杜仲药材特异性PCR的鉴定方法研究

目的:利用杜仲药材及其混伪品的rDNA-ITS序列差异设计DNA特异引物,实现杜仲药材的快速分子标记鉴定.方法:从NCBI数据库下载杜仲药材及其混伪品的rDNA-ITS序列,比对获得差异DNA片段,设计特异性引物,优化PCR扩增条件和检测方法.结果:扩增产物经琼脂糖凝胶电泳和荧光反应检测,杜仲药材能扩增400bp的鉴定条带,加入SYBR Green Ⅰ染料后在紫外光下有绿色荧光,而其混伪品不具特异条带和绿色荧光.结论:特异性PCR能有效鉴别杜仲药材及其混伪品,通过条件优化显著缩短PCR扩增时间,荧光染料检测能更直观显示鉴定结果,为杜仲药材的快速鉴定提供了新的思路和方法.

杜仲饮片HPCE指纹图谱的研究

目的:建立杜仲饮片HPCE指纹图谱分析方法,并对杜仲及其炮制品的指纹图谱进行比较.方法:采用高效毛细管电泳法进行色谱分离,以60 mmol/L硼砂-20 mmol/L磷酸二氧钠-10％甲醇(pH =10.0)为运行缓冲液,分离电压为20 kV,波长为210 nm,以松脂醇二葡萄糖苷为参照物,测定其指纹图谱,并作模糊聚类法分析和相似度评价.结果:初步建立了以10个共有峰为特征指纹信息的杜仲饮片HPCE指纹图谱；发现少数杜仲饮片的指纹图谱有一定差异,生品与其炮制品的指纹谱中共有峰相对峰面积差异显著.结论:该方法准确可靠,重现性好,可作为杜仲饮片内在质量评价的依据.

杜仲叶中黄酮的提取、检测方法研究进展

综述近年来杜仲叶中黄酮的提取方法、提取条件、黄酮总含量的检测方法,同时对各提取方法和检测方法进行评价,为黄酮提取分离的深入研究提供参考.

杜仲化学成分与药理研究进展

本文对近年来杜仲化学成分与药理研究的进展作一综述,并对其开发利用前景进行展望.

基于指纹图谱和化学计量学技术筛选张家界产杜仲的标志性成分

目的:筛选张家界产杜仲区别于其他产地杜仲的标志性成分.方法:采用HPLC法研究不同产地杜仲的指纹图谱;采用偏小二乘-线性判别以及竞争自适应采样法分析张家界杜仲和其他产地杜仲的差异性成分.结果:得到了40批不同产地杜仲指纹图谱,并筛选出张家界杜仲区别于其他地区杜仲的4个标志性色谱峰,其中3个峰鉴定为京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷,另1个为未知的木质素类化合物.结论:采用指纹图谱和化学计量学技术能较好地筛选出张家界产杜仲区别于其他产地杜仲的标志性成分,为张家界杜仲申报地理性标志药材提供数据基础.

贵州栽培杜仲表型性状与SCoT分子标记的遗传多样性分析

目的:研究贵州栽培杜仲的表型特征及遗传多样性.方法:综合运用表型差异分析与SCoT分子标记方法对贵州栽培的40份杜仲进行遗传多样性分析.结果:贵州栽培杜仲表型多样性指数高的是新生小枝上芽数,为2.0638,低的是新生小枝上叶片数,为1.7084;基于各样本间的表型差异,40份杜仲样本可聚为4类.10条SCoT引物扩增出76条带,其中多态性条带50条,多态位点百分率为65.79％;Nei's遗传多样性指数(H)平均值0.1937,Shannon's多态性指数(I)平均值为0.2832,种群间遗传分化系数(Gst)为0.1733,种群间基因流(Nm)为2.3848;基于遗传一致度,4个种群可聚为2类.结论:贵州栽培杜仲不同种群的遗传多样性差异较小;种群间存在一定的遗传分化,但遗传分化主要存在于种群内;种群间基因交流频繁,有利于该物种的扩展;种群间表型差异聚类和SCoT聚类结果相似,均与地理位置有一定的相关性,为种质资源的鉴定打下良好基础.

贵州杜仲的生态适宜性区划分析

目的:进行杜仲生态适宜性区划,为其生产布局和种植规划提供科学依据,也为贵州杜仲人工规范化种植基地的选取和优质原料收购区域的确定提供参考.方法:在对贵州省14个杜仲主产地资源调查的基础上,获取了松脂醇二葡萄糖苷含量及生态因子数据,应用空间分析技术进行生态适宜性区划,同时结合杜仲主要活性成分分析不同地理位置、不同环境条件与活性成分的相关性.结果:杜仲适宜区主要集中分布在贵州西北部;其中土壤类型、土壤pH及月均降水量等生态因子对杜仲的分布影响较大.不同地理位置杜仲主要活性成分在全局空间上是完全随机的,在局域空间上只有1个聚集点;且杜仲主要活性成分与海拔、经纬度相关性不显著.结论:应用空间分析技术及统计分析方法,从生态因子和化学成分两方面,进行了生态适宜性区划及松脂醇二葡萄糖苷含量的地理变异研究,可为杜仲适宜种植区及人工规范化种植基地的选取和生产布局提供依据.

杜仲盐制前后质量变化的比较研究

目的:研究杜仲盐制前后质量的变化.方法:通过杜仲盐制前后松脂醇二葡萄糖苷的含量、醇溶性浸出物以及指纹图谱的变化进行比较研究.结果:杜仲盐制后松脂醇二葡萄糖苷的含量均有不同程度的下降,醇溶性浸出物因产地的不同而呈现出不同的变化趋势,杜仲指纹图谱共标出指纹峰11个,盐杜仲则标示出8个.结论:杜仲经盐制后松脂醇二葡萄糖苷的含量下降,醇溶性浸出物也发生改变,杜仲盐制后HPLC色谱指纹图谱指纹峰减少,且大部分成分含量下降.

杜仲炮制沿革考

通过古代及现代杜仲炮制文献资料的整理,就杜仲饮片炮制方法的历史沿革及前人的炮制原始意图作了分析.总结前人的炮制经验及药理作用,为杜仲饮片炮制规范化研究提供借鉴.

甘草、牡蛎、续断与杜仲配伍对京尼平苷酸、绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷煎出含量的影响

目的:建立杜仲水煎液中3种有效成分(京尼平苷酸、绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷)的含量测定方法,考察药对“杜仲-甘草”、“杜仲-牡蛎”、“杜仲-续断”不同比例配伍过程中有效成分含量的变化规律,为杜仲临床配伍应用提供研究基础.方法:制备不同配伍比例(1∶0.5,1∶1,1∶2)杜仲与甘草、牡蛎、续断的合煎液,以杜仲单煎液为对照,采用HPLC-DAD法检测杜仲各样品中3种有效成分的含量,统计分析不同配伍对杜仲3种有效成分煎出含量的影响.结果:杜仲单煎液中京尼平苷酸、绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的煎出含量分别为0.649、0.069和0.440mg/g.与杜仲对照组比较,杜仲-甘草配伍水煎液中京尼平苷酸和松脂醇二葡萄糖苷的煎出含量均随甘草比例的增加而升高,绿原酸的煎出含量随甘草比例的增加而降低;杜仲-牡蛎配伍水煎液中京尼平苷酸的煎出含量随牡蛎比例的增加而升高,绿原酸的煎出含量随牡蛎的占比增加而降低,而松脂醇二葡萄糖苷的煎出含量无显著性变化;杜仲-续断配伍水煎液中京尼平苷酸、绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的煎出含量均随续断比例的增加显著升高.结论:药对“杜仲-甘草”、“杜仲-续断”配伍,对杜仲有效成分煎出含量影响较大,表明中医临床疗效与中药药对配伍剂量有密切关系.

杜仲穴盘育苗技术研究

目的:研究杜仲穴盘育苗技术,包括基质配比、施肥以及病害防治等.方法:采用泥炭、珍珠岩、蛭石、木屑等不同基质筛选出杜仲穴盘育苗适宜基质配比;以Hoagland's营养液为基础,设置不同的磷元素梯度,找出杜仲穴盘育苗适宜营养液;通过对杜仲叶部病害的分离鉴定,了解其发病规律及预防措施.结果:穴盘育苗中,佳基质配比为:泥炭:木屑:蛭石=1.5:1.5:2;佳营养液为:调整P浓度为0.04 g/L的改良Hoagland's营养液;在试验中分离出了两种主要的病原菌,经鉴定为杜仲灰霉病(Botrytis cinerea)和杜仲立枯病(Rhizoctonia solani).在大田试验的8种药剂中,72％杜邦克露1 000倍液对杜仲灰霉病有很好的防治效果,50％多菌灵800倍液和20％甲基立枯灵1 500倍液对杜仲立枯病有很好的防治效果.结论:本研究的杜仲穴盘育苗技术可为杜仲种苗规模化生产提供了理论依据.

归肾丸的质量标准研究

目的 建立归肾丸的质量标准.方法 采用薄层色谱法(TLC)对处方中的杜仲、枸杞子进行定性鉴别;采用高效液相色谱法对处方中山茱萸的主要成份马钱苷进行含量测定.结果 薄层鉴别的色谱斑点清晰,特征斑点对应性强,阴性对照无干扰;马钱苷进样量在0.188～0.940 μg范围内与峰面积具有良好的线性关系,平均回收率为99.00%(n=6),RSD为1.02%.结论 建立的定性及定量方法 简单可行,结果 准确可靠,重现性好,可作为该产品的参考质量标准.

京尼平及其衍生物的研究进展

京尼平及其糖苷是杜仲和栀子的主要药效成分.研究表明,京尼平及其糖苷具有保肝利胆、镇痛、解毒以及改善学习和增强性行为等作用.本研究对京尼平及其衍生物在抗老年痴呆、生物交联剂、抗血栓、降血糖和抗肿瘤作用等方面的研究进展进行综述.

"百花杜仲"降压市场策划

养心汤加减治疗脑梗致腿无力症

李氏老妇，85岁，2013年4月22日在医院确诊为脑梗塞、脑萎缩，高血压（160/80），血液化验正常。医院给输液10天，另开口服血栓通胶囊、心可舒胶囊、盐酸曲美他嗪胶囊。把脉发现脉弱细无力，舌淡苔薄，手脚发凉，双脚微肿，左脚有麻木感，两腿无力，不能行走，但患者说话清晰，无口干舌燥之症。辨证为：气虚、阳虚，血淤。治疗应益气、温阳、化淤。在口服成药的同时，遂用养心汤加减：枣仁、半夏，加白芍、狗脊、杜仲、怀牛膝、制附子等，并加重党参用量，患者连续服汤药30多剂，复查脉搏有力、面色红润、手脚温、脚肿消、脚无麻木感、双腿有力，无人搀扶，自己拄拐杖步行基本正常，在服汤药期间血压正常。其方用量为：黄芪15克，党参30克，甘草、川芎、五味子各6克，茯神12克，当归、白芍、怀牛膝、制附子、柏子仁、远志各9克，肉桂3克，狗脊、杜仲各10克。

老人冬季补肾助阳食疗方3款

◆煨烤杜仲肾
　　杜仲15克，猪肾4个。将生杜仲切成小段片；猪肾用竹片破开，去筋膜洗净。把切好的杜仲片装入呈钱包形的猪肾内，外面用湿草纸包裹数层，放入柴火灰中慢慢煨烤，不断添加热火灰，以保持热度，至草纸焦黑，猪肾熟透，除去草纸即成。不放盐、去杜仲，吃猪肾。

是强身壮体、延年益寿的根本出路--访北京怡寿医学研究院院长杜仲成教授“知未病，治未病”

现在人们的生活越来越好，可各种疾病也越来越多，影响了生活的质量。有什么办法可以减少病痛，让大家健康快乐地生活呢？为此，本刊记者专访了我国脏象望诊专家杜仲成教授。

杜仲补骨脂促进离体培养成骨细胞增殖的实验研究

目的:研究杜仲和补骨脂处理对离体培养成骨细胞增殖的影响.方法:取1日龄的SD大鼠、分离培养露骨中的成骨细胞并分为4组,A组用不含药物及血清的DMEM处理,B组用杜仲终浓度为10 μg/L的无血清DMEM处理,C组用补骨脂终浓度为10 μmol/L的无血清DMEM处理,D组用杜仲终浓度为10 μg/L及补骨脂终浓度为10 μmol/L的无血清DMEM处理.处理后24小时,检测细胞中凋亡基因和增殖基因的mRNA表达量.结果:B组、C组、D组细胞中Bax、Fas、FasL、HSG的mRNA表达量均显著低于A组,c-fos、c-jun、CyclinD1、Egr-1、NDRG1的mRNA表达量均显著高于A组;D组细胞中Bax、Fas、FasL、HSG的mRNA表达量均显著低于B组和C组,c-fos、c-jun、CyclinD1、Egr-1、NDRG1的mRNA表达量均显著高于B组和C组.结论:杜仲和补骨脂能够促进成骨细胞的增殖且两药联用具有协同作用.

妇科急症治验三则

1人工流产后恶露不断仝某,36岁,干部,1992年7月12日诊.自诉:刮宫后恶露连绵月余未停,自感眩晕眼花,腰膝酸软,胸闷心悸,心烦不眠,兼有带下,气味秽臭,舌苔薄黄,脉细数.治宜调补冲任,兼清湿热.处方:黄芪20g,当归10g,阿胶10g(烊化),菟丝子15g,杜仲10g,覆盆子10g,陈皮6g,薏苡仁20g,苍术18g,黄柏15g,知母10g,水煎日1剂.

杜仲水提液对幼鼠睾丸间质细胞睾酮合成和caspase9的影响

目的:探讨杜仲水提液对幼鼠睾丸间质(Leydig)细胞睾酮合成功能和caspase9的影响.方法:原代分离、鉴定幼鼠的Leydig细胞,进行细胞培养.在加入不同剂量杜仲水提液培养24h后,用化学发光法测定睾酮的浓度；分别在加药24h、36h和48 h后,用MTT法检测各组的吸光度；在加药24h后,用流式细胞仪分析细胞凋亡率、存活率和死亡率；用实时定量反转录聚合酶链反应测定caspase9 mRNA的表达.结果:在Leydig细胞中加入杜仲水提液24h后,上清液的睾酮浓度明显增加,与空白组比较差异有统计学意义(P＜0.01)；药物刺激24 h、36 h和48 h后,其吸光度与空白组比较差异均有统计学意义(P＜0.01)；药物刺激24h后,细胞凋亡率和死细胞率明显降低,活细胞率明显提高,与空白组比较差异有统计学意义(P＜0.01)；药物刺激 24h后,caspase9 mRNA的表达量明显降低,与空白组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:杜仲水提液能通过下调caspase9的表达,降低Leydig细胞的凋亡,促进其增殖,而提高其合成睾酮的能力.