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雷公藤单加氧酶基因全长克隆及表达分析
目的:单加氧酶(Monooxygenase,MO)是一类通过在底物上加一个氧原子的加氧酶,在动植物体内参与多种代谢途径.本实验致力于从雷公藤转录组数据中克隆得到单加氧酶基因cDNA全长,并对克隆得到的MO基因进行初步的功能分析.方法:通过对雷公藤转录组数据中筛选得到MO基因片段设计特异性引物,克隆MO基因cDNA全长,通过生物信息学方法对得到的MO基因进行分析,主要包括多重序列比对,蛋白结构预测和构建进化树分析等.结果:根据分析结果TwMO基因全长为2193 bp,共编码507个氨基酸,等电点为8.84,相对分子质量为55.20 kDa,多重序列比对显示它与其他植物的MO基因具有较高的同源性.雷公藤悬浮细胞经外源茉莉酸甲酯(MeJA)诱导后,实时荧光定量结果显示,Tw-MO的表达量明显增加,并在48 h达到高,提示TwMO基因与雷公藤的次生代谢产物的生成有关.结论:本研究首次从雷公藤悬浮细胞中克隆得到MO基因,为进一步研究该基因的功能奠定基础.
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昆虫CYP6家族与抗药性及其转录调控
已知昆虫细胞色素P450单加氧酶是一类具有多样性的酶(Feyereisen,1999),在各种杀虫剂如拟除虫菊酯、有机氯化合物、有机磷化合物及氨基甲酸酯类化合物等的代谢中起重要作用 (Feyereisen,1995).
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药物代谢酶CYP2D6和CYP2C19的基因多态性与个体化治疗
药物代谢酶的活性高低是决定药物代谢强度和持久性的主要因素.参与药物代谢的酶主要有细胞色素P450(cytochromep 450,CYP450)同工酶、N-乙酰转移酶(N-acefyltransferase,NAT)、醇脱氧酶(alcohol dehydrogenase,ADH)和酯酶(esterase)等,而在众多代谢酶中,CYP450酶起着非常重要的作用,它可代谢降解大约40%~50%的药物.CYP450酶又称混合功能氧化酶或单加氧酶,是一种以血红蛋白为辅基的B族细胞色素超家族蛋白酶,广泛存在于动物、真核有机体、植物、真菌和细菌中,是必不可少的结构酶.
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炎症状态对CYP2B6活性改变及其作用机制的研究进展
肝脏细胞色素 P450(cytochrome P450,CYP450)氧化酶又称混合功能氧化酶和单加氧酶,广泛存在于动物、植物、微生物的各种组织中,是负责大多数临床药物、环境致癌物、外源毒物及内源活性物质生物转化的主要酶系统,具有重要的药理、生理及病理学意义。CYP450是一类亚铁血红素-硫醇盐蛋白的基因超家族,由不同的基因家族和亚家族组成,其中与药物代谢关系为密切的主要有 CYP1A2、CYP2B6、CYP2C9、CYP2D6、CYP2E1及 CYP3A4等。本文综述了炎症状态对 CYP2B6活性改变及其作用机制的研究进展。
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CYP1A1基因多态性与动脉粥样硬化疾病相关性的研究进展
细胞色素P450(Cytochrome P450,CYP)是一含血红素的单加氧酶超家族,广泛存在于机体组织中,是外源性化学物质在体内转化第一时相主要的代谢酶.研究显示,其亚家族成员CYP1A1参与了香烟中重要的致癌物苯并芘B[a]P和亚硝胺的代谢激活,与吸烟诱导的肿瘤易感性增加密切相关,而Isner[1]研究发现动脉硬化与吸烟相关肿瘤的发生有相似的分子生物学机制,导致不同个体对动脉硬化及其相关疾病的易感性不同.现就CYP1A1基因多态性与吸烟相关的动脉粥样硬化疾病的易感性综述如下.
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细胞色素氧化酶CYP1A2基因多态性及其对代谢的影响
肝脏微粒体细胞色素P450酶(CYP450)系统是促进药物生物转化的主要酶系统.此酶系统的作用模式是从辅酶Ⅱ及细胞色素b5获得2个H+,另外接受1个氧分子,其中1个氧原子使药物羟化,另1个氧原子与2个H+结合成水,故又名单加氧酶,能对数百种药物起反应.P450酶系成员众多,是一个超家族[1],依次分类为家族(阿拉伯数字表示)、亚或次家族(大写英文字母表示)和酶个体(阿拉伯数字编序)3级.
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CYP2D6基因多态性与阿片类药物代谢的关系
阿片类药物使用有明显的个体差异,这种机体对疼痛敏感性的差异反应,可能与基因水平调节阿片类药物的药代动力学(包括代谢酶活性、载体)和药效学(受体和信号转导)有关[1].概 况细胞色素P450 (Cytochrome P450,CYP450)是一族单加氧酶,主要存在于肝细胞内滑面内质网和消化系统表面黏膜上.这一类酶家族参与内生物质,如甾体类固醇、激素、前列腺素以及脂类代谢,并参与外来物质的解毒作用.
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056细胞色素P450单加氧酶在心脏不同部位的基因表达
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单加氧酶基因筛选表达及其在苯甲亚砜中的合成应用
目的 克隆和表达假单胞菌菌株Pseudomonas monteilii CCTCC M2013683的单加氧酶基因并研究其在手性亚砜合成中的应用.方法 根据假单胞菌菌株Pseudomonas monteilii CCTCC M2013683基因组序列,选取3个单加氧酶基因设计特异性的PCR引物,利用PCR技术,以菌株基因组DNA为模板扩增基因片段,构建重组质粒pET-32a-pmmo,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,诱导表达目的蛋白.以构建的重组菌为生物催化剂,苯甲硫醚为底物进行催化反应.结果 扩增获得了3个目的基因并构建了相应的重组质粒,诱导表达的3个重组蛋白中有2个(pmmo-3546、pmmo-6814)具有活性,可催化苯甲硫醚转化为R构型的苯甲亚砜.结论 成功获得了具有R-选择性催化苯甲硫醚活性的单加氧酶重组蛋白.
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Rv1894 c是一种新型氮酸酯单加氧酶,为结核杆菌毒力所必需
结核病很难治愈,需要至少6个月的使用多种抗生素的治疗。少数菌体能够耐受抗生素,在感染对象肺部长期存在,但细菌生存仍然需要一些代谢活动。我们在豚鼠(其可利用缺氧,并且发生的坏死性肉芽肿在组织学上与人类的相似)体内研究缺氧诱导的Rv1894 c基因对结核杆菌毒力的作用,并发现该基因对整个杆菌的生长和生存都是必要的。其特征在于该基因所编码的酶的功能是一种氮酸酯单加氧酶,其可在缺氧代谢过程中防止有毒产物堆积,并可对转录阻遏物KSTR进行负调控。未来的研究将侧重于开发靶向Rv1894 c及其同源物的小分子抑制剂,其目标是杀死持续存在的细菌,从而缩短治疗肺结核所需的时间。
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细胞色素P450酶系与药物的代谢
细胞色素P450酶(cytochrome P450,CYP),又称混合功能氧化酶(mixed function oxidsde)和单加氧酶(monooxygenase),主要存在于肝微粒体中,在外源性化合物(包括药物和毒物)的生物转化中起着十分重要的作用,它的活性决定药物的代谢速率,与药物的清除率有着直接关系,是药物代谢的第一相酶,因而又称为药物代谢酶.