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反相高效液相色谱法测定厌氧菌有机酸代谢产物
建立反相高效液相色谱测定厌氧菌代谢发酵有机酸产物(乙酸、乳酸)的方法并用于测定乳酸菌代谢发酵产物中的含量.反相高效液相方法是一种简单、准确、灵敏的方法,可用于同时定量测定厌氧菌的有机酸代谢产物.
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液体培养基中天然变链素的纯化
目的 从变形链球菌临床株的液体培养基中分离纯化变链素,为进一步从分子水平研究变链素奠定基础.方法 通过抑菌活性检测,从变链临床株中选择出抑菌活性较强的菌株.用氯仿抽提法从该菌株的培养液中粗提变链素,经固相萃取和反相高效液相色谱(RP-HPLC)对粗提物进行纯化.结果 获得变链素活性较强的菌株"1G".从其200 ml液体培养基中粗提出变链素约15 μg,经固相萃取柱洗脱,再经过RP-HPLC 2次纯化,得到有抑菌活性的成分,此为纯化的变链素.结论 变链素分子量小,分离提纯步骤复杂,本实验得到纯化的变链素,为下一步研究变链素的氨基酸序列和基因序列奠定了基础.
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缺血性脑损伤大鼠海马皮层递质氨基酸变化的研究
目的建立高效液相色谱分析法,研究缺血性脑损伤大鼠海马皮层递质氨基酸的变化.方法用邻苯二甲醛-β-巯基乙醇柱前衍生,反相程序洗脱,荧光检测分析实验动物脑组织中的海马、皮层递质氨基酸即氨基丁酸(GABA)、天门冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、牛磺酸(Tau)、甘氨酸(Gly)的含量.结果该方法在50 pmol～2 nmol/L范围内具有良好的线性,线性相关系数平均为0.9997,平均回收率在87.75%～108.53%之间,峰面积变异系数小于4.73%.缺血脑损伤大鼠皮层海马脑区的兴奋性氨基酸明显高于正常对照组.结论为目前缺血性脑损伤功能障碍机理及健脑中药的药理研究提供了快速分析手段.为从神经生化角度揭示多发梗塞性痴呆的发生机制提供了有意义的线索和依据.
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外源性NGF对家兔急性全脑缺血再灌注期间兴奋性氨基酸释放的影响
目的观察外源性神经生长因子(NGF)对家兔急性全脑缺血再灌注期间兴奋性氨基酸释放及家兔生存情况的影响,以探讨NGF对脑神经细胞的保护机制.方法用反相高效液相色谱(HPLC)荧光检测方法,测量急性全脑缺血再灌注损伤模型动物脑脊液中的氨基酸,特别是兴奋性氨基酸含量,并观察实验动物生存情况.结果脑缺血再灌注期间,脑脊液中兴奋性氨基酸(EAA)明显增加(P＜0.01);而外源性NGF可使上述指标明显下降,与对照组有明显差异(P＜0.05和P＜0.01).结论外源性NGF可通过血脑屏障,抑制脑内EAA过度释放,改善缺血再灌注对脑的损害,保护脑细胞,提高动物生存率,在临床脑复苏中有一定应用前景和实用价值.
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RP-HPLC法测定柴胡中角鲨烯含量
目的:建立柴胡中角鲨烯含量测定的高效液相分析方法.方法:采用ODS-C8色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇∶乙腈-40:60,检测波长为203 nm.结果:柴胡药材中角鲨烯含量为0.104 mg/g,在进样量0.2064～6.1920μg范围内呈良好线性关系(r=0.9994),平均回收率为100.78％,RSD为1.13％(n=6),重复性RSD=1.60％,精密度RSD=0.27％.结论:该方法准确可靠,可用于角鲨烯含量测定.
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RP-HPLC测定复方槲皮素片中槲皮素芹菜素的含量
目的:建立复方槲皮素片中槲皮素和芹菜素的含量测定方法.方法:超声提取,C18分析柱,甲醇-0.4%磷酸水溶液(1:1)为流动相,检测波长360nm.结果:此法线形关系良好,平均回收率,槲皮素为101.5%,RSD为1.56%;芹菜素为101.33%,RSD为1.26%.结论:此方法简便,灵敏度高,重复性好,可用于复方槲皮素片的质量控制.
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RP-HPLC法同时测定桂龙咳喘宁胶囊中甘草酸和环磷酸腺苷的含量
目的 建立桂龙咳喘宁胶囊中两种成分甘草酸和环磷酸腺苷含量的测定方法.方法 采用色谱柱:Agilent TC-C18(150 mm x4.6 mm,5μm),流动相:甲醇(A)-0.01 mol·L-1磷酸二氢钾溶液(B),梯度洗脱程序为0 ～12 min,体积分数为10％的A；12～ 30 min,体积分数为70％的A,流速:1.0 mL·min-1,检测波长:250nm,柱温:30℃.结果 环磷酸腺苷和甘草酸质量浓度在2.0～200.0 mg·L-1内与峰面积线性关系良好,平均回收率分别为95.9％和92.7％,RSD分别为2.9％和3.1％(n=3).结论 该方法可作为桂龙咳喘宁胶囊的质量控制方法之一.
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注射用复合维生素冻干粉针中10种维生素的含量测定
目的 研究注射用复合维生素冻干粉针中水溶性维生素的提取方法,分别建立该制剂中6种水溶性维生素和4种脂溶性维生素含量测定的反相高效液相色谱法.方法 水溶性维生素含量测定采用DiamonsilTM C18色谱柱(4.6 mm×20mm,5μm);流动相A为甲醇,流动相B为20mmol·L-1磷酸二氢钾缓冲盐(磷酸调pH值4.0),梯度洗脱;流速1.0 mL·min-1;以214 nm和254 nm为检测波长,双波长检测.脂溶性维生素含量测定采用Tigerkin C18色谱柱(4.6 mm×20mm,5μm);流动相为甲醇-异丙醇(体积比95:5);检测波长235 nm;流速1.0 mL·min-1.结果 各种维生素含量测定方法的线性关系良好,相关系数为0.999 6～1.0000,回收率98.1%～101.9%,RSD为0.5%～1.9%.结论 实现了对亚微乳剂中水溶性维生素的提取分离,含量测定方法简单快速,精密度好,结果准确可靠.
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替硝唑片的人体药代动力学及生物等效性研究
采用反相高效液相色谱法研究替硝唑片在健康人体内的药代动力学及生物等效性.
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应用固相萃取-反相高效液相色谱技术检测水果中的尼索朗
目的 建立固相萃取-反相高效液相色谱技术测定水果中尼索朗的检测技术.方法 采用硅镁吸附剂固相萃取小柱净化样品;C18 250 mm×4.6 mm×5 μm色谱分析柱,流动相:乙腈∶水(70∶30),流速1 ml/min,检测波长225 nm,柱温:30℃.结果 方法的检出限为0.05 mg/kg,回收率为90.4%～93.9%,相对标准偏差为6.15%.结论 该方法具有准确度高,精密度好,能够满足水果中尼索朗的检测要求.
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使用RP-HPLC法测定清脑降压片中阿魏酸含量的效果研究
目的：探讨使用RP-HPLC法测定清脑降压片中阿魏酸含量的效果。方法：使用浓度为60%的乙醇提取清脑降压片中的阿魏酸，测定供试样品溶液的稳定性、精密度及回收率。用阿魏酸标准品建立标准曲线，使用外标法进行含量测定。结果：标准曲线为y=3551.4x+0.848，r=0.9987。阿魏酸的稳定性RSD为1.5%，精密度RSD为O.15%，回收率RSD为1.32%，阿魏酸的平均含量为0.014%。结论：使用RP-HPLC法测定清脑降压片中阿魏酸的含量具有回收率高、稳定性与精密度好等诸多优点，具有较高的应用价值。
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检测重组人源抗人肿瘤坏死因子单克隆抗体甲氨蝶呤残留量的反相高效液相色谱法的建立及验证
目的 建立重组人源抗人肿瘤坏死因子单克隆抗体中甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)残留量检测甲反相高效液相色谱(reversed-phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)法,并进行验证.方法 样品经饱和硫酸铵法沉淀蛋白,取上清液进样检测.色谱柱为Waters/ACQUITY UPLC BEH C18(1.7 μm,2.1 mm× 1OOmm),流动相为乙腈-甲醇-0.054 mol/L磷酸二氢钾缓冲液(体积比6∶2∶92),pH6.5,检测波长302 nm,柱温:30℃,流速:0.25 mL/min,进样体积:10 μL,洗脱时间:15 min.同时验证方法的线性、特异性、准确度、定量限、精密性及耐用性.结果 该方法特异性良好;MTX浓度在4～ 200 ng/ mL范围内线性良好,R2＞0.999;检测限为4 ng/mL;MTX浓度为20.0、50.0、100.0 ng/mL 3个加标样品的回收率分别为102.83％、100.33％、99.23％,3次重复检测结果RSD分别为1.56％、1.50％、0.42％,两位实验员6次检测结果的RSD分别为2.46％、1.27％、1.49％;MTX浓度为50.0 ng/mL的加标样品在流动相pH6.3、6.5、6.7条件下测定结果的RSD为2.02％.结论 本实验建立的方法具有良好的特异性、精密性及准确度,且操作简便,可用于重组蛋白药物研发及生产过程中残留MTX的监测.
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生化丸质量标准的研究
用反相高效液相色谱法分离并测定了生化丸中阿魏酸,建立了该制剂中阿魏酸分离,测定的色谱方法.色谱条件:ODS柱、甲醇--水--冰乙酸(37:62:1V/V)为流动相,检测波长322nm.
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反相高效液相色谱法测定血浆中多索茶碱的浓度
目的建立一种测定人血浆中多索茶碱浓度的反相高效液相色谱法.方法采用内标法,以kromasil C18柱为固定相,甲醇-超纯水(44∶56)为流动相;非那西丁为内标;检测波长为271.5nm;流速为1.3ml/min;柱温为40℃;血浆样品经高氯酸沉淀蛋白后取上清液直接进行色谱分析.结果样品与内标峰面积的比值与浓度间具有良好的线性关系,线性范围在0.102～8.16mg/L;回归方程Y=7.57X-0.054,r=0.99927(n=7),高、中、低3组浓度的回收率分别为98.08%、111.57%和97.55%(RSD均小于5%,n=5).结论该方法是一种简便、快速、准确的定量分析方法.
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反相高效液相色谱法测定前列康胶囊中淫羊藿苷的含量
目的:建立测定前列康胶囊中淫羊藿苷含量的方法.方法:采用RP - HPLC法,色谱柱为Dismonsil C18(250mm×4 6mm,5μm)柱,以乙腈-水(25:75)为流动相,流速1.0mL·min -1,检测波长为270nm,柱温30℃.结果:淫羊藿苷在0.372～1.860μg范围内存在良好的线性关系(r=0.9996),平均回收率(n=6)为99.84％(RSD为0.96％).结论:该方法操作简便,灵敏度高,结果准确可靠,可用于前列康胶囊的质量控制.
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RP-HPLC法测定清眩降压胶囊中芥子碱的含量
目的:采用RP-HPLC法测定清眩降压胶囊中的芥子碱含量.方法:色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶柱(迪马C18,4.16mm×250mm,5μm);流动相:乙腈-0.08mol/l磷酸二氢钾溶液(10:90);检测波长:326nm;流速:1ml/min;柱温:室温.结果:该方法操作简单,专属和重现性强,可有效测定清眩降压胶囊的含量.
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新生儿胎粪中环境内分泌干扰物含量与低出生体重的关联
[目的]研究新生儿胎粪中环境内分泌干扰物(EDs)的含量,并探讨其与新生儿低出生体重问的关联.[方法]上海市某区2006-2007年间出生的新生儿,病例组为88例低出生体重新生儿,对照组为113例正常新生儿.在新生儿娩出后24h内,收集所有胎粪,采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定其5种目标EDs,即双酚A(BPA)、邻苯二甲酸单丁酯(MBP)、邻苯二甲酸单乙基己酯(MEHP)、辛基酚(OP)和壬基酚(4-NP)的含量水平,并分析新生儿胎粪中EDs含量与低出生体重间的相关性,校正混杂因素后评估其健康风险.[结果]超过60%的新生儿胎粪样本均检测到上述5种目标EDs,其中邻苯二甲酸单酯类(MBP和MEHP)的含量高于BPA和表面活性剂类(OP和4-NP);对照组胎粪中的EDs平均含量明显低于病例组.胎粪中MBP和MEHP的含量与新生儿出生体重的降低呈正相关,校正OR值分别达到4.68和3.23.[结论]作为两种常见的EDs,增塑剂(双酚A和邻苯二甲酸酯类)和表面活性剂类在新生儿胎粪中被普遍检出;且宫内期暴露于这些EDs,可能会增加新生儿低出生体重的风险.
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RP-HPLC法同时测定天麻中游离天麻素、巴利森苷和总天麻素
目的 建立同时测定天麻中游离天麻素、巴利森苷和总天麻素的高效液相色谱方法.方法 色谱柱为LUNA C18(2)(4.6mm×150mm,5μm),流动相为甲醇-1％冰醋酸,梯度洗脱,体积流量0.8 mL/min,柱温35℃,检测波长270nm.结果 游离天麻素、巴利森苷和总天麻素的平均回收率分别为99.27％、98.97％和99.22％,RSD分别为1.32％、1.11％和1.72％(n=6).结论 该方法简便、可行,重现性好,可用于天麻药材的质量控制.
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RP-HPLC法测定皱叶凤毛菊中3种有效成分
目的 建立RP-HPLC同时测定皱叶凤毛菊中芦丁、木犀草素、异鼠李素.方法 采用Eclipse XOB-C18(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱;流动相以甲醇和水(含0.04%磷酸)梯度洗脱;检测波长为360 nm;柱温30℃.结果 芦丁、木犀草素、异鼠李素分别在0.465～6.30μg(r=0.999 9),O.345～3.30μg(r=0.999 7),和0.315～3.75μg(r=0.9999)范嗣内呈良好线性关系;平均回收率分别为102.39%(RSD为2.74%,n=5)、100.95%(RsD为3.01%,n=5)、和99.88%(RsD为2.22%,n=5).结论 方法 测定快速,简便、结果 准确、重复性好,3种有效成分可作为皱叶风毛菊的质量控制标准.
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高效液相色谱法测定槲寄生中齐墩果酸的含量
槲寄生作为传统中药有着悠久的历史,我国传统上将它作为祛风湿药物,其味苦、平,归肝、肾经,有祛风湿、补肝肾、强筋骨、安胎作用.用于风湿痹痛,腰膝酸软,胎动不安.以干燥的带叶茎枝入药.近年来国内外对槲寄生的研究发展较快,在传统药物基础上不断发现新疗效和新应用.对槲寄生治疗癌症的研究,国外早已开展并日臻成熟,槲寄生制剂已广泛应用于治疗癌症,并取得了较好的临床疗效.
