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猪链球菌细胞壁蛋白SSU05_1000的表达、纯化及活性分析
目的 构建猪链球菌细胞壁蛋白SSU05_1000基因的重组表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,并研究其对细胞间紧密连接的调控作用.方法 以05ZYH33基因组为模板设计引物,构建pET30a-SSU05_1000重组表达质粒,转化到大肠杆菌中诱导表达,用镍亲和层析的方法对目的蛋白进行纯化,Western blot检测其对人脑微血管内皮细胞紧密连接的调控.结果 构建的SSU05_1000重组表达质粒能够在大肠杆菌中高效表达,纯化的SSU05_1000蛋白纯度达90％以上,Western blot结果显示其与人脑微血管内皮细胞(hCMEC/D3)相互作用后,可以下调细胞间紧密连接蛋白Claudin-5的表达.结论 SSU05_1000蛋白能够破坏人脑微血管内皮细胞的紧密连接结构,提示其在猪链球菌穿血脑屏障(BBB,bloodbrain barrier)过程中起重要作用.
关键词： 猪链球菌 SSU05_1000 紧密连接 -
我国不同地区健康猪猪链球菌检出率调查
目的 了解我国不同地区健康猪猪链球菌的检出率,评估猪链球菌感染风险.方法 分别从不同地区采集正常屠宰猪或活体采集猪咽拭子,经选择性培养基增菌培养,用PCR的方法进行猪链球菌特异的16S rRNA、gapdh以及cps1j、cps2j、cps7h、cps9h、mrp、ef 和sly的检测.结果 共采集337份咽拭子标本.猪链球菌的检出率为93.8%(316/337).316份阳性标本中,毒力基因mrp、ef、sly的检出率分别为29.4%,70.3%,83.9%,血清2型为优势血清型61.4%(194/316).结论 高致病性猪链球菌的检出率很高,可能的猪链球菌感染风险不容忽视.
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四川资阳地区健康猪2型猪链球菌分离与分子生物学特征分析
目的 了解四川资阳地区健康猪携带猪链球菌状况及其主要毒力基因分布和药物敏感性,分析这些菌株与病人分离株的同源性,为疫情预测和制定防治措施提供依据.方法 从屠宰场采集健康猪的咽拭子和扁桃体标本分离培养获得分离株,用API 20 Strep 进行生化鉴定、猪链球菌诊断血清进行血清分型;聚合酶链反应(PCR)检测猪链球菌种特异性基因(16S rDNA)和相关毒力基因;K-B纸片法进行药物敏感性分析;并用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析菌株的同源性.结果 从健康猪分离到了12株猪链球菌,均为血清2型;菌株均具有cps 2J、mrp、sly、ef和gapdh毒力基因;所有菌株抗药性一致;PFGE分析结果 显示均为SmaI 001型,与同期病人分离株带型一致.结论 四川资阳地区健康猪携带的2型猪链球菌是高致病性菌株,与同期病人分离株具有一致的生物学特征,是引起猪或人发病的重要传染源;猪带菌率存在季节差异.
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2型猪链球菌中国强毒株溶血素样蛋白基因的原核表达及其抗血清制备
目的 克隆2型猪链球菌溶血素样蛋白(Hemolysin-like protein, HLP)编码基因并进行原核表达,纯化重组蛋白并制备相应的多克隆抗体.方法 采用PCR法,从2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33基因组扩增基因hlp,构建重组表达质粒pET32a::hlp,转化E.coli BL21(DE3),筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定表达产物;His亲和层析柱纯化重组蛋白;重组蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体,间接ELISA和Western blot检测多抗血清.结果 构建的重组质粒在宿主菌中可高效表达,His亲和层析柱纯化获得较高纯度的重组蛋白;重组蛋白免疫新西兰兔后获得高效价的抗血清.结论 在原核系统中成功地表达了hlp基因编码的蛋白,并以重组蛋白为抗原制备出高效价的多抗血清,为进一步研究hlp基因的功能奠定了基础.
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猪链球菌基因芯片检测方法的研究
目的 建立猪链球菌基因芯片检测方法 ,实现对猪链球菌种、致病血清型及毒力相关基因的同步检测和鉴定.方法 根据GenBank中猪链球菌的相关序列,设计并合成探针,采用点样法制备芯片;检测样本基因组DNA标记后与基因芯片杂交,激光扫描检测信号.结果 检测结果 显示,针对猪链球菌种、主要致病血清型及主要毒力相关基因设计的寡核苷酸探针可特异地识别对应靶基因,重复性好;而针对不同菌株设计的株特异性探针未获得预期检测效果.结论 初步建立猪链球菌基因芯片检测体系,敏感性与特异性高,对于高通量鉴定猪链球菌菌种及其毒力有重要价值.
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猪链球菌2型四川人源分离株ZYH18纤连蛋白结合蛋白基因的克隆和序列分析
目的对2005年猪链球菌2型(Streptococcu5 suis type 2,S.suis 2)四川资阳人源分离株ZYH18纤连蛋白结合蛋白(FBPS)基因进行克隆和序列分析.方法以ZYH18的基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增出纤连蛋白/血纤蛋白原结合蛋白基因片段,克隆于pMD-T18载体,构建成载体pMD-T-fbps,转化到宿主菌TG1中,进行序列测定(GenBank登录号为DQ345444).测序结果与实验室保存的其它7株猪链球菌2型临床分离菌株测序结果及GenBank提交序列AF438158进行编码区基因的同源性比对.结果成功克隆了实验室保存的分离于不同时间和地点的,包括ZYH18在内的8株S.suis2临床分离菌株的fbps基因,并对其编码区基因进行了同源性比对.结论实验室保存的8株菌的FBPS编码区基因同源性高达100%,并不因分离时间和地点的不同而不同;与GenBank提交序列AF438158同源性为99%,存在两个氨基酸的差异.
关键词： 纤连蛋白结合蛋白基因 猪链球菌 同源性比对 序列分析 -
100株猪链球菌的生化检测及药物敏感性分析
目的对2005年7、8月份中国各地分离到的猪链球菌进行血清分型、生化反应检测和药物敏感性分析.方法利用购自丹麦的猪链球菌分型血清进行血清分型,用api-strep生化鉴定条进行生化鉴定,采用微量稀释法进行药物敏感性分析.结果共对100株菌株进行了检测,血清分型均为血清2型,共得到15种生化反应编码,检测的13种抗生素中,100株猪链球菌对青霉素,氨苄西林,头孢噻肟,头孢曲松,头孢吡肟,美罗培南,左旋氟沙星,氯霉素,红霉素,阿齐霉素,克林霉素,万古霉素均敏感,对四环素均耐药.结论2005年7-8月份中国各地分离到猪链球菌均为血清2型,不同菌株间生化反应存在差异,所有菌株对β-内酰氨类药物较敏感.
关键词： 猪链球菌 血清分型 api-strep生化鉴定 微量稀释法 -
一种快速检测患者血液标本猪链球菌方法的研究
目的建立一种快速检测患者血液标本中猪链球菌的方法.方法收集患者血液标本,提取细菌全基因组DNA;根据猪链球菌6个特异基因设计引物,采用PCR技术对这些基因进行检测,并对PCR扩增阳性的基因产物进行序列分析验证,并分析该方法诊断猪链球菌病的特异性和敏感性.结果取唾液链球菌等6种链球菌进行验证,该检测方法的特异性为100%,模拟标本(细菌含量>103个/ml)的敏感性为100%,血培养阳性病人标本的敏感性为100%.通过对90份血培养阴性临床标本的检测,9份PCR结果阳性,序列分析结果证实扩增片段为目的基因.结论该方法灵敏、特异、快速,可直接用于患者血液标本的猪链球菌特异性基因的检测,为猪链球菌感染的早期诊断提供实验室依据.
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人猪链球菌感染的临床实验室诊断研究进展
猪链球菌(S.suis)是一种重要的人兽共患病原菌,可感染人并导致严重的脑膜炎、败血症,甚至引起死亡.自1968年国际首次发现了2型猪链球菌引起人类严重感染的病例以来,国内外又有诸多相关报道.人类在感染该菌的早期并无特异性表现,但病情进展迅速,若不及时诊断并予以干预,死亡率较高.2005年6月至8月在四川省资阳、内江等地区相继暴发人感染猪链球菌病疫情,广泛引起了国内外的关注.由于S.suis不仅给养猪业造成很大威胁,而且严重危害公共卫生安全,对该菌进行准确的早期诊断是控制猪链球菌病流行的关键.目前,针对该病原体的常见实验室检测方法包括微生物检测法、免疫学检测法、分子生物学检测法及动物实验法等.本文将就人感染S.suis的实验室诊断研究进展做一简要综述.
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猪链球菌铁元素吸收及其机理研究进展
铁是生物体生命活动所必需的金属营养元素,几乎所有病原菌感染过程都需要铁,病原菌与宿主之间对铁元素的争夺是感染性疾病发生与发展的核心.干扰和阻断病原菌金属离子吸收转运与调节,有望成为筛选抗菌药物的新靶点,与之相关的一些蛋白被认为是重要的疫苗候选分子.生物信息分析显示猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)菌株存在4个与铁吸收相关操纵子;链球菌金属离子吸收相关的金属离子绑定蛋白和调节蛋白为猪链球菌重要毒力因子和预防性疫苗候选分子.
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猪链球菌2型毒力相关因子及保护性抗原研究进展
猪链球菌是在世界范围内传播的一个重要的人兽共患病原体,可引起猪的脑脊膜炎、肺炎、心内膜炎、败血病、关节炎等症状.在已分离的猪链球菌35个血清型中,猪链球菌2型( SS2)流行范围广.1998年和2005年在中国江苏省与四川省暴发了人感染SS2的疫情,分别引起14人和38人死亡[1].目前已有报道超过700人感染SS2的病例,且主要集中在东南亚[2].因此SS2严重危害着公共卫生安全,已引起了科研人员及公众的广泛关注.
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杆状病毒/哺乳动物基因转移载体应用于活载体疫苗研究的进展
近年,高致病性禽流感、猪链球菌等动物疫病频繁暴发流行,不但对畜牧业生产造成巨大经济损失,而且给人民健康带来严重威胁.因此,如何研制并利用安全、有效的基因工程疫苗对预防和控制人兽共患传染病的发生和流行意义重大.
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猪链球菌2型与宿主细胞的相互作用
猪链球菌2型(SS2 )是一种重要的人畜共患病病原体.SS2先是定殖于猪的鼻咽组织,后引起脑膜炎、关节炎、心内膜炎等.而人一般则是经伤口感染,进而发展成脑膜炎、关节炎、肺炎、中毒休克综合征等.细菌由定殖部位侵入血流,又由血流突破各种屏障结构,期间必然涉及细菌与多种细胞的相互作用,因此细菌与宿主不同细胞的相互作用成了SS2致病机理研究的一个焦点.
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猪2型链球菌毒力因子研究进展
猪链球菌根据菌体荚膜抗原特性的不同,可以分为35个血清型(1-34型及1/2型)[1],其中以2型流行广,对猪的致病性强,其次是1、4、7、9型和1/2型等.猪链球菌2型又称为猪链球菌血清2型或荚膜2型猪链球菌,分类上属于兰氏分类法的R群[2].此菌通常以引起断奶仔猪关节炎、脑膜炎、败血症及支气管炎为特征[3],其还可引起人类感染胸膜炎、败血症等,导致严重疾患,甚至死亡[4-5].猪2型链球菌已成为我国当前人兽共患病的一种重要的新病原菌.
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贵州省一例人感染猪链球菌病例的病原学检测与分析
目的 对贵州省一疑似人感染猪链球菌病患者的血液来源菌株进行鉴定.方法 将患者血液分离菌株接种羊血琼脂平板,经革兰氏染色镜检、血清凝集试验和生化反应后,再用PCR技术检测猪链球菌种特异性基因(16S rRNA)和猪链球菌2型特有的荚膜多糖编码基因(cps2J)以及溶菌酶释放相关蛋白编码基因(mrp)、溶血素基因(sly)和细胞外蛋白因子编码基因(ef).结果 传统方法和PCR技术将病例来源菌株鉴定为猪链球菌2型,PCR鉴定结果显示该菌株的毒力基因cps2J、mrp、sly和Ef均为阳性.结论 贵州省一例人感染猪链球菌疑似病例来源菌株为猪链球菌2型强毒株.
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珠江口西岸地区致病性猪链球菌的分离鉴定与血清型分析
目的 调查珠江口西岸地区致病性猪链球菌血清型的分布情况.方法 从调查地21个猪场内疑似病猪中采集标本,进行细菌分离培养,对疑似猪链球菌阳性的168个菌株以多重PCR方法鉴定血清型.结果 检测到61株致病性猪链球菌,分布于12个区县,其中2型19株,1型3株,7型2株,阳性率分别为31％、4.9％、3.3％.结论 珠江口西岸地区猪链球菌流行广泛,并以2型流行为主,兼有1型和7型.存在较大的动物疫病和公共卫生风险.
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猪链球菌感染性综合征流行因素病例对照研究
1998年7、8月，在江苏省如皋、海安等相邻地区同时发生临床症状相似的病例，该病起病急，病程进展快，病情凶险，病死率高，1999年在上述局部地区又有零星病例发生，对当地的人民健康及社会经济发展造成了极大的危害。为了进一步明确流行因素，为以后该病的防治工作提供依据，以制定更具针对性的对策和措施，我们在进行流行病调查工作中，组织有关市、县(市)防疫站进行了流行因素配对调查，现将结果报告如下：
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严防猪链球菌感染人
重症链球菌感染是指由链球菌感染引起的预后较差的一类疾病的总称,主要指链球菌中毒性休克综合征.人和多种动物均可感染链球菌而发病.由于链球菌的血清群繁多,其感染宿主和致病力也不尽相同,因此所引起的人和动物的疾病也多种多样.其中,由猪链球菌2型引起的人兽疾病是一种重要的人兽共患病.
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江西省表观健康猪群携带猪链球菌状况分析
目的：了解江西省表观健康猪群携带猪链球菌的情况，为有效防控猪链球菌病提供科学依据。方法选取景德镇市、崇仁县为采样点，采集表观健康猪群鼻咽拭子和扁桃体进行猪链球菌病原分离鉴定。结果共采集表观健康猪群鼻咽拭子和扁桃体样本301份，检出2株猪链球菌2型，其毒力基因mrp、sly、ef均为阴性。结论本次调查中江西省表观健康猪携带猪链球菌的带菌率为0.66％。
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一起人感染猪链球菌疫情的处置报告
2007年8月13日,位于玄武区辖区的南京军区总院报告1起人感染猪链球菌疫情,由于各级领导重视,经过处理,疫情得到控制,现总结疫情处理过程中的不足和经验,报道如下.
