首页 > 文献资料
-
蒿鳖养阴软坚方对四氯化碳复合因素所致肝纤维化的预防作用
目的:探讨蒿鳖养阴软坚方对CCl4复合因素所致大鼠肝纤维化的预防作用及可能的作用机制.方法:将大鼠随机分为正常对照组,模型组,蒿鳖养阴软坚方高、中、低剂量组(8.20,2.59,0.82 g·kg-1),复方鳖甲软肝片组(0.54 g·kg-1),秋水仙碱组(1×10-4g·kg-1).第1次sc CCl45 mL·kg-1,从第2次开始每隔3 d sc 40％CCl4花生油3 mL· kg-1至第12次;模型组和治疗组隔日ig 30％乙醇(1 mL/只),各治疗组每日给药1次,正常组和模型组均给予相应体积的蒸馏水,每周6d(停药1d),共6周.观测肝组织形态和胶原蛋白,测定血清肝功能丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST);放免法测定血清透明质酸(HA)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)、Ⅲ型前胶原(PCIII),层黏连蛋白(LN)水平;紫外-可见分光光度法测定血清丙二醛(MDA)水平;检测肝组织中羟脯氨酸,胶原蛋白及白蛋白含量.结果:模型组大鼠肝组织内肝细胞广泛变性及坏死,大量炎性细胞浸润,类假小叶形成,大量胶原纤维形成;蒿鳖养阴软坚方高剂量组的肝脏病理变化程度较模型组明显减轻且无类假小叶形成;模型组的ALT,AST,HA及PCIII含量均高于正常对照组(P＜0.01,P＜0.05);各蒿鳖养阴软坚方给药组ALT,AST,HA及PCIII高剂量组显著低于模型组(P＜0.05);MDA及胶原蛋白的含量均低于模型组(P＜0.01),各蒿鳖养阴软坚方给药组白蛋白均高于模型组(P＜0.01).结论:蒿鳖养阴软坚方对四氯化碳复合因素诱导的大鼠肝纤维化有预防作用;其作用机制可能与抗脂质过氧化损伤,抗炎,抑制胶原蛋白的合成等有关.
-
蒿鳖养阴软坚方对免疫性肝纤维化大鼠的治疗作用
目的 探讨蒿鳖养阴软坚方对牛血清白蛋白(BSA)免疫性肝纤维化大鼠的治疗作用.方法 以18 mg/mL BSA与等体积的弗氏不完全佐剂混悬液足跖皮下多点注射5次免疫大鼠后,尾静脉攻击注射BSA生理盐水(每次2 mg/O.4 mL递增至3.4 mg/0.4 mL)15次,每周2次,制备肝纤维化模型;按体质量随机区组法分为模型组,蒿鳖养阴软坚方高、中、低剂量(8.2、2.59、0.82 g/kg,2.59 g/kg为临床等效剂量)组,复方鳖甲软肝片组,秋水仙碱组,各治疗组均于造模结束后ig给药(1 mL/100 g),每日1次,连续2个月,对照组和模型组分别ig等体积蒸馏水.酶谱法检测肝组织基质金属蛋白酶-2和-9(MMP-2、MMP-9),荧光法测定血清丙二醛(MDA),放免法检测血清透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、IV型胶原(Ⅳ-C)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ).结果 蒿鳖养阴软坚方各剂量均能显著降低肝组织羟脯氨酸(Hyp)、MMP-2及MMP-9、肝纤维化程度、血清HA、LN、Ⅳ-C水平(P＜O.05),其高、中剂量能明显降低血清MDA水平(P＜O.05).结论 蒿鳖养阴软坚方对BSA免疫性肝纤维化大鼠具有治疗作用,抗脂质过氧化与降低MMP-2及MMP-9为其部分作用机制.
-
蒿鳖养阴软坚方抗小鼠血吸虫病肝纤维化及其机制的研究
目的 明确蒿鳖养阴软坚方对血吸虫病肝纤维化的治疗作用,探讨肝星状细胞凋亡与抗血吸虫病肝纤维化的关系.方法 血吸虫尾蚴25条/只经腹壁皮肤感染小鼠,12周之后建立小鼠血吸虫病肝纤维化模型.将全部感染小鼠随机分为蒿鳖养阴软坚方(8.20、2.59、0.82 g/kg)治疗组、阳性药物(复方鳖甲软肝片组0.54 g/kg、秋水仙碱组0.1 g/kg)组、模型对照组(短模组、长模组)和正常对照组.蒿鳖养阴软坚方组ig蒿鳖养阴软坚方干粉状提取物混悬液；阳性药物对照组ig相应的阳性药物；模型组ig生理盐水,1次/d,共12周.光镜观察肝细胞病理变化；盐酸水解法测定肝细胞羟脯氨酸含量；免疫组化法测定α-SMA表达和ISOL技术测定细胞凋亡情况.结果 蒿鳖养阴软坚方高、中剂量组胶原蛋白含量均明显降低(P＜0.05).模型组HSC细胞α-SMA大量表达；而蒿鳖养阴软坚方组肝星状细胞(HSC)细胞α-SMA表达较模型组明显减少(P＜0.01).蒿鳖养阴软坚方中剂量组比模型组肝星状细胞数量有显著差异(P＜0.05),与正常组肝星状细胞凋亡差异无显著性(P＞0.05).结论 蒿鳖养阴软坚方对小鼠血吸虫病肝纤维化有治疗作用.抑制HSC的活化,并诱导其发生凋亡,是蒿鳖养阴软坚方抗血吸虫病肝纤维化的机制之一.
-
蒿鳖养阴软坚方对TGF-β1诱导的肝纤维化的作用
目的:研究蒿鳖养阴软坚方在体外对LX-2细胞的影响,从而探讨蒿鳖养阴软坚方对TGF-β1诱导的肝纤维化的作用.方法:体外培养人肝星状细胞LX-2,实验分为正常对照组、TGF-β1刺激组和蒿鳖养阴软坚方低、中、高浓度给药组.MTT法检测LX-2细胞增殖情况;比色法检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性;酶消化法检测细胞上清羟脯氨酸(Hyp)的含量;Western blot法检测collagen Ⅰ以及α-SMA蛋白表达量.结果:TGF-β1作用于LX-2能够明显促进细胞的增殖,collagen Ⅰ、α-SMA的表达量显著升高.蒿鳖养阴软坚方能抑制LX-2细胞增殖并且能够降低collagen Ⅰ和α-SMA的表达.结论:蒿鳖养阴软坚方能够显著抑制LX-2增殖,下调collagen Ⅰ和α-SMA的表达,降低Hyp生成,从而发挥抗肝纤维化的作用.
关键词： 肝纤维化 蒿鳖养阴软坚方 TGF-β1 collagen Ⅰ α-SMA -
蒿鳖养阴软坚方对刀豆球蛋白A诱导的肝纤维化Nrf2/HO-1信号通路影响
目的:探讨蒿鳖养阴软坚方对刀豆球蛋白A(ConA)诱导的肝纤维化Nrf2/HO-1信号通路的影响.方法:Balb/c小鼠随机分为正常、模型、秋水仙碱和蒿鳖养阴软坚方低、中、高剂量(1.16 g/kg、3.36 g/kg、11.58 g/kg)组.除正常组外,剩余各组均尾静脉注射1.5 mg/mL ConA,每周1次,持续10周.取小鼠肝脏作病理切片,观察肝脏的病理变化,检测肝组织羟脯氨酸浓度,免疫组化法检测肝组织Nrf2、HO-1蛋白的表达情况.结果:与模型组比较,蒿鳖养阴软坚方各剂量组能不同程度地减轻肝组织的炎症反应和降低肝组织羟脯氨酸的浓度,显著减轻肝纤维化程度(P＜0.05);随着蒿鳖养阴软坚方浓度增加,Nrf2和HO-1的阳性表达逐渐增强.结论:蒿鳖养阴软坚方对Nrf2/HO-1信号通路具有激活作用,且该作用可能为其抗肝纤维化机制之一.
-
蒿鳖养阴软坚方通过Nrf2/γ-GCS信号转导通路抑制酒精性肝纤维化作用及其机制
目的:研究不同提取方案的蒿鳖养阴软坚方对肝纤维化大鼠肝组织中Nrf2/γ-GCS信号转导通路的影响,探讨不同提取方案的蒿鳖养阴软坚方对大鼠肝纤维化的治疗作用.方法:健康Wistar大鼠随机分为8组:正常组、模型对照组、先水后醇60％提取方案组(0.09 mg·kg-1·d-1)、先水后醇95％提取方案低、高剂量组(2.59 g.kg-1·d-1、8.2 9·kg-1·d-1)、水提醇沉低、高剂量组(2.59 9·kg-1·d-1、8.2 9·kg-1·d-1)及复方鳖甲软肝片组(0.09 mg·kg-1·d-1),每组10只大鼠.酒精性肝纤维化大鼠模型制备成功后,各组按相应药物剂量分别开始治疗,正常组和模型组给予同体积蒸馏水,每日1次,造模10周后处死大鼠,留取标本.酸水解法测定肝组织中胶原蛋白含量;Western blotting检测肝组织Nrf2蛋白与γ-GCS蛋白的表达;光镜观察肝组织免疫组化染色结果.结果:(1)肝组织中羟脯氨酸含量:与正常组比较,模型组大鼠肝组织胶原蛋白含量增高(P＜0.01);与模型组比较,先水后醇60％提取方案组、先水后醇中、高剂量组以及复方鳖甲软肝片组大鼠肝组织胶原含量均降低(P＜0.05).(2)肝组织Nrf2蛋白与γ-GCS蛋白的表达:与正常组比较,模型组大鼠肝组织Nrf2蛋白与γ-GCS蛋白表达增高(P＜0.01);与模型组比较,各治疗组大鼠肝组织Nrf2蛋白与γ-GCS蛋白表达增高(P＜0.01).(3)肝组织免疫组化染色结果:模型组的Nrf2和γ-GCS蛋白主要在细胞浆中表达,各用药组Nrf2和γ-GCS蛋白均多数在细胞浆和细胞核中表达,汇管区附近也有所表达,但表达量不及胞浆和胞核.结论:提取工艺优化后的蒿鳖养阴软坚方可能通过上调肝组织Nrf2/γ-GCS信号转导通路,增加Nrf2蛋白和γ-GCS蛋白的表达,降低大鼠肝组织肝纤维化程度从而发挥抗肝纤维化的作用.
-
蒿鳖养阴软坚方通过激活Nrf2/NQO1信号通路抑制肝纤维化发生
目的:探讨蒿鳖养阴软坚方通过激活Nrf2/NQO1信号通路对四氯化碳复合因素所致大鼠肝纤维化的抑制作用.方法:选用健康Wistar大鼠作为研究对象,将大鼠随机分为正常组、模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组和秋水仙碱组.除正常组大鼠外,其余大鼠均给予自制高脂饲料饲养,每周两次皮下注射40％CCl4花生油混合溶液,隔日灌胃给予30％乙醇,各给药组每日灌胃给药的同时给予正常组和模型组以等容积的蒸馏水,直至造模时间(共6周)结束后,乌拉坦麻醉大鼠并收集肝组织标本,比色法检测肝组织中羟脯氨酸(Hyp)的含量,免疫组织化学法检测各组大鼠肝组织中Nrf2和NQO1的分布情况,Western blot法检测各组大鼠肝组织中Nrf2和NQO1的表达水平.结果:与正常组相比,模型组Hyp含量明显升高(P＜0.05);各给药组的Hyp含量显著低于模型组,且肝组织中Nrf2和NQO1的表达水平显著升高(P＜0.05).结论:蒿鳖养阴软坚方可以通过激活Nrf2/NQO1通路,上调Nrf2和NQO1的表达,降低肝组织中Hyp的含量,从而发挥抑制由四氯化碳复合因素所致大鼠肝纤维化的作用.
-
蒿鳖养阴软坚方对ConA诱导小鼠肝纤维化的预防作用
探讨蒿鳖养阴软坚方对伴刀豆球蛋白A(ConA)诱导小鼠肝纤维化的预防作用.方法:94只Balb/c小鼠根据体质量采用随机区组法分为7组,正常组8只,模型组16只,蒿鳖养阴软坚方高、中、低剂量组,复方鳖甲软肝片组和秋水仙碱组各14只.采用尾静脉注射ConA制备小鼠肝纤维化模型,以蒿鳖养阴软坚方作为预防用药.采用HE染色及胶原染色法观察肝组织形态；盐酸水解法测定肝组织胶原蛋白的含量；放射免疫法测定血清透明质酸(HA)和Ⅲ型前胶原(PCⅢ)水平.结果:模型组肝纤维化程度分期及计分均高于正常组(P＜0.01),中、低剂量组肝纤维化程度分期均低于模型组(P＜0.05).模型组肝组织胶原蛋白含量高于正常组(P＜0.01),高、中、低剂量组肝组织胶原蛋白含量皆明显低于模型组(P＜0.05或P＜0.01).结论:蒿鳖养阴软坚方对ConA诱导小鼠肝纤维化具有预防作用.
-
高效液相色谱法测定蒿鳖养阴软坚方中丹酚酸B的含量
目的 采用高效液相色谱法测定蒿鳖养阴软坚方中丹酚酸B的含量.方法 色谱柱为Hypersil ODS2(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-1.5%甲酸溶液(21:79),流速为1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长为286am.结果 丹酚酸B在11.28～90.24μg/mL范围内线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率为101.8%,RSD为1.3%.结论 该法简便,灵敏度高,稳定可靠,可用于产品的质量控制.
-
HPLC法测定蒿鳖养阴软坚方中丹参酮Ⅱ A的含量
目的 建立一种简单、快速的高效液相色谱法测定蒿鳖养阴软坚方中丹参酮ⅡA的含量.方法 采用色谱柱为Hypersil C18柱,甲醇-水(75:25)为流动相,检测波长为270 nm,流速为1.0 mL/min.结果 在浓度为0.5～3.0μg/mL范围内具有良好的线性关系,Y=14.9345×104X-4.8341×104,(r=0.9995,n=7),平均回收率为98.6%.结论 该方法快速简便,准确可靠,灵敏度高,可用于蒿鳖养阴软坚方的质量控制.
-
蒿鳖养阴软坚方中虎杖苷的含量测定
目的 建立高效液相色谱(HPLC)法测定蒿鳖养阴软坚方中虎杖苷含量的方法.方法采用高效液相色谱法对制剂中的虎杖苷进行了定量分析,色谱柱Hypersil ODS2(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-水(21:79),检测波长:306 nm,流速1.0 ml·min~(-1).结果 虎杖苷得到完全分离,在1.688～16.88 μg·ml~(-1)范围内线性关系良好,r＝0.999 9,平均加样回收率为101.0%,RSD为2.5%(n＝6).结论 此方法可将虎杖苷从复方中充分的提取分离,专属性强,精密度和稳定性良好,结果准确,可用于蒿鳖养阴软坚方的质量控制.
-
蒿鳖养阴软坚方对四氯化碳所致肝纤维化的治疗作用研究
目的 探讨蒿鳖养阴软坚方治疗CCl4等所致肝纤维化的作用.方法 0.5 ml CCl4/100 g wt皮下注射16次(后15次注射用CCl4:橄榄油=4:6,V/V)辅以10%乙醇为饮料制备肝纤维化模型,成模后以蒿鳖养阴软坚方治疗,灌胃用药[24.48 g/kg(生药/体重)和8.16 g/kg,每周6 d]2个月.结果 8.16 g/kg蒿鳖养阴软坚方能明显降低肝纤维化大鼠肝组织胶原蛋白含量及血清透明质酸和IV型胶原(P<0.05).结论 蒿鳖养阴软坚方具有治疗CCl4等所致肝纤维化的作用.
-
蒿鳖养阴软坚方对小鼠血吸虫病肝纤维化的疗效
目的 探讨蒿鳖养阴软坚方对小鼠血吸虫病肝纤维化的治疗作用.方法 随机取8只小鼠为正常对照组,其余小鼠每只用日本血吸虫尾蚴 (26±1) 条经腹壁皮肤感染;12周后再将感染小鼠按体质量随机区组法分为短期感染对照 (短模) 组和长期感染对照 (长模) 组、蒿鳖养阴软坚方高、中、低剂量(11.58、3.66,1.16 g/kg)组、阳性药物 (包括复方鳖甲软肝片和秋水仙碱)对照组.处死短模组小鼠,证实肝纤维化形成后给予治疗用药.蒿鳖养阴软坚方组给予蒿鳖养阴软坚方干粉状提取物混悬液灌胃,每日1次,共12周.光学显微镜观察肝组织病理学变化;盐酸水解法测定肝组织羟脯氨酸含量;放射免疫法测定血清透明质酸和Ⅲ型前胶原水平;明胶酶谱法测定肝组织基质金属蛋白酶 (MMP)-2和MMP-9水平.对正态分布计量资料多组间比较采用单因素方差分析,方差齐时用Tukey HSD检验,方差不齐时用Tamhane检验;对纤维化程度计分行非参数统计Mann-Whitney U检验;对纤维化程度分期行Ridit分析.结果 短模组和长模组小鼠肝组织均出现大量炎性细胞浸润及钙化的虫卵结节,大量胶原纤维分布于虫卵肉芽肿周围和汇管区,甚至形成假小叶;蒿鳖养阴软坚方可明显减轻血吸虫病肝纤维化小鼠肝脏的病理学改变,其各剂量均能显著降低肝纤维化分期 (u值分别为3.964、5.184、3.438,P值均<0.01) 及计分 (P值均<0.01),其中高剂量组的纤维化程度分期低于阳性对照药 (u值分别为32.204、2.451,P值均<0.05),且其计分低于秋水仙碱组 (P<0.05).短模组 [(6.07±2.46) mg/g]和长模组 [(7.84±4.12) mg/g]胶原蛋白含量显著高于正常对照组 [(0.24±0.27) mg/g],P值均<0.01;蒿鳖养阴软坚方高剂量组 [(1.88±1.62) mg/g]、中剂量组 [(2.18±2.16) mg/g] 明显低于长模组 (P<0.05).短模组[(1110.72±139.34) ng/ml] 和长模组 [(1062.62±65.81) ng/ml] 透明质酸水平显著高于正常对照组 [(647.52±360.29) ng/ml],P值均<0.05;蒿鳖养阴软坚方中剂量组 [(677.04±256.93) ng/ml]、低剂量组 [(733.96±273.14)ng/ml] 明显低于长模组 (P值均<0.05).短模组和长模组MMP-9水解条带的亮度分别为 (2.93±0.79)×10~5、(3.30±0.43)×10~5,显著高于正常对照组[(1.18±0.30)×10~5],P<0.01;蒿鳖养阴软坚方高、中、低剂量组 [(2.29±0.70)×10~5、(2.33±0.56)×10~5、(2.40±0.74)×10~5] 明显低于长模组 (P值均<0.05);短模组和长模组MMP-9水解条带的面积 (116.75±27.46,118.79±26.77) 显著高于正常对照组 (45.83±7.17),P值均<0.01.短模组和长模组MMP-2水解条带的亮度 [(2.48±0.61)×10~5、(2.79±0.61)×10~5] 显著高于正常对照组 [(1.17±0.31)×10~5,P值均<0.01];短模组和长模组MMP-2水解条带的面积(93.56±20.13、101.74±21.77) 显著高于正常对照组 (44.86±12.10,P值均<0.01),蒿鳖养阴软坚方高剂量组 (69.40±27.64) 明显低于长模组 (P<0.05).结论 蒿鳖养阴软坚方对小鼠血吸虫病肝纤维化有确切的治疗作用,其机制之一可能是降低肝组织MMP-2及MMP-9水平.
-
蒿鳖养阴软坚方对刀豆球蛋白A诱导的肝纤维化的预防作用研究
目的:研究蒿鳖齐阴软坚方对刀豆蛋白A(Con A)诱导的肝纤维化的预防作用.方法:将Balb/c小鼠随机分为7组,即正常、模型、复方鳖甲软肝片、秋水仙碱和蒿鳖养阴软坚方高、中、低剂量组.除正常组外,其余各组采用Con A 15mg·kg-1尾静脉注射,每周1次,连续10周,复制小鼠肝纤维化模型,给药结束后观察各组小鼠的肝组织病理学变化,检测肝组织羟脯氨酸含量,并检测血清玻璃酸(HA)和Ⅲ型前胶原(PCⅢ)的含量.结果:模型组肝组织见大量炎症细胞浸润,肝细胞呈点、灶状和大片状坏死,汇管区、中央静脉周围及血窦内胶原纤维增生,肝纤维化程度分期及计分皆显著增高(P<0.01);与模型组比较,各给药组能不同程度地降低肝组织胶原蛋白含量,显著减轻肝纤维化程度(P<0.05),在降低胶原蛋白含量方面以1.16g·kg-1蒿鳖养阴软坚方和复方鳖甲软肝片的作用显著(P<0.05),而11.58 g·kg-1蒿鳖养阴软坚方降低HA的作用较强.结论:蒿鳖养阴软坚方具有预防Con A诱导的小鼠肝纤维化的作用.
-
蒿鳖养阴软坚方药物血清对肝星状细胞的作用
目的:探讨蒿鳖养阴软坚方药物血清对肝星状细胞(HSC-T6)的作用.方法:MTT法分析不同剂量的蒿鳖养阴软坚方药物血清对HSC增殖的影响,并测定培养上清中Hyp含量和LDH活力,流式细胞仪检测其对HSC细胞周期的影响.结果:与正常血清组比较,蒿鳖养阴软坚方(0.82g/kg、2.59 g/kg、8.2 g/kg)药物血清组吸光度(A)值显著降低,抑制率分别为11.26%、30·24%、44.51%;G0/G1期细胞比例增多而S期细胞比例减少;Hyp生成减少,LDH略微升高.结论:蒿鳖养阴软坚方药物血清可能通过阻抑HSC于G0/G1关卡而抑制HSC-T6增殖,同时抑制了胶原蛋白产生,且无细胞毒作用.
-
蒿鳖养阴软坚方制剂工艺的正交实验与药理筛选比较研究
目的:探讨药理筛选在完善以有效成分的正交实验结果为依据所确立的蒿鳖养阴软坚方制剂工艺中的作用.方法:以复方中辅药的水溶性(丹酚酸B、梓醇)和脂溶性(大黄素)有效成分为评价指标,按HPLC测定其含量,对溶剂倍量、提取次数、提取时间、乙醉浓度等因素各3个水平进行正交实验,据以制定提取工艺共10种方案.0.5ml CCl4/100g wt皮下注射16次(后15次注射用CCl4:橄榄油=4:6,V/V)辅以10%乙醉为饮料引起大鼠肝纤维化,成模后按体重随机区组法分组,分别以蒿鳖养阴软坚方10种提取方案各2个剂量(24.48/kg,8.16g/kg)治疗用药,每日1次、每周6天灌胃共2个月,模型对照组和正常对照组则灌胃蒸馏水.以肝胶原蛋白含量、肝组织形态及血清中肝纤维化标志物评价疗效.结果:蒿鳖养阴软坚方按方案1-1(水提低含量和醇提低含量)提取,24.4g/kg能明显降低肝胶原蛋白及血清透明质酸和W型胶原水平(P＜0.05),按方案3-2(水提低含量和醇提高含量)提取,8.16g/kg能降低肝胶原蛋白及明显降低血清透明质酸和IV型胶原水平(P＜0.05).结论:对有效成分含量的正交实验基础上以疗效指标进行药理筛选应作为确立复方提取工艺方案的终依据.
