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化痰消瘤方对荷Lewis肺癌小鼠nm-23,VEGF表达的影响
目的:观察化痰消瘤方对Lewis肺癌小鼠瘤质量及肺转移灶的影响, 检测瘤组织中血管内皮生长因子 (VEGF), nm-23 mRNA表达的情况, 探究其作用机制.方法:取雄性C57BL/6J小鼠30只, 随机分为空白组, 化痰消瘤方组 (50 g·kg-1·d-1), 环磷酰胺 (CTX) 组[0.06 g·kg-1· (3, 7 d) -1], 共3组, 每组10只.右腋下注射细胞悬液建立荷Lewis肺癌小鼠模型, 造模后观察21 d, 处死, 剥离瘤组织, 计算抑瘤率, 摘取肺组织, 固定后显微镜下观察肺转移灶个数, 计算抗肺转移率, 通过实时荧光定量PCR (Real-time PCR) 检测瘤组织中nm-23, VEGF mRNA表达情况, 蛋白免疫印迹法 (Western blot) 检测瘤组织中nm-23, VEGF蛋白的表达情况.结果:与空白组比较, 化痰消瘤方组及环磷酰胺组瘤质量、肺转移灶个数均显著降低 (P＜0.01) .与空白组比较, 化痰消瘤方及环磷酰胺能显著下调VEGF蛋白和VEGF mRNA的表达水平 (P＜0.01), 能显著上调nm-23蛋白和mRNA的表达水平 (P＜0.01) .结论:化痰消瘤方具有抑制Lewis肺癌瘤体生长及转移的作用, 其作用机制可能是通过降低VEGF的表达水平, 减弱了肿瘤新生血管的生成, 同时上调nm23 mRNA表达水平, 抑制肿瘤生成与转移来实现的.
关键词： Lewis肺癌 化痰消瘤方 转移 nm-23 mRNA 血管内皮生长因子 -
六君祛痰解毒汤及其拆方对C57BL/6J小鼠Lewis肺癌转移的抑制作用
目的:研究六君祛痰解毒汤及其拆方对小鼠Lewis肺癌转移的抑制作用及作用机制.方法:建立C57BL/6J小鼠Lewis肺癌转移模型,随机分为对照组、替加氟阳性对照组(78 mg·kg-1)、六君祛痰解毒汤(21 g·kg-1)及拆方六君祛痰汤(11 g·kg-1)、解毒汤(10 g·kg-1)和祛痰汤(5 g·kg-1)6组.ig给药15 d后剥瘤称取瘤质量,计算抑瘤率；摘取肺组织,固定后于解剖显微镜下观察肺表面转移灶数,计算肺癌转移率和抗转移率；用免疫组化和图像分析方法检测瘤组织细胞中CD44的表达；用放射免疫法检测血清中透明质酸(HA)及Ⅳ型胶原(ColⅣ)的含量.结果:各治疗组皆可抑制小鼠Lewis肺癌移植瘤的生长,肺癌转移灶明显减少,以六君祛痰解毒汤效果好.给药各组皆程度不同地抑制小鼠移植瘤细胞CD44的表达,与模型对照组比较,六君祛痰解毒汤具有显著性差异(P＜0.05),六君祛痰汤及祛痰汤具有极显著性差异(P＜0.01)；4个治疗组皆能降低荷瘤小鼠血清HA和Col Ⅳ的含量,六君祛痰汤的效果好,六君祛痰解毒汤和祛痰汤次之(P＜0.01),而解毒汤的作用则相对较弱.结论:六君祛痰解毒汤及其拆方对Lewis肺癌转移模型小鼠具有抗肿瘤转移作用,其机制可能与抑制肿瘤细胞对细胞外基质(ECM)的破坏、使其血清中HA和ColⅣ水平降低,下调肿瘤细胞CD44的表达、降低其与基质的黏附,进而抑制肿瘤细胞的运动、侵袭和转移有关.
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荜茇明碱调控TGF-β1/ERK信号通路抗肺癌作用机制研究
目的:肺癌小分子靶向药是近年来研究的热点之一,采用荜茇明碱(PL)观察对小鼠Lewis肺癌生长和转移的抑制作用,并探讨其机制.方法:将28只接种Lewis肺癌细胞的C57小鼠随机分为4组,每组7只,分别对对照组、顺铂(DDP)组、转化生长因子-β1 (TGF-β1) (20mg/kg)抑制剂组、荜茇明碱(10mg/kg)组.接种第5天采取药物干预,用药21d,每天测量瘤体大小、小鼠体质量,第22天处死,剥离瘤体,计瘤重.通过Westernblot、HE、免疫组化观察用药前后TGF-β1和VEGF的变化.结果:荜茇明碱可以抑制Lewis小鼠移植瘤的生长;可以降低血清中TGF-β1、VEGF的表达,降低肿瘤组织中TGF-β1,ERK1/2,MEK,p-ERK1/2的蛋白表达.结论:荜茇明碱可以抑制TGF-β1/ERK信号通路上蛋白表达,同时降低VEGF的表达起到抗肿瘤血管生成和迁移的作用.
关键词： 荜茇明碱 Lewis肺癌 转移瘤 TGF-β1/ERK 血管内皮生长因子 -
肺瘤平膏及其联合塞来昔布干预时间对Lewis肺癌小鼠不同肿瘤微环境中COX-2表达的影响
目的:观察肺瘤平膏及其联合塞来昔布对癌组织(肿瘤核心微环境)与非癌组织(转移微环境)中环氧合酶-2(COX-2)表达的影响,揭示中药干预时间对不同肿瘤微环境中关键炎性分子的作用优势.方法:建立Lewis肺癌移植瘤小鼠模型,分别在肺瘤平膏干预14、21、28d收集瘤体、肺组织,并通过免疫组化、Westernblotting方法检测COX-2的表达.结果:肿瘤核心微环境中:与对照组相比,14d时,各组瘤体COX-2的表达明显降低,28d时,各组瘤体COX-2的表达无明显变化.肿瘤转移微环境中:与对照组比较,21d时,肺瘤平膏可明显抑制COX-2的表达(P＜0.05),28d时,抑制COX-2的作用增强(P＜0.01);肺瘤平膏联合塞来昔布在各阶段均可以抑制COX-2的表达,并且其抑制作用随时间不断增强.结论:长时间应用肺瘤平膏对转移微环境中COX-2关键分子的调控作用优于对肿瘤核心微环境,其联合塞来昔布具有协同或者叠加作用.
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益气除痰方对Lewis肺癌小鼠种植瘤细胞周期调控相关因子的影响
目的:观察益气除痰方对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长及细胞周期调控相关因子P16、p21/WIF1/CIP1、蛋白激酶C(PKC)、c-myc的影响.方法:建立C57BL/6小鼠Lewis肺癌种植瘤模型30只,随机分为Lewis肺癌模型组、益气除痰方低剂量组、高剂量组3组,每组10只.灌胃21d后,处死小鼠,检测肿瘤体积、重量,并用免疫组化法观察各组肿瘤组织P16、p21/WIF1/CIP1、PKC、c-myc的表达.结果:各组Lewis肺癌小鼠肿瘤体积、瘤重两两比较差异有统计学意义.其中高剂量组、低剂量组瘤体组织P16相对含量与模型组对比均显著增高(P＜0.05,P＜0.01);高剂量组与模型组、低剂量组对比p21/WIF1/CIP1含量显著增高(P＜0.05,P＜0.01).三组PKC含量两两比较差异均有统计学意义.结论:益气除痰方能抑制小鼠Lewis肺癌的生长,其机制可能与其能通过上调P16、p21/WIF1/CIP1、下调PKC表达引起细胞周期阻滞,延长肿瘤细胞倍增时间相关.
关键词： 益气除痰方 Lewis肺癌 p16 p21/WIF1/CIP1 蛋白激酶C -
中药肺岩宁方及其拆方对小鼠Lewis肿瘤生长、肺转移和微血管密度的影响
目的:观察中药肺岩宁及其拆方对C57BL/6小鼠Lewis肺癌肿瘤生长、肺转移和肿瘤微血管密度的影响,探讨肺岩宁抗肿瘤生长转移的机制.方法:采用C57BL/6小鼠,接种Lewis肺癌细胞株,随机分为对照组、肺岩宁组、益气组、补肾组和抗癌组,每组10只,在接种后第2天开始中药灌胃,灌胃21d后处死,观察肿瘤肺转移情况,取瘤称重后石蜡包埋,免疫组化法测定肿瘤微血管密度(MVD).结果:肺岩宁的抑瘤率33.4％；补肾组抑瘤率24.2％,抗癌组抑瘤率69.6％.肺岩宁组肺转移数目为(2.91±1.37)个,补肾组肺转移数目为(3.20±1.27)个,均显著低于对照组的(4.76±1.83)个.肺岩宁组MVD为(29.57±2.92)条/200倍视野,抗癌组MVD为(24.23±2.33)条/200倍视野,补肾组MVD为(31.93±4.88)条/200倍视野,明显低于对照组(51.03±3.09)条/200倍视野.结论:补肾中药抑制肿瘤生长和肺转移；抗癌方对肿瘤生长具有显著抑制作用；益气中药可能促进肿瘤生长；抑制血管生成可能是中药肺岩宁方抗肿瘤侵袭转移的机制之一.
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益肺清化颗粒对Lewis肺癌小鼠血清血管生成因子的影响
目的:观察益肺清化颗粒对Lewis肺癌小鼠血清中的血管生成因子:血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管抑素(AS)、内皮抑素(ES)的影响,以期探讨益肺清化颗粒对肿瘤新生血管的作用机制及抑瘤机制.方法:通过建立小鼠Lewis肺癌模型,并给与不同药物干预,造模成功后,留取小鼠眼球血,用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测以上4种血管生成因子的含量.结果:益肺清化颗粒低、中剂量组、高剂量组、吉非替尼组、吉非替尼+益肺清化颗粒中剂量组、环磷酰胺(CTX)组VEGF的表达均较模型组显著降低(P＜0.05,P＜0.01)；吉非替尼组、吉非替尼+益肺清化颗粒中剂量组、CTX组对AS的影响与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01)；益肺清化颗粒中、高剂量组、吉非替尼+益肺清化颗粒中剂量组、吉非替尼组、CTX组对ES的影响与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论:益肺清化颗粒能降低血管生成促进因子VEGF的表达及提高ES的表达,益肺清化颗粒治疗肺癌的可能作用机制为:降低血管生成促进因子VEGF的表达,升高ES的表达,进而发挥抑瘤作用.
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回药爱康方对Lewis肺癌抑制作用及突变型p53蛋白表达的影响
目的:观察回药爱康方对小鼠肿瘤生长的影响及对突变型p53蛋白(p53mt)表达的影响.方法:将55只C57小鼠常规接种Lewis肺癌细胞,24h后随机分为荷瘤模型组、化疗组、回药低剂量组、回药低剂量加化疗组、回药高剂量加化疗组.治疗后观察各组小鼠的脾脏、胸腺、瘤体质量,免疫组化法检测各组p53mt的表达差异.结果:①除化疗组外,其余各组小鼠体质量与荷瘤模型组比较差异均有统计学意义(P＜0.05)；②回药高剂量加化疗组抑瘤率为71.00％,与荷瘤模型组比较,各组瘤质量差异有统计学意义(P＜0.05)；③回药高剂量加化疗组p53mt表达阳性率为36.36％,与模型组比较有统计学意义(P＜0.01)；④与化疗组比较,各组小鼠脾脏指数及胸腺指数差异均有统计学意义(P＜0.01).结论:回药协同化疗抑瘤效果及下调突变型p53的表达效果优于单纯化疗,且回药爱康方可以降低化疗后的免疫抑制,这可能是回族医药治疗肿瘤的新靶点.
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乾坤胶囊治疗肺癌的实验研究
近年来,有关中药抗肿瘤作用的研究方兴未艾,笔者在经典方剂的基础上科学配伍,组成了复方中药制剂"乾坤胶囊",该胶囊具有扶正固本、活血化瘀、解毒抗癌的功效,临床治疗肺癌取得了满意的疗效.笔者运用小鼠移植性肿瘤模型(Lewis肺癌)进行了实验,观察乾坤胶囊的抗肿瘤作用并探讨其作用机制,现报告如下.
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益气养阴方对C57小鼠Lewis肺癌ERα及CyclinD1表达的影响
目的:免疫组化法观察益气养阴方对C57BL/6/小鼠Lewis肺癌瘤体雌激素受体α(estrogen receptor α,ER α)及细胞周期蛋白D1(CyclinD1)表达的影响,探讨该方抑制肿瘤和抗转移作用的机制,以及ER α和CyelinD1表达的关系.方法:24只C57BL/6/小鼠随机分为3组,每组8只,接种Lewis肺癌瘤株,造模后第2d按如下方案进行干预:荷瘤对照组用生理盐水灌服;中药组用益气养阴方煎汤灌服;顺铂组用顺铂溶液腹腔内注射.第20d处死全部小鼠,称瘤重计算抑瘤率,计数肺转移数,计算抑制肺转移率,免疫组化Envision二步法测定瘤体ER α、CyclinD1蛋白表达情况.结果:中药组和顺铂组的抑瘤率分别为35.02%和41.18%,抑制肺转移率分别为54.20%和39.02%,此两项分别与荷瘤对照组比较,差异显著.荷瘤对照组ER α和CyclinD1阳性率分别为100%和75%,中药组和顺铂组的ER α和CyclinD1阳性表达均显著低于对照组.ER α和CyclinD1的表达与瘤重(rs分别为0.501和0.404,P均＜0.05)、肺转移数(rs分别为0.605和0.535,P均＜0.01)均成正相关,两者之间亦成正相关(rs=0.542,P＜0.01).结论:益气养阴方具有较好的抑瘤和抗肺转移的作用,同时能够明显下调ER α和CyclinD1的表达,这是该方抑制肺癌转移的机制之一;肺癌ER α和CyclinD1蛋白均成高表达,是促进肺癌细胞增殖和转移的重要原因和判断指标,两者表达间存在一定的调控机制.
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益气活血解毒方体内外抗肿瘤作用的实验研究
中医视人体为统一整体,辨证论治是中医认识疾病和治疗疾病的基本原则,组方配伍是中医药治疗疾病的精髓.扶正培本、活血化瘀、清热解毒合用是中医治疗肿瘤及防治肿瘤转移的常用大法.本研究依据以往的研究结果,选用扶正培本代表药人参的提取物人参皂苷,活血化瘀药三七的提取物三七皂苷,清热药黄连、黄柏的提取物小檗碱,组成益气活血解毒复方研究其抗肿瘤作用,从而为扶正培本、活血化瘀、清热解毒法治疗肿瘤提供实验依据,也为开发质量稳定、有效成分明确的标准化中药复方新药奠定基础.
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肺瘤平膏及其拆方对Lewis肺癌移植瘤的抑瘤作用及对S-100蛋白和VEGF表达的影响
1 材料1.1 药物1.1.1 益气解毒活血方即肺瘤平膏,由中国中医科学院广安门医院制剂室提供,生理盐水稀释终浓度为1.71g/ml备用.
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柴胡龙牡汤对小鼠Lewis肺癌的实验研究
目的:观察和评价柴胡龙牡汤对Lewis肺癌小鼠的治疗作用.方法:将40只C57BL/6J小鼠常规接种Lewis肺癌,造模成功后按随机数字表法分为柴胡龙牡汤组、模型组、顺铂对照组和恩度联合NP对照组4组.治疗时间均为2周.称瘤重计算抑瘤率,统计肺部结节数量并计算抗肺转移率,用MTT法检测肿瘤细胞的增殖能力、血液中红细胞、血小板、白细胞的比值和对脾脏中自然杀伤细胞活性、IFN-y和1L-10含量及T淋巴细胞比值的影响.结果:柴胡龙牡汤组肿瘤质量和肺部转移结节数量明显减少(P＜0.05);柴胡龙牡汤组在第2～3天的肿瘤细胞数目明显低于模型组(P＜0.05);模型组、顺铂对照组和恩度联合NP治疗组自然杀伤细胞活性明显降低,IFN-γ含量减少,IL-10含量升高(P＜0.05).柴胡龙牡汤组的白细胞数量高于其他组(P＜0.05),脾脏T淋巴细胞的CD4+、CD4+/CD8+比值明显高于模型组、顺铂对照组和恩度联合NP治疗组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:柴胡龙牡汤对Lewis肺癌肿瘤细胞有抑制作用.
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中药复方对小鼠Lewis肺癌的抑制作用及其抑制血管新生机制初步探讨
目的:观察中药复方肺金生方对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长和对新生血管的影响,初步阐明其可能的作用机制.方法:选取成功构建Lewis肺癌移植瘤模型C57BL/6小鼠48只,按随机数字表法分为荷瘤对照组、顺铂组、肺金生方低剂量组、肺金生方高剂量组4组,每组12只,分别以相应药物干预2周,取瘤块称重,计算肿瘤抑制率;采用SABC免疫组化法检测Lewis肺癌小鼠肿瘤组织的微血管密度(MVD);采用western blot法检测Lewis肺癌小鼠肿瘤组织的血管内皮生长因子(VEGF)蛋白和碱性纤维细胞生长因子(bFGF)的表达.结果:各组肿瘤质量中,顺铂组(1.65±0.15)g、肺金生方低剂量组(2.42±0.19)g、高剂量组(1.83±0.16)g与荷瘤对照组(3.13±0.21)g比较差异有统计学意义;各组对Lewis肺癌小鼠肿瘤的抑瘤率分别为:荷瘤对照组0,顺铂组46.61％,肺金生方低剂量组27.32％,肺金生方高剂量组44.29％:各组MVD的值中,顺铂组(16.74±0.96)个,肺金生方低剂量组(19.31±0.85)个、肺金生方高剂量组(17.21±0.77)个与荷瘤对照组(29.98±1.06)个比较差异有统计学意义;Western blot结果显示,各治疗组的VEGF和bFGF蛋白表达均低于模型组,差异有统计学意义;肺金生方高剂量组VEGF和bFGF蛋白的表达与顺铂组比较差异无统计学意义.结论:肺金生方可抑制血管新生对抗Lewis肺癌,其机制可能与抑制VEGF和bFGF相关.
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消积饮对小鼠Lewis肺癌生长和转移的抑制作用机制
目的:探讨消积饮对小鼠Lewis肺癌生长及转移的作用机理.方法:将Lewis肺癌细胞接种于30只C57BL/6小鼠右腋窝皮下后,把小鼠随机分成对照组、替加氟治疗组和消积饮治疗组,两治疗组分别灌服78mg/kg替加氟和60g/kg消积饮,每天1次,共21d.21d停药后次日,处死小鼠,测定各组小鼠的皮下瘤重肺转移灶数:运用流式细胞仪分析各组小鼠肿瘤细胞周期各时相分布.结果:经消积饮治疗的小鼠皮下瘤重(1.95g±0.39g,νs3.43g±0.55g,P＜0.01)以及肺转移灶数(3.30个±2.31个,ν11.3个±4.00个,P＜0.01)均较对照组低,C0/G1期细胞比例增高,S期细胞比例降低(P＜0.01),呈明显的C0/G1期阻滞现象.结论:消积饮抑制小鼠Lewis肺癌生长和转移可能与其促使肿瘤细胞发生q/G1期阻滞、阻抑细胞DNA合成有关.
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肺岩宁方及其不同组分对小鼠Lewis肺癌移植瘤VEGF、bFGF表达及血管生成的影响
肺岩宁方是徐振哗教授研制的具有防治肺癌侵袭转移作用的经验方,本实验在前期观察到肺岩宁方有抑制肺癌血管生成作用的基础上,进一步研究肺岩宁方及其不同组分对Lewis小鼠移植瘤VEGF,bFGF表达的影响,探讨该方抑制肿瘤血管生成的可能有效组分和作用靶点.
关键词： 肺岩宁方 Lewis肺癌 血管内皮生长因子 碱性成纤维细胞生长因子 -
中药复方JHL免疫抑制作用的实验研究
目的:探讨中药复方JHL的免疫抑制作用.方法:以动物移植肿瘤造模的实验方法,观察JHL对S 180及Lewis肺癌模型动物的免疫抑制作用.结果:对S 180有一定的抑制作用,对Lewis肺癌抑制作用无显著差异.使荷瘤小鼠胸腺明显萎缩;抑制其NK细胞活性;明显增强荷S 180小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能.而对Lewis肺癌仅5g/kg剂量可增强其腹腔巨噬细胞吞噬功能.10g/kg,20g/kg给药组能提高荷S 180小鼠脾细胞对ConA反应性,而5g/kg组作用相反;5g/kg,10g/kg降低Lewis肺癌小鼠脾细胞对ConA反应性.对荷瘤小鼠血清溶血素抗体的含量及IL-2水平作用不显著.与环磷酰胺合用,未见加强其作用.结论:JHL具有良好的免疫抑制作用,是一种颇有希望的免疫抑制剂,对S 180有一定抑制作用.
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针刺联合紫杉醇对小鼠Lewis肺癌细胞凋亡相关因子p53、bcl-2蛋白表达的影响
目的 本实验采用针刺联合抗癌新药紫杉醇对Lewis肺癌小鼠进行治疗,探讨针药结合对肿瘤的治疗作用及机制.方法 Lewis肺癌移植瘤小鼠48只,体重18～22 g,随机分为4组,即模型组、针刺组、药物组、针药结合组,每组12只.观察小鼠的生存状态、肿瘤体积的动态变化,应用Western Blotting法观察肿瘤组织中凋亡相关因子p53、Bcl-2蛋白表达情况.结果 针刺、紫杉醇、针刺联合紫杉醇均有抑瘤作用,但针药结合抑瘤作用强,且能改善实验动物的生存状态.各组中均有p53、bcl-2蛋白表达,模型组表达高;与模型组比较,针刺组、药物组、针药结合组表达明显低于模型组,有显著差异;针药结合组与针刺组和药物组比较,有显著差异.结论 针刺加紫杉醇具有联合抑制野生型p53基因突变,降低bcl-2蛋白表达的作用,两者具有协同效应.
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通关藤苷H对小鼠Lewis肺癌的抑制作用及对荷瘤小鼠免疫功能的影响
目的：研究通关藤苷H对小鼠Lewis肺癌的抑制作用,观察其对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法小鼠右腋皮下注射Lewis肺癌细胞,选取接种成功的荷瘤小鼠30只,随机分为模型组、环磷酰胺组、通关藤苷H组,每组10只。3组均从接种后第3日开始,每隔2d,分别给予腹腔注射生理盐水、环磷酰胺、通关藤苷H,0.2mL/只。第21日,摘眼球取血,取肿瘤组织、脾、胸腺并分别称重,计算抑瘤率、脾指数和胸腺指数；采用ELISA法检测血清中白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-10(IL-10)的含量。结果环磷酰胺组、通关藤苷H组的瘤质量均低于模型组,差异有统计学意义(P＜0.05),抑瘤率分别为54.12%、25.68%；通关藤苷H组的胸腺指数与脾指数升高,环磷酰胺组则下降较为显著。ELISA法检测结果显示,与模型组比较,通关藤苷H组的IL-2水平明显升高,IL-10水平显著降低。结论通关藤苷H可以抑制Lewis肺癌细胞生长和转移,调节免疫细胞因子IL-2、IL-10的表达水平,提高荷瘤小鼠的免疫功能。
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中药抗小鼠Lewis肺癌实验研究进展
利用小鼠Lewis肺癌细胞进行中药抗癌作用的研究,探索中医药对肺癌细胞生长与转移、细胞周期与细胞凋亡等遗传学与免疫学方面的研究,已成为中医药抗肺癌研究的重点领域之一.笔者查阅了1998年1月-2008年1月由国家自然科学基金、国家新药基金及各省市中医药管理局、卫生厅、教育厅等资助的中药抗小鼠Lewis肺癌作用研究文献,进行了详细的分析.现报道如下.
