TCT联合DNA定量细胞学检测在宫颈病变筛查中的应用

宫颈癌的发病率一直居我国女性生殖系统恶性肿瘤之首位,液基细胞学检查(TCT)是宫颈癌及癌前病变常用的筛查方法.采用液基细胞学检查联合DNA定量细胞学检测,对宫颈病变进行筛查1280例.现报告如下.

淋巴瘤患者HBV感染标志物及其DNA定量的实验室调查与分析

目的 探讨霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤和T淋巴母细胞淋巴瘤患者HBV感染标志物和HBV DNA的表达情况.方法 选取近5年淋巴瘤科1779例住院病人,其中霍奇金淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma,HL) 160例,非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma,NHL) 1590例,弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL) 16例,T淋巴母细胞淋巴瘤(T cell lymphoblasts lymphoma,T-LBL) 13例.健康查体者作为正常对照组(normal control group,NCG),共12890名,男性8450名,女性4440名.采用电化学发光法测定乙型肝炎病毒抗原和抗体;采用TaqMan实时荧光定量PCR方法测定乙型肝炎病毒DNA.结果 霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤和T淋巴母细胞淋巴瘤的HBsAg、HBeAg的阳性率高于显著高于正常对照组;霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤的HBcAb阳性率显著高于正常对照组;霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤和弥漫性大B细胞淋巴瘤的HBsAb阳性率低于正常对照组;说明HBV携带者对HBV的免疫力较低,发生恶性淋巴瘤的风险较大.乙型肝炎病毒具有嗜淋巴细胞和嗜肝细胞的特性,淋巴瘤患者HBsAg携带率是正常对照组的4.1 ～10.9倍;霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤患者HBV DNA的阳性率是正常对照组的2.2 ～8.3倍.结论 HBV感染与淋巴瘤的发生具有很强的相关性,患者血清的HBV抗原、抗体和DNA水平可能是淋巴瘤患者致病和HBV再激活的重要因素.对于用化疗药物或免疫抑制剂治疗的淋巴瘤患者,应定期对其肝功能和乙肝标志物进行检测.若出现肝功异常或HBV再激活等情况,应立即评估患者病情,及时调整治疗方案.

SYBR greenⅠRQ-PCR定量检测DNA方法的改良与建立

目的探讨用改良SYBR greenⅠ实时定量PCR(RQ-PCR)技术消除引物二聚体(PDs)对定量分析的影响,建立准确的定量检测DNA含量的方法.方法以β-actin 为目的基因,通过对扩增产物和PDs熔解曲线的分析找出各自的解链温度(Tm),选择在高于PDs Tm但低于目的片段 Tm的温度时检测荧光信号,建立改良SYBR greenⅠRQ-PCR方法.结果该法可消除PDs对SYBR greenⅠRQ-PCR的影响.用此法构建所得标准曲线斜率为-3.178 866,相关系数为-0.980 535,PCR反应动力学范围达5个log值(102～106);精确性检测中,DNA含量实测值与预测值的差异无统计学意义(P>0.05);稳定性检测中,3种不同浓度标本的批内变异和批间变异分别为1%、3%、2%和2%、4%、4%.结论改良SYBR greenⅠRQ-PCR可有效消除PDs对定量分析的影响,对目的基因DNA拷贝数进行PCR反应线性范围广、敏感性、精确性和稳定性好的定量检测.是一种简便实用的DNA定量检测的方法.

乙肝两对半模式与乙肝病毒DNA定量的相关性分析

目的:研究分析乙肝两对半和乙肝病毒DNA定量相关性,给临床治疗乙肝提供依据.方法:2012 ～2014年我院接收了240例疑似乙肝病毒患者,对他们进行了乙肝病毒HBV-DNA含量测定,使用ELISA法两对半指标测试,对检测的结果进行探讨分析.结果:125例HBV-DNA呈阳性,占52.08％;115例HBV-DNA呈阴性,占47.92％.定量为5.0×102IU/ml～ 5.0×108IU/ml.125例HBV-DNA阳性标本中,小二阳14例阳性,小三阳35例阳性,大三阳76例阳性.结论:患者检测结果中HBeAg与HBV-DNA拷贝数呈正相关性,是临床治疗乙肝的重要依据,能够控制乙肝病毒的传染.

血清DNA定量及基因甲基化状态检测在卵巢上皮性癌诊断中的应用

卵巢恶性肿瘤是病死率高的女性生殖系统肿瘤,其中90%为卵巢上皮性癌(卵巢癌),而70%的患者诊断时已达Ⅲ期或Ⅳ期,5年生存率仅为15%～20%[1].因此发现新的既敏感又特异的肿瘤标志物,对卵巢癌的早期诊断、提高生存率具有重要意义.近年的研究发现,作为表观遗传的主要方式之一,DNA异常甲基化是肿瘤发生的早期事件,可早于基因及其表达产物的改变[2].而且,肿瘤患者血清DNA含量明显升高,虽然其来源尚未十分明确,但其具有与肿瘤DNA类似的遗传学和表观遗传学改变[3].因此,血清DNA的异常甲基化用于肿瘤的早期诊断具有明显的优势和极大的潜力.本研究通过定量检测卵巢癌患者血清DNA含量,以及基因EGFLAM、CDKN2A和LSM2的启动子区胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤二核苷酸岛(CpG island,CGI)甲基化状态,探索新的可用于辅助卵巢癌早期诊断的血清DNA甲基化标志物.

乳腺肿瘤增殖细胞核抗原与DNA定量的关系

目的用单克隆抗体对乳腺肿瘤细胞的增殖细胞核抗原PCNA进行免疫组化标记,并与细胞内DNA定量,方法直方图周期分析加以比较.结果 PCNA阳性细胞的分布在良性肿瘤及各级乳腺癌不同,其量的表达随恶性程度的增高而增高.经X2检验,P＜0.025,差异显著.结论 PCNA中度和高度表达组的DNA含量及异倍体率高于低表达组(P＜0.05),但不是明显递增,而是在中度表达组中趋于高.

乙型肝炎病毒阳性患者的HBV-DNA、乙肝两对半和血清酶ALT测定结果关系

目的 探讨乙肝病毒DNA(HBV-DNA)检测与乙肝两对半检测及血清酶谷丙转氨酶(ALT)测定的关系.方法 方便选择该院在2014年10月—2016年10月期间收治的177例乙肝病毒阳性患者作为研究对象,采集患者的血清测定HBV-DNA含量、乙肝标志物及血清酶ALT值,并对其进行统计学分析.结果 以HBsAg+、HBcAb+患者的HBV-DNA定量总阳性率(38.7%)为参考值,大三阳(HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+)患者的HBV-DNA定量总阳性率为95.2%,与参考值的差异有统计学意义(P<0.05),小三阳(HBsAg+、HBeAb+、HBcAb+)患者的HBV-DNA定量总阳性率为39.7%,与参考值的差异无统计学意义(P>0.05);并且大三阳与小三阳患者HBV-DNA定量阳性率间的差异有统计学意义(P<0.05);患者血清ALT含量在HBV-DNA量的不同范围内有明显变化,且差异有统计学意义(P<0.05).结论 患者HBV-DNA量与乙肝两对半检测结果及血清酶ALT含量有相关性,对乙肝患者的病情诊断具有重要价值.

荧光定量PCR检测生殖道内沙眼衣原体感染的应用

目的 评价DNA定量测定技术在生殖道衣原体感染诊断中的应用价值.方法 比较荧光定量DNA测定与传统检测手段对衣原体感染的检测结果.结果 用荧光定量PCR法测定DNA来检测沙眼衣原体(CT)感染,其敏感性和特异性均比传统的方法高.结论 CT-DNA定量测定不宜用作短期判愈,在沙眼衣原体诊断中具有巨大的潜力.

标准曲线变动性的不确定度分量评定

目的:以实时荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒核酸载量实验为例,尝试性评定临床实验室中标准曲线变动性的不确定度分量.方法:对4个乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(DNA)定量检测系列标准品重复测定5次,取各标准品的Ct均值对标准品浓度的对数值求回归直线,进而测定并计算高、中、低值血清样本的DNA载量及其标准曲线变动性的不确定度分量.结果:高、中、低值血清样本浓度取对数后的标准曲线变动性的标准不确定度分量量分别0.079、0.040和0.07.结论:标准曲线变动性的不确定度分量和标准品的数量及标准品重复测量次数相关;和待铡样本浓度及其重复测量次数相关.

78例HBV患者血清标志物不常见模式与HBV DNA的对比分析

目的 探讨乙型肝炎病毒感染的不常见模式与HBV DNA拷贝数之间的关系.方法 日常ELISA法检测获得HBV标志物特殊结果的样本,经发光免疫确认结果完全一致的78例样本,以荧光定量检测(FQ-PCR)技术测定其HBV DNA,并对结果进行统计学分析.结果 在78例不常见模式里,20例13阳性的HBV DNA检出率为100%,平均载量为7.546×107;7例123阳性HBV DNA的检出率为100%,平均载量为6.322×105;15例1235阳性HBV DNA的检出率为86.7%,平均载量为6.905×105;13例1245阳性标本中HBV DNA检出率为69.2%,平均载量为1.299×104;14例125阳性的HBV DNA的检出率为57.1%,平均载量为2.292×104在少见乙肝阳性模式中,以HBeAg阳性的HBV DNA载量高,而即使是有抗体产生的标本,仍然有复制水平中等的HBV DNA阳性标本,所以建议临床医生应根据HBV DNA结果作出客观的临床解释.

血浆可溶性E-选择素和P-选择素与慢性乙型肝炎的关系

选择素是细胞黏附分子的一种,近年来发现与许多疾病密切相关.选择素与慢性肝病之间的关系也越来越受到人们的重视,为了探讨可溶性E-选择素(sE-selectin )和可溶性P-选择素(sP-selectin)在各型慢性乙型肝炎患者的含量变化,我们动态检测了慢性乙型肝炎60例患者外周血sE-selectin和sP-selectin的含量,并分析其与血清乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)定量的关系,现报道如下.

乙型肝炎病人血清HBV DNA水平与血清标志物的关系

目的研究乙型肝炎病人血清标志物与HBV DNA的关系.方法血清HBV DNA定量检测应用FQPCR法,抗原、抗体检测应用ELISA法.抗原、抗体分别与DNA定量进行相关性分析.结果HBeAg的OD值与DNA定量呈正相关(P＜0.001),HBsg的OD值与HBV DNA定量不相关(P＞0.2),抗-HBe与DNA定量呈负相关(P＜0.001).结论血清HBeAg的OD值可很好反映体内HBV的复制程度,HBsAg的OD值与病毒复制程度无关.HBeAg转化为抗-HBe后病毒复制水平下降.

乙肝病毒DNA定量的数值越高肝病就越严重吗

e抗原阴性和阳性慢性乙型肝炎患者血清HBVDNA定量与肝组织病理学关系

目的 研究HBeAg阴性和阳性慢性乙型肝炎(以下简称慢乙肝)患者血清HBV DNA定量与肝组织炎症活动度及纤维化程度的关系.方法 选取慢乙肝患者68例,行肝穿刺病理检查,并检测血清HBV DNA定量,按照HBeAg阴性和阳性分组,进行相关性检验.结果 HBeAg阴性患者血清HBV DNA定量与肝组织炎症活动度及纤维化程度之间呈明显正相关,r分别为0.706、0.689,P均小于0.05;HBeAg阳性者血清HBV DNA定量与肝组织炎症活动度及纤维化程度之间均无相关性,r分别为-0.119、-0.096,P均大于0.05.结论 血清HBV DNA定量可作为HBeAg阴性慢乙肝患者肝组织损伤程度的预测指标之一.

胸水中肺腺癌细胞DNA定量检测的临床病理学意义

目的探讨DNA定量检测在胸水肺癌细胞病理学诊断中的应用价值,并为肺癌伴胸水病例选择性扩大手术指征提供依据.方法我院临床诊断为肺癌伴胸水的患者50例,制备常规胸水涂片,进行改良Feulgen DNA染色,应用2000型癌细胞定量检测系统测定DNA主峰质量、平均DNA质量、DNA指数(DI)、DNA倍体类型和细胞周期等参数.结果本组患者病理学诊断均为腺癌,78%(39/50例)在胸水中找到癌细胞,其中8例原先诊断为核异型,通过DNA测定确诊,阳性率提高16%.常规细胞病理阳性率为62%,灵敏度为79.5%,特异度为100%;DNA定量检测阳性率为78%,灵敏度及特异度均为100%(x2=6.13,P＜0.05).癌细胞阳性组平均DNA质量为(18.29±1.48)pg,DI为1.45±0.35,5倍体超过率为(6.00±10.54)%;癌细胞阴性组平均DNA质量为(7.03±1.75)pg,DI为0.83±0.15,5倍体超过率为(0.12±0.29)%;两组的差异均有显著性(P＜0.05).结论胸水细胞DNA检测有助于提高肺癌细胞病理学阳性率,可为渗出性胸水(无癌细胞)的病例选择性扩大手术指征提供依据.

沉淀浓缩检测HBV DNA含量在乙型肝炎诊治中的临床价值

目的通过沉淀浓缩法检测HBV DNA,探讨HBV DNA含量的临界值及其在乙型肝炎诊治中的临床价值.方法28例患者以血清标志分为三组:HBsAg、HBeAg、抗-HBc IgG、抗-HBc IgM阳性(大三阳)患者2例,HBsAg、抗-HBe、抗-HBc IgG、抗-HBc IgM阳性(小三阳)患者22例,HBsAg、抗-HBc IgG阳性、抗-HBc IgM阳性患者4例,肝功能均有异常,且HBV DNA阴性的患者标本,经病毒裂解、核酸沉淀后用75%乙醇抽提,离心后烘干沉淀,加入沉淀溶解液,将患者血清处理后进行扩增.结果28例抗-HBc IgM阳性、HBV DNA定量阴性的患者血清经沉淀处理后:小三阳患者22例,19例HBV DNA定量阳性;大三阳患者2例,HBV DNA定量均为阳性;HBsAg、抗-HBc IgG阳性患者4例,HBV DNA定量2例为阳性.HBV DNA定量大值为3.7×103拷贝/L,小值为4.5×102拷贝/L,平均值为2.1×103拷贝/L.结论对于抗-HBcIgG阳性、抗-HBc IgM阳性,肝功能有不同程度异常的乙型肝炎患者,HBV DNA若为阴性则应对其血清标本进行沉淀浓缩,再检测其HBV DNA含量.同时应降低HBV定量临界值的下限,并提高HBV定量检测试剂的灵敏度,这对慢性乙型肝炎的诊治具有重要临床价值.

EB病毒DNA定量测定与鼻咽癌“中国2008TNM分期”的关系

[目的]探讨血浆EB病毒DNA定量测定与鼻咽癌“中国2008TNM分期”的关系.[方法]收集2008年8月至2009年9月在中山大学肿瘤防治中心首诊为鼻咽癌的患者721例,按鼻咽癌“中国2008TNM分期”标准进行分期.治疗前行血浆EB病毒DNA定量测定,分别计算T分期、N分期、M分期及临床分期的EBV-DNA拷贝数.[结果]鼻咽癌患者血浆EBV-DNA拷贝数与鼻咽癌中国2008的T分期、N分期、M分期及临床分期呈正相关关系,差异有显著性(P＜0.01).即鼻咽癌TNM分期越晚,患者血浆中EBV-DNA拷贝数越高.[结论]首诊鼻咽癌患者治疗前的血浆EBV-DNA拷贝数与鼻咽癌“中国2008TNM分期”有显著相关性,可作为评估鼻咽癌临床分期的一种辅助性分子生物学指标,值得临床推广应用.

定量PCR检测血清中乙型肝炎病毒DNA及其意义

目的检测血清中乙型肝炎病毒DNA拷贝数,并了解HBV感染的不同血清学指标组合相应的HBV DNA含量分布,以指导临床.方法采用定量PCR和定性PCR方法,检测216份不同临床类型血清标本的HBV DNA,再用ELISA方法测定HBV-M,统计不同免疫指标组合的HBV DNA平均含量.结果病毒量分为高、中、低三度,大于107拷贝mL-1为高滴度:107～105拷贝mL-1为中等滴度;105拷贝mL-1以下为低滴度.60例HBsAg(+)HBeAg(+)HBcAb(+)血清,HBV DNA全部阳性,平均含量为1.9×108拷贝mL-1.51例HBsAg(+)HBeAb(+)HBcAb(+)血清,HBV DNA平均含量为5.4×106拷贝mL-1;33例HBsAg(+)HBcAb(+)血清,HBV DNA平均含量为7.5×105拷贝mL-1;114例HBsAb(+)HBeAb(+)HBcAb(+)血清,HBV DNA平均含量为1.8×105拷贝mL-1.定性和定量PCR阳生率分别为59.3%和61.6%.两种方法相对符合率为94.5%.结论定量PCR可真实反应HBV感染、复制及病程变化,对乙型肝炎临床诊断及治疗均有较大的指导意义.

法医学组织病理切片DNA的实时荧光定量分析

目的:运用TaqMan探针实时荧光定量扩增法,对法医学病理切片进行DNA定量分析,探讨切片组织类型、保存时间对DNA基因组的质量影响.方法:取14例尸检7个年龄段的新鲜组织样本,制作脑、心、肝、肾、脾、肺、肠等7类组织病理切片.以2个7阶拉丁方实验设计,将切片随机分组保存7d、14 d、30d、90d、180 d、360 d、720 d.用硅珠法提取切片DNA,实时荧光PCR进行DNA定量.结果:同一类型组织的不同保存时间的切片DNA含量存在差异(P＜0.01),保存1月以内的切片DNA含量下降不显著,半年以上的样本DNA含量下降明显；同一保存时间的不同组织类型之间的DNA含量存在差异(P＜0.01),肺、肝、肾三种组织切片DNA含量相对较高；身源年龄组之间差异不显著(P＞0.6).结论:法医学病理组织切片DNA含量较低,为低拷贝模板,组织切片保存时间、组织类型是影响DNA质量的重要因素.

荧光定量PCR检测生殖道内沙眼衣原体感染的分析

目的:评价DNA定量测定技术在生殖器衣原体感染诊断中的应用价值.方法:比较DNA定量测定与传统检测手段对衣原体感染的检测结果.结果:用DNA定量测定法检测衣原体感染,其敏感性和特异性均比传统的方法高.定量测定结果显示,衣原体感染者高2×108copy/ml,低2×102copy/ml.结论:CT DNA定量测定标本取材要求不是很严格,不宜用作短期判愈,在CT诊断中有巨大的潜力.