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芪卫颗粒对糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin表达影响的实验研究
目的 探讨芪卫颗粒对糖尿病肾病大鼠肾组织足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin表达的影响.方法 随机选取10只健康雄性SD大鼠为正常组,其余30只采用腹腔注射大剂量链脲佐菌素(60 mg/kg)诱导糖尿病大鼠模型,将成模大鼠随机分为模型组、西药组以及芪卫颗粒组,将西药组按缬沙坦10 mmg/(kg·d)灌胃、芪卫颗粒组按生药10g/(kg·d)灌胃,连续给药.于给药第24周检测大鼠血肌酐、血尿素氮及内生肌酐清除率;24周后将大鼠处死,采用PAS染色法将肾组织染色,在光镜下观察大鼠肾组织病理改变;采用western blot法检测肾组织足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin表达情况.结果 与正常组相比,模型组大鼠血肌酐、血尿素氮水平显著升高,内生肌酐清除率及足细胞nephrin表达水平显著下降(P＜0.05);与模型组相比,各给药组大鼠血肌酐、血尿素氮水平明显下降,内生肌酐清除率及nephrin表达水平明显上调(P＜0.05).结论 芪卫颗粒能够上调糖尿病肾病大鼠肾组织足细胞nephrin的表达,减轻足细胞损伤,保护肾功能,延缓糖尿病肾病的发生发展.
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芪卫颗粒改善TGF-β1诱导的肾小球足细胞转分化的作用研究
目的 观察芪卫颗粒对转化生长因子 β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)诱导的足细胞转分化的影响.方法 以体外培养的小鼠肾小球足细胞株为研究对象,以TGF-β1(7.5 ng/mL)刺激足细胞建立转分化模型,分为正常组、模型组、芪卫颗粒组,干预24小时后,进行相关检测.采用CCK-8方法检测足细胞的活力,采用荧光定量PCR方法检测足细胞转分化相关指标Nephrin、Podocin、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和成纤维细胞特异蛋白-1(fibroblast-specific protein1,FSP-1)基因的水平,采用Western blot方法检测足细胞转分化标志蛋白Nephrin、Podocin、α-SMA和FSP-1蛋白表达的变化.结果 与正常组相比,TGF-β1诱导的模型组足细胞Nephrin和Podocin的基因和蛋白表达均减少(P<0.05),α-SMA和FSP-1的基因和蛋白表达均增加,足细胞活力下降(P<0.05);而与模型组相比,芪卫颗粒组足细胞Nephrin和Podocin的基因和蛋白表达均明显上调(P<0.05),α-SMA和FSP-1的基因和蛋白表达均有所下调(P<0.05),细胞活力有所升高.结论 TGF-β1能诱导足细胞发生转分化,芪卫颗粒能明显改善TGF-β1诱导的足细胞转分化.
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芪卫颗粒干预糖尿病肾病小鼠足细胞损伤的作用研究＊
目的：探讨芪卫颗粒干预糖尿病肾病小鼠足细胞损伤的作用机制。方法：28只8周龄KK-Ay小鼠成模后分为模型组和芪卫低剂量组、芪卫中剂量组及芪卫高剂量组，另8只C57BL/6J小鼠设为正常对照组。实验中纪录小鼠一般状况、血糖、24 h尿蛋白定量。治疗10周后检测小鼠肾功能指标血清肌酐及尿素氮，并称取小鼠肾脏，固定后行小鼠肾组织苏木精-伊红（HE）、Masson、过碘酸希夫（PAS）染色，并制作肾母细胞瘤基因（WT-1）免疫组化，结合软件分析计算小鼠肾小球足细胞数。蛋白质印迹法（Western Blot）检测小鼠肾脏中nephrin蛋白表达，实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测nephrin mRNA的表达。结果：与模型组相比，芪卫颗粒治疗10周后小鼠体质量、血糖、24 h尿蛋白定量及血肌酐明显降低，并有效改善肾小球系膜增生等病理损害，保护足细胞数目。芪卫颗粒治疗后的nephrin蛋白表达量及mRNA表达量均显高于模型组。结论：芪卫颗粒可能通过调节nephrin表达而改善糖尿病肾病小鼠足细胞损伤。
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芪卫颗粒调节USF2及其下游信号分子表达对KK-Ay小鼠糖尿病肾病的干预作用
目的:探讨自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠肾组织TGF-β1、USF2、MMP-9、TIMP-1的表达情况和相互关系,以及芪卫颗粒对糖尿病肾病(DN)肾纤维化的干预机制.方法:将SPF级12周龄雄性KK-Ay小鼠60只按血糖值随机分为模型组、芪卫颗粒组、缬沙坦组,20只C57BL/6J小鼠为对照组.24周龄时,行RT-PCR检测肾组织中USF2、TGF-β1的mRNA表达,Western Blot检测TGF-β1、USF2、MMP-9、TIMP-1蛋白表达,免疫组化染色观察TGF-β1在肾脏中的表达及分布情况.并用图像定量分析系统进行统计分析.结果:①与对照组比较,模型组肾组织TGF-β1、USF2、TIMP-1表达明显升高,MMP-9表达明显降低,免疫组化显示模型组TGF-β1在肾小球和肾小管表达均明显增加(P＜0.05).②与模型组比较,芪卫颗粒组和缬沙坦组TGF-β1、USF2、TIMP-1表达降低,MMP-9表达升高(P＜0.05).结论:①USF2正向调节TGF-β1表达,TGF-β1过表达进而促使MMP-9表达降低、TIMP-1表达升高,MMP-9/TIMP-1比例失衡,细胞外基质(ECM)降解减少而沉积.②芪卫颗粒下调KK-Ay小鼠肾组织USF2基因和蛋白表达,负向调节TGF-β1表达,纠正MMP-9/TIMP-1比例失衡,可能是其治疗DN肾纤维化的机制之一.
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芪卫颗粒含药血清通过Caspase12途径减轻高糖环境下肾足细胞损伤的机制研究
目的:观察芪卫颗粒(QWG)含药血清对高糖环境下肾足细胞Caspase12凋亡途径的影响,探讨其保护足细胞损伤的作用机制.方法:将体外培养的条件永生系小鼠足细胞分为正常组,甘露醇组,模型组,QWG高、中、低浓度组.干预24h后,罗丹明-鬼笔环肽染色观察足细胞骨架结构;CCK8法、Annexin V-FITC/PI双染色法检测高糖环境下足细胞活力及凋亡情况;免疫细胞化学检测Caspase12及GRP78蛋白表达变化,Western blot检测足细胞标志蛋白Nephrin水平.结果:QWG含药血清能够增加高糖环境下足细胞活力(P＜0.05,P＜0.01),减少细胞凋亡,改善足细胞骨架结构,增加Nephrin表达(P＜0.05),同时降低高糖环境下足细胞内质网应激GRP78及Caspase12蛋白水平(P＜0.05,P＜0.01). 结论:芪卫颗粒含药血清能够保护高糖环境下足细胞损伤,与内质网应激介导的Caspase12凋亡途径相关.
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芪卫颗粒对KK-Ay小鼠肾组织TGF-β1/Smads信号转导通路的影响
目的 探讨芪卫颗粒延缓糖尿病肾病(DN)肾间质纤维化的分子作用机制.方法 自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠45只,采用高脂饲料喂养制备DN模型.将造模成功小鼠随机分为模型组、中药组[芪卫颗粒20 g/(kg·d)灌胃]、西药组[缬沙坦胶囊10mg/(kg ·d)灌胃],每组15只,另设C57BL/6J小鼠15只作为正常组,连续给药12周.采用免疫组织化学法检测各组小鼠肾组织中转化生长因子β1(TGF-β1)表达,免疫印迹法检测磷酸化Smad2(P-Smad2)、磷酸化Smad3(P-Smad3)、Smad7及整合素连接激酶(ILK)的表达,实时荧光定量PCR法检测ILK mRNA表达. 结果 模型组小鼠肾组织中TGF-β、P-Smad2、P-Smad3、ILK及ILK mRNA表达较正常组明显增加(P＜0.01),Smad7表达明显下降(P＜0.01).中药组及西药组TGF-β1、P-Smad2、P-Smad3、ILK及ILK mRNA表达较模型组显著减少(P＜0.05或P＜0.01),Smad7表达明显增加(P＜0.01).中药组P-Smad3表达较西药组增加(P＜0.05),其余指标两组比较差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 芪卫颗粒通过下调TGF-β1、P-Smad2、P-Smad3、ILK的表达,上调Smad7的表达,影响TGF-β1/Smads信号通路,从而延缓了DN肾脏纤维化的发生发展.
关键词： 糖尿病肾病 芪卫颗粒 肾间质纤维化 TGF-β1/Smads信号通路 -
芪卫颗粒对糖尿病肾病大鼠足细胞CD2 AP表达的影响
目的：探讨芪卫颗粒对糖尿病肾病( diabetic nephropathy,DN)大鼠肾组织足细胞裂孔隔膜蛋白CD2相关蛋白( CD2-associated protein,CD2AP)表达的影响。方法采用数字表法随机选取10只大鼠为正常组,其余大鼠采用腹腔注射大剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)(60 mg/kg)诱导DN大鼠模型,将成模大鼠采用数字表法随机分为模型组、西药组以及芪卫颗粒组,连续给药,动态监测大鼠血糖、体质量、24 h尿微量白蛋白；24周后将大鼠处死,采用免疫组织化学法及蛋白印迹法( Western blotting)检测肾组织足细胞CD2AP表达情况。结果与正常组相比,模型组呈高血糖、低体质量状态(P<0.05),24 h尿微量白蛋白浓度显著升高,足细胞CD2AP表达显著下降(P<0.05)；与模型组相比,各给药组体质量、血糖无明显变化,24 h尿微量白蛋白浓度明显下降,CD2AP表达明显上调(P<0.05)。结论芪卫颗粒能够上调CD2AP在肾组织的表达,降低DN大鼠尿微量白蛋白排泄,延缓DN的发生、发展。
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芪卫颗粒对糖尿病大鼠肾组织晚期糖化终产物的影响
葡萄糖通过非酶促糖化的方式与蛋白质或氨基酸的氨基结合,先形成醛胺类产物,进而形成晚期糖化终产物(Advanced Glycation Endproducts,AGEs)[1].近年研究表明,糖尿病持续高血糖所致的蛋白非酶促糖基化是糖尿病肾病发生发展的重要机制,尤其是AGEs的形成和堆积是糖尿病肾病等慢性并发症形成的关键因素[2].氨基胍作为AGEs形成的抑制剂,在糖尿病动物模型中已证实可对肾脏损害起干预作用[2].以往及本研究表明中药复方芪卫颗粒对实验性糖尿病大鼠肾功能和肾脏病理有明显改善作用[3,4],临床治疗糖尿病肾病也获良好效果[5],但芪卫颗粒是否抑制AGEs的形成尚不清楚,为此本研究观察了芪卫颗粒对糖尿病大鼠肾组织中AGEs的影响.
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芪卫颗粒调节KK-Ay小鼠肾组织USF2表达对肾纤维化的干预研究
目的 探讨芪卫颗粒对自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠肾组织USF2表达的影响及对DN肾纤维化的干预机制.方法 将SPF级12周龄雄性KK-Ay小鼠60只造模后随机分为模型组、芪卫颗粒组、缬沙坦组,20只C57BL/6J小鼠为正常对照组.24周龄时,检测各组血糖、糖化血红蛋白、肾功能(BUN、SCr)、尿蛋白;用光镜和电镜观察肾组织的结构变化,Masson染色观察肾脏纤维化程度;RT-PCR检测肾组织中USF2、TGF-β1的mRNA表达,Western blot检测USF2蛋白表达,免疫组化染色观察TGF-β1、Col-IV、FN在肾脏中的表达及分布情况.并用图像定量分析系统进行统计分析.结果 (1)与正常对照组比较,模型组肾组织中USF2和TGF-β1的mRNA表达明显升高,免疫组化显示模型组TGF-β1、ColIV、FN在肾小球和肾小管表达均明显增加,纤维化程度明显加重,肾功能减退(P<0.05).(2)与模型组比较,芪卫颗粒组和缬沙坦组肾功能和尿蛋白得到改善,肾脏纤维化减轻,USF2和TGF-β1基因及纤维化蛋白水平表达均显著降低(P<0.05).(3)相关分析表明,USF2与TGF-β1呈正相关(r=0.82,P<0.05).结论 (1)USF2正向调节TGF-β1表达,刺激TGF-β1所调节的下游纤维化蛋白ColIV、FN表达增加,导致细胞外基质积聚.(2)芪卫颗粒下调KK-Ay小鼠肾组织USF2基因和蛋白表达,负向调节TGF-β1表达,可能是其治疗DN肾纤维化的机制之一.
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芪卫颗粒对2型糖尿病大鼠肾脏氧化应激和病理的影响
目的:研究芪卫颗粒对2型糖尿病大鼠肾脏氧化应激和病理的影响.方法:先诱导2型糖尿病大鼠模型50只,按照随机数字表法将大鼠分为A组和B组,每组25只,另选取25只正常鼠为对照组;A组给予芪卫颗粒,B组给予a-硫辛酸,均治疗3个月,检测3组血糖(BG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、血脂、肾功能指标、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽氧化物酶(GSH-Px),并观察肾脏的病理变化.结果:A组BG、HbA1c和血脂水平均显著优于B组,差异有统计学意义(P＜0.05);A组肾功能指标与对照组比较无统计学意义(P＞0.05),A组肾功能指标显著优于B组,差异有统计学意义(P＜0.05);A组SOD、MDA和GSH-Px均优于B组,差异有统计学意义(P＜0.05);A组肾小球病理变化显著优于B组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:芪卫颗粒对2型糖尿病大鼠肾脏氧化应激有一定抑制作用,能改善肾功能和病理.
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HPLC测定芪卫颗粒中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量
目的:建立芪卫颗粒中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为Waters Xbrighe C18柱(5μm,4.6mm×250mm);流动相:乙腈-1 g/L甲酸溶液(17∶83);检测波长为260 nm.结果:毛蕊异黄酮葡萄糖苷在43.48～521.70 mg/L浓度范围内,线性关系良好(r=0.998 0),毛蕊异黄酮葡萄糖苷的平均回收率为98.85％(RSD=0.76％).结论:该法快速、简便,结果准确、可靠,可用于芪卫颗粒中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定.
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芪卫颗粒联合雷公藤多苷片治疗2型糖尿病肾病Ⅳ期患者的疗效及对血清VEGF及MCP-1、hs-CRP的影响
目的 探讨芪卫颗粒与雷公藤多苷片联合治疗2型糖尿病肾病Ⅳ期患者的疗效及对血清VEGF及MCP-1、hs-CRP的影响.方法 选取2013年6月至2015年9月我院收治的2型糖尿病肾病Ⅳ期患者114例为研究对象,采用随机数字表法分为对照组与联合组,每组57例.对照组患者在常规治疗的基础上给予雷公藤多苷片治疗,联合组患者在常规治疗的基础上给予雷公藤多苷片联合芪卫颗粒治疗.比较两组患者的临床疗效、血清VEGF、MCP-1、hs-CRP水平以及不良反应发生率.结果 联合组患者的治疗总有效率(91.23％)明显高于对照组(71.93％),差异有统计学意义(P＜0.05);治疗后,两组患者VEGF及MCP-1、hs-CRP水平均显著下降(P＜0.01),联合组患者上述指标水平显著低于对照组(P＜0.01);两组患者不良反应发生率比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 芪卫颗粒联合雷公藤多苷片治疗2型糖尿病肾病Ⅳ期患者临床疗效显著,能明显降低血清VEGF、MCP-1、hs-CRP水平,值得推广应用.
