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MK-801对甲基汞致大鼠脑皮质Nrf2及HO-1、γ-GCS、GPx-1表达的影响
目的 观察甲基汞对大鼠脑皮质Nrf2、HO-1 、γ-GCS 、GPx-1 mRNA和蛋白表达的影响,探讨MK-801对其是否具有拮抗作用.方法 Wistar大鼠随机分成4组,对照组:皮下及腹腔注射生理盐水；低、高剂量甲基汞染毒组:皮下注射生理盐水,2h后分别腹腔注射4和12μmol/kg的氯化甲基汞,MK-801预处理组:皮下注射0.3μmoL/kg的MK-801,2h后腹腔注射12 μmol/kg的氯化甲基汞；注射容量为5 ml/kg,干预隔日1次,染毒每日1次,连续干预与染毒4周.后一次染毒24 h后,处死大鼠取大脑皮质,测定大脑皮质汞含量及Nrf2、HO-1、γγ-GCS、GPx-1 mRNA及蛋白表达水平.结果 随着染汞剂量的增加,脑内汞含量明显升高；脑皮质内Nrf2 、HO-1、γ-GCS的mRNA及蛋白表达均明显升高,GPx-1的mRNA及蛋白表达明显降低.MK-801预处理组较高剂量甲基汞染毒组Nrf2、HO-1的mRNA及蛋白表达明显降低,GPx-1的mRNA及蛋白表达明显升高,对γ-GCS的mRNA及蛋白表达未见明显改变.结论 甲基汞可导致大鼠脑皮质Nrf2、HO-1、γ-GCS的mRNA及蛋白表达上调和GPx-1的mRNA及蛋白表达下调,MK-801对甲基汞致大鼠脑皮质Nrf2、HO-1、γ-GCS、GPx-1表达的变化有一定的拮抗作用.
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慢性阻塞性肺疾病患者肺组织中ATF3与ATF4对γ-GCS表达的影响
目的 探究慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者肺组织中转录活化因子3(ATF3)与转录活化因子4(ATF4)对γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)表达的影响.方法 本研究采用回顾性分析方法,选择2014 ～2016年收治的160例肺部疾病患者作为研究对象,将经胸部X线或CT检查确诊为COPD者列为观察组(80例),将非COPD者列为对照组(80例).观察两组光镜下肺病理形态学改变、肺功能指标和吸烟史.经原位杂交分析两组肺组织中的ATF3、 ATF4、γ-GCS-HS水平,采用免疫组化法检测肺组织中的ATF3、ATF4、γ-GCS-HS蛋白表达,并采用直线相关法,分析肺组织ATF3、ATF4蛋白与γ-GCS-HS表达的相关性及肺组织ATF3、ATF4、γ-GCS-HS蛋白与肺功能之间的关系.结果 经HE法,光镜下可见观察组肺组织标本有病理形态学改变,而对照组无形态学变化;观察组肺功能指标低于对照组(P＜0.05),观察组吸烟史多于对照组(P＜0.05).经原位杂交法检验,观察组中的ATF3、ATF4、γ-GCSHS的mRNA表达水平高于对照组,差弄有统计学意义(P＜0.05).经免疫组化检测,观察组中的ATF3、ATF4、γ-GCS-HS蛋白的表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).经直线相关法分析,ATF3、ATF4蛋白表达与 GCS-HSmRNA及其蛋白呈正相关关系(P＜0.01);ATF3、ATF4、γ-GCS-HS蛋白与肺功能各指标呈正相关关系(P＜0.01).结论COPD患者的ATF3、ATF4表达明显上调可影响调控γ-GCS表达,从而使γ-GCS表达上调,以发挥抗氧化作用.
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蒿鳖养阴软坚方通过Nrf2/γ-GCS信号转导通路抑制酒精性肝纤维化作用及其机制
目的:研究不同提取方案的蒿鳖养阴软坚方对肝纤维化大鼠肝组织中Nrf2/γ-GCS信号转导通路的影响,探讨不同提取方案的蒿鳖养阴软坚方对大鼠肝纤维化的治疗作用.方法:健康Wistar大鼠随机分为8组:正常组、模型对照组、先水后醇60％提取方案组(0.09 mg·kg-1·d-1)、先水后醇95％提取方案低、高剂量组(2.59 g.kg-1·d-1、8.2 9·kg-1·d-1)、水提醇沉低、高剂量组(2.59 9·kg-1·d-1、8.2 9·kg-1·d-1)及复方鳖甲软肝片组(0.09 mg·kg-1·d-1),每组10只大鼠.酒精性肝纤维化大鼠模型制备成功后,各组按相应药物剂量分别开始治疗,正常组和模型组给予同体积蒸馏水,每日1次,造模10周后处死大鼠,留取标本.酸水解法测定肝组织中胶原蛋白含量;Western blotting检测肝组织Nrf2蛋白与γ-GCS蛋白的表达;光镜观察肝组织免疫组化染色结果.结果:(1)肝组织中羟脯氨酸含量:与正常组比较,模型组大鼠肝组织胶原蛋白含量增高(P＜0.01);与模型组比较,先水后醇60％提取方案组、先水后醇中、高剂量组以及复方鳖甲软肝片组大鼠肝组织胶原含量均降低(P＜0.05).(2)肝组织Nrf2蛋白与γ-GCS蛋白的表达:与正常组比较,模型组大鼠肝组织Nrf2蛋白与γ-GCS蛋白表达增高(P＜0.01);与模型组比较,各治疗组大鼠肝组织Nrf2蛋白与γ-GCS蛋白表达增高(P＜0.01).(3)肝组织免疫组化染色结果:模型组的Nrf2和γ-GCS蛋白主要在细胞浆中表达,各用药组Nrf2和γ-GCS蛋白均多数在细胞浆和细胞核中表达,汇管区附近也有所表达,但表达量不及胞浆和胞核.结论:提取工艺优化后的蒿鳖养阴软坚方可能通过上调肝组织Nrf2/γ-GCS信号转导通路,增加Nrf2蛋白和γ-GCS蛋白的表达,降低大鼠肝组织肝纤维化程度从而发挥抗肝纤维化的作用.
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六君子汤对慢性阻塞性肺疾病大鼠核因子κB和γ-谷氨酰半胱氨酸合酶表达的干预作用
目的:通过观察慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠NF-κB和γ-GCS水平的变化,探讨六君子汤治疗脾气虚型COPD的作用机理.方法:采用改良烟熏加气管滴加脂多糖并结合中医证型造模方法复制COPD模型,以免疫组化法检测NF-κB和γ-GCS水平.结果:与正常对照组相比,造模大鼠NF-κB、γ-GCS在支气管和肺泡上皮细胞、平滑肌细胞以及炎性细胞等都为高表达.经灌服六君子汤治疗后,大鼠阳性表达率明显降低,与脾气虚造模组比较差异显著.结论:六君子汤具有纠正氧化/抗氧化失衡,减少炎性反应的作用,对于脾气虚型COPD疗效确切.
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波动性高血糖对糖尿病大鼠肾脏HO-1γ-GCS及Nrf2表达影响
目的 观察糖尿病大鼠波动性高血糖状态下肾脏组织HO-1、γ-GCS及Nrf2的表达.方法将24只雄性SD大鼠随机分成正常对照组(N组,n=8)和糖尿病模型组(n=16),高脂饲料喂养加小剂量链脲佐菌素(STZ)诱导建立糖尿病大鼠模型,随机分为稳定高糖组(S组,n=8)和波动性高糖组(F组,n=8),喂养8周.实验结束后主动脉取血,检测血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、活性氧簇(ROS)水平,取肾脏组织,HE染色观察肾脏组织病理变化,免疫组化测定HO-1、γ-GCS及Nrf2的表达.结果与N组比较,S组及F组血清SOD浓度明显减少,MDA、ROS浓度均明显增加(P<0.05);与S组比较,F组MDA、ROS浓度明显增加,SOD浓度明显减少(P<0.05).与N组比较,S组及F组HO-1、γ-GCS及Nrf2表达均增多(P<0.05);与S组比较,F组HO-1、γ-GCS及Nrf2表达增多(P<0.05).结论波动性高血糖引发的肾脏氧化应激水平增高,Nrf2和其转录调控的下游抗氧化蛋白HO-1和γ-GCS参与了糖尿病肾病的抗氧化防御机制.
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小青龙汤对慢性阻塞性肺疾病大鼠核因子κB和γ-谷氨酰半胱氨酸合酶表达的干预作用
[目的]通过观察COPD大鼠核因子κB和γ-GCS水平的变化,探讨小青龙汤治疗COPD的机理.[方法]采用改良烟熏加气管滴加脂多糖方法复制COPD模型,并以免疫组化法检测核因子κB和γ-GCS水平.[结果]与正常对照组相比,造模组γ-GCS、NF-κB在支气管和肺泡上皮细胞、平滑肌细胞以及炎性细胞等都为高表达(P＜0.01),经过治疗后,阳性表达率有明显降低,其差异具显著性(P＜0.05).[结论]小青龙汤有着纠正氧化抗氧化失衡,减轻炎性反应的作用,对于寒痰蕴肺型COPD疗效确切.
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丁苯酞延缓小鼠单侧输尿管梗阻模型纤维化的机制研究
目的：探讨丁苯酞延缓梗阻性肾病小鼠肾脏纤维化的可能机制。方法：雄性小鼠分为假手术组（Sham）、模型组（UUO）、对照组（ACEI）及治疗组（NBP）。对照组、治疗组分别给予贝那普利、丁苯酞灌胃。而假手术组、模型组则给予生理盐水灌胃。各组分别于术后第3、7、14天处死，取梗阻侧肾组织做免疫组化染色以及western blot。结果：（1）Nrf-2在正常肾组织中仅散在表达于肾小管上皮细胞中，模型组术后第3、7、14天小鼠肾组织中Nrf-2表达均增加，治疗组小鼠肾组织Nrf-2随着输尿管梗阻时间的延长，Nrf-2表达逐渐增强，至14 d时表达达到顶峰，呈时间依赖性。（2）与模型组相比，丁苯酞治疗组Nrf-2、γ-GCS明显升高、Ⅰ型胶原蛋白表达明显减少（ P ＜0．05）， Nrf-2、γ-GCS在第7、14天表达均强于贝那普利组（P ＜0．05）。相关性分析显示：Nrf-2与γ-GCS呈正相关（r ＝0．930）；与Ⅰ型胶原蛋白呈负相关（r ＝－0．859）。结论：丁苯酞可能通过激活Nrf-2通路，上调γ-GCS的表达，缓解氧化应激对肾间质的损伤，延缓肾间质纤维化进展。
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慢性阻塞性肺疾病患者肺组织中ATF3与ATF4对γ-GCS表达的影响
目的:探讨慢性阻塞性肺疾病患者肺组织中ATF3与ATF4对γ-GCS表达的影响.方法:将2017年1月-2017年12月期间在我院接受治疗的60例慢性阻塞性肺疾病患者为研究组,60例非COPD为对照组,经原位杂交分析两组肺组织中的ATF3、ATF4、γ-GCS-HS水平,采用免疫组化法检测肺组织中的ATF3、ATF4、γ-GCS-HS蛋白表达.结果:经原位杂交法检验及免疫组化检测,研究组中的ATF3、ATF4、γ-GCS-HS的mRNA表达水平高于对照组(P<0.05).结论:COPD患者的ATF3、ATF4表达明显上调可影响调控γ-GCS表达,从而使γ-GCS表达上调,以发挥抗氧化作用.
