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双波长HPLC同时测定延胡索中3种生物碱的含量
目的:建立同时测定延胡索中巴马汀、脱氢紫堇碱和延胡索乙素的HPLC方法.方法:采用C18柱(4.6 mm×250nm,5 μm),以乙腈(A)-0.1％磷酸(加三乙胺调节pH 6.0,B)进行梯度洗脱(0～ 20 min,25％A;20～30 min,25％～55％ A;30 ～45 min,55％A；45 ～ 50 min,55％～25％A；50 ～55 min,25％A)；检测波长为270,280 nm,柱温30℃.结果:巴马汀在2.12×10-2～1.59 μg呈良好的线性关系(r=0.999 9)；脱氢紫堇碱在4.10 e 10-2～ 3.07 μg呈良好的线性关系(r=0.999 9)；延胡索乙素在2.10×10-2～1.57 μg呈良好的线性关系(r =0.999 9)；加样回收率分别为100.10％,100.03％,97.47％.结论:该方法准确、稳定、分离效果好,可用于测定延胡索药材中巴马汀、脱氢紫堇碱和延胡索乙素的含量.
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延胡索中生物碱类成分的质量控制
目的:建立RP-HPLC同步测定延胡索中11种生物碱成分的方法,为该药材的质量控制提供参考.方法:Kromasil Eternity C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈(A)-0.1 mol·L-1乙酸铵溶液(每1L溶液中加冰乙酸0.5mL)(B)梯度洗脱(0～50 min,20％ ～55％ A;50 ～55 min,55％ ～65％ A;55 ～60 min,65％A),流速1.0 mL· min-1,柱温25℃,检测波长280 nm,进样量10μL.结果:11种待测成分的线性关系良好,相关系数均＞0.999;精密度试验RSD0.1％～2.0％,稳定性试验RSD0.2％～2.1％,重复性试验RSD 1.7％ ～4.1％,平均加样回收率98.2％ ～ 100.8％ (RSD 1.6％ ～ 3.5％),均符合中药质量分析要求.结论:建立的RP-HPLC灵敏、简便、可靠,可用于延胡索药材中多种生物碱成分的同步测定.
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脱氢紫堇碱对高糖培养心肌成纤维细胞增殖和胶原分泌的影响
目的：观察中药延胡索主要有效成分脱氢紫堇碱(DHC)对高浓度葡萄糖培养的心肌成纤维细胞(CFs)增殖和胶原分泌的影响,为延胡索的临床应用提供实验依据。方法采用体外高糖培养的CFs模型进行实验。以胶原酶与胰蛋白酶联合消化分离出生24 h内乳鼠CFs,取2～4代细胞高浓度葡萄糖(25 mmol/L)培养,分别加入100、50、25 mg/L DHC干预,24、48 h后镜下观察细胞形态,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,ELISA测定Ⅰ型、Ⅲ型胶原含量。结果 CFs种植3 h后开始贴壁生长,高浓度葡萄糖培养液培养24、48 h后细胞增殖明显增加(P＜0.05,P＜0.01),48 h后S＋G2＋M期细胞的百分率明显增加(P＜0.01),细胞分泌Ⅰ型、Ⅲ型胶原量明显升高(P＜0.01)；DHC干预后可显著抑制CFs增殖(P＜0.01),降低S＋G2＋M期细胞百分率(P＜0.01),减少Ⅰ型、Ⅲ型胶原分泌(P＜0.05,P＜0.01)。结论 DHC能抑制高糖培养的CFs的增殖,减少胶原分泌,DHC具有潜在的抗心肌纤维化作用。
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脱氢紫堇碱体外对兔血小板中环核苷酸含量的影响
目的:研究脱氢紫堇碱(DHC)对兔血小板中cAMP 和cGMP含量的影响以探讨其抑制血小板聚集的作用机制.方法:应用放射免疫分析方法.结果:DHC显著增加兔血小板中cAMP的含量,而降低兔血小板中cGMP的含量.结论:DHC可能通过增加血小板中cAMP的含量和降低血小板中cGMP的含量而产生血小板抑制作用.
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LC-MS/MS法测定大鼠口服延胡索提取物后延胡索乙素和脱氢紫堇碱的药代动力学
建立检测大鼠血浆中延胡索乙素和脱氢紫堇碱分析方法,并应用有机溶剂沉淀法提取含药血浆中的生物碱类成分,色谱采用SB-C18反相柱,流动相为乙腈-乙酸铵(0.1%乙酸)梯度洗脱,质谱采用多反应监测(MRM)方式进行正离子检测,用于定量分析的例子对分别为m/z 356.2→m/z 191.9(延胡索乙素)和m/z 366.2→m/z 350.2(脱氢紫堇碱).测定血浆中这两种成分的线性范围均为1.0～1 000 ng·mL-1,定量下限为1.0 ng·mL-1,相关系数分别为0.994和0.992,延胡索乙素的回收率为71.71%～91.59%,脱氢紫堇碱的回收率为83.27%～103.15%,方法的精密度、准确度和稳定性均符合要求.结果显示,该法选择性强、灵敏度高、操作简便,适用于血浆延胡索乙素和脱氢紫堇碱的药代动力学研究.
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大孔吸附树脂纯化延胡索总生物碱工艺研究
目的 确定大孔吸附树脂纯化延胡索总生物碱的工艺条件.方法 以酸性染料比色法测定延胡索总生物碱,HPLC法测定延胡索中盐酸巴马汀、脱氢紫堇碱、延胡索乙素及延胡索甲素:以延胡索总生物碱和4种生物碱的吸附率、洗脱率及质量分数为指标,利用静态吸附和动态吸附实验相结合的方法,对6种大孔吸附树脂进行筛选.通过考察上样量、体积流量、除杂溶剂和体积、洗脱溶剂和体积等因素,优选延胡索总生物碱纯化工艺条件,以5、10倍放大试验考察纯化工艺的稳定性.结果 选取D141型大孔树脂用于延胡索总生物碱纯化,纯化工艺为生药0.6 g/mL的上样液,加入径高比1:5～1:9的D141大孔吸附树脂柱,以体积流量2 BV/h上样2 BV,1.3 BV纯水除杂,6 BV 95％乙醇以2 BV/h体积流量洗脱.纯化后延胡索总生物碱质量分数高达68.19％,盐酸巴马汀、脱氢紫堇碱、延胡索乙素及延胡索甲素的质量分数分别为1.95％、11.74％、4.93％、6.36％.经5、10倍放大试验得到的延胡索总生物碱质量分数能达到65％以上.结论 该工艺经验证试验,总生物碱质量分数能达到65％以上,且延胡索总生物碱及4种生物碱单体的转移率均能达到85％以上,表明D141型大孔吸附树脂能有效纯化延胡索中总生物碱,且适用于工业大生产.
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RP-HPLC法同时测定醋延胡索配方颗粒中7种生物碱
目的 建立RP-HPLC法同时测定醋延胡索配方颗粒中原阿片碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、脱氢紫堇碱、延胡索乙素、四氢小檗碱和延胡索甲素的方法.方法 采用Ultimate AQ-C 18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);乙腈-0.1％磷酸水溶液(三乙胺调pH值至6.0)(10∶90)为流动相,梯度洗脱,体积流量为1.0 mL/min,检测波长为280 nm.结果 原阿片碱线性范围为6.8～119.0 ng,r=0.999 9,平均回收率为98.2％,RSD为2.0％;盐酸巴马汀线性范围为24.38～426.65 ng,r=0.999 9,平均回收率为99.6％,RSD为2.8％;盐酸小檗碱线性范围为8.88～155.40 ng,r=0.999 9,平均回收率为100.2％,RSD为1.3％;脱氢紫堇碱线性范围为77.66～1 359.05 ng,r=0.999 9,平均回收率为99.0％,RSD为2.2％;延胡索乙素线性范围为41.4～724.5 ng,r=0.999 9,平均回收率为100.8％,RSD为2.6％;四氢小檗碱线性范围为6.70～117.25 ng,r=0.999 7,平均回收率为98.7％,RSD为2.5％;延胡索甲素线性范围为25.50～446.25 ng,r=0.999 9,平均回收率为97.7％,RSD为2.2％.结论 该法分离度好,快速简便,重现性好,可用于醋延胡索配方颗粒的质量控制.
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脱氢紫堇碱对高糖培养心肌成纤维细胞Wnt信号通路的影响
目的 采用体外高糖培养心肌成纤维细胞(CFs)的方法,观察脱氢紫堇碱(DHC)对高浓度葡萄糖培养的心肌成纤维细胞Wnt信号通路的影响.方法 采用体外高糖诱导心肌成纤维细胞增殖模型,western blot法检测β-catenin,GSK-3β以及P-GSK-3β的蛋白表达水平;ELISA法观察细胞分泌TGF-β1蛋白的能力.结果 脱氢紫堇碱可以抑制β-catenin的表达(P＜0.01),上调P-GSK-3β的表达(P＜0.05),减少TGF-β1的合成(P＜0.01).结论 脱氢紫堇碱能抑制Wnt信号通路的异常表达,具有潜在的抗心肌纤维化作用.
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穿孔膜片钳方法记录L型钙通道及脱氢紫堇碱对其影响的研究
目的 比较全细胞膜片钳和穿孔膜片钳方法记录大鼠心室肌细胞L型钙通道电流随时间经过的变化差异,并观察脱氢紫堇碱对L型钙通道的影响.方法 采用全细胞膜片钳和穿孔膜片钳方法记录急性分离的大鼠心室肌细胞L型钙通道电流.结果 采用全细胞膜片钳法记录到的L型钙通道电流峰值在15 min内衰减了(34±23)%(n=10),采用穿孔膜片钳方法记录到的L型钙通道电流峰值15 min内仅衰减了(2.7±3.4)%(n=9);采用穿孔膜片钳方法能够记录到人参皂苷Re(100 μmol·L-1)的抑制效应,而采用全细胞膜片钳方法产生的电流衰减几乎完全掩盖了人参皂苷Re的效应.脱氢紫堇碱(10,100 μmol·L-1)能够抑制L型钙通道的电流峰值,抑制率分别为(9±7.5)%(n=5);(28.6±8.5)%(n=5).结论 穿孔膜片钳方法较全细胞膜片钳方法在对L型钙通道电流记录方面更具稳定性和准确性,脱氢紫堇碱能够浓度依赖性的抑制L型钙通道.
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HPLC同时测定延胡索中4个化学成分的含量
目的:运用HPLC同时测定延胡索中脱氢紫堇碱、延胡索乙素、紫堇碱、四氢小檗碱4个化学成分的含量.方法:采用Diamonsil C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以甲醇-0.1%磷酸(三乙胺调pH值至6.0)为流动相进行梯度洗过,流速1.0mL/min,检测波长280nm,柱温30℃.结果:脱氢紫堇碱、延胡索乙素、紫堇碱、四氢小檗碱色谱峰分离度良好.进样量分别在0.050~1.241、0.054~1.354、0.068~1.698、0.027~0.671μg范围内线性关系良好.平均回收率(n=6)分别为102.5%、102.7%、100.9%、97.0%,RSD分别为0.8%、1.0%、0.7%、0.6%.结论:建立的延胡索HPLC含量测定方法可用于延胡索的质量控制.
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脱氢紫堇碱和巴马汀协同l-THP抗吗啡成瘾药效初探
目的 初步探寻延胡索中1～2种与左旋延胡索乙素(l-THP)协同抗吗啡成瘾的有效成分.方法 小鼠吗啡50 mg·kg-腹腔1次注射,至3h纳洛酮注射建立小鼠吗啡依赖纳洛酮催促戒断跳跃反应模型.按l-THP、脱氢紫堇碱和巴马汀各自在延胡索中自然存在比例(l-THP∶脱氢紫堇碱:巴马汀=1∶ 2.31∶0.46)配置成“l-THP-脱氢紫堇碱-巴马汀”混合液,分别观察l-THP3 mg·kg-1单体、混合液(混合液内所含l-THP的量等同l-THP单体治疗组的剂量)灌胃治疗后,对模型小鼠戒断10 min内跳跃反应发生率和每鼠跳跃次数,以及1h体重改变的影响.结果 模型组较生理盐水对照组小鼠跳跃次数和跳跃反应百分率明显增加(P＜0.01),体重下降(P＜0.01);l-THP3 mg· kg-1组与模型组各指标数据接近(P＞0.05);混合液组跳跃次数和跳跃反应百分率比模型组均显著减少(P＜0.05),而体重下降幅度减轻(P＜0.05).结论 从行为学方面初步表明,延胡索水提液中的脱氢紫堇碱和巴马汀成分具有协同l-THP抗吗啡成瘾的药效作用.
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脱氢紫堇碱对内毒素血症大鼠心肌NF-κB和SOD、MDA的影响
目的 观察脱氢紫堇碱(DHC)对内毒素血症大鼠心肌核因子-κB(NF-κB)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的影响,探讨DHC对内毒素血症大鼠心肌损伤的保护作用及其机制.方法 采用直接尾静脉注射内毒素的方法建立大鼠内毒素血症心肌损伤模型,50只Wistar大鼠随机分成5组:NS对照组、LPS模型组、DHC低剂量组、DHC中剂量组、DHC高剂量组.采用比色法检测血清SOD含量、TBA法测定血清含量,免疫组化组检测心肌组织NF-κB的表达.结果 LPS模型组大鼠血清SOD含量明显减低,而MDA含量明显增高,心肌组织中NF-κB蛋白水平明显增高,与NS对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01);予DHC干预后,DHC低、中剂量组可明显使降低的SOD活性升高,而高剂量组与LPS模型组差异无统计学意义(P＞0.05);DHC各剂量组可明显降低血清MDA含量,与LPS模型组相近(P＜0.01);DHC各剂量组大鼠心肌组织NF-κB蛋白水平明显下降,与LPS模型组比较差异明显(P＜0.01).结论 DHC可以通过降低内毒素血症大鼠心肌组织内NF-κB活性和提高大鼠抗氧化能力,对心肌产生保护作用.
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脱氢紫堇碱对内毒素血症大鼠心肌保护作用研究
目的 研究脱氢紫堇碱(DHC)对内毒素血症大鼠心肌保护作用,并探讨其机制.方法 50只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组和DHC低、中、高剂量组,每组10只,通过尾静脉注入脂多糖(LPS)建立内毒素血症大鼠心肌损伤模型,以低、中、高剂量的DHC分别进行干预,在用药后1h采用酶速率法检测血清心肌酶(CK)、心肌同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白(TnI)含量,ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β (IL-1β)含量,光镜观察大鼠心肌组织的病理学变化.结果 与对照组相比较,LPS模型组CK、CK-MB、TnI明显上升,DHC低、中剂量组中CK、CK-MB、TnI明显下降(P＜0.05),高剂量组与模型组相比无明显差异.LPS模型组、DHC干预组的TNF-α、IL-1β的含量均有显著增加(P＜0.01),DHC低、中、高剂量组与LPS模型组相比显著减少(P＜0.01).光镜观察发现模型组大鼠心肌组织炎症反明显,心肌组织较多炎症细胞浸润;脱氢紫堇碱低、中剂量组大鼠心肌组织炎症反应较轻,心肌组织有少量炎症细胞浸润;高剂量组大鼠心肌组织炎症坏死程度介于模型组和中剂量组之间.结论 DHC能有效抑制内毒素血症大鼠心肌组织炎症反应,减轻心肌损伤,在低、中剂量时效果明显.
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脱氢紫堇碱的研究概况
脱氢紫堇碱(DHC)又名去氢延胡索甲素,是从罂粟科紫堇属植物延胡索块茎中提取的一种季胺类生物碱.延胡索味苦、辛,性温,归心、肝、脾经,主要功效为活血、行气、止痛,临床多用于气血瘀滞痛证.延胡索中被鉴定的生物碱已达20多种,DHC为其活性成分之一,临床证实对胃溃疡、冠心病、急性心肌梗死[1-2]均有较好疗效,但在其他方面研究甚少,现就其近年实验及临床研究介绍如下.
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HPLC-双波长切换法同时测定双参通冠胶囊中脱氢紫堇碱、丹酚酸B的含量
目的:建立同时测定双参通冠胶囊中脱氢紫堇碱和丹酚酸B含量的方法.方法:采用HPLC-双波长切换法.色谱柱为Waters symmetry C18,以乙腈-0.05％磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱,检测波长为286 nm(丹酚酸B)、336 nm(脱氢紫堇碱),流速为1.0 mL/min,柱温为25℃,进样量为10μL.结果:在建立的检测条件下,脱氢紫堇碱和丹酚酸B均能达到基线分离,二者进样量线性范围分别为0.157～1.259μg、0.391～3.131μg(r均为0.9999);精密度、重复性和稳定性试验(24 h内)的RSD均小于2.00％(n=6～10);平均加样回收率分别为101.61％、102.85％(RSD分别为3.59％、2.85％,n=6).结论:建立的HPLC-双波长切换法可同时测定双参通冠胶囊中脱氢紫堇碱和丹酚酸B含量,且方法操作简便、快速,可用于双参通冠胶囊的质量控制.
关键词： 双参通冠胶囊 HPLC-双波长切换法 含量测定 丹酚酸B 脱氢紫堇碱 -
延冰片中脱氢紫堇碱的含量测定
目的：延冰片是由延胡索、冰片以及辅料等组成的片剂，临床用于治疗冠心病，心绞痛。研究旨在制定延冰片中脱氢紫堇碱的含量限度。方法：以脱氢紫堇碱作为延冰片成品的跟踪指标，采用高效液相色谱法测定其含量。结果：延冰片以脱氢紫堇碱作为定性鉴别标准，脱氢紫堇碱的含量不得少4．25mg／g。结论：该方法测定脱氢紫堇碱的含量可行性良好，可作为延冰片质量控制的指标之一。
