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CD44剪接变异体在乳腺癌中的表达
目的 观察乳腺癌细胞系及原发性乳腺癌组织中CD44剪接变异体种类及其表达情况.方法 RT-PCR法检测乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MDA-MB-435和20例原发性乳腺癌组织中CD44变异体表达情况,分析其与临床病理参数之间的关系.结果 RT-PCR分析显示,在已知的8种剪接变异体、乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MDA-MB-435和所检测的全部乳腺癌组织标本中,检测到CD44剪接变异体1、2、3、4、5、6、8,其中CD44剪接变异体4、5表达水平较高.CD44剪接变异体与临床病理参数分析显示CD44剪接变异体与患者年龄、TNM分期、淋巴结转移、ER、PR表达无关.CD44剪接变异体1和CD44剪接变异体2 mRNA的高表达与较小的肿瘤直径有关;CD44剪接变异体4的mRNA高表达与组织学高级别有关;CD44剪接变异体2、6的mRNA高表达与Her-2低表达相关;CD44剪接变异体5的mRNA低表达和Her-2高表达相关.结论 MDA-MB-231、MDA-MB-435及所检测的乳腺癌组织标本中,CD44剪接变异体为异质性表达,以标准型CD44表达水平高.
关键词： 乳腺肿瘤 CD44 剪接变异体 MDA-MB-231 MDA-MB-435 -
环九肽与人乳腺癌MDA-MB-231细胞特异性结合的研究
目的:探讨99 Tcm标记分子探针与人乳腺癌MDA-MB-231细胞的特异结合及生物分布.方法:Western blot分析MDA-MB-231细胞和正常乳腺上皮细胞MCF-10A IL-11受体(IL-11R)蛋白的表达;荧光检测99 Tcm-DTPA-c(CG-RRAGGSC)与乳腺癌细胞的特异性结合及结合位点.18只荷瘤裸鼠随机分为6组(n=3),经尾静脉注入0.74 MBq(0.1 mL)分子探针,不同时间测量其在荷瘤鼠体内生物分布.结果:West-ern blot检测MDA-MB-231细胞IL-11R是MCF 10A细胞的6.7倍;荧光染色证实99 Tcm-DTPA-c(CGRRAGGSC)-FITC特异结合在MDA-MB-231细胞的胞质和胞膜中;乳腺癌细胞IL-11R结合分子探针具饱和性;分子探针在荷瘤鼠体内迅速、持续聚集在瘤体内,4h达峰值(17.63±1.73) ％ID/g,其他脏器分布极少,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:MDA-MB-231细胞呈IL-11R高表达,与环九肽具有高亲和力,99Tcm标记环九肽放射性分子探针体内外能与之靶向特异结合.
关键词： 环九肽 肿瘤/乳腺癌 MDA-MB-231 -
HSPG和无HS-GAGs链HSPG体外抗乳腺癌的研究
目的:比较硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(简称HSPG)和去硫酸乙酰肝素链(简称HS-GAGs链即HS链)的HSPG的体外抗人乳腺癌细胞MDA-MB-231的抗增殖和凋亡诱导作用.方法:对HSPG进行提取、纯化,硫酸乙酰肝素酶1水解HSPG的HS链;光学显微镜法观察两组分引起的细胞形态学的变化;MTT比色法检测两组分对肿瘤细胞生长曲线的影响;流式细胞术结合Annexin V-FTTC及PI双染标记法观察两组分对肿瘤细胞凋亡的影响.结果:HSPG可致MDA-MB-231细胞脱落悬浮;MTT法检测结果显示HSPG对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用随浓度的增加而增强,而去HS链HSPG只有在高浓度时才呈现出抑制作用.HSPG能诱导MDA-MB-231的早期凋亡,而去HS链HSPG在高浓度(4 mg/mL)时对MDA-MB-231早期凋亡有诱导作用.结论:HSPG能诱导MDA-MB-231的早期凋亡和抑制细胞生长增殖.作用机制可能与HSPG的硫酸乙酰肝素链有关.
关键词： 硫酸乙酰肝素蛋白聚糖 硫酸乙酰肝素链 MDA-MB-231 MCF-7 凋亡 -
eEF2K对MDA-MB-231细胞增殖的影响与初步机制研究
目的 研究在不同培养条件下,真核延伸因子2激酶(eEF2K)对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响,并初步探讨其机制.方法 慢病毒感染构建eEF2K表达抑制的MDA-MB-231稳定细胞株以及对应的空载体对照细胞株.在完全、无糖和无血清的培养条件下,SRB法测定细胞增殖曲线,平板克隆实验评价细胞的克隆形成能力,Western blot检测增殖相关蛋白的表达和活性.结果 贫营养条件下,抑制MDA-MB-231细胞中eEF2K的表达能够促进细胞生长.而在完全培养条件下,抑制eEF2K表达则抑制细胞的增殖和克隆形成,并降低Akt和mTOR蛋白的活性,对其它增殖相关分子如PI3K、Src、ERK、JAK无明显影响.结论 不同培养条件下,eEF2K对MDA-MB-231细胞生长影响不同,其功能值得进一步研究.
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海参粘多糖对肿瘤细胞介导的凝血过程的影响
目的 探究海参粘多糖(hGAG)对MDA-MB-231乳腺癌细胞介导的凝血过程的影响及其作用机制.方法 采用MDA-MB-231乳腺癌细胞为模型,观察经不同浓度的hGAG处理后的肿瘤细胞对血浆复钙时间的影响;采用S-2222发光底物检测凝血因子Xa(FXa)的生成;以Fluo-4/AM为荧光探针,在荧光酶标仪下检测细胞Ca2+的变化;流式细胞仪检测细胞表面组织因子(TF),采用real-time PCR和Western blot的方法分别对TF的mRNA和蛋白水平进行测定;并观察hGAG对AKT、MAPK、NF-κB等信号通路的影响.结果 hGAG 0.01～1 μmol·L-1可以呈剂量依赖性的方式延长肿瘤细胞诱导的血浆复钙时间,并降低FXa的生成,对Ca2+无明显影响,而能够下调TF的mRNA和蛋白表达,抑制p38的磷酸化而对其它信号通路无明显影响.结论 hGAG通过下调TF的表达及p38的磷酸化而抑制MDA-MB-231细胞诱导的凝血过程.
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甘精胰岛素和人胰岛素对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖作用
目的 探讨甘精胰岛素(insulin glargine)和人胰岛素(human insulin)对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖的影响及细胞外信号调节激酶(ERK)的调节作用.方法 使用不同浓度的甘精胰岛素和人胰岛素刺激人乳腺癌MDA-MB-231细胞株,检测不同时间段的细胞增殖作用,探讨抑制ERK1/2激活对细胞增殖的影响.使用cell counting kit-8(CCK-8)试剂检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期分布.结果 甘精胰岛素和人胰岛素在1、10、100 IU·L-1刺激MDA-MB-231细胞96 h后均可轻度促进MDA-MB-231细胞增殖,相同条件下甘精胰岛素和人胰岛素的促增殖效应无差异.甘精胰岛素与人胰岛素以10 IU·L-1分别刺激48、72、96 h后两药均诱导细胞增殖,比较两种药物间增殖效应的差异无统计学意义.甘精胰岛素和人胰岛素均使S+G2/M期细胞比例增加,但两处理组间差异无显著性.ERK1/2抑制剂PD98059可抑制MDA-MB-231细胞增殖;但PD98059不影响甘精胰岛素和人胰岛素对MDA-MB-231细胞增殖的促进作用.结论 甘精胰岛素和人胰岛素对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖有类似的轻度促进作用,该作用不依赖于ERK的激活.
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黄芩素抑制人乳腺癌细胞侵袭和迁移的实验研究
目的 探讨黄芩素 (baicalein) 对人乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭和迁移的作用及其机制.方法 MTT法检测Baicalein对细胞活力的影响;Transwell小室测定其侵袭力和迁移力;细胞划痕实验测定细胞运动能力;Western blot检测细胞MMP 2、MMP 9和uPA的表达.结果 与对照组相比,50、100 μmol·L-1的baicalein明显抑制了MDA-MB-231细胞的侵袭(P<0.01) 和迁移(P<0.01).其中,baicalein对细胞侵袭抑制率分别为15%和44%,对细胞迁移的抑制率分别为50%和77%.50 μmol·L-1的baicalein抑制了MMP 2的表达水平,100 μmol·L-1的baicalein分别抑制了MMP 9和uPA的表达水平.结论 baicalein能够抑制MDA-MB-231细胞侵袭和迁移,其机制可能与直接抑制细胞侵袭和迁移能力, 抑制MMP 2、MMP 9和uPA的表达有关.
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选择性Bcl-2抑制剂ABT-199对乳腺癌细胞MDA-MB-231的放疗增敏作用
目的 研究ABT-199 对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的放疗增敏作用,并探讨其作用机制. 方法 取对数期生长的MDA-MB-231细胞分成对照组、药物组、照射组及联合组(照射+ABT-199). 四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同剂量单纯照射和ABT-199 分别作用不同时间对MDA-MB-231细胞增殖的影响并计算20%抑制浓度( IC20 );流式细胞术检测 ABT-199 对 MDA-MB-231 细胞周期和凋亡的影响;Caspase活性试剂盒检测细胞 Caspase-3 活性变化;Western blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Bcl-xl的表达. 结果ABT-199对MDA-MB-231细胞有增殖抑制作用且有时间和浓度依赖性,随着ABT-199 浓度的升高, MDA-MB-231 细胞发生不同程度的G0/G1 期阻滞. 联合组较照射组细胞凋亡率明显增高(16. 9% vs 84. 5%),Bcl-2表达水平明显下调(P<0. 05),Bcl-xl变化不明显,同时Bax水平和胞内Caspase-3活性增高(P<0. 05). 结论 选择性Bcl-2抑制剂ABT-199可有效抑制人乳腺癌细胞系MDA-MB-231增殖,诱导细胞发生G0/G1 期阻滞及凋亡. IC20浓度的ABT-199 可明显提高MDA-MB-231细胞对放疗的敏感性.
关键词： MDA-MB-231 ABT-199 Bcl-2抑制剂 放疗 协同效应 -
4-肼基苯磺酸特异性抑制SHP-2激活突变的乳腺癌细胞增殖
目的 研究4-肼基苯磺酸对SHP-2激活突变的乳腺癌MDA-MB-231细胞株增殖的特异性抑制作用,为新型抗乳腺癌药物的开发提供些许参考.方法 不同浓度的4-肼基苯磺酸处理SHP-2激活突变的MDA-MB-231细胞,用MTT法检测细胞的增殖.结果 4-肼基苯磺酸对乳腺癌MDA-MB-231细胞株的增殖有明显抑制作用,并呈剂量依赖性;同时对SHP-2低活性的对照组细胞无明显作用.结论 4-肼基苯磺酸可特异性地抑制SHP-2激活突变的乳腺癌MDA-MB-231细胞的体外增殖,这种抑制效果应是通过特异性抑制SHP-2异常增高的磷酸酶活性来实现的.
关键词： 4-肼基苯磺酸 乳腺癌 MDA-MB-231 SHP-2酪氨酸磷酸酶 -
银杏叶提取物(EGb-761)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响
目的:探讨银杏叶提取物(EGb-761)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响.方法:以不同浓度的EGb-761作用于人乳腺癌MDA-MB-231细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率、Transwell小室实验测定侵袭及迁移能力.结果:MTT法检测显示,EGb-761组处理的细胞生长受到抑制,其抑制率呈浓度依赖关系;与对照组相比,656.25μg/mL、1093.75μg/mL、1531.25μg/mL的EGb-761明显抑制了MDA-MB-231细胞的侵袭(P<0.05)和迁移(P<0.05).其中EGb-761对细胞侵袭力的影响:低、中、高浓度组对MDA-MB-231细胞穿透基质胶的数量分别为(77.4±16.67)%、(47.6±11.80)%、(22.2±4.67)%;EGb-761对细胞迁移力的影响:低、中、高浓度组对MDA-MB-231细胞穿透数量分别为(87.72±18.54)%、(72.48±29.33)%、(56.40±13.18)%.结论:EGb-761能够抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭及迁移能力.
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小檗碱药理作用对乳腺癌MDA-MB-231细胞的影响
目的 研究中药小檗碱对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖与代谢的影响,探讨小檗碱治疗或改善乳腺癌的可能机制.方法 2015年4-10月分别用50、100μmol/L的小檗碱处理乳腺癌MDA-MB-231细胞12、24、36 h,检测小檗碱对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及TNF-α及IL-8的分泌的影响,检测细胞组蛋白脱乙酰酶4(histone deacetylase 4,HDAC4)及P21的表达水平.计量资料两组间比较采用f检验,多组间比较采用方差分析,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 与对照组相比,24及36 h时50和100μmol/L小檗碱组均抑制MDA-MB-231的增殖,差异有统计学意义(P＜0.05);不同浓度小檗碱组的细胞增殖率比较,差异有统计学意义(P＜0.05).与对照组比较,12与24 h低浓度小檗碱对细胞增殖均有抑制作用,差异均有统计学意义(均P＜0.05);与24 h比较,12、36 h高浓度小檗碱对细胞增殖有影响,差异均有统计学意义(均P＜0.05).24和36 h时不同浓度的小檗碱组与对照组的TNF-α含量相比,差异有统计学意义(P＜0.05),且小檗碱的浓度越高,TNF-α的分泌受到抑制的程度越大.36 h时低浓度小檗碱组IL-8含量明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05);不同时间段高浓度小檗碱组IL-8的分泌与对照组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).24 h时小檗碱组与对照组比,HDAC4的表达均下调,P21的表达上调,差异均有统计学意义(均P＜0.05),高浓度小檗碱组相对低浓度小檗碱组HDAC4表达量的下调及P21的上调更明显.36 h时小檗碱组与对照组比HDAC4的表达下调的,且小檗碱浓度越高,相对表达量越低,P21则相应上调.12与24及36 h小檗碱组HDAC4及P21的表达比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 小檗碱可抑制乳腺癌细胞的增殖与代谢,可能机制是抑制HDAC4的表达,同时上调P21的表达,从而抑制乳腺癌的发展与转移.
关键词： 小檗碱 乳腺癌 MDA-MB-231 组蛋白脱乙酰酶4 p21 -
二烯丙三硫对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和侵袭的抑制及对uPA系统的调节
目的 研究二烯丙三硫( DATS)对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和侵袭能力的影响及对尿激酶型纤溶酶激活物(uPA)系统的调节作用.方法 实时定量PCR法(real-time PCR)检测乳腺癌细胞株uPA系统中uPA、uPA受体(uPAR)和uPA抑制物(PAI-1)的表达；使用不同浓度DATS处理乳腺癌细胞,MTS比色法测定细胞的增殖能力；Matrigel体外浸润实验检测DATS(20 ～ 60 μmol/L)对细胞浸润能力的影响；Transwell小室迁移实验和划痕试验评价60 μmol/L DATS对细胞迁移能力的影响；RT-PCR和Western blot分别测定60 μmol/L DATS作用后,乳腺癌细胞中uPA、uPAR和PAI-1 mRNA和蛋白表达的变化;ELISA法检测细胞培养液中PAI-1蛋白含量的变化.结果 20 ～80μmol/L DATS对高侵袭性乳腺癌细胞株MDA-MB-231的生长有明显的抑制作用,且呈浓度和时间依赖性.60 μmol/L DATS明显抑制MDA-MB-231细胞的浸润和迁移能力,并在mRNA和蛋白水平上,显著上调PAI-1的表达,但对uPA和uPAR的表达水平无显著影响.结论 DATS抑制MDA-MB-231细胞的增殖和侵袭能力,并在mRNA和蛋白水平上,显著上调PAI-1的表达.
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异甘草酸镁对乳腺癌细胞系生物学行为的影响及作用机制
目的 观察异甘草酸镁对乳腺癌生物学行为的影响,并初步探讨其作用机制.方法 将三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231与ER阳性乳腺癌细胞株MCF-7用不同浓度(0、50、500μmol/L)异甘草酸镁处理,分别采用CCK-8法、划痕实验、LDH活性检测观察异甘草酸镁对两种细胞株细胞增殖、迁移、死亡的作用;利用Western blotting检测异甘草酸镁对细胞不同凋亡蛋白(Bax、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9、HSP70与HSP90)的表达.结果不同浓度异甘草酸镁处理后,乳腺癌细胞的增殖、迁移能力被明显抑制,细胞自噬、凋亡增加;与化疗药物顺铂联合使用后,异甘草酸镁能够提高顺铂对乳腺癌细胞迁移能力的抑制作用.在MDA-MB-231细胞株中,异甘草酸镁能够降低HSP90蛋白的表达,促进Bax蛋白的表达;在MCF-7细胞株中,异甘草酸镁能够降低HSP70蛋白的表达.结论 异甘草酸镁对乳腺癌细胞株的生物学行为存在一定抑制作用,与化疗药物顺铂联合使用,能够提高顺铂对肿瘤细胞的抑制作用. 异甘草酸镁在MCF-7及MDA-MB-231细胞株中的作用机制存在一定差异.
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天花粉蛋白诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡机制的研究
目的：探讨天花粉蛋白（ TCS）诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡及与凋亡相关蛋白bcl-2表达相关性。方法利用CCK-8检测不同浓度TCS对MDA -MB-231细胞生长抑制作用；通过流式细胞仪（ FCM ）测定天花粉蛋白作用后MDA-MB-231细胞周期及细胞凋亡变化情况；利用流式细胞仪观察不同浓度天花粉蛋白作用于MDA-MB-231后bcl-2蛋白表达情况。结果随着TCS浓度升高、作用时间延长，人乳腺癌MDA-MB-231细胞的生长受到明显抑制，且存在剂量效应和时间效应关系；TCS在一定浓度范围内能诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡，使细胞阻滞于G1期，并使细胞中bcl-2蛋白表达下降。结论 TCS能通过促进细胞凋亡来抑制人乳腺癌MDA-MB-231的生长，bcl-2表达下降可能是TCS诱导人乳腺癌MDA-MB-231凋亡的分子机制之一。
关键词： 天花粉蛋白 乳腺肿瘤 MDA-MB-231 BCL-2蛋白 -
乳腺癌细胞中E1AF,MMP-1和MMP-9的表达及其相关性
目的 探讨雌激素受体阳性(ER+)乳腺癌细胞MCF-7和雌激素受体阴性(ER-)乳腺癌细胞MDA-MB-231及MDA-MB-435s中E1AF,MMP-1和MMP-9表达情况及相关性.方法 应用免疫细胞化学技术检测3种不同乳腺癌细胞中MMP-9的表达,采用RT-PCR方法检测细胞株中E1AF,MMP-1及其mRNA表达.结果 ER(-)乳腺癌细胞MDA-MB-231中E1AF基因、MMP-1及其mRNA的表达水平与MMP-9的表达高于ER(+)乳腺癌细胞MCF-7和ER(-)乳腺癌细胞MDA-MB-435s.结论 乳腺癌细胞中E1AF的表达与MMP-1,MMP-9的表达存在相关性,E1AF可能是乳腺癌侵袭转移的重要因子.
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miRNA-411对乳癌细胞侵袭和迁移的影响
目的 探讨微小RNA-411(miRNA-411)对人乳癌细胞株MDA-MB-231增殖、侵袭和迁移的影响.方法 采用实时定量PCR方法检测高转移性乳癌细胞MDA-MB-231与低转移性乳癌细胞MCF-7中miRNA-411的表达.采用LipofectamineTM 2000将miRNA-411成熟子(Mimic)转染至MDA-MB-231细胞中,通过采用实时定量PCR方法检测miRNA-411 Mimic的转染效率,Transwell法检测细胞的迁移和侵袭能力,免疫蛋白印迹法检测E-钙黏素(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达,MTT实验检测MDA-MB-231细胞的增殖能力.结果 miRNA-411在MDA-MB-231细胞中的表达水平显著低于MCF-7细胞(t=7.45,P＜0.01).miRNA-411 Mimic瞬时转染MDA-MB-231细胞后,其迁移和侵袭能力均受到明显的抑制(t=7.24、6.62,P＜0.01),而且经转染的细胞E-cadherin表达升高,而Vimentin表达下降.然而,miRNA-411 Mimic对MDA-MB-231细胞增殖能力无明显影响(P＞0.05).结论 miRNA-411在高转移性乳癌细胞中低表达,转染miRNA-411 Mimic后乳癌细胞MDA-MB-231迁移和侵袭能力明显减弱,其迁移和侵袭能力的下降并非通过降低MDA-MB-231细胞的增殖能力所致,而是可能通过逆转MDA-MB-231细胞的上皮-间质转化过程实现的.
关键词： 乳房肿瘤 MDA-MB-231 miRNA-411 细胞运动 肿瘤侵润 -
Cbl-b shRNA稳定转染乳腺癌MDA-MB-231细胞系的构建
目的 构建靶向Cbl-b基因的短发夹环RNA(shRNA)真核质粒表达载体,建立Cbl-b shRNA稳定转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞系,为探讨Cbl-b的生物学功能奠定基础.方法 设计Cbl-b shRNA序列BLAST进行同源性分析.化学合成法合成shRNA序列,将配对的单链合成双链,以T4连接酶连接于pSilencerTM 4.1-CMV表达载体,加入感受态细胞.将菌液涂布于含有氨苄青霉素的LB平板,筛选阳性菌落,测序确认后进行大量复制、扩增,提取重组质粒.脂质体法将上述质粒转染至MDA-MB-231细胞中,G418持续压力选择和有限稀释法获得稳定转染的细胞系.结果 DNA测序证实靶向Cbl-b基因的shRNA真核质粒表达载体构建正确,G418压力筛选出阳性克隆,Western blot检测发现MDA-MB-231/Cbl-b shRNA转染细胞株中Cbl-b蛋白表达水平明显下调.结论 成功构建了基因沉默Cbl-b的MDA-MB-231细胞株,为进一步探讨其生物学功能奠定实验基础.
关键词： 乳腺肿瘤 Cbl-b 短发夹环RNA MDA-MB-231 转染 -
半边旗提取物5F 对乳癌细胞 MDA-MB-231培养物诱导的HUVEC血管生成潜能的影响
目的：研究半边旗提取物5F对乳癌细胞MDA-MB-231培养物（乳癌细胞培养物）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）血管生成潜能的影响及其作用机制。方法：MTT法检测不同浓度5F对乳癌细胞培养物诱导的HU-VEC增殖的抑制作用；Transwell小室法检测不同浓度5F对乳癌细胞培养物诱导的HUVEC穿膜能力和趋化性运动能力的影响；细胞-基质黏附实验检测5F对乳癌细胞培养物诱导的HUVEC黏附能力的影响；RT-PCR、Western blot法检测不同浓度5F对乳癌细胞培养物诱导的HUVEC KDR、Flt-1 mRNA和蛋白表达的影响。结果：不同浓度5F处理6、24 h后对乳癌细胞培养物诱导的HUVEC的增殖有一定程度的抑制作用（F组间＝64．852，F时间＝131．393，P＜0．001）。20、40、80μmol/L 5F可抑制乳癌细胞培养物诱导的HUVEC体外穿膜能力、趋化性运动能力和黏附基质能力（F＝48．206、147．613、22．081，P均＜0．001）。不同浓度5F作用于乳癌细胞培养物诱导的HUVEC 24 h后，下调HUVEC KDR、Flt-1 mRNA和蛋白的表达（mRNA：F＝86．381、79．175；蛋白：F＝36．621、127．910，P均＜0．001）。结论：5F抑制乳癌细胞培养物诱导的HUVEC体外增殖、穿膜能力、趋化性运动能力和黏附基质能力，其机制可能与下调细胞KDR mRNA和蛋白的表达水平有关。
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乳康舒颗粒剂对乳腺癌肿瘤组织VEGF和Ki-67表达的影响研究
目的 探讨乳康舒颗粒剂对乳腺癌细胞血管生成因子(VEGF)和肿瘤细胞增殖核抗原(Ki-67)表达的影响.方法 乳腺癌细胞株MDA-MB-231接种于裸鼠右前肢腋下,分别给予高、低剂量乳康舒颗粒剂,连续灌胃两周,脱臼处死,取肿瘤组织称重并计算瘤重系数,免疫组织化学法测定瘤组织中VEGF、Ki-67的表达.结果 乳康舒颗粒剂高剂量组瘤重明显低于对照组,且抑制肿瘤组织中VEGF、Ki-67的过度表达,呈剂量效应关系.结论 乳康舒颗粒剂能抑制MDA-MB-231乳腺癌荷瘤裸鼠肿瘤细胞的生长.
关键词： 乳康舒颗粒剂 MDA-MB-231 乳腺癌 VEGF Ki-67 -
多药耐药基因MDR1慢病毒表达载体的构建、病毒包装及功能验证
目的 构建MDR1基因的过表达慢病毒载体并进行病毒的包装,为进一步深入的研究MDR1基因在乳腺癌耐药中的作用提供基础工具.方法用PCR 技术获得MDR1基因片段,将其连接入酶切后的慢病毒载体,转化感受态进行PCR及测序鉴定,脂质体转染293T细胞,包装成慢病毒再分别感染靶细胞MDA-MB-231和MCF-7细胞验证其生物学功能.结果 成功构建MDR1慢病毒表达载体,测序证实所获取基因序列完全正确,Western印迹验证在乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7稳转MDR1细胞系中MDR1基因高表达.通过药物杀伤实验验证稳转MDR1细胞组较对照组耐药性显著增高.结论 MDR1慢病毒表达载体的成功构建及病毒包装完成为进一步深入研究MDR1基因在乳腺癌多药耐药过程中的作用奠定了基础.
关键词： MDR1 慢病毒表达载体 MDA-MB-231 MCF-7
