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基于DNA条形码的翠云草快速鉴定方法研究
目的:基于卷柏属植物DNA条形码鉴定序列,运行TaqMan探针技术探讨翠云草快速鉴定新方法.方法:本文利用DNA条形码鉴定技术对采集的11种32份卷柏属样本提取总DNA扩增ITS2序列,结合Genbank数据库的34种103条序列综合分析,针对翠云草设计特异引物及探针,运用实时荧光PCR检测技术比较序列扩增荧光信号差异实现翠云草的快速鉴定.结果:在所分析的物种中ITS2序列可将翠云草与其它卷柏属近源物种有效区分,TaqMan探针及引物特异性较好,本研究建立的方法在翠云草的鉴别中具有良好的特异性、重复性及灵敏性,甚至可从低至1 mg的样品中提取DNA得到有效检出.结论:基于DNA条形码鉴定序列变异位点信息,运用高特异TaqMan探针实时荧光PCR检测技术,可实现翠云草真伪快速鉴别,具有中药材市场监管应用前景,将为中药材快速鉴定应用研究提供参考.
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翠云草中1个新的芳基黄酮
研究翠云草Selaginella uncinata全草的化学成分.采用大孔吸附树脂、硅胶、Sephadex LH-20柱色谱以及高效液相色谱等分离方法,从翠云草75％乙醇提取物中分离得到1个黄酮类化合物,根据理化性质和各种波谱技术鉴定该化合物为8-(4-羧基苯氧基)-5,4'-二羟基-7-甲氧基二氢黄酮(1),该化合物为新的芳基黄酮类化合物,命名为翠云草黄酮G.
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翠云草中黄酮类成分的研究
采用大孔吸附树脂、聚酰胺柱、正相硅胶柱、Sephadex LH-20柱色谱以及制备高效液相色谱等分离纯化方法,从翠云草75％乙醇提取物中分离得到9个化合物,根据化合物的理化性质和光谱方法鉴定其结构分别为:滨蓟黄苷(1)、印度荆芥苷(2)、芹菜素-6-C-α-L-吡喃阿拉伯糖-8-C-β-D-吡喃葡萄糖苷(3)、芹菜素-6-C-β-D-吡喃葡萄糖-8-C-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(4)、芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)、2,3-二氢穗花杉双黄酮(6)、4'-甲氧基穗花杉双黄酮(7)、2,3-二氢-4'-甲氧基穗花杉双黄酮(8),2,3,2",3"-四氢-4'-甲氧基罗波斯塔双黄酮(9),化合物1～5为黄酮苷类化合物,并且均为首次从卷柏属植物中分离得到,化合物7为首次从翠云草中分离得到.
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翠莲解毒片质量标准研究
目的:提高翠莲解毒片的质量标准.方法:采用TLC法对处方中的薄荷、翠云草和穿心莲进行了鉴别;用HPLC法测定了方中脱水穿心莲内酯的含量.结果:在TLC色谱中分别检出薄荷脑、翠云草和脱水穿心莲内酯;脱水穿心莲内酯在0.1～1.6μg范围内呈良好线性关系(r=0.9999),平均回收率为98.40%,RSD=1.30%(n=6).结论:定性定量方法简便、专属、准确,能有效地控制翠莲解毒片的质量.
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翠云草中双黄酮类成分研究
目的 研究翠云草中的双黄酮类成分.方法 利用Sephadex LH-20,硅胶等色谱技术进行分离纯化,用UV,IR,NMR,MS等方法确定结构.结果 分离得到5个双黄酮化合物,分别鉴定为穗花杉双黄酮(Amentoflavone,I)、罗波斯塔双黄酮(Robustaflav dimethyl ether,Ⅲ)、2",3"r-二氢-4'-甲氧基穗花杉双黄酮(2",3"-dihydro-4'-O-methyl Amentoflavone,Ⅳ)、7".甲氧基-2,3,2",3"-四氢扁柏双黄酮(7"-O-methyl-2,3,2",3"-tetrahydrohinokiflavone,Ⅴ).结论 化合物Ⅱ,Ⅲ为首次从该植物中分离得到,化合物Ⅳ,Ⅴ为新化合物.
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翠云草中1个新的双黄酮类化合物
目的 研究翠云草Selaginella uncinata全草的化学成分.方法 采用大孔吸附树脂、硅胶、Sephadex LH-20、高效液相色谱等柱色谱方法进行分离纯化,通过NMR、HR-ESI-MS等技术鉴定化合物的结构.结果 从翠云草全草75％乙醇水提取物中分离得到1个新的双黄酮类化合物,鉴定为4',7"-二甲氧基-2",3"-二氢南方贝壳杉双黄酮(1).结论 化合物1为新的南方贝壳杉型的双黄酮类化合物,命名为翠云草双黄酮.
关键词： 翠云草 卷柏属 4' 7"-二甲氧基-2" 3"-二氢南方贝壳杉双黄酮 翠云草双黄酮 双黄酮 -
翠云草中酚性成分的分离与鉴定
目的 研究翠云草[Selaginella uncinata(Desv.)Spring]的化学成分.方法 利用硅胶、Sephadex LH-20、ODS柱色谱及反相制备型HPLC等方法进行分离纯化,根据化合物的理化性质及波谱数据鉴定它们的结构.结果与结论 从体积分数为60%的乙醇提取液中分离得到7个酚性成分.结构分别鉴定为:阿魏酸棕榈酸-16-醇酯(1)、对羟基桂皮酸(2)、对羟基苯乙酮(3)、香草醛(4)、香草酸(5)、丁香酸(6)、对羟基苯甲酸(7).化合物1～3为首次从该属植物中分离得到,化合物1～7为首次从该种植物中分离得到.
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翠云草中酸酯类成分研究
目的 研究翠云草全草的60%乙醇提取物中酸酯类化学成分.方法 分别使用乙酸乙酯、正丁醇对翠云草全草的60%乙醇提取物进行萃取,借助硅胶、sephadex LH-20、ODS柱色谱以及反相制备型高效液相色谱法等现代分离方法对其乙酸乙酯萃取部位进行了分离纯化,利用理化分析以及现代波谱学方法对分离得到的化合物结构进行了鉴定.结果 从翠云草中分离鉴定了5个化合物,分别为(10E,12Z,14E)-9,16-二羰基-10,12,14-三烯-十八碳酸 (1)、金色酰胺醇乙酸酯 (2)、(2E)-2-壬烯二酸 (3)、软脂酸单甘油酯 (4)及β-谷甾醇 (5).结论 化合物1～5为首次从本属植物分离得到,并首次报道了(2E)-2-壬烯二酸 (3)的核磁数据.
关键词： 翠云草 酸酯类成分 结构鉴定 (2E)-2-壬烯二酸 -
翠云草对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化抑制作用研究
目的·研究翠云草对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化的抑制作用,以及可能的机制.方法·108只SD大鼠,随机均分为假手术组、模型组、低浓度药物组和高浓度药物组.模型组、低浓度药物组和高浓度药物组先建立左侧输尿管梗阻模型,低浓度药物组(2 g/kg)和高浓度药物组(4g/kg)给予翠云草提取液持续灌胃14 d.分别于建模后3、7、14 d,每组取9只,制备肾组织切片,通过苏木精·伊红染色(H-E染色)、Masson染色,观察UUO大鼠模型及治疗组肾脏病理组织学改变,以及肾脏纤维化情况.采用免疫组织化学法检测各组大鼠α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β1(TGF-β1)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)在肾组织的表达情况;通过RT-PCR法定量检测α-SMA、TGF-β1和MCP-1 mRNA水平.结果·模型组大鼠术后3d时,肾脏病理改变主要以肾间质小管炎症细胞浸润为主,可见肾小管扩张,肾间质纤维化不明显,肾小球正常;术后14 d时,部分肾小管萎缩、排列紊乱,肾间质可见弥漫性炎症细胞浸润,纤维化程度严重.2个药物治疗组同模型组比较,炎症细胞浸润程度、肾小管的萎缩程度及纤维化程度均较轻.免疫组织化学检测结果显示:α-SMA、TGF-β1和MCP-1均沿肾小管间质、小血管壁分布,术后14d时,模型组染色深,2个药物治疗组的平均光密度均显著低干模型组(均P＜0.05).RT-PCR结果显示,2个药物治疗组肾组织的α-SMA、TGF-β1和MCP-1 mRNA水平均较模型组显著下调(均P＜0.05).结论·翠云草可下调UUO大鼠肾组织α-SMA、TGF-β1和MCP-1的水平,减少炎症细胞浸润,抑制肾纤维化进展.
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翠云草水提液对哮喘大鼠IgE、IL-5的影响
目的 观察翠云草水提液对哮喘大鼠血清IgE、肺组织IL-5水平的影响.方法 取雄性SD大鼠60只随机分为6组,以卵白蛋白(OVA)致敏、激发的方法建立大鼠哮喘模型.用ELISA法测定各组大鼠血清IgE和肺组织IL-5的浓度.结果 模型组IgE、IL-5的含量明显高于正常对照组(P<0.01);与模型组比较,翠云草水提液高剂量可下调血清IgE(P<0.05)和肺组织IL-5水平(P<0.01).结论 翠云草水提液能有效降低哮喘大鼠IgE和IL-5水平,进而可能抑制哮喘发作.
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纤维素酶法提取翠云草总黄酮的工艺研究
目的 研究纤维素酶法提取翠云草总黄酮的佳提取工艺.方法 以翠云草总黄酮含量为指标,分别研究了酶用量、酶解温度、pH值和酶解时间对总黄酮提取率的影响,在此基础上设计了L9 (34)正交实验,确定佳提取工艺.结果 纤维素酶法提取翠云草中总黄酮的佳工艺条件为:酶用量为22 U/g,酶解温度为45℃,pH值为5.0,酶解时间为60min.结论 优化后的提取工艺条件合理可行,为翠云草总黄酮的工业化生产提供理论参考依据.
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翠云草中黄酮及酚性成分研究
目的 研究翠云草Selaginella uncinata (Desv.) Spring全草的60％乙醇提取物中黄酮及酚性成分.方法 对翠云草全草的60％乙醇提取物依次用乙酸乙酯和正丁醇进行萃取,萃取物经硅胶、sephadex LH-20、ODS柱色谱以及反相制备型高效液相色谱法等现代分离方法进行了分离纯化,利用现代波谱学方法对分离得到的化合物的结构进行了鉴定.结果 从翠云草中分离得到4个黄酮及酚性化合物,分别为(2S)2,3-二氢-7′-甲氧基扁柏双黄酮(Ⅰ)、芹菜素(Ⅱ)、3,5-二甲氧基-4-羟基-苯乙酮(Ⅲ)及阿魏酸(Ⅳ).结论 化合物Ⅲ、Ⅳ为首次从本属植物分离得到,化合物Ⅰ、Ⅱ为首次从该种植物分离得到.
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翠云草的生药鉴别研究
目的：：对翠云草进行系统生药鉴别研究，为翠云草的鉴定提供依据。方法：观察药材的性状特征、组织结构和粉末显微特征；采用TLC法以穗花杉双黄酮为对照品定性鉴别翠云草；测定翠云草的灰分、醇溶性浸出物。结果：建立了翠云草药材的性状鉴别、显微鉴别、薄层色谱鉴别方法，初步确定了其总灰分、酸不溶性灰分和醇溶性浸出物的限度标准。结论：为翠云草药材的鉴定和质量评价提供了参考依据。
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翠云草总黄酮对结肠癌HT-29细胞COX-2 mRNA表达的抑制作用
目的:研究翠云草总黄酮对结肠癌HT-29细胞环氧化酶-2(COX-2)mRNA表达的影响.方法:以翠云草总黄酮作用于人结肠癌HT-29细胞,用倒置显微镜观察细胞形态学的变化;并设总黄酮高中低剂量组和阴性对照组共4个组别.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测给药后癌细胞COX-2 mRNA表达的水平,用电泳凝胶成像自动分析系统检测各扩增带的产物含量.结果:与阴性对照组比较,翠云草总黄酮可以在mRNA水平上抑制COX-2的表达,且呈量效关系.结论:翠云草总黄酮能在mRNA水平上抑制COX-2,进而抑制COX-2蛋白质表达,这可能是翠云草抗肿瘤作用的机制之一.
关键词： 翠云草 Ht-29 环氧化酶-2 逆转录聚合酶链反应法 -
翠云草的研究进展
对翠云草的化学成分、药理作用、质量分析、提取工艺4个方面进行综述.结果表明,翠云草含有黄酮类、酚类、甾体皂苷类、酸脂类化合物及挥发油等化学成分.具有抗病毒、抗氧化、抗肿瘤、平喘、祛痰止咳、抗茵等作用.认为目前主要利用薄层色谱法和高效液相色谱法检测穗花杉双黄酮来控制其质量,其总黄酮提取工艺合理可行.
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翠云草化学成分研究
目的 对翠云草化学成分进行研究.方法 采用大孔吸附树脂、聚酰胺柱、正相硅胶柱、Sephadex LH-20柱色谱以及制备高效液相色谱等方法进行分离纯化,根据化合物的理化性质和光谱方法鉴定结构.结果 从翠云草75％乙醇提取物中分离得到10个化合物,分别鉴定为:3,5-二甲基儿茶酚(1)、十七烷酸-2,3-二羟基丙酯(2)、没食子酸辛酯(3)、对羟基苯甲醛(4)、对羟基苯乙酮(5)、大黄素(6)、大黄酚(7)、大黄素-6-甲醚(8),β-谷甾醇(9),β-胡萝卜苷(10).结论 化合物1～4为首次从卷柏属中分离得到,化合物6～8、10为首次从翠云草中分离得到.
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2种卷柏药材中穗花杉双黄酮和罗波斯塔-4'-甲醚含量测定研究
目的 建立同时测定穗花杉双黄酮和罗波斯塔-4'-甲醚含量的方法,并在此基础上比较这2种成分在翠云草和卷柏中的含量差异.方法 采用岛津VP-ODS色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为乙腈-0.2％醋酸水溶液,梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,检测波长为338 nm,柱温为30℃.结果 在此条件下,穗花杉双黄酮和罗波斯塔-4'-甲醚得到完全分离,均在0.600～12.00 μg与峰面积线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率分别为99.8％和97.7％,RSD分别为0.85％和11％(n=6).结论 该含量分析方法操作简单、快速、准确、灵敏度高、重现性好,为卷柏类药材中双黄酮类化合物含量测定提供参考.
关键词： 卷柏 翠云草 穗花杉双黄酮 罗波斯塔-4'-甲醚 含量测定 -
翠云草总黄酮的提取工艺研究
目的:优化翠云草总黄酮的提取工艺,提高翠云草总黄酮的提取率.方法:通过单因素试验,采用紫外分光光度法,以总黄酮得率为指标,分别考察乙醇浓度、提取时间、提取次数和溶剂用量对提取效率的影响,并在此基础上设计L9(34)正交试验,研究翠云草乙醇回流提取法的提取工艺.结果:翠云草总黄酮乙醇回流提取法的佳工艺条件为:用料液比1:35的60％乙醇,加热回流3次,每次1.5h.结论:采用正交设计法对翠云草中总黄酮提取条件优化合理可行,为提高翠云草中总黄酮的提取率提供了实验基础,并为其进一步的工业化生产提供科学的理论依据.
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翠云草的化学成分及药理作用研究概况
翠云草Selaginella uncinata(Desv.) spring又名蓝地柏、绿绒草,系蕨类卷柏科卷柏属Selaginella植物,主要分布于我国广西、广东、福建及西南等地,常作为园林植物和居家盆景.该植物全草均可药用,具有清热利湿、消瘀、解毒、止血等功效[1-2],为民间习用药,已收载于《广西中药材标准》中.近年研究发现,其具有较好的抗肿瘤和抗病毒作用[3].为了促进翠云草的广泛深入研究及合理开发利用,本文就其化学成分及药理作用综述如下.
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两种卷柏属植物对人单核细胞白血病U937细胞的增殖和凋亡影响
目的:研究垫状卷柏、翠云草两种卷柏属植物对体外培养的人单核细胞白血病细胞U937细胞的增殖和凋亡的影响.方法:分别采用95％乙醇对两种植物采用冷浸和热提取两种提取方法,回收溶剂后萃取得乙酸乙酯和石油醚萃取物.采用噻唑兰比色法(MTT)检测不同浓度样品作用于U937细胞24h后的细胞增殖情况,Hoechst33342染色分析细胞形态学变化,Western Bolt检测凋亡蛋白表达情况.结果:MTT法分析表明垫状卷柏、翠云草提取物均对U937细胞的增殖抑制成剂量依赖性关系.其中垫状卷柏热提物效果佳,其乙酸乙酯和石油醚萃取物均有良好抑制效果,乙酸乙酯萃取部位抑制作用更强;Hoechst33342染色发现随着提取物浓度升高,凋亡细胞增多;Western印记分析凋亡相关蛋白,其中Bax蛋白表达量增加,Bcl-2蛋白表达量减少,Caspase-3和Caspase-8蛋白表达量减少.结论:两种卷柏均能有效抑制U937细胞增殖,并且热提总提物抑制效果优于冷漫总提物,其中垫状卷柏热提总提物的乙酸乙酯萃取层初步认为可能是垫状卷柏抗肿瘤的有效部位,其诱导U937细胞凋亡与Caspase依赖性线粒体途径相关.
