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筋骨草中总环烯醚萜苷的含量测定
目的:建立筋骨草药材中总环烯醚萜苷的含量测定方法.方法:采用分光光度法,以乙酰哈巴苷(8-acetylharpagide)为对照品,经酸水解、二硝基苯肼乙醇试液-氢氧化钠甲醇水溶液显色后,在586 nm处测定其含量.结果:乙酰哈巴苷及筋骨草药材显色稳定,乙酰哈巴苷在0.016 2～0.324 8 mg范围内线性关系良好(r=0.999 8),筋骨草药材样品平均回收率为101.2%,RSD=2.0%.结论:建立了比色法测定筋骨草药材中总环烯醚萜苷类含量的方法,该方法简便、准确、重复性好,可作为该药材的质量控制方法.
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RP-HPLC法同时测定筋骨草药材中哈巴苷和乙酰哈巴苷含量
目的:建立高效液相色谱法同时测定筋骨草药材中哈巴苷和乙酰哈巴苷含量的方法.方法:采用高效液相色谱法,Kromasil C18色谱柱(4.6 mm x 250 mm,5μm);流动相A-乙腈,B-水,梯度洗脱;流速1.0 mL·min-1,检测波长202 nm.结果:哈巴苷和乙酰哈巴苷在0.44～4.40μg(r=O.999 4),0.1～10μg(r=0.999 8)范围内线性关系良好,加样回收率哈巴苷为100.93%,乙酰哈巴苷为99.81%,RSD值分别为1.93%,1.62%.结论:该方法简便、准确、重复性好,可作为该药材的质量控制方法.
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HPLC-ELSD同时测定筋骨草药材中乙酰哈巴苷和哈巴苷含量
目的：建立高效液相色谱-蒸发光散射检测器法(HPLC-ELSD)同时测定筋骨草药材中乙酰哈巴苷和哈巴苷含量的方法,并对不同产地和批次的筋骨草药材进行测定。方法采用Dikma C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm)；流动相A为水,B为乙腈,梯度洗脱(0～6 min,5%B；6～11 min,5%～15%B；11～17 min,15%B)；洗脱流速1 mL/min；柱温30℃。蒸发光散射检测器漂移管温度103℃,以压缩空气为雾化气,气体流速1.6 L/min。结果乙酰哈巴苷在0.017～17.32μg、哈巴苷在0.003～1.62μg范围内呈良好线性关系,精密度和准确性良好。福建6个批号样品的乙酰哈巴苷和哈巴苷含量较高。结论乙酰哈巴苷和哈巴苷可作为监测筋骨草药材质量的指标性成分。
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HPLC测定筋骨草中乙酰哈巴苷的含量
目的:建立筋骨草中乙酰哈巴苷的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法.色谱柱:PhenomenexLuna C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相乙腈-水(15:85);流速1.0 mL·min-1,检测波长197nm.结果:乙酰哈巴苷含量测定的线性范围为0.6～3.6 μg(r=0.999 3),平均加样回收率为99.1%,RSD为2.5%.结论:不同产地的筋骨草中乙酰哈巴苷的含量为0.40%～6.39%;本法简便,灵敏准确,可用于筋骨草的质量控制.
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筋骨草提取物抑制乳腺癌转移与MMPs和TIMPs表达的关系研究
目的:探讨筋骨草提取物(HBG)对乳腺癌及转移的抑制作用,及其对与乳腺癌侵袭和转移密切相关的基质金属蛋白酶及其抑制物的影响.方法:采用小鼠乳腺癌细胞株4T1原位接种制作乳腺癌自发转移模型,给予50～200 mg· kg-1HBG后评价各组肿瘤生长和肺转移情况；并用免疫印迹法测定肿瘤原位灶和转移灶MMP-2/9,TIMP-1/2的表达水平.结果:50 ～200 mg·kg-1HBG呈剂量依赖性抑制乳腺癌生长和肺转移；下调MMP-2和MMP-9的表达；上调TIMP-1和TIMP-2表达.结论:筋骨草提取物通过调节乳腺癌细胞MMPs和TIMPs的表达而发挥抗乳腺癌及其转移的作用.
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筋骨草抗感染作用研究
目的：研究筋骨草对常见病原菌的抑制作用，及对小白鼠腹腔巨噬细胞的吞噬作用的影响，研究筋骨草的抗感染效果。方法配制热炎宁溶液及筋骨草治疗药物溶液，将其分为对照组及低中高浓度的治疗组，每组15孔，进行平皿琼脂扩散实验；同时取小白鼠分为对照组和低中高浓度的治疗组，每组30只，分别在第8天和第15天进行小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验，研究筋骨草的抗感染作用。结果筋骨草低、中、高剂量下，均能抑制金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌的生长，低剂量的作用弱于热炎宁（P＜0．05），中剂量的作用与热炎宁相当，高剂量的作用强于热炎宁（P＜0．05）；低剂量组小白鼠的吞噬率和吞噬指数低于对照组（P＜0．05），中剂量组的小白鼠的吞噬率和吞噬指数与对照组相当，高剂量组的小白鼠的吞噬率和吞噬指数高于对照组（P＜0．05）。结论筋骨草具有抗感染作用，能够明显抑制金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌的生长，并能够增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬作用。
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筋骨草的化学成分研究
目的研究筋骨草Ajuga decumbens的化学成分.方法采用硅胶柱色谱对筋骨草的甲醇提取浸膏进行分离纯化,得到5个单体,并通过光谱分析鉴定了其结构.结果这5个单体分别被鉴定为1-辛烯-O-α-L-吡喃阿拉伯糖-(1-6)-O-[β-D-吡喃葡萄糖-(1-2)]-β-D-吡喃葡萄糖(Ⅰ)、正丁基-β-D-吡喃果糖苷(Ⅱ)、6,7-二羟基-香豆素(Ⅲ)、5,7-二羟基-4'-甲氧基黄酮(Ⅳ)和谷甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅴ).结论5个化合物均为首次从该植物中分离得到.
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筋骨草提取物抗运动疲劳的作用
目的:探讨筋骨草的抗运动性疲劳作用.方法:将120只雄性昆明种小鼠随机平均分成安静组、运动组、阳性对照组和筋骨草低、中、高剂量组(n=10).其中低、中、高剂量组小鼠分别按100 mg/kg、200 mg/kg、400 mg/kg体重连续灌胃筋骨草提取物30d,阳性对照组小鼠按200 mg/kg体重灌胃西洋参胶囊颗粒,安静组和运动组小鼠以等体积生理盐水灌胃.动物试验结束后,分析各组小鼠运动力竭时间、血清生理生化指标(包括血乳酸、血尿素氮、血糖、总胆固醇、甘油三酯含量)、肝糖原与肌糖原含量,以及股四头肌、肝脏和心脏组织的抗氧化指标(包括谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和丙二醛).结果:中、高剂量组小鼠的运动力竭时间、红细胞数量、血红蛋白含量、血糖浓度、肝糖原与肌糖原含量,以及器官组织中谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活力均明显高于运动对照组,而血清乳酸含量、血清尿素氮、血清甘油三酯与总胆固醇含量,以及器官组织中丙二醛含量明显低于运动对照组,中剂量的筋骨草提取物的作用效果优于同剂量的西洋参胶囊颗粒.结论:筋骨草通过提高机体的抗氧化功能而达到抗运动性疲劳作用.
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筋骨草总黄酮对慢性血清病肾炎大鼠自由基损伤的影响
目的:探讨筋骨草总黄酮对慢性血清病肾炎大鼠的治疗作用及其作用机制.方法:采用大鼠改良慢性血清病肾炎模型,于造模第5周末检测尿蛋白,将尿蛋白阳性者随机分为模型组、雷公藤多苷组、筋骨草总黄酮组,另设正常对照组.于造模第6周起开始给药,6周后,测定各组大鼠的24 h尿蛋白定量、血生化和血清中SOD、MDA的含量,光镜下观察肾组织病理形态学变化.结果:与模型组相比,筋骨草总黄酮组可显著降低尿蛋白[(38.91±10.62)mg/24 h vs(18.28±8.07)mg/24 h,P＜0.01],且可明显升高TP、SOD,降低BUN、Scr、TG、TC、MDA(P＜0.05或P ＜0.01);形态学观察也显示筋骨草总黄酮组较模型组损害减轻[(0.196±0.035)vs(0.304±0.059),P＜0.01].而筋骨草总黄酮组与雷公藤多苷组相比,可明显提高SOD活性[(0.379±0.042)U/ml vs(0.327±0.063)U/ml,P＜0.05],显著降低TC[(1.63±0.23)mmol/L vs(1.95±0.37)mmol/L,P＜0.05]、MDA含量[(4.773±0.675)U/ml vs(6.526±2.727)U/ml,P＜0.05];且筋骨草总黄酮组ALT明显低于雷公藤多苷组[(57.60±8.09)U/L vs(83.40±11.53)U/L,P＜0.01].结论:筋骨草总黄酮对慢性血清病肾炎大鼠有较好的治疗作用,而提高SOD活性、降低MDA、抑制脂质过氧化反应、减轻自由基损伤等可能是其治疗作用机制之一.
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筋骨草总黄酮大孔树脂吸附热力学研究
目的 研究筋骨草总黄酮在大孔树脂上的吸附特性及热力学性质.方法 采用静态吸附法,考察不同型号大孔吸附树脂对筋骨草总黄酮的吸附及解析特性,确定佳吸附树脂.根据不同等温吸附模型Langmuir及Freundlich方程分别对实验数据进行线性回归,通过相关系数评价模型的适用性,并计算其吸附过程热力学参数.结果 HPD300对筋骨草总黄酮的吸附效果好.其吸附焓变△H ＞0,吸附熵变△S和吸附自由能△G均大于零.结论 HPD300吸附筋骨草总黄酮的过程为吸热过程,升温有利于吸附.
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筋骨草中总环烯醚萜苷的提取动力学研究
目的 研究筋骨草中总环烯醚萜苷提取过程的动力学机制.方法 采用比色法,测定不同提取温度条件下筋骨草水提液中总环烯醚萜苷的含量.以Fick扩散定律为基础,建立其提取过程的动力学方程,并由此推算出提取的速率常数、活化能、半衰期等动力学函数值.结果 所得的动力学模型能较好地描述筋骨草中总环烯醚萜苷提取的动态过程,其表观活化能为45.18 kJ.mol-1.结论 筋骨草中总环烯醚萜苷提取过程的动力学符合一级动力学方程特征.
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筋骨草和茯苓配伍合用抑制乳腺癌细胞侵袭转移作用及初步机制研究
目的 研究筋骨草和茯苓联合用药对高转移性乳腺癌MDA-MB-231(三阴型乳腺癌)和SK-BR-3(HER-2过表达乳腺癌)细胞侵袭转移的作用及分子机制.方法 以筋骨草有效部位——总环烯醚萜类化合物和茯苓有效部位——三萜类化合物为研究对象.采用细胞黏附实验、细胞划痕和Transwell 侵袭实验检测细胞黏附、运动和侵袭能力.Western blot 法检测上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)相关蛋白和MAPK通路蛋白表达.结果 筋骨草和茯苓合用对MDA-MB-231和SK-BR-3细胞的黏附、迁移和侵袭能力有明显的抑制作用,配伍比例为10 ∶1时具有较好的协同效应.两药合用还可逆转乳腺癌细胞EMT,主要表现在上皮性标志物β-catenin、E-cadherin、ZO-1表达增加,间质性标志物Vimentin表达降低.进一步研究发现,两药合用明显降低p-ERK1/2、p-JNK和p-p38的蛋白表达.结论 筋骨草和茯苓合用能有效地抑制高转移性乳腺癌MDA-MB-231 和SK-BR-3细胞的侵袭和转移,作用机制可能与其调控MAPK通路,逆转肿瘤细胞EMT有关.
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筋骨草有效部位黄酮类粗品的保肝试验
目的为观察筋骨草有效部位黄酮粗制品的保肝作用.方法实验采用热水提取法,提取黄酮类粗品对CC14所致中毒性肝损伤小鼠进行治疗试验.结果该黄酮类粗品可明显降低CC14性肝损伤小鼠血清ALT的活性.结论筋骨草有良好的保肝作用,其有效成分主要为黄酮类化合物.
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筋骨草抗炎有效部位及其量效关系研究
目的 研究筋骨草抗炎有效部位及其量效关系.方法 选用水煎法将获得的筋骨草水煎液经大孔树脂吸附后依次用蒸馏水和乙醇分别洗脱,观察水煎液和醇洗液浓缩后的筋骨草提取物时二甲苯致小鼠耳廓肿胀和琼脂皮下注射形成肉芽肿2种致炎模型的影响,初步明确筋骨草抗炎有效部位,并对该有效部分进行量效关系的评定.结果 筋骨草水煎液和筋骨草醇洗液均有抗炎作用,其中醇洗液更佳,有明显量效关系.结论 筋骨草醇洗液为筋骨草抗炎的主要活性部位,剂量在3～12 g·kg-1之间有明显的量效关系.
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筋骨草对小鼠S180肉瘤的抑瘤试验
为观察筋骨草的抑瘤作用,试验采用肿瘤移植的动物模型,进行筋骨草水提液对小鼠S180肉瘤的抑瘤试验.通过重复试验,2次试验的抑瘤率分别为81%和73%,与对照组比,P＜0.01.结果提示:筋骨草水提液对小鼠S180肉瘤有明显的抑制作用.
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响应面分析法优化提取筋骨草抗氧化成分的工艺研究
目的 确定筋骨草抗氧化成分的佳提取工艺条件.方法 以乙醇回流提取法提取筋骨草抗氧化成分.采用分光光度法,以总酚得率、总环烯醚萜得率和DPPH·清除率为考察指标,考察乙醇浓度、料液比、提取时间等因素对筋骨草抗氧化成分提取得率的影响,利用响应面分析法优化提取工艺,确定抗氧化成分的佳提取工艺.结果 筋骨草抗氧化成分的佳提取工艺为:加药材26倍量的68％乙醇,于90℃水浴回流提取1次,每次2.10h.此工艺下总酚得率为10.14mg/g,总环烯醚萜得率为8.33 mg/g,DPPH·清除率为82.96％.结论 该工艺提取得率高、操作简便,可用于筋骨草抗氧化成分的提取.
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超声辅助提取筋骨草多糖及抗氧化性研究
目的 研究超声辅助提取筋骨草多糖的佳工艺及其清除自由基的能力.方法 通过单因素实验和正交试验,研究料液比,超声时间,提取次数,提取温度对筋骨草中多糖提取率的影响,优选出超声辅助提取筋骨草多糖的佳工艺;采用DPPH法、ABTS法和FRAP三种测定法对筋骨草多糖抗氧化活性进行综合评价.结果 超声辅助提取筋骨草多糖的佳工艺:料液比为1∶30 g/ml,80℃超声提取3次,每次30 min,筋骨草多糖提取率为3.55％.筋骨草多糖对DPPH自由基(IC50 =46.96 μg/ml,大清除率为84.44％)、ABTS自由基(IC50=49.56 μg/ml,大清除率为93.21％)的清除能力较好,对Fe3+的还原能力(AEAC=3708 μmol/g)也比较强.结论 筋骨草多糖含量丰富,优选出的工艺提取率高,稳定、可行.筋骨草多糖具有较强的抗氧化活性,是一种较好的天然抗氧化剂.
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4种中药体外抗结核分枝杆菌H37RV的研究
目的 研究中药夏枯草、积雪草、筋骨草和青蒿素的体外抗结核分枝杆菌H37Rv的活性.方法 采用改良罗氏固体培养基试管培养法进行活性检测.结果 夏枯草醇提物抗结核效果明显;积雪草苷片、筋骨草及青蒿素均无效.结论 夏枯草醇提物抗结核菌效果优于水提物;积雪草醇提物有微弱抑制结核杆菌活性,但其有效成分可能不是积雪草苷;青蒿素及二氢青蒿素无抑制结核分枝杆菌的活性.
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筋骨草总黄酮的HPD300大孔树脂动态吸附纯化工艺探讨
目的:确定HPD300大孔吸附树脂吸附纯化筋骨草总黄酮的工艺条件.方法:采用动态吸附分离法,确定筋骨草总黄酮的纯化工艺条件.结果:HPD300大孔树脂对筋骨草总黄酮有良好的吸附分离性能,其动态吸附分离工艺条件为:筋骨草总黄酮上样质量浓度为4 mg·mL-1,大吸附量为13.73 mg·g-1,吸附流速为1 mL·min-1,以10倍柱体积70％乙醇洗脱,树脂可重复使用4次.结论:采用HPD300大孔树脂吸附分离筋骨草总黄酮简便有效,回收率高.
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筋骨草属药材中哈巴苷和乙酰哈巴苷的含量测定
目的:分析筋骨草属易混淆药材中活性成分哈巴苷和乙酰哈巴苷的含量差异.方法:采用高效液相色谱法,Kromasil C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈-水(12:88);流速:1.0mL/min,检测波长:207 nm.结果:哈巴苷在0.0688 ～0.8262mg/mL(r=0.9991)范围内线性关系良好,乙酰哈巴苷在0.0538～0.8608mg/mL(r=0.9994)范围内线性关系良好;哈巴苷与乙酰哈巴苷的平均加样回收率分别为98.48％和98.91％,RSD值分别为2.17％和1.60％.结论:该方法简便、准确、重复性好,可作为筋骨草属药材的质量控制方法.3种筋骨草属植物中,筋骨草所含哈巴苷和乙酰哈巴苷含量低,金疮小草中乙酰哈巴苷含量高,紫背金盘中哈巴苷含量高.
