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电离辐射对人造血干细胞CD34+的损伤作用
目的 研究不同剂量电离辐射对人造血干细胞CD34+的损害及其机制.方法 采集健康人脐带血,分离培养得到CD34+造血干细胞,分为对照组和辐射组.分别用1、2、5Gy的X线对辐射组细胞进行照射后继续培养24 h后进行对比,检测细胞增殖活性,测定各组内ROS水平并定量测定各组细胞内caspase-3和Nrf-2水平.结果 用1、2、5 Gy的电离辐射对CD34+造血干细胞进行照射后,细胞活性降低,ROS释放量增高,细胞内caspase-3、Nrf-2蛋白相对表达量升高,且这种作用与电离辐射剂量相关.结论 电离辐射可诱导CD34+造血干细胞损伤,损伤作用很可能与细胞凋亡和氧化应激作用相关.
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上调Keap-1抑制Nrf-2核转运和降低卵巢癌细胞Skov3/DPP对顺铂耐药
目的 分析Keap-1/Nrf-2通路在耐顺铂(eis-pt)的卵巢癌细胞Skov3/DDP中的活化状态,及其对细胞耐药的影响.方法 构建pFlag-CMV-Keap-1过表达载体.细胞分4组:空白、cis-pt、Keap-1过表达及cis-pt联合Keap-1过表达组;Western blot检测Keap-1和Nrf-2蛋白表达及亚细胞定位;流式细胞计量术分析细胞的凋亡;DHE探针检测胞内活性氧簇(ROS)积累效应.结果 相比Skov3,Skov3/DDP细胞中Keap-1水平明显下调(P＜0.05),Nrf-2在细胞核中含量增多(P＜0.05);过表达Keap-1后,Keap-1水平明显增加(P＜0.05);细胞核中Nrf-2含量明显减少(P＜0.05);20 mg/L顺铂能够明显诱导凋亡,24及48 h的凋亡率分别为24.36％和53.81％,显著高于未过表达Keap-1组(P＜0.05),并激活caspase-3及PARP;DHE过表达Keap-1联合顺铂能够明显诱导ROS在细胞内累积.结论 Nrf-2能够在药物刺激时降低ROS保护细胞,Skov3/DDP细胞中Keap-1表达下调导致Nrf-2活化入核,可能与药物作用时ROS的毒性作用降低及细胞耐药有关.
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Nrf-2-ARE信号通路在胃癌治疗研究中的作用及机制
Nrf-2-ARE 信号转导通路是机体重要的抗氧化应激系统之一,在肿瘤的发生发展中扮演着双重作用,一方面可以预防肿瘤的发生;另一方面近期的研究发现,Nrf-2 在肿瘤发生发展的过程中也起了重要作用.Nrf-2 及其下游基因在许多癌前病变及肿瘤组织中表达异常升高,促进了异常增殖的细胞向肿瘤方向分化,肿瘤细胞的生长分裂能力增强,同时Nrf-2 的升高能使肿瘤细胞对化疗药物敏感性下降,是肿瘤细胞耐药机制中的重要一环.然而,胃癌是威胁人类健康的恶性肿瘤之一,它的发生发展是一个涉及到分子和细胞改建的多步骤过程.由于受检测方法及技术的限制,目前早期胃癌检出率低,多数胃癌患者在确诊时已达中晚期,因此化学治疗在胃癌患者的综合性治疗中具有重要作用,但是化学治疗在肿瘤中的应用却存在着亟须攻克的问题- 多药耐药.已有研究表明,Nrf-2 在不同期胃癌、癌前病变中存在不同水平的高表达,对胃癌的发生发展有一定的促进作用,Nrf-2 在细胞核中的堆积是一些肿瘤产生耐药性的原因.本资料就Nrf-2 在胃癌发展过程中的作用及机制作相关阐述.
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HO-1和Nrf-2在髓母细胞瘤中的表达和意义
目的:髓母细胞瘤是儿童后颅凹常见恶性肿瘤,本研究目的在于检测Nrf-2和HO-1在髓母细胞瘤中的表达,并探讨其在髓母细胞瘤发生发展的意义.方法:应用免疫组化SP法检测41例髓母细胞瘤及27例瘤旁对照脑组织中Nrf-2和HO-1的表达,并结合研究病例的临床资料(患者性别、年龄、临床症状、肿瘤大小、肿瘤病理分型),进行相关性分析.结果:在髓母细胞瘤病例中,Nrf-2和HO-1的阳性表达率(分别为82.9%,78.0%)与瘤旁对照组织的阳性表达率(分别为37.0%,29.6%)相比明显升高,差异具有显著统计学意义(P<0.001),并且二者之间呈显著正相关关系(P<0.05).但Nrf-2和HO-1的表达与分析的病例的临床特征无显著相关性(P>0.05).结论:Nrf-2和HO-1的高表达可能在髓母细胞瘤的发生发展中发挥重要作用.
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卡波金联合川芎嗪对耳蜗微循环障碍豚鼠抗氧化作用实验研究
目的:探讨卡波金川芎嗪联合应用对耳蜗微循环障碍豚鼠的抗氧化作用及部分机制.方法:50只豚鼠随机分为5组:空白对照组、模型对照组、川芎嗪组、卡波金组、川芎嗪+卡波金组,每组10只.采用光化学法诱导耳蜗微循环障碍模型,并以川芎嗪和/或卡波金进行干预,连续干预1周.采用比色法检测各组豚鼠血清中H2O2、MDA、CAT、SOD含量;采用western-blot法检测各组豚鼠耳蜗组织中Nrf-2表达水平.结果:与空白对照组比较,模型对照组、川芎嗪组、卡波金组、川芎嗪+卡波金组豚鼠血清MDA、H2O2含量显著升高,而SOD、CAT活性显著降低(P＜0.01);与模型对照组比较,川芎嗪组、卡波金组、川芎嗪+卡波金组豚鼠血清MDA、H2O2含量显著降低,而SOD、CAT活性显著升高(p＜0.01);与川芎嗪+卡波金组比较,川芎嗪组、卡波金组豚鼠血清MDA和H2O2含量显著升高,而SOD、CAT活性显著降低(P＜0.01).与空白对照组比较,其余各组豚鼠耳蜗组织中Nrf-2表达水平均显著升高,有统计学差异(P＜0.01);与模型对照组比较,川芎嗪组、卡波金组和川芎嗪+卡波金组豚鼠耳蜗组织中Nrf-2表达水平均显著升高,有统计学差异(P＜0.01);与川芎嗪+卡波金组比较,川芎嗪组、卡波金组豚鼠耳蜗组织中Nff-2表达水平均显著降低,有统计学差异(P＜0.01).结论:川芎嗪和卡波金联合应用更能提高抗氧化作用,而二者联合应用的抗氧化作用机制可能与上调Nrf-2表达水平相关.
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氧化应激与肺纤维化
肺纤维化是许多肺问质疾病的共同结局,发病机制尚未完全明确,氧化/抗氧化失衡是重要机制之一.纠正氧化/抗氧化失衡能缓解肺纤维化程度;氧化应激感受器Nrf-2能通过调节体内抗氧化物质的生成,而改善肺纤维化.
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核因子相关因子2在氧化应激性纤维化疾病中的新研究进展
核因子相关因子2(NF-E2-related factor 2,Nrf-2)与多种氧化应激性疾病密切相关,包括慢性阻塞性肺疾病、哮喘、阿尔茨海默氏综合症、帕金森氏病、恶性肿瘤等.Nrf-2在这些疾病中通过启动多种保护性基因,起到了抗氧化和保护细胞的作用,并且共同起保护作用.本文综述了Nrf-2的作用机制和相关氧化应激性疾病之间关系的新研究进展.
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高良姜素对臭氧所致COPD气道炎症的影响
目的:研究高良姜素对臭氧所致慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)小鼠气道炎症的影响并探讨其可能机制.方法:32只C57BL/6雄性小鼠随机分为正常对照组、COPD组、COPD+高良姜素组、高良姜素单独给药组.COPD组和COPD+高良姜素组反复给予臭氧吸入,每周3次、1次3h,共12周;对照组吸入空气.取肺组织切片行苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察气管旁及血管旁炎性细胞浸润;收集支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF),并用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测BALF中炎症因子水平;实时荧光定量(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测肺组织核转录因子E2相关因子2(nuclear factor-erythroid relatedfactor 2,Nrf-2)及Keap1(Kelch-like ECH-associated protein1,Keap1)mRNA的表达.结果:与正常对照组相比,COPD模型组小鼠气道内炎症细胞浸润程度明显,BALF中炎性细胞亦明显增多;BALF中白介素(interleukin,IL)-6、IL-8及肿瘤坏死因子(tumornecrosis factor,TNF)-α水平显著增高(P＜0.05);给予高良姜素可显著缓解炎症严重程度并抑制IL-6、IL-8及TNF-α分泌(P＜0.05).同时高良姜素可使COPD组肺组织Nrf-2水平增高而Keap1未见明显变化.结论:高良姜素可以有效抑制COPD小鼠气道炎症的发生和进展,其机制可能与Nrf-2-Keap1抗氧化系统有关.
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人脑胶质母细胞瘤中Nrf-2和HO-1的表达及意义
目的 探讨核因子相关因子2 (nuclear factor erythroid2-related factor2,Nrf-2)和血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)在胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)中的表达及意义.方法 采用免疫组化SP法检测49例GBM及23例瘤旁正常组织中Nrf-2和HO-1蛋白的表达,并复习相关文献.结果 Nrf-2和HO-1蛋白在GBM组中的阳性率(分别为85.7%和89.8%)明显增加,与瘤旁正常对照组(34.8%和26.1%)相比,差异有统计学意义(P<0.001),且Nrf-2和HO-1蛋白的表达呈正相关(rs=0.440,P<0.05).而患者性别、年龄、胶质瘤复发、手术切除范围、肿瘤大小、术后放化疗情况与Nrf-2、HO-1蛋白的表达均无相关性(P>0.05).结论 Nrf-2和HO-1蛋白可能与GBM的形成有一定关系,有望作为反映GBM的诊断及治疗的生物学新指标,成为GBM的治疗和研究的新靶点.
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人参皂苷预处理对电离辐射下人造血干细胞的保护作用及其机制探讨
目的：观察人参总皂苷预处理对电离辐射下人造血干细胞（ HPCs ）的保护作用，并探讨其作用机制。方法将HPCs随机分为对照组和观察组，对照组不处理，观察组予以人参皂苷5．0μmol／L培养24 h，分别用剂量为0、1、2、5 Gy的X线对两组细胞进行照射。 MTT法测算细胞存活率，流式细胞仪测定辐射后24 h细胞内的活性氧（ ROS），Western blot 法测定细胞内的Caspase-3和Nrf-2。结果随着辐射剂量的增加，两组细胞存活率均逐渐下降（P均＜0．05），细胞内ROS活性增强、Caspase-3表达增加、Nrf-2表达减少（P均＜0．05）；与相同照射剂量对照组比较，观察组细胞存活率增加（P均＜0．05），细胞内ROS活性减弱、Caspase-3表达减少、Nrf-2表达增加（P均＜0．05）。结论人参皂苷对电离辐射下的HPCs具有保护作用，该作用与其抗凋亡和抑制氧化应激有关。
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Nrf－2和Ras在胃癌中的表达及意义
目的：通过检测Nrf－2、Ras在胃癌组织及正常胃组织中的表达，研究两者与胃癌病理学特征之间的关系及在胃癌组织中的表达相关性，为临床胃癌的治疗提供理论依据。方法收集胃癌手术石蜡标本74例及16例正常胃组织标本，使用免疫组化法检测正常胃组织及胃癌组织中Nrf－2、Ras的表达，对结果进行对比分析。结果 Nrf－2、Ras表达与患者性别、病理类型无关（ P＞0．05）。 Nrf－2、Ras在胃癌组织中表达明显高于正常胃组织（P＜0．05）。 Nrf－2与Ras在胃癌组织中表达呈正相关性（r＝0．421，P＜0．01）。结论 Nrf－2与Ras在胃癌组织中的表达明显高于正常胃组织，且两者呈正相关，表明在肿瘤的发生、发展中Nrf－2与Ras可能具有相互作用，为后期探索具体机制及靶向治疗指明了方向。
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丁苯酞延缓小鼠单侧输尿管梗阻模型纤维化的机制研究
目的：探讨丁苯酞延缓梗阻性肾病小鼠肾脏纤维化的可能机制。方法：雄性小鼠分为假手术组（Sham）、模型组（UUO）、对照组（ACEI）及治疗组（NBP）。对照组、治疗组分别给予贝那普利、丁苯酞灌胃。而假手术组、模型组则给予生理盐水灌胃。各组分别于术后第3、7、14天处死，取梗阻侧肾组织做免疫组化染色以及western blot。结果：（1）Nrf-2在正常肾组织中仅散在表达于肾小管上皮细胞中，模型组术后第3、7、14天小鼠肾组织中Nrf-2表达均增加，治疗组小鼠肾组织Nrf-2随着输尿管梗阻时间的延长，Nrf-2表达逐渐增强，至14 d时表达达到顶峰，呈时间依赖性。（2）与模型组相比，丁苯酞治疗组Nrf-2、γ-GCS明显升高、Ⅰ型胶原蛋白表达明显减少（ P ＜0．05）， Nrf-2、γ-GCS在第7、14天表达均强于贝那普利组（P ＜0．05）。相关性分析显示：Nrf-2与γ-GCS呈正相关（r ＝0．930）；与Ⅰ型胶原蛋白呈负相关（r ＝－0．859）。结论：丁苯酞可能通过激活Nrf-2通路，上调γ-GCS的表达，缓解氧化应激对肾间质的损伤，延缓肾间质纤维化进展。
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Nrf-2与HO-1在胃癌组织中的表达及意义
目的 通过检测核因子E-2相关因子(Nrf-2)、血红素加氧酶-1(HO-1)在胃粘膜标本组织中的表达情况,研究二者在胃癌发生、发展以及早期胃癌诊断中的意义和作用.方法 通过免疫组化EnVision法检测122例Nrf-2、HO-1在胃粘膜标本组织中的表达情况,分析Nrf-2、HO-1在胃粘膜组织各个病变期彼此间的关系,以及二者与胃癌各临床病理资料因子相应的关系.结果 Nrf-2蛋白在正常胃粘膜组与重度不典型增生组、胃癌组对照比较,差异有统计学意义(P＜0.05);肠上皮化生组与胃癌组对照比较,差异有统计学意义(P＜0.05);轻-中度不典型增生组与胃癌组对照比较,差异有统计学意义(P＜0.05);而其余各胃粘膜样本组之间相互对照比较,差异无统计学意义(P＜0.05).HO-1蛋白在正常胃粘膜组与重度不典型增生组、胃癌组对照比较,差异有统计学意义(P＜0.05);肠上皮化生组与胃癌组对照比较,差异有统计学意义(P＜0.05);轻-中度不典型增生组与胃癌组对照比较,差异有统计学意义(P＜0.05);而其余各胃粘膜样本组之间相互对照比较,差异无统计学意义(P＞0.05).Nrf-2、HO-1蛋白分别在年龄、性别、肿瘤大小、分化程度中比较,差异无统计学意义(P＞0.05);在肿瘤侵润深度、TNM分期、淋巴结转移中比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Nrf-2、HO-1的高表达对胃癌的发生、发展可能有重要作用,若将二者进行联合检测,对胃癌高危人群的初筛、早期胃癌的诊断和预后的判断可能有重要的意义.同时二者也将有可能成为胃癌化学预防以及治疗的新靶点.
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姜黄素对HepG2细胞增殖及Keap1、Nrf-2表达的影响
目的 探索姜黄素对肝癌HepG2细胞增殖及Keap1、Nrf-2表达的影响.方法 姜黄素(10 μmol/L、20 μmol/L、40 μmol/L)处理HepG2细胞,采用MTT法检测细胞增殖活力,Real-time PCR法检测Keap1 mRNA的表达,Western blotting法检测Keap1及Nrf-2蛋白的表达,荧光酶标仪检测细胞内活性氧(ROS)的变化.结果 姜黄素可抑制HepG2细胞的增殖活性,中剂量组与低剂量组相比具有显著性差异(P＜0.05),高剂量组与中剂量组之间差异不明显(P＞0.05);姜黄素可促进Keap1 mRNA及蛋白的表达,表达量随着药物浓度上升呈升高趋势(P＜0.05);姜黄素可抑制Nrf-2蛋白表达,且随着药物浓度的增加Nrf-2蛋白表达量降低(P＜0.05);随着姜黄素浓度增加,HepG2细胞内ROS生成量升高(P＜0.05).结论 姜黄素可以抑制HepG2细胞的增殖,其机制可能与促进Keap1表达,从而抑制Nrf-2核转位,致Nrf-2抗氧化功能弱化,ROS生成增加,促进了细胞凋亡有关.
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黄芪甲甙调控 Nrf -2表达对骨髓间充质细胞凋亡机制的研究
目的：研究黄芪甲甙是否通过 Nrf2- Keap1/ ARE 信号通路发挥抗氧化作用来抑制骨髓间充质细胞的凋亡。方法：培养 Wistar 大鼠 BMSCs，设立正常组和黄芪甲甙干预组。采用实时荧光定量 RT - PCR 方法测定 Nrf -2以及 GSH 的基因表达，Westem blot 检测其蛋白表达。结果：TUNEL 和流式结果表明黄芪甲甙有抑制 BMSCs 凋亡的作用，50μg/ L 组作用较强，与 ADR 组比较差异有显著性。增加浓度抑制凋亡的作用增加不明显，ADR + AST（100μg/ L、50μg/ L）两组，细胞凋亡率差异无显著性。黄芪甲甙作用后明显降低 Nrf2 mR-NA 的表达，与 ADR 模型组比较差异有统计学意义。各组分别与阿霉素模型组比较差异均有统计学意义。结论：黄芪甲甙可以通过 Nrf -2表达调控细胞凋亡，可能是其抑制神经细胞氧化应激、发挥保护作用的机制之一。
