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一测多评法测定左归丸中3种环烯醚萜苷类成分的含量
目的:建立以马钱苷为内参物,同时测定左归丸中莫诺苷、马钱苷和山茱萸新苷含量的一测多评法(QAMS).方法:采用高效液相色谱法,Phenomenex C18(250 mm×4.6 mm,5μm)硅胶色谱柱;流动相:乙腈(A)-0.3%磷酸水溶液(B)梯度洗脱;柱温35℃;检测波长(0~65 min,240 nm,检测莫诺苷和马钱苷;66~80 min,218 nm,检测山茱萸新苷).以马钱苷为内参物,建立其与莫诺苷、山茱萸新苷的相对校正因子(RCFS),并进行含量计算,实现一测多评;同时采用外标法(ESM)测定左归丸中3种有效成分的含量,比较一测多评法计算值与外标法实测值的差异.结果:在一定线性范围内,马钱苷与莫诺苷、山茱萸新苷的相对校正因子分别为1.048、1.390.建立的相对校正因子重现性良好,7批左归丸中3种成分的计算值与实测值间无显著差异.结论:采用本研究建立的"一测多评"法控制左归丸的质量是可行的.
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一测多评法与电子眼和电子舌技术相结合优化山茱萸蒸制时间
目的 建立山茱萸药材及饮片的一测多评法(QAMS),并将此法与电子眼和电子舌技术相结合,优选山茱萸佳蒸制时间.方法 以山茱萸药材及饮片为研究对象,采用HPLC法测定没食子酸、5-羟甲基糠醛(5-HMF)、莫诺苷、山茱萸新苷、马钱苷量;通过建立没食子酸、5-HMF、莫诺苷、山茱萸新苷与内参物马钱苷之间的相对校正因子(RCF),计算各种成分的量;运用电子眼和电子舌技术进行颜色与滋味测定,所得数据用主成分分析(PCA)法进行分析;综合分析3种方法所得结果,对山茱萸佳蒸制时间进行优选.结果 被测定的5种成分色谱峰均有良好的分离度,方法精密度、重复性的RSD均小于2％,在室温条件下24 h内稳定性良好,各成分均有较宽的线性范围和良好的线性关系(r≥0.999 6),平均加样回收率为98％～100.1％,RSD均＜2％;在一定线性范围内马钱苷与没食子酸、5-HMF、莫诺苷、山茱萸新苷间的RCF分别为0.560、1.344、1.255、0.972.电子眼和电子舌PCA中,主成分之和分别为94.618％和94.98％,识别指数(DI)分别为98和93,说明山茱萸全部样品能够通过电子眼和电子舌很好地区分开来.综合分析3种方法所得结果,优选出山茱萸佳蒸制时间为4h.结论 通过QAMS分析指标成分量,与电子眼和电子舌技术进行颜色与滋味测定的结合应用,能够优选出山茱萸佳蒸制时间.
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RP-HPLC法同时测定山茱萸萜类制剂中莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸及熊果酸
目的 建立RP-HPLC法同时测定用于干预刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠急性免疫性肝损伤的山茱萸萜类制剂(液体制剂)中莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸及熊果酸5种活性成分,为山茱萸萜类成分及其相关制剂的质量控制提供方法.方法 采用RP-HPLC法,Zorbax SB-C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;以乙腈-添加2 mmol/Lγ-环糊精的0.1％磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长240、360、210 nm;进样量3μL.结果 莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸及熊果酸的线性范围分别为10.42～333.33、23.44～750.00、9.11～291.67、10.42～333.33、13.02～416.67mg/L;供试样品中莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸及熊果酸的平均回收率为95.60％～98.02％,RSD为1.47％～1.89％;重复性试验RSD为1.46％～1.71％;稳定性试验RSD为1.29％～1.76％;6批山茱萸萜类制剂中含有莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸及熊果酸的平均质量浓度分别为669.6～680.2、850.1～869.5、94.1～96.4、164.3～166.1、85.6～87.6 mg/L.结论 该方法简便、灵敏度高、重复性好、回收率高,可用于检测山茱萸萜类制剂中莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸及熊果酸.
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一测多评法同时测定山茱萸配方颗粒中5种成分
目的 建立一测多评法同时测定山茱萸配方颗粒(山茱萸)中5种成分的含有量.方法 该药物80％甲醇提取液的分析采用Wondasil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-0.3％磷酸,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;检测波长240 nm;柱温30℃.以莫诺苷为内标,计算没食子酸、5-羟甲基糠醛、马钱苷、山茱萸新苷的相对校正因子,再测定其含有量.结果 没食子酸、5-羟甲基糠醛、莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷分别在0.012 0 ～0.120、0.026 8 ～0.268、0.074 4 ～0.744、0.058 6～0.586、0.008 6～0.086 μg范围内线性关系良好(r≥0.999 9),平均加样回收率(RSD)分别为103.43％ (1.45％)、103.36％ (1.50％)、104.47％ (0.30％)、102.08％(1.74％)、104.01％ (0.62％).一测多评法所得结果接近于外标法.结论 该方法稳定可靠,可用于山茱萸配方颗粒的质量评价.
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HPLC法同时测定右归丸中3种成分
目的 建立HPLC法同时测定右归丸(熟地黄、肉桂、山药等)中3种成分的含有量.方法 该药物甲醇提取液的分析采用Agilent C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);以乙腈句.3％磷酸为流动相,梯度洗脱;体积流量1 mL/min;柱温35℃;检测波长240 nm(莫诺苷和马钱苷)和218 nm(山茱萸新苷).结果 莫诺苷、马钱苷和山茱萸新苷分别在0.032 4～0.485 5 μg(r=0.999 7)、0.033 9～0.508 5μg(r=0.999 7)、0.007 8 ～0.116 3 μg (r=0.999 9)范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为97.75％、99.49％、97.69％,RSD (n=6)分别为1.10％、1.38％、1.34％.结论 该方法简便、准确、可靠,可用于右归丸的质量控制.
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山茱萸新苷抑制EAE模型大鼠中枢神经系统免疫细胞浸润及VCAM-1表达的研究
目的 明确山茱萸新苷是否可以抑制实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型大鼠中枢神经系统免疫细胞浸润及血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)表达.方法 Lewis大鼠32只,随机分为正常对照组、模型组、强的松组以及山茱萸新苷组,各8只.除正常对照组外,均制作EAE模型.每天评定各组大鼠神经功能缺损症状评分,当症状达到高峰期时处死所有大鼠,比较各组大鼠脊髓炎性病灶数以及VCAM-1 mRNA、VCAM-1蛋白表达.结果 正常对照组、模型组、强的松组以及山茱萸新苷组大鼠第14d神经功能缺损症状评分分别为0分、(3.83±0.98)分、(0.67±0.82)分、(1.67±1.75)分,脊髓炎性病灶个数分别为0个、(8.75±2.23)个、(2.33±1.03)个、(4.83±1.47)个,VCAM-1mRNA的相对表达量分别为(5.602±0.761)、(37.762 ±4.560)、(17.143±1.521)、(28.042 ±3.147),VCAM-1蛋白相对表达量分别为(7.958±2.265)、(22.433±1.829)、(15.725±1.338)、(18.625±0.874).与模型组比较,山茱萸新苷组大鼠神经功能缺损症状评分较低,脊髓炎性病灶个数较少,VCAM-1mRNA相对表达量及VCAM-1蛋白的相对表达量较低(P＜0.05,P＜0.01).结论 山茱萸新苷可以改善EAE模型大鼠神经功能缺损症状,抑制免疫细胞浸润EAE模型大鼠中枢神经系统及中枢神经系统VCAM-1 mRNA及蛋白质表达.
关键词： 大鼠 实验性自身免疫性脑脊髓炎 多发性硬化 山茱萸新苷 血管细胞黏附分子-1 -
山茱萸新苷对EAE中枢神经系统MCP-1表达及CD68阳性细胞浸润的影响
[目的]研究山茱萸新苷对实验性自身免疫性脑脊髓炎（ experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE）大鼠中枢神经系统单核细胞趋化蛋白-1（ monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1）表达及CD68阳性细胞浸润的影响。[方法]制备豚鼠全脊髓匀浆免疫抗原，皮下注射至 Lewis大鼠，建立EAE模型。设正常对照组、EAE组、山茱萸新苷组、波尼松组，每天神经功能评分，待症状达到高峰处死实验动物，用RT-PCR、Western Blot法比较各组实验动物中枢神经系统MCP-1 mRNA及蛋白的表达，免疫组织化学染色法比较各组实验动物中枢神经系统 CD68阳性细胞浸润情况。[结果]正常对照组、EAE组、山茱萸新苷组、波尼松组大鼠MCP-1 mRNA的相对表达量分别为（11.265±2.928）、（401.373±55.398）、（124.987±20.244）、（75.465±7.766），MCP-1蛋白相对表达量分别为（7.458±2.570）、（24.155±1.420）、（19.568±0.863）、（17.458±1.630），CD68阳性指数分别为0%、（41.93±12.25）%、（16.08±8.70）%、（5.38±2.88）%。使用单因素方差分析法，MCP-1 mRNA的相对表达量、MCP-1蛋白相对表达量、CD68阳性指数组间差异显著，均有统计学意义（ F=199.734、66.081、35.565，均P=0.000）。山茱萸新苷组与EAE组在神经功能评分、MCP-1 mRNA的相对表达量、MCP-1蛋白相对表达量、CD68阳性指数表达差异均有统计学意义（ P=0.002、0.000、0.003、0.013）。[结论]山茱萸新苷可改善 EAE大鼠神经功能，抑制EAE大鼠中枢神经系统MCP-1表达及CD68阳性细胞浸润。
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HPLC法同时测定六味地黄丸中4种活性成分的含量
目的:建立HPLC法同时测定六味地黄丸中莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷和丹皮酚的含量.方法:采用Phenome-nex Luna C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);以乙腈-0.3％磷酸溶液为流动相,梯度洗脱;流速1 mL/min,柱温35℃;检测波长240 nm(莫诺苷、马钱苷和山茱萸新苷)和274 nm(丹皮酚).结果:4种测定成分分离度良好,莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷和丹皮酚进样量分别在0.390～3.904μg(r=0.9995)、0.297～2.970μg(r=0.9995)、0.136～1.360μg(r=0.9996)和0.531～5.306μg(r=0.9998)范围内呈良好的线性关系;加样回收率分别为97.42％、97.08％、95.40％和100.59％,相应的RSD分别为1.87％、1.14％、2.18％和1.25％.结论:本方法简单易行,准确可靠,可作为六味地黄丸的定量方法.
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山茱萸中3种环烯醚萜苷的响应曲面优化微波提取及HPLC测定
目的:建立微波辅助提取、高效液相色谱同时测定山茱萸中马钱苷、獐芽菜苷及山茱萸新苷3种环烯醚萜苷的方法.方法:采用响应曲面法优化微波功率、提取溶剂以及料液比等提取条件；应用Agilent TC-C18柱分离,以水和乙腈为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长240nm.结果:佳微波提取工艺为:以体积分数72％的乙醇作溶剂,液料比15 mL/g,在微波功率400W下提取10 min,连续提取两次；3个成分的高效液相色谱峰面积与浓度呈良好的线性关系(r ＞0.9994),加样回收率分别为98.68％、98.24％和98.29％.结论:所建立的微波辅助提取高效液相色谱同时测定方法简便、准确、重现性好,可用于山茱萸药材中3种环烯醚萜苷的同时测定.
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一测多评法测定酒萸肉中5种环烯醚萜苷类成分的含量
目的:建立一测多评法(QAMS)同时测定酒萸肉中5种环烯醚萜苷成分含量,并验证该方法在酒萸肉质量控制中应用的可行性和技术适应性.方法:以马钱苷为内参物,建立其与莫诺苷、獐牙菜苷、马鞭草苷和山茱萸新苷的相对校正因子(RCF),并计算4种成分的含量,实现一测多评;同时采用外标法(ESM)测定酒萸肉中5种环烯醚萜苷类成分的含量,比较两种测定方法的差异,验证一测多评法的可行性.结果:建立的校正因子重现性良好,43批酒萸肉中5种成分分别按2种方法测定,结果基本一致.结论:该研究建立的“一测多评”法可作为一种新的质量评价模式,在缺少对照品的情况下可用于酒萸肉中环烯醚萜苷类成分的质量评价.
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一测多评法同时测定杞菊地黄口服液中4种有效成分的含量
目的:建立以马钱苷为内参物,同时测定杞菊地黄口服液中莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷和丹皮酚含量的一测多评法(QAMS法).方法:采用高效液相色谱法,使用C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈(A)-03％磷酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱,柱温35℃,检测波长240 nm(0～79 min,检测莫诺苷、马钱苷和山茱萸新苷)、274 nm(80～95 min,检测丹皮酚).以马钱苷为内参物,建立其与莫诺苷、山茱萸新苷和丹皮酚的相对校正因子(RCF),并进行含量计算,实现一测多评;同时采用外标法(ESM)测定杞菊地黄口服液中4种有效成分的含量,比较一测多评法计算值与外标法实测值的差异.结果:在一定线性范围内,马钱苷与莫诺苷、山茱萸新苷、丹皮酚的相对校正因子分别为1.048、1.390、0.349.建立的相对校正因子重现性良好,采用一测多评法测定的4批杞菊地黄口服液中各成分的含量范围分别为莫诺苷0.425～0.529 mg· mL-1,马钱苷0.209～0.235 mg· mL-1,山茱萸新苷0.045～0.072 mg· mL-1,丹皮酚0.468～0.573 mg·mL-1;各批样品中4种成分的计算值与实测值间无显著差异.结论:采用本研究建立的一测多评法控制杞菊地黄口服液的质量是可行的.
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中药山茱萸炮制前后特征化学成分的分析
目的:确定可用于分析和鉴别炮制前山萸肉和炮制后酒萸肉的特征成分.建立HPLC法同时测定山茱萸样品中没食子酸、5-羟甲基糠醛(5-HMF)、莫诺苷、当药苷、马钱苷和山茱萸新苷的含量.方法:采用Phenomenex Gemini C18110(A)(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.3％磷酸水(B)为流动相,梯度洗脱(0～ 20 min,7％A;20～ 50 min,7％A→20％A;50～65 min,20％ A),流速1 mL· min-,检测波长240 nm,柱温35℃.将15份山萸肉和10份酒萸肉样品中6种化学成分含量测定数据采用SPSS 10.0软件进行组间t检验统计处理.将酒萸肉中含量较高的4种成分进行雷达图分析.结果:方法学验证结果显示,没食子酸、5-HMF、莫诺苷、当药苷、马钱苷和山茱萸新苷进样量分别在8.174 ～653.92 μg(r =0.999 5),48.12～3 849.6 μg(r =0.999 5),44.92～3 593.6 μg(r=1.0000),9.088～727.042 μg(r=1.0000),41.36 ～3 308.8 μg(r=1.000 0)和8.608 ～688.64 μg(r =0.999 9)范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系;平均加样回收率(n=9)均在97.26 ～ 103.1％之间,RSD均小于2.8％.样品测定分析结果显示,山萸肉和酒萸肉样品中,除当药苷含量无显著差异外,其余5种成分没食子酸、5-HMF、莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷含量均有显著差异.炮制品酒萸肉中没食子酸、5-HMF含量高于生品山萸肉,但莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷含量低于山萸肉.雷达图分析结果,马钱苷和没食子酸含量呈相对稳定分布,莫诺苷和5-HMF呈现相反的变化趋势,莫诺苷含量越低,则5-HMF含量越高.结论:建立的方法符合方法学验证要求.5-HMF和莫诺苷差异显著,可用于鉴别山萸肉和酒萸肉.
