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离心运动引起骨骼肌过度使用损伤机理研究
目的:探讨长期离心运动引起骨骼肌过度使用损伤的发生机制.方法:12只雄性SD大鼠随机分成安静对照组(C组)和训练组(TG组)两组.训练组采用4周低强度跑台离心运动(-16°、60～90分/天,5天/周)建立过度使用损伤动物模型.第4周取股中间肌,采用透射电子显微镜观察骨骼肌细胞超微结构损伤累积；采用扫描电子显微镜观察骨骼肌神经、血管结构损伤和胶原纤维结构变化；采用Masson氏三色染色法评价骨骼肌组织的胶原纤维沉积量；采用免疫组化方法量化沉积的胶原纤维中的collagen Ⅰ表达,并依据collagen Ⅳ染色,观察肌细胞的基质膜形态变化.结果:(1)骨骼肌超微结构变化:与安静对照组比较,训练组骨骼肌超微结构异常变化,体现为Z线流、肌原纤维间隙变宽、肌原纤维降解、肌膜下线粒体聚积和肌原纤维内线粒体降解物堆积；(2)肌膜结构变化:训练组肌膜结构完整,没有撕裂现象；(3)骨骼肌神经和血管结构变化:与安静对照组比较,rG组神经和血管结构损伤,且collagen Ⅰ过度沉积在神经和血管周围；(4)肌内膜和肌束膜结构变化:与安静对照组比较,训练组肌束膜胶原纤维结构紊乱,且厚度增加的肌内膜尤其是肌束膜collagen Ⅰ过度沉积.结论:(1)长期重复性离心运动导致骨骼肌过度使用损伤,包括骨骼肌细胞超微结构损伤累积,神经、血管和肌束膜纤维化；(2)骨骼肌细胞超微结构损伤累积导致肌内膜尤其是肌束膜collagen Ⅰ过度沉积,以保护肌膜免受进一步损伤；(3) collagen Ⅰ在肌内膜尤其是肌束膜持续沉积增加了结缔组织硬度,造成骨骼肌神经和血管结构损伤累积.表明骨骼肌细胞超微结构损伤累积导致了过度使用损伤症状发生.
关键词： 过度使用损伤 collagen Ⅰ collagenⅣ 胶原纤维沉积 骨骼肌 -
蒿鳖养阴软坚方对TGF-β1诱导的肝纤维化的作用
目的:研究蒿鳖养阴软坚方在体外对LX-2细胞的影响,从而探讨蒿鳖养阴软坚方对TGF-β1诱导的肝纤维化的作用.方法:体外培养人肝星状细胞LX-2,实验分为正常对照组、TGF-β1刺激组和蒿鳖养阴软坚方低、中、高浓度给药组.MTT法检测LX-2细胞增殖情况;比色法检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性;酶消化法检测细胞上清羟脯氨酸(Hyp)的含量;Western blot法检测collagen Ⅰ以及α-SMA蛋白表达量.结果:TGF-β1作用于LX-2能够明显促进细胞的增殖,collagen Ⅰ、α-SMA的表达量显著升高.蒿鳖养阴软坚方能抑制LX-2细胞增殖并且能够降低collagen Ⅰ和α-SMA的表达.结论:蒿鳖养阴软坚方能够显著抑制LX-2增殖,下调collagen Ⅰ和α-SMA的表达,降低Hyp生成,从而发挥抗肝纤维化的作用.
关键词： 肝纤维化 蒿鳖养阴软坚方 TGF-β1 collagen Ⅰ α-SMA -
雷帕霉素诱导成纤维细胞自噬在瘢痕疙瘩中的作用
目的 探讨瘢痕疙瘩与正常皮肤中,真皮成纤维细胞层自噬水平的差异,并研究自噬诱导剂雷帕霉素对瘢痕疙瘩成纤维细胞Collagen Ⅰ及α-SMA表达的影响.方法 收集瘢痕疙瘩和正常皮肤临床标本,免疫组化和WB检测自噬标志物LC3的表达;雷帕霉素处理成纤维细胞,检测细胞Collagen Ⅰ及α-SMA表达.结果 瘢痕疙瘩中,LC3表达高于正常皮肤;雷帕霉素可诱导成纤维细胞自噬,并降低细胞Collagen Ⅰ及α-SMA的表达.结论 自噬与瘢痕疙瘩发病相关,雷帕霉素诱导自噬可以显著影响成纤维细胞合成胶原及向肌成纤维细胞分化的特性,干预细胞自噬可能是一种有效的治疗瘢痕的途径.
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加味茵陈四逆汤对肝纤维化小鼠Smad7及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响
目的:探讨预防性使用加味茵陈四逆汤对肝纤维化小鼠Smad7和Ⅰ型胶原蛋白(Collagen Ⅰ)、Ⅲ型胶原蛋白(CollagenⅢ)基因表达的影响.方法:雄性ICR小鼠48只,随机分为正常对照组、模型组、秋水仙碱组及加味茵陈四逆汤高、中、低剂量组,每组8只.采用腹腔注射30％ CCl4(1.5 mg/kg,溶解于橄榄油)建立肝纤维化模型,同时给予药物灌胃处理.用药14 d后,计算肝脏指数;试剂盒检测血清透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)水平;各组行HE染色观察肝组织病理改变并进行肝纤维化分级;RT-qPCR法检测肝组织Smad7、Collagen Ⅰ、CollagenⅢmRNA表达.结果:(1)加味茵陈四逆汤中、低剂量组肝脏指数和HA、LN水平较模型组显著降低(P＜0.05);(2)加味茵陈四逆汤各剂量组肝纤维化较模型组减轻(P＜0.05);(3)与模型组比较,各给药组Collagen Ⅰ mRNA表达显著降低(P＜0.05),除加味茵陈四逆汤高剂量组外,各给药组Smad7 mRNA表达显著升高(P＜0.05),除加味茵陈四逆汤低剂量组外,各给药组Collagen Ⅲ mRNA表达显著降低(P＜0.05).结论:加味茵陈四逆汤可上调肝纤维化小鼠Smad7表达,抑制Collagen Ⅰ、CollagenⅢ表达,发挥对肝纤维化的抑制作用.
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红芪多糖对db/db小鼠糖尿病心肌病心肌组织TGF-β1与Ⅰ型胶原蛋白表达的影响
目的:通过研究红芪多糖对db/db小鼠糖尿病心肌病心肌组织中TGF-β1与Collagen Ⅰ表达的影响,探讨其对db/db小鼠心肌纤维化的作用.方法:将60只6周龄雄性db/db小鼠随机分为5纽:模型组、红芪多糖200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg剂量组和罗格列酮4mg/kg组;正常组为12只同周龄同背景的非转基因雄性db/m小鼠.连续灌胃干预8周,于给药前及给药后第2、4、6、8周末检测各组小鼠空腹血糖及体重;Masson染色观察小鼠左心室心肌胶原纤维化程度;Western blot、RT-PCR法检测心肌组织TGF-β1与Collagen Ⅰ的蛋白和mRNA表达.结果:干预治疗8周后,红芪多糖200mg/kg、100mg/kg剂量组和罗格列酮4mg/kg组血糖较模型组明显下降;Masson染色可见亮绿色胶原纤维在模型组心肌细胞间及血管周围较正常组明显增多且呈堆积状分布;模型组TGF-β1与Collagen Ⅰ蛋白及mRNA表达水平与红芪多糖50mg/kg剂量组无显著差异,其余各治疗组较模型组明显降低,其中红芪多糖200mg/kg剂量组和罗格列酮4mg/kg组改善更明显.结论:红芪多糖对db/db小鼠心肌纤维化具有保护作用,其作用机制可能是通过抑制TGF-β1的异常表达而降低Collagen Ⅰ降解实现的.
关键词： 红芪多糖 糖尿病心肌病 TGF-β1 collagen Ⅰ db/db小鼠
