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山茱萸活性成分对 D-半乳糖致衰星形胶质细胞影响的实验研究
目的：研究山茱萸活性成分马钱苷、莫诺苷对 D-半乳糖致衰大鼠星形胶质细胞的保护作用。方法常规方法体外培养乳大鼠大脑皮层星形胶质细胞，采用免疫荧光方法进行星形胶质细胞鉴定；MTT 法对比不同浓度 D-半乳糖对星形胶质细胞的增殖抑制作用，以及马钱苷、莫诺苷对 D-半乳糖致衰星形胶质细胞活力的影响；以超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）为观察指标，观察马钱苷、莫诺苷对D-半乳糖致衰星形胶质细胞的影响；ELISA 法检测胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）、碱性成纤维细胞生长因子（bF-GF）含量变化；Western blot 法检测 Bax、caspase-3、磷酸化细胞外信号调节激酶（p-ERK1／2）、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶／ERK 激酶（p-MEK1／2）的表达水平，以做进一步机制研究。结果马钱苷、莫诺苷组与模型组比较，细胞的增殖能力提高，SOD 含量增加，MDA 活性降低，且差异有显著性（P＜0.05）；马钱苷、莫诺苷组生长因子（GDNF、bFGF）的分泌高于模型组；Western blot 结果表明，D-半乳糖致衰老的星形胶质细胞中 Bax、caspase-3蛋白表达无明显变化，模型组 p-ERK1／2、p-MEK1／2蛋白表达降低，马钱苷、莫诺苷增加 p-ERK1／2、p-MEK1／2蛋白的表达。结论山茱萸活性成分马钱苷、莫诺苷可通过提高 D-半乳糖致衰星形胶质细胞的增殖能力，提高衰老细胞的抗氧化能力，发挥抗衰老作用，其机制可能与 MEK／ERK 介导的信号通路调控有关。
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HPLC法测定山茱萸生品中5-羟甲基糠醛、莫诺苷和马钱苷含量
目的 采用高效液相二极管阵列检测法(HPLC-DAD)同时测定山茱萸生品中3个成分的含量:5-羟甲基糠醛(5-HMF)、莫诺苷和马钱苷.方法 采用Venusil ABS C18色谱柱(250 mm × 4.6 mm,5 μm),以甲醇和水为流动相,梯度洗脱,流速 1 ml·min-1,柱温 30 ℃,检测波长284、240、238 nm.结果 5-HMF 、莫诺苷和马钱苷的峰面积与浓度的线性关系均良好(r≥0.999 6);加样回收率分别为100%、100.62%、100.53%.结论 该方法快速、准确、重现性好,可用于同时测定山茱萸生品中5-羟甲基糠醛、莫诺苷和马钱苷的含量.
关键词： 高效液相二极管阵列检测法 山茱萸 5-羟甲基糠醛 莫诺苷 马钱苷 -
HPLC法测定桂附地黄丸(浓缩丸)中莫诺苷、马钱苷和丹皮酚的含量
目的 建立桂附地黄丸(浓缩丸)中莫诺苷和马钱苷的总量与丹皮酚含量的测定方法.方法 采用高效液相色谱法测定方中酒萸肉中莫诺苷和马钱苷的总量与牡丹皮中丹皮酚的含量;色谱柱为phenomsil C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相:以乙腈为流动相A,以0.3％磷酸为流动相B,采用梯度洗脱,流速1.0mL·min-1,柱温:40℃,莫诺苷和马钱苷的检测波长为240nm,丹皮酚的检测波长为270nm.结果 莫诺苷在2.0223～40.4660μg·mL-1浓度范围内线性关系良好,平均回收率为99.91％,RSD为1.26％(n=6);马钱苷在2.1660～43.3200μg·mL-1浓度范围内线性关系良好,平均回收率为99.40％,RSD为0.84％(n=6);丹皮酚在4.6154～92.3080μg·mL-1浓度范围内线性关系良好.平均回收率为99.63％,RSD为1.20％(n=6).结论 该法能够同时测定三组分的含量,而且简便、快速、准确,可用于桂附地黄丸(浓缩丸)的质量控制.
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畲药安唐胶囊中莫诺苷和马钱苷的含量测定
目的 建立畲药安唐胶囊中莫诺苷和马钱苷的含量测定方法.方法HT6K 采用高效液相色谱法测定安唐胶囊中莫诺苷和马钱苷的含量,以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-0.3%磷酸溶液为流动相,按规定进行梯度洗脱;检测波长为240nm.结果 莫诺苷浓度在5μg·mL-1~40μg·mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系,回归方程y=1324418x+8714,r=0.9998;平均回收率80.54%;R SD=0.88%;马钱苷浓度在5μg·mL-1~40μg·mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系,回归方程y=139022x+14726,r=0.9993;平均回收率80.46%;RSD=0.99%.H T5"H结论 本方法简便、准确、可靠,适用于安唐胶囊中莫诺苷和马钱苷的含量测定.
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HPLC法测定六味地黄膏中莫诺苷和马钱苷含量
目的:建立六味地黄膏中莫诺苷及马钱苷的含量测定方法.方法:采用ZORBAX SB-C1s柱(4.6mm × 150 mm,5μm),流动相为乙腈-0.3％磷酸溶液梯度洗脱;流速1.0 mL/min;检测波长均为240 nm;柱温为40℃.结果:莫诺苷、马钱苷分别在5.5～87.6 μg/mL(r=0.9999),5.4 ～ 85.6μg/mL(r=0.9999)范围内线性关系良好;莫诺苷、马钱苷平均回收率分别为96.7％,91.09％,RSD＜2.0％,供试品溶液在24h内稳定性良好,且此法重复性较好.结论:该方法简便准确,可用于六味地黄膏中莫诺苷及马钱苷的含量测定,以控制六味地黄膏质量.
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莫诺苷的药理药效作用研究进展
从神经保护、降低血液黏度、抗凝血、抗血小板聚集、保护内皮细胞和心肌细胞、抑制黑素形成、促进骨折愈合、抗糖尿病肾病等方面综述了莫诺苷的药理药效作用。通过归纳梳理其机制研究，推测莫诺苷为一种具有心肌细胞和神经保护作用的新型单体化合物。
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HPLC法同时测定六味地黄丸中4种活性成分的含量
目的:建立HPLC法同时测定六味地黄丸中莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷和丹皮酚的含量.方法:采用Phenome-nex Luna C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);以乙腈-0.3％磷酸溶液为流动相,梯度洗脱;流速1 mL/min,柱温35℃;检测波长240 nm(莫诺苷、马钱苷和山茱萸新苷)和274 nm(丹皮酚).结果:4种测定成分分离度良好,莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷和丹皮酚进样量分别在0.390～3.904μg(r=0.9995)、0.297～2.970μg(r=0.9995)、0.136～1.360μg(r=0.9996)和0.531～5.306μg(r=0.9998)范围内呈良好的线性关系;加样回收率分别为97.42％、97.08％、95.40％和100.59％,相应的RSD分别为1.87％、1.14％、2.18％和1.25％.结论:本方法简单易行,准确可靠,可作为六味地黄丸的定量方法.
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RP-HPLC法同时测定山茱萸中莫诺苷和马钱苷的含量
[目的]建立同时测定山茱萸中莫诺苷和马钱苷含量的方法.[方法]采用反相HPLC法和依利特ODS-BP(250 mm×4.6 mm)色谱柱,以甲醇-水为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长为237 nm.[结果]莫诺苷和马钱苷质量浓度分别在0.099 0～0.495 0 mg/mL、0.040 0～0.240 0 mg/mL范围内具有良好的线性关系,相关系数分别是0.999 9、0.999 8,平均回收率分别为97.4％(RSD=1.68％,n=9)、98.6％(RSD=1.30％,n=9).[结论]HPLC法测定山茱萸中莫诺苷和马钱昔的含量,线性关系良好、准确度高、稳定性好、重复性好,可作为该药品的质量控制方法.
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压力溶剂萃取法提取山茱萸环烯醚萜苷工艺的研究
目的 优化压力溶剂萃取法提取山茱萸环烯醚萜苷的工艺条件.方法 采用正交实验法,考察乙醇浓度、压力、温度及时间对环烯醚萜苷得率的影响.结果 佳工艺条件为:90%乙醇,压力90bar,温度60℃,时间20 min.结论 与传统提取方法相比,压力溶剂萃取法节约了时间和溶剂消耗量,具有一定优势.
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归芍地黄丸中山茱萸的定性定量方法研究
目的：：建立归芍地黄丸中山茱萸的定性和定量测定方法。方法：采用TLC对归芍地黄丸中山茱萸进行定性鉴别,并采用HPLC测定山茱萸中莫诺苷、马钱苷的含量。结果： TLC色谱斑点清晰,分离度好,专属性强；莫诺苷对照品在0.010~2.620μg范围内线性关系良好(r =0.9999),平均回收率为102.75%,RSD 为1.40%(n =6)。马钱苷对照品在0.009~2.170μg范围内线性关系良好(r=0.9999),平均回收率为103.59%,RSD为1.10%(n=6)。结论：本方法准确、简单、可行,重复性好,可有效控制该制剂中山茱萸的质量。
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山茱萸饮片与市售配方颗粒的含量对比
目的:以传统汤剂为基准,比较山茱萸中药饮片与市售配方颗粒中指标性成分的含量差异.方法:收集8批合格的山菜萸饮片和A、B、C3个厂家的配方颗粒各5批,采用高效液相色谱(HPLC)法测定山茱萸传统汤剂和配方颗粒中莫诺苷、马钱苷的含量,并计算总合量转移率、出膏率.结果:8批山茱萸传统汤剂的指标性成分总合量均值、转移率均值、出膏率均值分别为2.09％,80.3％,68.7％;3个厂家的配方颗粒指标性成分总合量在0.24％～0.57％之间,理论转移率在20.2％～47.3％之间,出膏率在16.7％～30.0％之间.结论:山菜萸配方颗粒的含量、转移率、出膏率测定结果远低于传统汤剂,二者不具有质量一致性.
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HPLC法同时测定补肾温肺合剂中6种活性成分含量
目的:建立高效液相色谱法同时测定补肾温肺合剂中莫诺苷、马钱苷、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、淫羊藿苷和五味子醇甲6种活性成分的含量.方法:采用Phenomenex luna C18色谱柱(250mm×4.6mm,5.0 μm),以甲醇(A)-0.1％甲酸水溶液(B)为流动相,线性梯度洗脱(0～20min,45％A;20～21min,45％ A→65 ％A;21～30 min,65 ％A;30～35min,65％ A→67 ％A),流速为1.0mL·min-1,检测波长为240nm(莫诺苷和马钱苷)、250nm(五味子醇甲)、254nm(升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷)和270nm(淫羊藿苷),柱温为30℃.结果:莫诺苷、马钱苷、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、淫羊藿苷和五味子醇甲分别在0.013 2～0.264、0.010 4～0.208、0.015 6～0.312、0.011 6～0.232、0.01～0.2和0.01～0.2 mg·mL-1浓度范围内与其峰面积积分呈良好的线性关系,平均回收率(n=9)分别为100.9％、100.5％、101.0％、99.2％、98.2％和102.5％.3批补肾温肺合剂中莫诺苷、马钱苷、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、淫羊藿苷和五味子醇甲的含量范围分别为2.26～2.33、1.12～1.15、2.75～2.91、0.43～0.48、0.31～0.34和0.16～0.19 mg·mL-1.结论:经方法学验证,该研究建立的方法可作为补肾温肺合剂质量控制的有效方法.
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不同来源山茱萸中莫诺苷的含量测定
目的 检测不同来源山茱萸中莫诺苷的含量.方法 采用反相高效液相色谱法,流动相:0.05%磷酸-乙腈(91:9);柱温:25 ℃;流速:1.0 mL·min-1;检测波长:240 nm.结果 各药材莫诺苷含量在16.94～18.66 mg·g-1,其中以河南宛西山茱萸中莫诺苷含量高.在0.25～2.0 mg莫诺苷回归方程为:Y=0.556 6 X-0.228 7(r=0.999 1).结论 不同来源山茱萸中莫诺苷的含量不同.
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高效液相色谱法同时测定归芍地黄丸中4种化学成分的含量
目的 建立高效液相色谱法同时测定归芍地黄丸中莫诺苷、马钱苷、芍药苷和丹皮酚的含量.方法 色谱柱为Waters Symmetry C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.3％磷酸溶液,梯度洗脱,柱温为35℃,流速为0.8 mL·min-,检测波长为240 nm,外标法计算含量.结果 莫诺苷进样量在0.010 48～2.62μg与峰面积线性关系良好(r=0.9999),平均加样回收率为102.8％,RSD为1.4％;马钱苷进样量在0.00868～2.17 μg与峰面积线性关系良好(r=0.9999),平均加样回收率为103.6％,RSD为1.1％;芍药苷进样量在0.007 696～1.15 μg与峰面积线性关系良好(r=0.9943),平均加样回收率为102.3％,RSD为2.1％;丹皮酚进样量在0.018～2.25 μg与峰面积线性关系良好(r=0.9998),平均加样回收率为102.2％,RSD为1.6％.结论 该方法准确、简便、可行、重复性好,可有效控制归芍地黄丸的质量.
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大孔树脂与活性炭富集山茱萸总苷的实验研究
目的:比较大孔树脂与活性炭富集山茱萸总苷的工艺条件及参数.方法:以山茱萸总苷中主要有效成分莫诺苷及马钱素为考察指标,用HPLC法观察大孔树脂及活性炭富集山茱萸总苷的佳工艺条件.结果:山茱萸提取液10ml上大孔树脂及活性炭柱(R25 mm×H300 mm),先用蒸馏水洗脱除去水溶性杂质,再用乙醇梯度洗脱.结果表明以30%及50%乙醇洗脱大孔树脂柱、以30%、50%、70%乙醇洗脱活性炭柱为佳分离工艺.结论:大孔树脂富集山茱萸总苷优于活性炭,前者对莫诺苷和马钱素的洗脱率约为96%,后者约为85%.故大孔树脂可作为相关制剂富集山茱萸总苷的首选.
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总评归一化法优选山茱萸酒蒸炮制工艺
目的:优化山茱萸酒蒸炮制工艺.方法:以山茱萸中莫诺苷、马钱苷、多糖、5-HMF、水溶性浸出物的总评归一值为评价指标,采用正交试验法考察黄酒用量、闷润时间和蒸制时间对炮制工艺的影响,确定酒山茱萸佳炮制工艺.结果:筛选的佳工艺参数为黄酒用量25％,闷润时间2h,蒸制时间4h.酒山茱萸外观色泽为紫黑色有光泽,气味为微有酒香气,炮制品质量稳定.结论:结合酒山茱萸的外观和内在质量,优选得到的酒山茱萸炮制工艺稳定可行,可为更好的控制酒山茱萸的质量提供科学依据.
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不同工艺酒制山茱萸马钱素、莫诺苷含量比较
目的:比较山茱萸炮制前后马钱素、莫诺苷含量的变化.方法:RP-HPLC法.结果:河南不同产地山茱萸饮片不同炮制品中马钱素、莫诺苷的含量比较稳定,生品和酒制品含量有一定差异.结论:炮制对酒制山茱萸马钱素、莫诺苷含量有一定影响.
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正交法优选山茱萸酒炖工艺
目的:优化酒炖山茱萸的炮制工艺条件.方法:采用HPLC法测定以黄酒的加入量、闷润时间、炮制时间三因素进行正交设计L9(34)所得9个样品的莫诺苷、马钱素含量,以两苷的总量来评价酒炖工艺的优劣.结果:酒炖山茱萸的佳工艺为A2B1C2,即净山茱萸肉加20%黄酒,闷润1 h,隔水加热炖6 h,得两苷含量高.结论:炖制时间对两苷的含量影响显著,加酒量次之,闷润时间影响不显著,可为制定酒炖山茱萸饮片的质量标准及炮制工艺提供依据.
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一测多评法测定酒萸肉中5种环烯醚萜苷类成分的含量
目的:建立一测多评法(QAMS)同时测定酒萸肉中5种环烯醚萜苷成分含量,并验证该方法在酒萸肉质量控制中应用的可行性和技术适应性.方法:以马钱苷为内参物,建立其与莫诺苷、獐牙菜苷、马鞭草苷和山茱萸新苷的相对校正因子(RCF),并计算4种成分的含量,实现一测多评;同时采用外标法(ESM)测定酒萸肉中5种环烯醚萜苷类成分的含量,比较两种测定方法的差异,验证一测多评法的可行性.结果:建立的校正因子重现性良好,43批酒萸肉中5种成分分别按2种方法测定,结果基本一致.结论:该研究建立的“一测多评”法可作为一种新的质量评价模式,在缺少对照品的情况下可用于酒萸肉中环烯醚萜苷类成分的质量评价.
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莫诺苷对脑缺血后神经保护作用的分子机制的实验研究进展
近年来,随着脑缺血分子机制研究的进展,在其基础上的新药研发亦迸发出诸多亮点,尤其在目前与细胞凋亡有关的细胞因子、酶类及细胞保护因子等研究日益增多的情况下,引入传统中药主要成分治疗脑缺血已开始取得实际临床意义.笔者认为,挖掘传统中药中具有神经保护作用的有效成分的价值并阐明其分子作用机制,将为其开发成临床治疗脑缺血的新药提供坚实的理论基础.
