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KL-0153,一种新型铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵抑制剂
铜绿假单胞菌是一种具有高发病率和死亡率的条件致病菌.以MexAB-OprM外排泵为主的耐药节结化细胞分化家族多药耐药外排系统的存在是铜绿假单胞菌产生多药耐药的主要原因.MexAB-OprM外排泵抑制剂可以显著增强被MexAB-OprM外排的抗生素的活性,作为抗菌药物增效剂,具有良好的临床应用前景.在本研究中,通过小分子库筛选得到了一种新型的MexAB-OprM外排泵抑制剂KL-0153,通过与抗生素的协同活性研究以及EB积累检测证明了其对于MexAB-OprM的抑制活性.在表达MexAB-OprM的铜绿假单胞菌菌株,特别是MexAB-OprM高表达株中,KL-0153与被MexAB-OprM外排的抗生素有协同作用,并且在EB积累检测中,其活性强于阳性药羰基-氰-间-氯苯腙.尽管KL-0153也具有明显的肝肾毒性,但作为先导化合物,对于KL-0153的进一步研究将有助于新型MexAB-OprM外排泵抑制剂的研发.
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铜绿假单胞菌主动外排系统MexAB-OprM的研究进展
医院感染在感染性疾病中占有相当比例.院内感染的病原菌中,铜绿假单胞菌的感染高居榜首,且耐药状况十分严重.主动外排系统是细菌存在耐药性并发生获得性多重耐药的主要原因.MexAB-OprM型外排系统因具有广谱的外排活性成为铜绿假单胞菌具临床意义的药物外排系统.本文对细菌主动外排系统的分类,PA MexAB-OprM外排系统的组成、结构、重要作用及表达调控予以综述,并对其治疗研究作出展望.
关键词： 铜绿假单胞菌 主动外排系统 MexAB-OprM -
铜绿假单胞菌RND型药物外排泵研究进展
铜绿假单胞菌是重要的医院感染及免疫缺陷者感染的致病菌.近年来由于各种抗菌药物的广泛应用甚至滥用,导致铜绿假单胞菌耐药性日渐严重,其耐药性与多种机制相关,本文就主动外排这一耐药机制作一综述.详细介绍生物结构,底物,调节机制,与其他耐药机制间的相互关系,广谱外排泵抑制剂等.
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MexAB-OprM主动外排系统在全耐药铜绿假单胞菌耐药中的作用及机制
目的 探讨MexAB～OprM主动外排系统(外排泵)在全耐药铜绿假单胞菌耐药机制中的作用及其过度表达的机制.方法 联合L-酚丙氨基-L-氨基酰-β-萘胺(MC-207,110)和环丙沙星(CIP),测定26株全耐药铜绿假单胞菌的MIC;用RT-PCR法扩增MexAB-OprM内膜转运蛋白MexB的结构基因mexB和内参照基因16SrDNA片段,根据mexB与16SrDNA扩增产物的电泳扫描比值,分析mexB mRNA的表达水平,判断MexAB-OprM的表达情况;用PCR法扩增MexAB-OprM调控基因mexR并对其产物测序,用Blast软件在GenBank中与已知序列比对.结果 联合MC-207,110后有20株(76.9%)CIP的MIC值下降4倍及以上;26株全耐药铜绿假单胞菌中有22株MexAB-OprM高表达,其中有15株mexR基因发生变异,13株发生点突变,出现氨基酸替换,2株发生插入突变,导致氨基酸插入;点突变位点是336G-A、603G-A、660G-A、584C-G、653T-A,后两者导致氨基酸替换103Ala-Gly、126Val-Glu,插入突变是在470和474核苷酸间插入碱基GGC,导致66和68氨基酸间插入Ala.结论 MexAB-OprM主动外排系统的高表达对铜绿假单胞菌的耐药性起重要作用,调控基因mexR的突变是其高表达的原因之一.
关键词： 铜绿假单胞菌 主动外排 MexAB-OprM RT-PCR -
阿奇霉素对铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵及耐药性的影响
目的 探讨阿奇霉素对铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵的影响,为指导临床合理选择抗生素提供依据.方法 排泵抑制剂(苯丙氨酸精氨酸β-萘酰胺PAβN)干预铜绿假单胞菌后,采用微量肉汤稀释法测定常见药物的低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)值的变化,筛选主动外排表型阳性菌株.PCR扩增主动外排表型阳性菌株oprM、mexB和mexR；real-time PCR检测主动外排表型阳性菌株mexB的mRNA水平；对主动外排表型阳性菌株进行mexR基因测序分析.在阿奇霉素作用下,观察铜绿假单胞菌的mexB基因表达及对头孢他啶、左氧氟沙星、环丙沙星和美罗培南的MIC值变化.结果 从20个临床多重耐药的铜绿假单胞菌菌株中筛选出8株主动外排表型阳性菌.检测表明这8株菌oprM、mexB和mexR均呈阳性,mexB的mRNA水平均较PAO1显著增高.对8株MexABOprM高表达菌mexR基因进行测序,发现菌株PAO03的mexR基因存在突变.阿奇霉素可显著降低mexR基因未突变MexAB-OprM高表达菌株的mexB基因的表达和对头孢他啶、左氧氟沙星、环丙沙星和美罗培南的MIC值,而对菌株PAO03和nalB突变株(mexR基因突变MexAB- OprM高表达菌株)无显著影响.结论 阿奇霉素可抑制铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵的表达,提高铜绿假单胞菌对抗生素的敏感性.
关键词： 铜绿假单胞菌 外排泵抑制剂 阿奇霉素 MexAB-OprM -
MexAB-OprM和MexXY-OprM在耐药铜绿假单胞菌中的表达
目的 探讨MexAB-OprM和MexXY-OprM主动外排系统与铜绿假单胞菌多重耐药的关系.方法 挑选临床分离的铜绿假单胞菌敏感株和多重耐药株各30株,以及标准质控株,用RT-PCR扩增其mexB、mexY和核糖体参照基因rpsL片段,根据mexB、mexY与rpsL扩增产物的电泳扫描比值,分析mexB与mexY mRNA的表达水平.结果 标准株、所有敏感株和多重耐药株均检测出mexB、mexY的mRNA基因,耐药株的mexB、mexY mRNA水平显著高于敏感株(P＜0.05).结论 MexAB-OprM和MexXY-OprM主动外排系统与铜绿假单胞菌固有耐药有关,其表达水平异常增高与多重耐药形成密切相关.
关键词： 铜绿假单胞菌 MexAB-OprM MexXY-OprM 多重耐药 -
多重耐药铜绿假单胞菌MexAB-OprM的表达及mexR基因的突变
目的 分析MexAB-OprM主动外排系统在铜绿假单胞菌耐药性中的作用,并讨论MexAB-OprM高表达与mexR基因突变的关系.方法 L-酚丙氨基-L-氨基酰-β-萘胺(MC207,110)联合环丙沙星(CIP)筛选13株多重耐药铜绿假单胞菌主动外排系统表型;RT-PCR检测13株多重耐药和7株全敏感的铜绿假单胞菌结构基因mexB的mRNA相对含量,推测MexAB-OprM表达水平;对6株MexAB-OprM高表达的多重耐药铜绿假单胞菌进行mexR基因扩增、测序和比对.结果 13株多重耐药铜绿假单胞菌9株主动外排系统表型阳性,阳性率69.2%;所有检测株中均有MexAB-OprM表达,其中有6株多重耐药株高表达;6株多重耐药高表达株中有5株存在mexR基因的突变.结论 MexAB-OprM主动外排系统高表达是导致本院铜绿假单胞菌多重耐药的重要原因,而mexR基因的突变又是导致MexAB-OprM高表达的主要原因.
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细菌外排泵介导耐药性研究进展
随着抗生素的广泛应用,临床上产生一些多重耐药菌株.多重耐药菌株的产生使常规抗生素在临床细菌性感染治疗中失效.细菌主动外排是耐药菌株产生多重耐药的主要机制之一;因此有关细菌主动外排泵的研究也是近年来细菌多重耐药机制研究中,相对较新和活跃的领域.本文结合当前主动外排泵研究的进展,对主动外排蛋白的分类、组成和主要的主动外排系统的基因表达调控以及耐药性情况进行综述.
关键词： 外排泵 耐药 AcrAB-TolC MexAB-OprM -
铜绿假单孢菌多药外排系统研究进展
铜绿假单孢菌是一种重要的院内感染条件致病菌,具有先天的和后天获得的多重高度耐药性,一旦感染,临床治疗十分困难.铜绿假单孢菌的耐药机理十分复杂,除常见耐药机制外,很重要的就是其拥有可以外排多种药物的主动外排系统,使抗菌药物很难发挥应有作用.本文将从近年铜绿假单孢菌中各类外排泵的研究情况,特别是其中重要的外排系统"MexAB-OprM"的分子结构模型、膜定位、该基因的表达与调控等方面的研究进展做一综述.
关键词： 铜绿假单孢菌 外排泵 MexAB-OprM -
铜绿假单胞菌MexAB-OprM主动外排表型筛选和外排基因检测
目的 研究解放军总医院临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌的主动外排系统,为指导临床合理选择抗生素提供依据.方法 采用外排泵抑制剂(苯丙氨酸-精氨酸-β萘酰胺)与喹诺酮类抗生素,以微量肉汤稀释法测定加与不加外排泵抑制剂时环丙沙星与左氧氟沙星的低抑菌浓度(MIC)值,并计算MIC值的变化,根据加与不加外排泵抑制剂MIC值降低3个稀释度及以上筛选主动外排表型阳性菌株;PCR扩增外排表型阳性菌的耐药基因oprM、mexB和mexR,并对3株菌进行mexR基因测序分析;RT-PCR检测oprM基因的mRNA水平,分析耐药基因的表达情况.结果 苯丙氨酸-精氨酸-β萘酰胺能极大的降低左氧氟沙星和环丙沙星的MIC值,70株多重耐药铜绿假单胞菌中46株表型阳性(65.7%),其中PCR检测oprM、mexB和mexR基因同时阳性菌株42株(91.3%),仅oprM基因阳性2株(4.3%),oprM、mexB和mexR基因均阴性2株(4.3%).RT-PCR产物测定A值(A260/A280)与PAO1对照阳性菌株13株,以PAO1的oprM/rpoD的A值为对照阳性菌株4株,同时满足A值(A260/A280)和oprM/rpoD比值均高于PAO1的菌株3株.测序结果与GenBank中已知的mexR基因比对,其中2株同源性为100%,1株第434位核苷酸插入2bp(AT).结论 中国人民解放军总医院多重耐药铜绿假单胞菌大多存在主动外排的耐药机制,其耐药与外排泵过度表达相关.
