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延胡索提取物在大鼠肠外翻实验中的吸收研究
目的:利用肠外翻模型研究延胡索提取物不同剂量在大鼠不同肠段的吸收特征.方法:采用大鼠肠外翻模型,HPLC检测延胡索提取物中的延胡索甲素(CDL)和延胡索乙素(THP),计算各成分的吸收参数,分析它们在肠道不同部位的吸收特征.结果:不同浓度延胡索提取物中CDL和THP在各肠段均为线性吸收,R2均大于0.95,符合零级吸收;CDL和THP的吸收速率常数(Ka)均随延胡索提取物给药剂量的增加而增加(P<0.05),表明其为被动吸收.肠道不同部位的吸收实验表明,十二指肠,空肠,回肠对其均有较好的吸收,结肠吸收较差;且肠道对THP的吸收好于对CDL的吸收.结论:不同浓度延胡索提取物CDL和THP在肠道不同部位吸收均符合零级吸收速率,其吸收形式可能为被动吸收.
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延胡索提取物在大鼠血浆中的药代动力学研究
目的:考察延胡索提取物中主要成分延胡索乙素(tetrahydropalmatine,THP)和延胡索甲素(corydaline,CDL)在大鼠体内的药代动力学过程.方法:采用血药浓度法,LC-MS/MS测定大鼠ig不同浓度(0.46,0.93,1.38 g·kg-1)延胡索提取物后不同时间点的血药浓度,Win Nonlin药动学数据处理软件计算药动学参数.结果:ESI(+)离子化条件下采用MRM工作模式用m/z 370-354,m/z 356～340分别检测CDL、THP,同时以m/z 306～140来检测内标盐酸山莨菪碱(anisodaminehydrochloride,ADM).CDL,THP分别在1.13～565,1.5～750 ng·mL-1表现出良好的线性关系,高、中、低3个剂量的回收率、日内和日间精密度均符合要求,不同剂量THP和CDL的Cmax分别为(84.3±9.2),(157.3±99.6),(497.1±71.3)ng·mL-1和(30.8±1.3),(54.4±22.7),(91.2±15.4)ng·mL-1,Tmax分别为(54.8±6.9),(119.2±5.7),(62.5±7.5)min和(31.5±0.07),(65.6±10.6),(111.5±4.2)min.结论:LC-MS/MS选择性好,灵敏度高.适用于血浆样品成分含量的测定,为进一步的复方药代动力学的研究奠定了基础.
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延胡索甲素和乙素的人源肠内菌丛生物转化及在人源Caco-2细胞单层模型的吸收转运
目的:研究延胡索甲素(d-corydaline,CDL)和延胡索乙素(tetrahydropalmatine,THP)的人源肠内菌丛生物转化,在入源结肠腺癌细胞系Caco-2细胞单层模型的吸收转运.方法:应用人源肠内菌丛在厌氧、37℃条件下分别与CDL和THP共温孵培养；利用人源结肠腺癌细胞系Caco-2细胞单层模型测试CDL和THP从绒毛面(AP端)到基底面(BL端)、BL端到AP端双向的转运过程.计算转运参数和表观渗透系数(Papp),并与吸收良好的阳性对照药普萘洛尔和吸收不良的阿替洛尔进行比较.应用高效液相色谱法对CDL和THP进行分析.结果:CDL和THP在人源肠内菌丛温孵体系没有发生生物转化.它们与普萘洛尔在Caco-2细胞单层模型双向转运的Papp皆在1×10-5cm·s-1数量级；在0～ 180 min,转运效率与转运时间呈正相关.结论:CDL和THP在人源肠内菌丛温孵体系中稳定；在Caco-2细胞单层模型的转运机制可能为被动扩散.
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大孔吸附树脂纯化延胡索总生物碱工艺研究
目的 确定大孔吸附树脂纯化延胡索总生物碱的工艺条件.方法 以酸性染料比色法测定延胡索总生物碱,HPLC法测定延胡索中盐酸巴马汀、脱氢紫堇碱、延胡索乙素及延胡索甲素:以延胡索总生物碱和4种生物碱的吸附率、洗脱率及质量分数为指标,利用静态吸附和动态吸附实验相结合的方法,对6种大孔吸附树脂进行筛选.通过考察上样量、体积流量、除杂溶剂和体积、洗脱溶剂和体积等因素,优选延胡索总生物碱纯化工艺条件,以5、10倍放大试验考察纯化工艺的稳定性.结果 选取D141型大孔树脂用于延胡索总生物碱纯化,纯化工艺为生药0.6 g/mL的上样液,加入径高比1:5～1:9的D141大孔吸附树脂柱,以体积流量2 BV/h上样2 BV,1.3 BV纯水除杂,6 BV 95％乙醇以2 BV/h体积流量洗脱.纯化后延胡索总生物碱质量分数高达68.19％,盐酸巴马汀、脱氢紫堇碱、延胡索乙素及延胡索甲素的质量分数分别为1.95％、11.74％、4.93％、6.36％.经5、10倍放大试验得到的延胡索总生物碱质量分数能达到65％以上.结论 该工艺经验证试验,总生物碱质量分数能达到65％以上,且延胡索总生物碱及4种生物碱单体的转移率均能达到85％以上,表明D141型大孔吸附树脂能有效纯化延胡索中总生物碱,且适用于工业大生产.
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左旋延胡索乙素印迹聚合物的制备及固相萃取应用
目的 利用分子印迹技术制备左旋延胡索乙素(L-THP)分子印迹聚合物(MIPs),并进行固相萃取应用研究.方法 以L-THP为模板分子,甲基丙烯酸(MAA)为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)为交联剂,制备左旋延胡索乙素分子印迹聚合物(L-THP-MIPs),并进行固相萃取实验优化萃取条件,考察L-THP-MIPs吸附的选择性和专一性.结果 L-THP-MIPs能特异性地吸附L-THP,而对L-THP的结构类似物延胡索甲素未表现出明显的吸附行为.结论 L-THP-MIPs对L-THP具有良好的选择性和专一性.
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HPLC法同时测定元胡止痛滴丸中6种成分
目的 建立同时测定元胡止痛滴丸中6种成分的HPLC分析方法.方法 色谱柱为Diamonsil C18柱(250 mm×4.6mm,5μm);流动相为乙腈-0.04％乙酸铵溶液(冰醋酸调pH值至4.0),梯度洗脱:0～10 min,20％乙腈;10～25 min,20％～25％乙腈;25～70 min,25％～75％乙腈;体积流量lmL/min;柱温35℃;检测波长280 nm;进样量10 μtL,测定元胡止痛滴丸中延胡索乙素、黄藤素、去氢延胡索甲素、延胡索甲素、欧前胡素和异欧前胡素的量.结果 延胡索乙素、黄藤素、去氢延胡索甲素、延胡索甲素、欧前胡素和异欧前胡素分离度良好,阴性无干扰,分别在14.94～149.40、1.97～19.72、15.94～159.36、9.72～97.20、2.82～28.17、0.61～6.06 μg/mL线性关系良好,r均大于0.999 0,平均加样回收率为95％～105％ (RSD1.82％～2.99％).4批样品中延胡索乙素、黄藤素、去氢延胡索甲素、延胡索甲素、欧前胡素、异欧前胡素的量分别在0.368～0.483、0.058～0.082、0.532～0.766、0.315～0.459、0.145～0.212、0.030～0.053mg/g.结论 方法简便、准确,重复性好,适用于元胡止痛滴丸中6种成分的定量测定,可为元胡止痛滴丸的质量控制提供依据.
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RP-HPLC法同时测定醋延胡索配方颗粒中7种生物碱
目的 建立RP-HPLC法同时测定醋延胡索配方颗粒中原阿片碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、脱氢紫堇碱、延胡索乙素、四氢小檗碱和延胡索甲素的方法.方法 采用Ultimate AQ-C 18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);乙腈-0.1％磷酸水溶液(三乙胺调pH值至6.0)(10∶90)为流动相,梯度洗脱,体积流量为1.0 mL/min,检测波长为280 nm.结果 原阿片碱线性范围为6.8～119.0 ng,r=0.999 9,平均回收率为98.2％,RSD为2.0％;盐酸巴马汀线性范围为24.38～426.65 ng,r=0.999 9,平均回收率为99.6％,RSD为2.8％;盐酸小檗碱线性范围为8.88～155.40 ng,r=0.999 9,平均回收率为100.2％,RSD为1.3％;脱氢紫堇碱线性范围为77.66～1 359.05 ng,r=0.999 9,平均回收率为99.0％,RSD为2.2％;延胡索乙素线性范围为41.4～724.5 ng,r=0.999 9,平均回收率为100.8％,RSD为2.6％;四氢小檗碱线性范围为6.70～117.25 ng,r=0.999 7,平均回收率为98.7％,RSD为2.5％;延胡索甲素线性范围为25.50～446.25 ng,r=0.999 9,平均回收率为97.7％,RSD为2.2％.结论 该法分离度好,快速简便,重现性好,可用于醋延胡索配方颗粒的质量控制.
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基于质量标志物的元胡止痛方配伍大鼠脑组织分布研究
目的 考察延胡索和白芷配伍对延胡索甲素、延胡索乙素、原阿片碱、欧前胡素及异欧前胡素在大鼠脑组织内分布动力学的影响,为元胡止痛方中质量标志物(Q-marker)的确定提供进一步的实验依据.方法 分别ig给予大鼠延胡索、白芷及元胡止痛方提取物,采用UPLC-MS/MS测定不同时间点大鼠脑组织样品中各成分的质量浓度,拟合动力学参数评价组方配伍对各成分在大鼠脑组织中分布的影响.结果 与延胡索、白芷组相比,元胡止痛方组大鼠脑组织中延胡索甲素、延胡索乙素和原阿片碱的达峰浓度(Cmax)和药时曲线下面积(AUC)均显著增加,欧前胡素、异欧前胡素平均驻留时间(MRT)延长.结论 延胡索与白芷配伍具有协同作用,能促进延胡索甲素、延胡索乙素、原阿片碱、欧前胡素及异欧前胡素在大鼠脑组织中的分布,以上化合物可作为元胡止痛方的Q-marker.
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HPLC-CAD法测定元胡止痛胶囊中生物碱和香豆素
目的 建立高效液相色谱法联合二极管阵列检测器(HPLC-DAD)法同时测定元胡止痛胶囊中延胡索乙素、盐酸黄连碱、去氢延胡索甲素、延胡索甲素、欧前胡素和异欧前胡素.方法 采用HPLC-CAD法,Thermo Hypersil BDS C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相;乙腈-10 mmol/L甲酸铵(甲酸调pH 4.0),梯度洗脱;体积流量0.8 mL/min;CAD雾化器温度为35℃;柱温35℃;进样量为20μL.结果 延胡索乙素、盐酸黄连碱、去氢延胡索甲素、延胡索甲素、欧前胡素和异欧前胡素分别在0.041～1.020、0.013～0.320、0.068～1.700、0.041～1.020、0.101～2.520、0.039～0.980μg与峰面积线性关系良好;平均回收率分别为98.41％、98.89％、98.32％、99.35％、98.05％、98.67％,RSD值分别为0.9％、1.4％、0.7％、1.1％、0.7％、0.9％.结论 该方法准确、简便、灵敏度高,可用于元胡止痛胶囊中生物碱和香豆素类多成分的质量控制研究.
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HPLC法同时测定延胡索药材中3种生物碱类成分的含量
目的：建立测定延胡索药材中延胡索甲素、延胡索乙素和脱氢延胡索碱含量的方法。方法采用 HPLC 法，Agilent XDB C18色谱柱（250mm ×4.6mm，5μm）；乙腈为流动相A，0.2％磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱；检测波长0～10min为340nm，10～40min为280nm；柱温30℃；流速1mL· min －1。结果延胡索甲素在64μg· mL －1～320μg· mL －1、延胡索乙素在100μg· mL －1～500μg· mL －1、脱氢延胡索碱在52μg· mL －1～260μg· mL －1的范围内线性关系良好，回收率均在95％～100％，RSD均小于2％。结论本法灵敏、准确、重现性好，可用于延胡索药材的质量控制。
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延胡索甲素和延胡索乙素的电喷雾质谱研究
目的:对延胡索甲素和延胡索乙素在电喷雾质谱下的裂解途径进行研究.方法:采用高效液相-电喷雾串联质谱(HPLC-ESI-MSn)对其样品进行测定.结果:在正离子模式下,延胡索甲素和延胡索乙素围绕碳氮键进行开环裂解,碎裂成苯二亚甲基和四氢异喹啉两部分,形成其鉴定的主要碎片离子.结论:本实验为该类化合物的分析鉴定提供有效的质谱方法.
关键词： 延胡索甲素 延胡索乙素 高效液相-电喷雾串联质谱 裂解途径 -
白花土元胡药材中延胡索甲素和乙素的含量测定
目的 建立测定白花土元胡药材中延胡索甲素和乙素含量的方法.方法 采用RP-HPLC外标法,Symmetry C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm);乙腈为流动相A,0.1%磷酸溶液(三乙胺调pH6)为流动相B,梯度洗脱;检测波长282 nm.结果 延胡索甲素在10.40～208.00 μg·ml-1范围内线性关系良好,平均回收率为98.5%,RSD=3.1%;延胡索乙素在10.10～505.00 μg·ml-1范围内线性关系良好,平均回收率为101.9%,RSD=2.3%.结论 所建方法结果准确可靠,适用于白花土元胡中延胡索甲素和乙素含量的同时测定.
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延胡索药材商品规格等级划分的合理性研究
目的 研究延胡索商品等级的划分与其外观指标和内在含量的相关性,探讨其等级划分方法的合理性.方法 考察不同等级延胡索的外观指标,采用高效液相色谱(HPLC)法测定原阿片碱、延胡索乙素、延胡索甲素的含量,并测定醇溶性浸出物的含量.将各个指标与等级进行相关性分析.结果 不同产区延胡索之间的醇溶性浸出物含量差异有统计意义(P＜0.05),且道地产区的含量高于非道地产区;商品等级与醇溶性浸出物存在较强的负相关(r=-0.434,P＜0.01),与原阿片碱含量呈较强的负相关(r=-0.370,P＜0.05);商品等级与延胡索乙素含量呈较弱的负相关(r=-0.180,P＞0.05),与延胡素甲素的含量呈较弱的负相关(r=-0.163,P＞0.05).即延胡索商品等级越高、块茎越大,醇溶性浸出物、原阿片碱含量越少,延胡索乙素、延胡索甲素含量具有随等级升高而减少的趋势.结论 不同产区延胡索醇溶性浸出物含量存在差异,以直径大小划分延胡索等级的方法还有待商榷.
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延胡索甲素与左旋延胡索乙素抗吗啡躯体依赖和精神依赖的作用研究
目的 观察并比较延胡索甲素(corydaline,Cor)与左旋延胡索乙素(1-tetrahydropalmatine,1-THP)抗吗啡躯体依赖和精神依赖的作用.方法 SD大鼠随机分为对照组、模型组、Cor组、1-THP组.连续递增sc吗啡9d后,纳洛酮促瘾,制备吗啡依赖大鼠催促戒断模型,促瘾前30 min ip Cor (40、80 mg/kg)或1-THP(5.0、10.0 mg/kg),观察大鼠戒断症状和体质量的降低;应用旷场实验,观察Cor(5、10 mg/kg)和1-THP (2.5、5.0 mg/kg)对吗啡诱导的大鼠自发活动的影响、对吗啡连续递增给药致大鼠行为敏化效应的影响,以及Cor(10、20、40 mg/kg)和1-THP(2.5、5.0、10.0 mg/kg)对大鼠自发活动的影响.结果 Cor (40、80 mg/kg)、1-THP (5.0 mg/kg)对吗啡催促戒断症状无显著改善作用,10 mg/kg 1-THP显著改善大鼠戒断症状(P＜0.05);Cor和1-THP对吗啡降低大鼠体质量效应有改善趋势,但差异不显著;Cor 40 mg/kg以下剂量、1-THP 10 mg/kg以下剂量对大鼠自发活动无显著影响;Cor(5、10 mg/kg)和1-THP (2.5、5.0 mg/kg)均可显著降低吗啡诱发的大鼠高活动性行为、行为敏化的形成(P＜0.05、0.01).结论 Cor和1-THP对吗啡所致的大鼠躯体依赖和精神依赖均有不同程度的调节作用,1-THP的起效剂量明显低于Cor.
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RP-HPLC同时测定活络效灵丹中糖苷及生物碱成分的含量
目的:建立反相高效液相色谱法同时测定活络效灵丹中3个糖苷(马钱苷酸、龙胆苦苷、芍药苷)和2个生物碱(延胡索乙素、延胡索甲素)成分的含量.方法:采用xBridgeTM C18色谱柱(150 mm× 4.6 mm,3.5 μm),流动相A为乙腈,流动相B为体积分数0.02％的磷酸水溶液,梯度洗脱,流速为1.2 mL· min-1,检测波长为230 nm,柱温为30℃.结果:马钱苷酸、龙胆苦苷、芍药苷、延胡索乙素、延胡索甲素的质量浓度分别在9.375～300.0、45.99～1 502.4、31.20～998.3、1.693～54.20、1.125～36.00 mg·L-1范围内与峰面积呈良好的线性关系(r≥0.999 6,n=6),加样回收率均值分别为99.1％、99.9％、98.4％、102.2％、99.8％,RSD均不大于2.8％.3个糖苷和2个生物碱含量的质量分数测定结果分别为3.94～4.59、22.8～26.5、13.6～14.7、1.04～1.17、0.408～0.459 mg· g-1.结论:该方法可作为活络效灵丹中糖苷和生物碱类化学成分的含量测定方法,为其质量控制提供参考依据.
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建立HPLC法同时测定复方黑骨藤中9种有效成分的含量
目的:建立HPLC法同时测定复方黑骨藤中落干酸、6’-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、龙胆苦苷、獐芽菜苷、杠柳苷、延胡索乙素、四氢小檗碱、延胡索甲素9种有效成分的含量.方法:采用KromasilC18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈(A)-0.05％三乙胺+乙酸水溶液(B,pH=6.0)为流动相,梯度洗脱(0～5 min,5％A→8％A;5～5.5 min,8％A→11％A;5.5～20 min,11％A;20～30 rin,11％A→30％A;30～40min,30％A→40％A;40～42 min,40％A→55％A;42～53 min,55％A→75％A),流速1.2 mL·min-1,柱温25℃,检测波长为206 nm(延胡索乙素、四氢小檗碱、延胡索甲素)、225 nm(落干酸和杠柳苷)、243 nm(獐牙菜苦苷和獐牙菜苷)和275 nm(6’-0-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷和龙胆苦苷),进样量10 μL.结果:落干酸、6’-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、龙胆苦苷、獐芽菜苷、杠柳苷、延胡索乙素、四氢小檗碱和延胡索甲素的质量浓度在一定范围内,与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率(n=6)分别为92.7％、90.9％、91.2％、94.9％、97.4％、94.6％、96.1％、90.9％和104.4％,RSD分别为2.1％、1.3％、1.1％、1.6％、0.7％、0.6％、1.8％、2.0％和1.4％;样品中上述9种成分含量范围分别为3.464～3.535、1.133～1.178、0.373～0.382、13.598～14.142、0.109～0.112、0.499～0.510、0.114～0.119、0.027～0.028和0.163～0.174mg·g1.结论:经方法学验证,本方法可用于黑骨藤复方药物中9种有效成分的分析和含量测定,为复方黑骨藤药物的质量控制奠定基础.
