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铜绿假单胞菌耐药机制及中医药治疗研究进展
随着抗生素的不规范使用,近年细菌耐药率越来越高.临床尤以感染性疾病的多见病原菌——铜绿假单胞菌为突出,不仅是临床急危重症的棘手问题,也是国际医学界的难题和焦点.为此,作者综述了近5年来铜绿假单胞菌耐药机制研究进展,并对β-内酰胺酶、主动外排系统、密度感应系统等主要耐药机制着力阐述,进而阐释相关的中医药治疗措施,以期为抗生素治疗无果时探索中医药治疗思路提供依据.
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外排泵抑制剂对泛耐药铜绿假单胞菌作用的体内研究
铜绿假单胞菌(Psedumonas aeruginosa,PA)是主要的医院内感染致病菌,对抗假单胞菌作用的所有药物全部耐药的即为泛耐药PA[1](pandrug-re-sistance,PDR).主动外排系统的过度表达是导致PA耐药的重要机制.Henrichfreise等[2 ]报道多耐药的22株PA中,有82％的菌株高表达MexXYOprM.衣美英等[3 ]发现主动外排系统在多耐药PA中表达超过60％.
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多药耐药鲍氏不动杆菌外排泵adeA基因的检测及分析
目的 了解多药耐药鲍氏不动杆菌(MDRAB)临床分离菌株的耐药性,并检测其外排泵adeA基因的携带状况.方法 收集医院135株MDRAB临床分离菌株,采用纸片扩散法对135株MDRAB进行药物敏感试验,并采用聚合酶链式反应法(PCR)扩增外排泵adeA基因.结果 135株MDRAB对头孢唑林和呋喃妥因耐药率均为100.0％,对亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦的耐药率分别为80.0％、60.7％,对其他抗菌药物的耐药率均较高,仅对阿米卡星较敏感,敏感率为79.3％；135例MDRAB中adeA基因检测共有127株阳性,阳性率为94.0％.结论 MDRAB呈现严重的多药耐药,主动外排泵系统是MDRAB临床分离菌株产生多药耐药性的主要机制之一.
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多药耐药鲍氏不动杆菌外排泵基因表达的研究
目的 探讨鲍氏不动杆菌对常用抗菌药物的耐药性及与外排泵adeA基因表达水平之间的关系.方法 琼脂两倍稀释法检测鲍氏不动杆菌对17种常用抗菌药物的低抑菌浓度(MIC);PCR法扩增外排泵编码基因adeA;实时荧光定量RT-PCR法检测adeA基因的mRNA表达水平.结果 药敏结果显示,耐药率高的是亚胺培南,其次是头孢哌酮/舒巴坦,耐药率分别为92.9%、78.8%,临床常用的氨苄西林/舒巴坦、头孢吡肟、阿米卡星、氧氟沙星及环丙沙星耐药率均>50.0%;氨曲南、哌拉西林、头孢噻肟、头孢曲松等抗菌药耐药率相对较低;85株鲍氏不动杆菌中有多药耐药株52株,占61.2%;adeA基因的检出阳性率为81.2%,实时定量RT-PCR结果显示,多药耐药菌株adeA基因的mRNA相对表达量均高于敏感菌株,其中3株相对表达量为敏感菌株平均表达水平>20倍.结论 临床分离的鲍氏不动杆菌株耐药情况严重,其主动外排系统adeA基因表达增强在多药耐药性形成中起重要作用.
关键词： 鲍氏不动杆菌 主动外排系统 多药耐药 实时荧光定量RT-PCR -
主动外排系统介导阴沟肠杆菌耐药机制新进展
阴沟肠杆菌(ECL)是存在于人和动物肠道内的正常菌群,由阴沟肠杆菌导致的感染多与严重的基础疾病,以及长期应用广谱抗菌药物和免疫抑制剂等因素有关,已成为院内获得性感染越来越重要的病原菌.近年来,由于长期和不合理使用广谱抗菌药物,使细菌产生多药耐药性(MDR)[1]成为全球医疗难题.李博等[2]分离医院常见的革兰阴性肠杆菌显示阴沟肠杆菌占第3位.主动外排泵对于细菌多药耐药有重要作用,笔者结合近几年国内外相关研究,就主动外排泵的分类、结构及调控机制的新进展进行综述.1 阴沟肠杆菌的生物学特性及耐药机制
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铜绿假单胞菌主动外排系统MexAB-OprM的研究进展
医院感染在感染性疾病中占有相当比例.院内感染的病原菌中,铜绿假单胞菌的感染高居榜首,且耐药状况十分严重.主动外排系统是细菌存在耐药性并发生获得性多重耐药的主要原因.MexAB-OprM型外排系统因具有广谱的外排活性成为铜绿假单胞菌具临床意义的药物外排系统.本文对细菌主动外排系统的分类,PA MexAB-OprM外排系统的组成、结构、重要作用及表达调控予以综述,并对其治疗研究作出展望.
关键词： 铜绿假单胞菌 主动外排系统 MexAB-OprM -
外排泵高表达和外膜蛋白缺失在铜绿假单胞菌对碳青霉烯耐药中的作用
目的探讨铜绿假单胞菌(PA)外科监护室(SICU)分离株对碳青霉烯的耐药机制.方法用Western 印迹和逆转录PCR测定外膜蛋白OprD、OprN表达水平和基因mexA的mRNA水平;用PCR扩增IMP、VIM金属酶基因和主动外排系统MexAB-OprM调控基因mexR,并测序.结果从SICU分离的49株PA,42株对碳青霉烯耐药,其OprD表达除PA42外均有不同程度的降低或缺失,而正常表达OprD的7株菌,均对2种碳青霉烯敏感.27株菌高表达主动外排系统MexAB-OprM,高表达组对亚胺培南耐药率81.5%(22/27) 与低表达组耐药率86.4%(19/22)比较差异无统计学意义(χ2=0.005, P=0.943);而高表达组对美罗培南耐药率44.4%(12/27)与低表达组耐药率13.6% (3/22) 比较差异有统计学意义(χ2=5.417, P=0.020).14株表达了MexEF-OprN,但表达组对亚胺培南和美罗培南耐药率与未表达组耐药率比较差异均无统计学意义(χ2=0.000, P=1.000).8株高表达MexAB-OprM主动外排系统的调控基因mexR发生变异,其中7株出现氨基酸替换,1株提前出现终止密码子.未发现产IMP、VIM金属酶菌株.结论本院SICU分离的PA,对碳青霉烯耐药主要是由外膜蛋白OprD表达降低或缺失引起,与IMP、VIM金属酶无关;主动外排系统MexAB-OprM的高表达对美罗培南的耐药起重要作用;其高表达与调控基因mexR变异有关.
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鲍曼不动杆菌耐药机制及治疗对策的研究进展
近年来,关于鲍曼不动杆菌感染的报道日益增多,广谱抗生素的大量使用又加剧了其对主要抗菌药物的耐药,多耐药甚至全耐药的病例较多.回溯文献发现,耐药机制主要体现在产生对抗抗菌药物的灭活酶和细菌本身的特性和突变等方面.针对多重耐药和泛耐药病例,含舒巴坦制剂、多粘菌素类、替加环素以及联合用药已成为主流治疗方法.
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多重耐药鲍曼不动杆菌外排泵基因的检测
目的 探讨外排泵表型阳性的鲍曼不动杆菌主动外排泵在耐药方面的作用和外排泵基因表达情况.方法 用PCR扩增对外排泵表型阳性的鲍曼不动杆菌34株进行外排泵蛋白基因adeB的检测和分析,并测序.结果 34株外排泵表型阳性的鲍曼不动杆菌检测到adeB基因有33株,检出阳性率为97.06％.对33株鲍曼不动杆菌的外排泵基因adeB进行测序,经比对所测序列与Genebank中序列同源性为100％.结论 主动外排泵基因是鲍曼不动杆菌发生多重耐药的重要因素之一.
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碳青霉烯类耐药铜绿假单胞菌外排泵M ex AB-OprM 的研究
目的：研究铜绿假单胞菌对碳青霉烯类耐药与外排泵MexAB‐OprM 的相关性。方法琼脂稀释法测定亚胺培南和美罗培南对75株铜绿假单胞菌的低抑菌浓度（M IC ），联合外排泵抑制剂M C207110进行外排泵表型的筛选；用反转录‐聚合酶链反应（RT‐PCR）扩增MexAB‐OprM融合蛋白结构基因 mexA以及内参基因rpoD ，并测定其mRNA的表达量，用PCR扩增MexAB‐OprM 相对高表达菌株的外排泵调节基因 mexR、nalC和 nalD ，对扩增产物进行DNA 双向测序；结果进行BLAST比对分析。结果75株铜绿假单胞菌中外排泵表型阳性菌株13株，其中10株细菌的MexAB‐OprM 相对表达量增高，此高表达MexAB‐OprM菌株的调节基因 mexR、nalC及nalD均阳性。其中9株菌 nalC均发生第71位氨基酸突变（甘氨酸→谷氨酸）、8株菌同时还有第209位氨基酸突变（丝氨酸→精氨酸），仅发现1株菌 nalD第158位氨基酸突变（苏氨酸→异亮氨酸），8株菌 mexR发生突变。结论外排泵MexAB‐OprM的高表达在铜绿假单胞菌对碳青霉烯类耐药中可能起到重要作用。MexAB‐OprM的高表达与其调节基因突变相关。
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表皮葡萄球菌对氟喹诺酮类药物摄入的研究
目的探讨耐药表皮葡萄球菌中是否存在主动外排系统,以揭示表皮葡萄球菌对氟喹诺酮类药物的耐药机制.方法应用荧光法检测表皮葡萄球菌耐药株和敏感株对环丙沙星、司帕沙星的累积量以及加入利血平和碳酰氰间氯苯腙(CCCP)后对环丙沙星、司帕沙星累积量的变化情况.结果表皮葡萄球菌临床株和敏感株中加入CCCP后菌体内环丙沙星、司帕沙星的累积量变化不大,而利血平可以使SR79菌体内环丙沙星的累积量显著上升.结论表皮葡萄球菌中可能存在针对亲水性氟喹诺酮药物的主动外排系统.
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主动外排系统与白念珠菌耐药关系研究
目的了解国内白念珠菌的耐药与主动外排系统的关系.方法通过检测若丹明6G在敏感株和耐药株中的蓄积动力学,以明确白念珠菌的耐药与主动外排系统有关;以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测主动外排基因cdr1和cdr2的表达水平.结果所有菌株在能量耗竭时,若丹明快速进入细胞内,耐药株和敏感株相似,在加入葡萄糖提供能量后,耐药株外排若丹明明显,而敏感株细胞外液中的若丹明含量仍继续下降.RT-PCR发现临床分离的耐药株和诱导耐药株主动外排基因cdr1和cdr2的表达水平均显著高于敏感株,回复株上述基因表达水平介于两者之间.结论国内临床分离白念珠菌的耐药性与主动外排系统高表达有关.氟康唑具有诱导主动外排基因cdr高表达的作用,主动外排基因cdr的高表达可使菌株获得多重耐药性,但该诱导效应是可逆的.
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鲍曼不动杆菌主动外排系统和NDM-1基因分布特征及与耐药表型的关系
目的 了解鲍曼不动杆菌主动外排系统(外排泵)基因和新德里金属β-内酰胺酶1(NDM-1)基因的分布情况,并分析其与细菌耐药表型的关系.方法 采用琼脂二倍稀释法检测13种抗生素对81株鲍曼不动杆菌临床分离株的低抑菌浓度(MICs),根据外排泵抑制剂PAβN处理前后MICs的变化判定外排泵表型.利用PCR扩增技术检测外排泵基因adeABC、adeIJK和adeFGH以及NDM-1基因blaNDM-1在临床分离株中的分布特征,根据外排泵基因的检出情况将临床分离株进行分组并比较耐药率.结果 81株鲍曼不动杆菌对临床常用的13种抗生素普遍耐药,43株(53％)外排泵表型试验阳性,对米诺环素的耐药率低(30.9％),其次为亚胺培南,对其余抗生素的耐药率均超过60％,对头孢西丁和复方新诺明的耐药率较高,分别为97.5％和93.8％.在AdeABC外排泵基因阳性的菌株中,adeB、adeS和adeR的检出率分别为78％、78％和74％；在AdeIJK和AdeFGH外排泵基因中,adeJ、adeL、adeF、adeG和adeH的检出率均＞90％；外排泵基因adeB、adeJ和adeG全部阳性的60株鲍曼不动杆菌的多重耐药为严重,耐药基因阳性组的耐药率明显高于相对基因阴性组.32株鲍曼不动杆菌被检测出携带blaNDM-1基因.结论 本地区鲍曼不动杆菌临床分离株多重耐药情况严重,存在blaNDM-1基因的克隆传播.AdeABC、AdeIJK和adeFGH外排泵基因在鲍曼不动杆菌临床分离株中的检出率较高.主动外排系统和NDM-1在鲍曼不动杆菌多重耐药性的形成中起重要作用.
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泛耐药鲍曼不动杆菌主动外排泵adeB基因表达及耐药性研究
目的：探讨细菌主动外排泵adeB基因在临床分离的泛耐药鲍曼不动杆菌耐药性中的作用。方法琼脂稀释法检测临床分离泛耐药鲍曼不动杆菌经外排泵抑制剂羰基氰氯苯腙(CCCP)处理前后对抗生素小抑菌浓度(MIC)变化，以聚合酶链反应(PCR)、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测外排泵基因adeB及其表达水平。结果50株泛耐药鲍曼不动杆菌临床株加入CCCP后，MIC值小于原值的1/4或1/4以下的四环素42株(84％)、氧氟沙星45株(90％)、亚胺培南45株(90％)、头孢噻肟50株(100％)、庆大霉素50株(100％)。50株泛耐药鲍曼不动杆菌临床株和4株敏感菌株均检测到adeB基因，但泛耐药株表达水平明显高于敏感株(P<0.01)。结论泛耐药鲍曼不动杆菌耐药性与外排泵adeB基因高表达密切相关。
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铜绿假单胞菌主动外排系统MexAB-OprM与碳青霉烯类药物耐药的关系研究
目的:探讨临床分离的铜绿假单胞菌的主动外排系统MexAB-OprM与其对碳青霉烯类药物耐药之间的关系,研究其耐药分子机理.方法:测定临床分离的铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南的体外抗菌活性,根据耐药情况,分为碳青霉烯类药物敏感组和碳青霉烯类药物耐药组;应用RT-PCR方法,研究两组菌株的主动外排系统MexAB-OprM中结构基因oprM的mRNA表达水平;用PCR法扩增两组菌株的泵调节基因mexR,对扩增产物进行DNA双向测序.结果:耐药组oprM的mRNA表达水平明显高于敏感组(P<0.05);一株菌发现MexR第126位氨基酸突变(缬氨酸→谷氨酸),两株菌发现MexR第70位氨基酸突变(精氨酸→谷氨酰胺).结论:山西医科大学第一医院临床分离铜绿假单胞菌的主动外排系统MexAB-OprM参与碳青霉烯类药物的耐药;MexAB-OprM高表达的分子机理可能与泵调节基因mexR的突变以及其他突变型有关.
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外排泵表型阳性的鲍曼不动杆菌外排泵基因adeB的研究
目的 探讨多重耐药鲍曼不动杆菌外排泵蛋白在耐药方面的作用和外排泵基因表达情况.方法 分离自河北医科大学第一医院的多重耐药鲍曼不动杆菌,加入外排泵抑制剂后MIC值降低至原值的1/4或以上判定为外排泵表型阳性株,外排泵表型阳性鲍曼不动杆菌34株采用PCR扩增法对其进行外排泵蛋白基因adeB的检测,并将adeB基因测序序列与GenBank中序列进行同源性比较.结果 34株外排泵表型阳性的鲍曼不动杆菌检测到adeB基因的有33株,检出阳性率为97.06％.对33株鲍曼不动杆菌的外排泵基因adeB进行测序,经比对,所测序列与GenBank中序列同源性为100％.结论 AdeABC外排泵机制在鲍曼不动杆菌对抗菌药物敏感性方面的作用尤其重要,含有adeB基底泵的重组衍生体相对于不含有的菌株抗菌素的敏感性降低,所以主动外排基因adeB是鲍曼不动杆菌发生多重耐药的重要因素之一.
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鲍曼不动杆菌的多重耐药性与主动外排系统
鲍曼不动杆菌的多重耐药现象日益严重,给临床抗菌药物的应用带来威胁,其多重耐药机制复杂,其中主动外排是主要原因之一.该文系统综述易化子超家族、耐药结节分化超家族和多药及毒物外排家族的5种主动外排系统的结构,外排机制及调节通路,分析多重耐药与主动外排系统的关系,为新型抗菌药物的设计提供新思路.
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主动外排抑制剂对耐氟喹诺酮的表皮葡萄球菌MIC的影响
目的探讨耐药表皮葡萄球菌中是否存在主动外排系统,以揭示表皮葡萄球菌对氟喹诺酮类药物的耐药机制.方法应用琼脂稀释法检测表皮葡萄球菌耐药株和敏感株在加入主动外排抑制剂利血平和碳酰氰间氯苯腙(CCCP)后对环丙沙星、司帕沙星的低抑菌浓度(MIC)变化情况.结果加入CCCP及利血平后表皮葡萄球菌敏感株及多数耐药株对环丙沙星、司帕沙星的MIC变化不大,而利血平可以使耐药菌SR79对环丙沙星的MIC减小8倍.结论表皮葡萄球菌中可能存在针对氟喹诺酮药物的主动外排系统.
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鲍曼不动杆菌耐药性分析及其主动外排基因adeB的分子检测
目的 了解临床鲍曼不动杆菌的多重耐药状况及主动外排基因adeB的检测情况.方法 对南华大学附一医院所分离的鲍曼不动杆菌在不同类型标本中的分布与科室来源进行分析,利用ATB药敏系统对所分离菌株进行药物敏感试验；通过Primer Premier软件设计特异性扩增引物,采用聚合酶链反应(PCR)对鲍曼不动杆菌主动外排基因adeB在不同类型标本中的分布情况进行检测,探讨鲍曼不动杆菌的耐药性与主动外排基因adeB之间可能存在的关系.结果 所分离的50株鲍曼不动杆菌耐药率较高,对美罗培南和亚胺培南的耐药率达76.0％和74.0％,对其它抗菌药物的耐药率均在80％以上；50株鲍曼不动杆菌经PCR检测,主动外排基因adeB阳性者42株,检出率为84.0％.结论 本地区鲍曼不动杆菌耐药率及主动外排基因adeB检出率较高,主动外排基因adeB可能介导了鲍曼不动杆菌的多重耐药.
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临床分离鲍曼不动杆菌耐药性检测及其主动外排机制的确证
目的 对我院分离的鲍曼不动杆菌进行耐药性分析并初步探讨是否存在药物主动外排机制.方法 K-B法对临床分离的鲍曼不动杆菌进行药敏试验,CCCP联合不同抗菌药物测定MIC值的变化进行主动外排机制的初步确证.结果 75株鲍曼不动杆菌对临床常用抗生索均有不同程度耐药,CCCP处理前后MIC值均呈现不同程度变化,多种药物泵阳性株和泵阴性株的耐药率和敏感率差异有统计学意义(P<0.05).结论 临床鲍曼不动杆菌耐药形势严峻,75株试验菌株存在药物主动外排机制,其高度耐药性及多重耐药性可能与主动外排机制密切相关.
