骨病处方中皂苷的优选有效部位。

中药挥发油/水提物的细胞抗炎、免疫及骨细胞修复活性的比较

目的：以腰痛宁衍生方为基础比较桂枝、土鳖虫等6类中药挥发油/水提物有效部位对细胞抗炎、免疫及骨细胞修复的影响，为风湿骨病处方候选药物筛选有效部位提供依据。方法在马钱子、麻黄生物碱+甘草等5种药材和黄酮+甘草等4种药材皂苷混合物的基础上，分别加入50%的苍术、乳香+没药、独活、桂枝挥发油、50%的土鳖虫、全蝎+僵蚕水提液组成新的中药有效部位组方。测定各样品抑制小鼠巨噬细胞（Ana-1）中前列腺素E2（PGE2）增殖的半数抑制浓度（IC50）及促进白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子（TNF-α）因子增殖和促进IL-1β诱导的软骨细胞增殖的半数有效浓度（EC50）。同时采用小二乘优化方法，计算各样品的EC50或IC50叠加值，根据EC50或IC50叠加值与实验值之间的差异分析各有效部位间的相互作用关系。结果在6类中药挥发油/水提物有效部位中，桂枝挥发油抑制Ana-1分泌PGE2及促进Ana-1分泌IL-1β、IL-6的活性强；土鳖虫、僵蚕+全蝎水提液促进Ana-1分泌TNF-α的作用佳，并在细胞抗炎、促进软骨细胞增殖活性和其他细胞免疫模型中表现出较好的活性。各挥发油/水提物有效部位促进IL-1β诱导的软骨细胞增殖的活性相当。结论桂枝挥发油具有良好的抗炎、免疫及促软骨细胞增殖等综合药理活性，可作为风湿骨病处方的优选有效部位并用其替代腰痛宁处方中的乳香+没药挥发油以降低乳香+没药引起的不良反应。腰痛宁组方药材中虫类药材的水提物也可作为风湿骨病处方的候选有效部位。

软骨细胞增殖调控机制的研究进展

软骨细胞位于软骨陷窝内,在关节运动、负重中的缓冲过程中起到支持和保护作用,对损伤修复、应激、外界刺激起到修复和增殖作用.关节软骨中软骨细胞占总体积的1％,关节软骨损伤后主要由软骨细胞增殖、分化来修复,而软骨细胞的增殖能力极有限,其质与量直接影响修复作用.软骨细胞的增殖受各种生长因子、细胞因子及各种外界环境如机械压力、细胞密度变化等作用,形成一个网络调节系统.

二期骨折愈合中骨痂软骨细胞增殖变化的研究

转化生长因子-β可以诱导骺板软骨细胞表达细胞增殖核抗原

目的:了解转化生长因子-β(TGF-β)诱导骺板软骨细胞增殖的作用.方法:采用鸡胚股骨无血清培养、PCNA(细胞核增殖抗原)免疫染色方法研究对骺板软骨细胞增殖的作用.结果:PCNA阳性软骨细胞数目与分布部位与TGF-β作用剂量、时间密切相关,PCNA阳性细胞分布区域和数目远多于对照组,根据染色情况可以将PCNA阳性细胞分为S期和非S期细胞二种.结论:TGF-β能诱导非增殖软骨细胞表达PCNA,用PCNA作为细胞增殖的指标是不适宜的.

转化生长因子-β对骺软骨细胞增殖和PCNA表达的影响

采用14天鸡胚股骨无血清培养、5-溴尿嘧啶核苷(BrdU)掺入标记和细胞核增殖抗原(PCNA)免疫染色方法,研究转化生长因子-β(TGF-β)对骺软骨细胞增殖的作用.结果显示:BrdU阳性软骨细胞数目与分布部位与TGF-β作用剂量和时间密切相关,TGF-β可以促进骺板成熟区和肥大区软骨细胞增殖,与BrdU标记相比,PCNA阳性细胞分布区域和数目远多于前者,根据染色情况可以将PCNA阳性细胞分为S期和非S期细胞两种.结论:TGF-β参与和调节骺软骨各部位软骨细胞增殖活动,并能诱导非增殖软骨细胞表达PCNA,用PCNA作为细胞增殖的指标是不适宜的.