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莫诺苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠模型红细胞压积的影响
目的：研究莫诺苷对局灶性脑缺血再灌注(MCAO)大鼠红细胞压积(Hct)的影响。方法改良Longa法制备大鼠MCAO模型，造模后分别给予莫诺苷小剂量(30 mg/kg, n=8)、中剂量(90 mg/kg, n=8)、大剂量(270 mg/kg, n=8)和阿司匹林(n=8)连续灌胃7 d，每天1次。腹主动脉采血，全自动血样测试仪检测Hct。结果模型组大鼠Hct较假手术组显著升高(P<0.001)；莫诺苷小、中、大剂量组和阿司匹林组的Hct均比模型组降低(P<0.05)。结论莫诺苷能显著性抑制局灶性脑缺血再灌注引起的Hct升高。
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莫诺苷抑制过氧化氢诱导的SH-SY5Y神经细胞凋亡
目的 研究莫诺苷抑制过氧化氢诱导的神经细胞凋亡作用和机制.方法 培养的人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞加入莫诺苷1 μmol/L、10/μmol/L、100 μmol/L预孵育24 h,加入H2O2 300～500μmol/L作用18 h,检测神经细胞丙二醛(MDA)、线粒体膜电位(MMP)、细胞凋亡.结果 1 μmol/L、10 μmol/L、100 μmol/L莫诺苷显著抑制丙二醛增加,降低细胞膜电位,抑制细胞凋亡.结论 莫诺苷能够通过抑制H2O2诱导的SH-SY5Y神经细胞脂质过氧化,降低细胞膜电位来抑制细胞凋亡.
关键词： 莫诺苷 人神经母细胞瘤细胞系 脂质过氧化 线粒体膜电位(MMP) 细胞凋亡 -
莫诺苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠皮层CD34表达的影响
目的：观察莫诺苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠皮层CD34表达的影响。方法45只健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠分为假手术组，模型组，莫诺苷小、中、大剂量组，每组9只。线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞30 min后再灌注模型。术后莫诺苷小、中、大剂量组予莫诺苷30 mg/kg、90 mg/kg、270 mg/kg每天灌胃1次。7 d后采用免疫组化(n=6)及Western blotting法(n=3)观察缺血侧皮层CD34表达。结果模型组大鼠患侧皮层CD34表达显著升高，莫诺苷大剂量组较模型组显著升高(F>14.865, P<0.001)。结论莫诺苷可能通过上调局灶性脑缺血再灌注大鼠皮层CD34的表达，促进血管新生。
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莫诺苷对SH-SY5Y神经细胞生长的影响及对过氧化氢诱导损伤的保护
目的 研究从中药山茱萸分离提取的有效成分莫诺苷对人神经母细胞瘤株SY5Y生长的影响及对H2O2诱导SH-SY5Y细胞损伤的神经保护作用.方法 对培养的SH-SY5Y细胞加入不同浓度的莫诺苷,以MTT代谢率为指标确定无毒范围以及莫诺苷促进神经细胞生长的佳有效浓度;对培养的SH-SY5Y细胞加入佳有效浓度的莫诺苷,观察MTT代谢率、细胞轴突长度及胞体面积、细胞计数的改变;H2O2 500 μmol/L诱导SH-SY5Y细胞损伤,加入不同浓度的莫诺苷及维生素E,以Western Blotting检测神经生长因子(NGF)的表达.结果 莫诺苷在10～100 μmol/L浓度范围内均可增加SH-SY5Y细胞的存活率;培养的SH-SY5Y细胞分别加入10 μmol/L莫诺苷,与正常对照组相比,莫诺苷组组MTT代谢率升高(P＜0.05),细胞轴突长度显著增长(P＜0.001),胞体面积明显增加(P＜0.01),细胞计数增加(P＜0.05);H2O2损伤后,莫诺苷组NGF的表达明显高于对照组(P＜0.01).结论 莫诺苷对SH-SY5Y细胞的生长有促进作用,并对H2O2诱导的损伤有神经保护作用.
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莫诺苷抑制过氧化氢诱导的SH-SY5Y神经细胞氧化损伤
目的 研究莫诺苷对H2O2诱导的神经细胞氧化损伤的影响.方法 培养的人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞加入莫诺苷(1、10、100 μmol/L)预孵育24 h,加入H2O2 500 μmol/L作用18 h诱导产生氧化损伤,测定细胞内活性氧(ROS)、一氧化氮(NO)和谷胱甘肽(GSH)含量.结果 莫诺苷(10、100 μmol/L)使活性氧的释放分别降低了37%(P＜0.01)、27%(P＜0.05),NO的释放分别降低了31%(P＜0.05)、53%(P＜0.01),莫诺苷(1、10、100 μmol/L)有明显抑制GSH的降低的作用.结论 莫诺苷能够抑制H2O2诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤,有神经保护作用.
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莫诺苷抑制大鼠脑缺血再灌注模型皮层脂质过氧化作用的研究
目的 研究莫诺苷对大鼠脑缺血再灌注皮层脂质过氧化作用的影响.方法 用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,缺血30 min,再灌注72 h.以维生素E(VE)为阳性对照药,采用分光光度法检测脑组织中丙二醛变化.结果 与假手术组相比,模型组丙二醛含量明显增加(P<0.01);与模型组相比,莫诺苷30 mg/kg、90 mg/kg能够降低丙二醛含量(P<0.05),莫诺苷270 mg/kg能明显降低丙二醛含量(P<0.01);VE(35 mg/kg)能显著减少丙二醛的含量(P<0.001).结论 莫诺苷能通过抑制皮层脂质过氧化水平而发挥神经保护作用.
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莫诺苷对二磷酸腺苷诱导兔血小板聚集后血栓素B2的影响
目的 观察莫诺苷对二磷酸腺苷(ADP)诱导兔血小板聚集后血栓素(TX)B2含量的影响.方法 利用酶联免疫吸附剂测定法(ELISA)试剂盒,检测不同条件下ADP 诱导血小板聚集后TXB2的含量.结果 与对照组相比,莫诺苷能显著抑制由ADP 诱导兔血小板聚集后TXB2的升高(P<0.001).结论 莫诺苷可以不同程度抑制ADP 诱导兔血小板聚集后TXB2的生成.
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莫诺苷对大鼠脑缺血再灌注神经凋亡的影响
目的 研究山茱萸有效成分莫诺苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠皮层谷胱甘肽含量及Caspase-3的影响.方法 用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,缺血30 min,再灌注7 d.采用分光光度法检测大鼠皮层谷胱甘肽含量;用Western blot方法检测Caspase-3表达.结果 莫诺苷(270 mg/kg)能显著增加大鼠谷胱甘肽含量,降低Caspase-3表达.结论 莫诺苷能通过增强大鼠皮层抗氧化能力而抑制脑缺血再灌注引起的神经元凋亡.
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莫诺苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注模型脑梗死体积的影响
目的 观察莫诺苷对大脑中动脉阻塞法(MACO)致脑缺血再灌注模型大鼠脑梗死体积的影响.方法 用线柃法制备局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,缺血30 min,再灌注7 d.采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色,检测大鼠的脑梗死体积.结果 与假手术组相比,模型组及给药组出现明显梗死灶;与模型组相比,莫诺苷(90 mg/kg,270 mg/kg)脑梗死体积显著减少,维生素E(35 mg/kg)组脑梗死体积未出现明显改变.结论 莫诺苷可减少局灶性脑缺血再灌注大鼠脑梗死体积,对脑缺血再灌注损伤有保护作用.
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莫诺苷抑制过氧化氢诱导的SH-SY5Y神经细胞钙超载和细胞毒
目的 研究莫诺苷抑制过氧化氧诱导的SH-SY5Y神经细胞钙超载和细胞毒作用.方法 体外培养的人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞分别加入莫诺苷1μmol/L、10μmol/L、100 μmol/L预孵育24 h,加入H2 O2 300～500 μmol/L,作用18 h,检测细胞内游离钙离子浓度、乳酸脱氢酶(LDH)释放率.结果 与未加莫诺苷预孵育的细胞相比,莫诺苷10μmol/L、100μmol/L能抑制神经细胞内游离钙离子浓度增加,莫诺苷1μmol/L、10μmol/L、100 μmol/L能降低LDH的释放率.结论 莫诺苷能够抑制H2O2诱导的SH-SY5Y神经细胞钙超载和细胞毒,有神经保护作用.
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莫诺苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠血管生成素1及其受体Tie-2的影响
目的：观察莫诺苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠血管生成素1(Ang-1)及其受体Tie-2的影响。方法20只健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组，模型组，莫诺苷小、中、大剂量组，每组4只。线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞模型，术后予莫诺苷30 mg/kg、90 mg/kg、270 mg/kg每天1次灌胃。术后7 d采用Western blotting法分析皮层Ang-1及其受体Tie-2的表达。结果模型组患侧皮层Ang-1、Tie-2的表达均比假手术组明显增加(P<0.01)。莫诺苷大剂量组Ang-1、Tie-2的表达较模型组明显提高(P<0.01)，莫诺苷中、大剂量组Tie-2的表达较模型组显著提高(P<0.001)。结论莫诺苷能上调局灶性脑缺血大鼠缺血再灌注皮层Ang-1及受体Tie-2的表达，促进血管再生。
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莫诺苷对大鼠脑缺血再灌注皮层Wnt信号通路转录因子表达的影响
目的研究莫诺苷对脑缺血再灌注7 d患侧皮层Wnt信号通路相关转录因子神经发生素2(Ngn2)、Pax6、Tbr2表达的影响。方法健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组，模型组，莫诺苷小、中、大剂量组，每组3只。线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞模型，造模后3 h予莫诺苷30 mg/kg、90 mg/kg、270 mg/kg每天1次灌胃。Western blotting法分析术后7 d皮层Ngn2、Pax6、Tbr2的表达。结果与假手术组相比，模型组皮层Ngn2表达升高(P<0.05)；与模型组相比，莫诺苷中、高剂量组Ngn2表达明显升高(P<0.01)。模型组皮层Pax6的表达与假手术组无显著性差异，莫诺苷中、高剂量组Pax6表达升高(P<0.05)。各组间Tbr2的表达无显著性差异。结论莫诺苷能增加脑缺血再灌注后皮层Ngn2、Pax6的表达，提示有促进神经发生的作用。
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莫诺苷对脑缺血再灌注大鼠皮层梗死周边区基质金属蛋白酶表达的影响
目的：研究莫诺苷对大鼠脑缺血再灌注3 d皮层梗死周边区基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9表达的影响。方法健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠15只随机分为假手术组(n=3)，模型组(n=3)，莫诺苷小剂量组(n=3)、中剂量组(n=3)及大剂量组(n=3)。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)30 min再灌注模型。术后3 h，莫诺苷各组予莫诺苷30 mg/kg、90 mg/kg、270 mg/kg每天1次灌胃。术后3 d，免疫组化染色观察脑缺血皮层梗死周边区MMP-2、MMP-9表达。结果与假手术组比较，模型组皮层梗死周边区MMP-2、MMP-9表达明显著升高(P<0.01)。与模型组比较，莫诺苷各组MMP-2、MMP-9表达明显降低(P<0.01)。结论莫诺苷能降低大鼠脑缺血再灌注3 d皮层梗死周边区MMP-2、MMP-9的表达，从而保护血脑屏障功能。
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莫诺苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠血管内皮生长因子和成纤维生长因子-2表达的影响
目的：观察莫诺苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠皮层血管内皮生长因子(VEGF)和成纤维生长因子-2(FGF-2)表达的影响。方法25只成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、模型组、莫诺苷小剂量组(30 mg/kg)、莫诺苷中剂量组(90 mg/kg)和莫诺苷大剂量组(270 mg/kg)。采用改良线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)30 min再灌注模型。再灌注7 d后利用蛋白免疫印迹法检测梗死侧皮层VEGF和FGF-2蛋白表达。结果与假手术组相比，缺血再灌注7 d后，各组梗死侧大脑皮层VEGF、FGF-2的表达均有增加(P<0.05)；莫诺苷小、中、大剂量组VEGF表达进一步增加(P<0.05)；莫诺苷大剂量组FGF-2的表达进一步显著增加(P<0.001)。结论莫诺苷可以促进局灶性脑缺血再灌注后VEGF和FGF-2的表达，可能有助于促进缺血性脑损伤后的血管新生。
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莫诺苷的大鼠组织分布
目的 研究莫诺苷在大鼠组织的分布特征.方法 24只雄性SD大鼠随机分为4组,单剂量(30 mg/kg)莫诺苷灌胃给药,分别于给药后5,45,120和360 min股动脉放血处死动物,解剖取组织.采用高效液相色谱-串联质谱联用法测定莫诺苷浓度.结果 大鼠给药5 min即在小肠、胃、脾脏、肝脏和心脏达高值,120m in在脂肪组织中达高值,其余组织均在45 min达到高值,360 min后各组织的药物浓度均降至较低水平.结论 莫诺苷在大鼠体内的吸收和分布较快,药物入血后在体内各组织分布较为广泛,在组织中的消除亦较快,结果提示药物没有组织蓄积趋势.
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济生肾气丸质量标准的研究
目的 建立济生肾气丸的质量标准.方法 采用TLC法对山茱萸药材进行鉴别;HPLC法同时测定莫诺苷、马钱苷与丹皮酚3种成分的含量.结果 山茱萸的TLC鉴别方法简单可行;莫诺苷、马钱苷和丹皮酚与其他色谱峰得到良好的分离,平均回收率分别为98.58％、101.31％和100.17％,RSD分别为1.88％、1.67％和1.55％.结论 该方法简便、准确,重复性好,可用于控制该产品质量.
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健肾颗粒的质量标准建立
目的 制备健肾颗粒剂并建立质量控制标准.方法 原药材经水提,低温浓缩干燥,湿法制粒,检查成品颗粒的粒度、水分、溶化性、干燥失重、装量差异、装量和微生物限度,TLC法对山茱萸、黄芪、丹参、当归与川芎、大黄6味药进行鉴别;HPLC法同时测定莫诺苷、马钱苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量.结果 颗粒剂的粒度、水分、溶化性、干燥失重符合规定.TLC法能定性检出山茱萸、黄芪、丹参、当归与川芎、大黄.HPLC法精密度、稳定性、重复性、准确性良好,莫诺苷、马钱苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷分别在0.054～1.080 μg(r =0.9999)、0.039～0.780 μg(r =0.9999)、0.011～0.220 μg(r=1.0000)范围内线性关系良好.平均加样回收率分别为98.37％(RSD为1.75％)、99.69％(RSD为1.77％)、99.27％(RSD为1.79％)(n=6).结论 制备工艺合理,定性、定量方法准确可靠,可作为健肾颗粒的质量控制标准.
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莫诺苷对过氧化氢诱导PC12细胞损伤的保护作用
目的 研究莫诺苷对过氧化氢诱导PC12细胞损伤的保护作用及其机制.方法 MTT法检测细胞存活率,探索过氧化氢损伤模型,筛选莫诺苷浓度.将PC12细胞分为对照组、模型组、阳性药组及不同浓度莫诺苷组,分别采用MTT及乳酸脱氢酶法检测细胞存活率,采用荧光探针法检测细胞内活性氧以及丙二醛的含量,Western blot方法检测细胞内Bcl 2蛋白表达的变化.结果 过氧化氢诱导PC12细胞损伤明显,与模型组相比,莫诺苷各组PC12细胞存活率显著提升,乳酸脱氢酶漏出量显著降低;莫诺苷能够降低细胞内活性氧水平,减少丙二醛的产生,上调细胞内抗凋亡蛋白Bcl-2的表达.结论 莫诺苷对过氧化氢诱导的PC12细胞具有一定的保护作用.
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六味地黄软胶囊质量标准的研究
目的 建立六味地黄软胶囊的质量标准.方法 采用TLC法对山茱萸药材进行鉴别;采用HPLC法同时测定莫诺苷、马钱苷与丹皮酚3种成分的含量.流动相为乙腈-0.3％磷酸水梯度洗脱,检测波长:240 nm(莫诺苷和马钱苷)、274 nm(丹皮酚).结果 山茱萸的TLC鉴别方法简单可行;莫诺苷、马钱苷和丹皮酚与其他色谱峰得到良好的分离,平均回收率分别为97.29％、97.58％和99.67％;RSD分别为2.30％、1.25％和0.79％.结论 该方法简便、准确,重复性好,可用于控制该制剂质量.
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六味地黄汤水提醇溶部位的成分分析及对小鼠的补肾作用机制研究
目的 研究分析六味地黄汤水提醇溶部位的主要成分及其补肾作用机制.方法 用Hypersile C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-水(27∶73)为流动相,检测波长为236 nm;流速为1.0 mL·min-1;柱温为25℃,用高效液相色谱法测定六味地黄汤水提醇溶部位的主要成分及含量.按照性别和体重将30只小鼠随机分为3组(n=10):正常组、模型组、实验组.实验组按9.75g·kg-1体重灌胃六味地黄汤水提醇溶部位,连续给药9d;在给药第6天,除正常组外,其他各组按50 mg·kg-1体重灌胃氢化可的松,连续4d,建立肾阴虚小鼠模型.第10天,用ELISA法测定小鼠血浆环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)含量,用放射免疫分析法测定小鼠血清促卵泡素(FSH)、雌二醇(E2)及睾酮(T)含量.结果 莫诺苷、獐牙菜苷、芍药苷和马钱苷的线性范围分别在0.24～2.40 μg(r =0.999 6)、0.14～1.38 μg(r =0.999 1)、0.12 ～1.20 μg(r =0.999 1)及0.24 ～2.40 μg(r =0.999 4)内,线性关系良好;这4种成分的回收率分别为(100.22±1.80)％,(100.83±1.94)％,(102.40±1.47)％,(101.40±1.50)％,RSD分别为1.80％,1.92％,1.44％,1.50％.在六味地黄汤水提醇溶部位中按生药量计算,莫诺苷、獐牙菜苷、芍药苷和马钱苷的平均含量分别为0.20％,0.02％,0.06％,0.13％.给药9d后,模型组与实验组cAMP含量分别为(8.20±0.63),(6.90±0.15) nmol·L-1,差异有统计学意义(P＜0.01);模型组与实验组FSH、E2、T含量分别为(0.54±0.10),(0.88±0.04) mU·mL-1;(13.93±0.29),(15.48±0.43) pg·mL-1;(2.23±0.14),(5.63±0.48)ng·mL-,差异均有统计学意义(均P ＜0.01).结论 六味地黄汤水提醇溶部位主要含有马钱苷、莫诺苷、獐牙菜苷、芍药苷,其补肾作用机制可能与其调节cAMP含量及HPG轴中各环节激素水平有关.
