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清热化痰解毒方对脑缺血再灌注大鼠肺组织TXNIP/NLRP3炎性通路的影响
目的:探究清热化痰解毒方对脑缺血再灌注大鼠肺组织的影响,并初步探讨相关分子机制.方法:将SD大鼠分为假手术组、模型组、阳性药组(灌胃尼莫地平200 mg·kg -1)、清热化痰解毒方低、高剂量组(100,200 mg·kg -1 ),每组10只,除假手术组外,采用改良4动脉阻断法制备大鼠全脑缺血再灌注损伤模型,造模后,给药3 d.肺湿/干重(W/D)分析,采用苏木素-伊红(HE)染色进行组织病理学分析;酶联免疫吸附法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素(interleukin,IL)-lβ和 IL-18水平;肺髓过氧化物酶试剂盒检测髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性;免疫组化分析核苷酸结合域样受体蛋白3 (nucleotide-binding domain-like receptor 3, NLRP3 )阳性细胞数;半胱氨酸天冬氨酸酶-1(Caspase-1 )比色测定试剂盒检测 Caspase-1活性;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测NLRP3, ASC, Caspase-1 mRNA和蛋白表达,免疫共沉淀检测硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)-NLRP3蛋白表达.结果:与假手术组比较,模型组肺损伤评分,肺W/D,BALF中IL-1β和IL-18水平、总细胞和多形核白细胞数量,MPO活性均明显增加(P ＜ 0.05 );与模型组比较,尼莫地平组、清热化痰解毒方低、高剂量组肺损伤评分,肺W/D,BALF中IL-lβ和IL-18水平、总细胞和多形核白细胞数量及MPO活性均明显降低(P＜0.05).与假手术组比较,模型组肺组织中NLRP3阳性细胞数,Caspase-1活性,NLRP3,ASC, Caspase-1蛋白和mRNA相对表达明显增加(P ＜ 0.05 );与模型组比较,尼莫地平组、清热化痰解毒方低、高剂量组肺组织中 NLRP3阳性细胞数,Caspase-1活性,NLRP3,ASC,Caspase-l蛋白和mRNA相对表达均明显降低(P ＜ 0.05 ).与假手术组比较,模型组肺组织中ROS产生,TXNIP蛋白表达均明显增加(P＜0.05);与模型组比较,尼莫地平组、清热化痰解毒方低、高剂量组肺组织中ROS产生,TXNIP蛋白表达均明显降低(P＜0.05).与假手术组比较,模型组肺组织中TXNIP-NLRP3蛋白共沉淀增加.与模型组比较,尼莫地平组、清热化痰解毒方低、高剂量组肺组织中TXNIP-NLRP3蛋白共沉淀减少.结论:清热化痰解毒方对全脑缺血再灌注大鼠的炎症性肺损伤具有保护作用,且这种作用可能通过抑制ROS产生,从而抑制TXNIP-NLRP3炎症通路介导的促炎介质IL-1β和IL-18的分泌,终抑制肺组织中炎性细胞浸润,缓解肺组织损伤.
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TXNIP介导的氧化应激在疾病中的作用机制
硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)通过与硫氧还蛋白(Trx)的结合而抑制Trx的抗氧化作用,促进了活性氧簇(ROS)的产生与积聚,诱发内质网应激与线粒体应激,终可诱导炎症或细胞凋亡.TXNIP所介导的氧化应激在糖尿病及其并发症(糖尿病肾病、糖尿病视网膜病变等)、动脉粥样硬化、缺血/再灌注损伤、癌症(肝细胞癌、膀胱癌、乳腺癌、白血病)等疾病的发生、发展过程中起着重要的调控作用.该文就TXNIP介导的氧化应激在相关疾病中的作用机制及研究进展进行综述.
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过表达硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)通过激活p38MAPK通路促进MIN6细胞凋亡
目的 研究硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)对MIN6细胞凋亡的影响及其相关机制.方法 将处于对数生长期的MIN6细胞,进行TXNIP慢病毒感染,用荧光显微镜和Western blot法检测感染效率.将MIN6细胞分为对照组、空载体(LV-GFP)组、TXNIP过表达(LV-GFP-TXNIP)组.利用CCK-8法检测细胞增殖活性,异硫氰酸荧光素标记的膜联素V/碘化丙啶(annexinV-FITC/PI)双染色结合流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测TXNIP、硫氧还蛋白(TRX)、Bax、Bcl2、裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)及其磷酸化蛋白激酶(p-p38MAPK)的蛋白水平.用p38MAPK抑制剂SP169316处理上述三组细胞,Western blot法检测其蛋白磷酸化水平及Bax、Bcl2、c-caspase-3蛋白水平的变化.结果 感染慢病毒72 h后,LV-GFP组、LV-GFP-TXNIP组感染率分别为(87.10±2.30)％、(92.21±0.54)％,说明病毒感染成功.与对照组和LV-GFP组相比较,LV-GFP-TXNIP组的细胞生存率明显降低,细胞凋亡率、Bax/Bcl2比值、c-caspase-3蛋白、p38MAPK蛋白磷酸化水平明显增高.p38MAPK特异性抑制剂作用后,LV-GFP-TXNIP组Bax/Bcl2表达比率及c-caspase-3蛋白表达均显著减少.结论 过表达TXNIP通过激活p38MAPK信号通路促进MIN6细胞的凋亡.
