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三羟异黄酮对人乳腺癌细胞端粒酶的影响
目的 研究三羟异黄酮(Genistein,Gen)对人乳腺癌细胞系体外增殖的影响及其与端粒酶的关系.方法 体外培养雌激素受体阳性(ER+)和阴性 (ER-)乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231,MTT法检测细胞增殖的影响;RT-PCR法观察端粒酶逆转录酶TERT基因mRNA的表达;免疫细胞化学染色观察NF-κB p65的核移位.结果 雌二醇(Estradiol,E2)单独作用时,促进MCF-7细胞增殖、TERT mRNA表达和NF-κB p65的核移位,但对MDA-MB-231细胞无明显影响.低剂量的Gen对MCF-7细胞的单独作用与E2类似,与E2联合作用时,MCF-7细胞无明显变化;高剂量的Gen单独或联合E2作用于 MCF-7细胞以及MDA-MB-231细胞,均表现为抑制细胞增殖、TERT mRNA表达和NF-κB p65的核移位.结论 Gen对两种乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231增殖的不同影响与雌激素受体表达状态及E2存在与否有关,并可能是通过调节TERT的mRNA表达、NF-κB p65的核移位来调控细胞端粒酶活性的.
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miR-204对乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学特性的影响
目的 研究microRNA-204(miR-204)对乳腺癌细胞生物学特性的影响.方法 在人乳腺癌细胞MDA-MB-231中转染miR-204模拟物和抑制剂后48 h,实时荧光PCR(Real-time PCR)检测细胞中miR-204表达变化.流式细胞仪分析miR-204对MDA-MB-231细胞增殖、凋亡的影响.采用Transwell迁移小室分析法检测miR-204对MDA-MB-231细胞迁移的影响.结果 实时荧光PCR分析:miR-204模拟物和抑制剂效果显著,与正常对照比较差异有统计学意义(P<0.01);流式细胞仪分析:与正常对照相比,miR-204 模拟物组G1期细胞数目明显减少(P<0.01),G2/M期细胞数目明显增多(P<0.01),而miR-204 抑制剂的作用则相反,G1期细胞数目明显增多(P<0.01),G2/M期细胞数目明显减少(P<0.01);miR-204模拟物组明显促进细胞凋亡(P<0.01),而抑制剂组明显抑制细胞凋亡(P<0.01).Transwell迁移小室分析:miR-204 模拟物组穿过Transwell迁移小室的细胞明显减少(P<0.01),而抑制剂组则相反,细胞数目明显增多(P<0.01).结论 miR-204对乳腺癌MDA-MB-231细胞具有负调控作用,能够抑制乳腺癌细胞增殖和迁移,促进癌细胞凋亡.
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β-榄香烯对人乳腺癌细胞侵袭和迁移作用的研究
目的:研究β-榄香烯对不同分子亚型人乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的作用.方法:以不同转移潜能MCF-7、MDA-MB-231乳腺癌细胞作为研究对象,设空白对照组及药物组,药物组以不同浓度β-榄香烯溶液作用细胞24h与48h后,CCK8法检测其对细胞活力的影响.应用细胞克隆形成实验进一步检测β-榄香烯对两种细胞增殖和克隆形成能力的影响.此外,Transwell实验和划痕实验检测β-榄香烯对高转移性细胞株MDA-MB-231细胞侵袭和迁移能力的作用.结果:β-榄香烯对MCF-7、MDA-MB-231乳腺癌细胞的活力均有抑制作用,且对高转移细胞MDA-MB-231抑制作用更强,对于MCF-7细胞24h,48h的半数抑制浓度(IC5o)分别为(43.45±0.43),(43.05±0.56)μg/ml,对MDA-MB-231细胞24h,48h的半数抑制浓度(IC50)分别为(12.20±0.61),(8.30±0.27)μg/ml.克隆形成实验结果表明β-榄香烯能够抑制乳腺癌细胞的克隆形成率,与空白对照组相比具有显著性差异.当β-榄香烯浓度为25μg/ml时,对MDA-MB-231细胞的抑制率达到49.2％,对MCF-7只有15.5％.此外,Transwell实验和划痕实验结果显示当β-榄香烯浓度达到10μg/ml时就能抑制高转移性细胞株MDA-MB-231的侵袭和迁移能力.结论:β-榄香烯能够抑制MCF-7、MDA-MB-231的细胞活力、增殖和克隆形成,且对高转移性细胞株MDA-MB-231的侵袭和迁移能力显示出很强的抑制作用,其具体作用机制有待进一步研究.
关键词： β-榄香烯 MCF-7 MDA-MB-231 乳腺癌 -
采用MDA-MB-231细胞膜进行表皮生长因子受体活性的检测
目的探讨能否直接利用肿瘤细胞膜进行表皮生长因子受体(Epidermal growthfactor receptor,EGFR)催化活性检测.方法首先筛选出EGFR基因表达水平相对较高的细胞株MDA-MB-231,通过差速离心制备细胞膜,采用Western blotting检测EGFR催化磷酸化的程度.结果底物被磷酸化,加入特异性拮抗剂AG1478后,磷酸化被抑制.结论利用肿瘤细胞膜检测EGFR活性的设想是成立的,并且其方法简便、经济.
关键词： 表皮生长因子受体 MDA-MB-231 细胞膜 -
非分泌型CXCL16在乳腺癌细胞系中的表达及对其生物学特性的影响
目的 通过检测非分泌型CXCL16在不同侵袭性乳腺癌细胞系(SK-BR-3、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435S)及正常乳腺上皮细胞MCF-10A的表达,探讨非分泌型CXCL 16表达对乳腺癌细胞生物学特性的影响.方法 采用RT-PCR检测CXCL16 mRNA在MCF-10A、SK-BR-3、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435S细胞系的表达,将pEGFP-CXCL16真核表达质粒转染到低表达CXCL 16的MDA-MB-231细胞,通过实时荧光定量PCR和Western blot验证CXCL16过表达,采用体外迁移、侵袭实验及甲基四唑蓝(MTT)法分别检测过表达CXCL16对MDA-MB-231细胞迁移、侵袭和增殖活性的影响.结果 CXCL16 mRNA在高侵袭性的MDA-MB-231细胞低表达,在低侵袭性的MCF-7细胞高表达,过表达CXCL16使得MDA-MB-231细胞的迁移、侵袭减弱,而增殖未受到影响.结论 非分泌型CXCL16表达与乳腺癌细胞系的侵袭性相关,其表达可以抑制乳腺癌细胞的体外迁移、侵袭.
关键词： CXCL16 MDA-MB-231 迁移 侵袭 增殖 -
青蒿琥酯对乳腺癌细胞株MDA-MB-231生长的影响
目的 探讨青蒿琥蒿酯对乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖的影响及可能机制.方法 以不同浓度(0、25、50、100μg/ml)的青蒿琥酯处理MDA-MB-231细胞,然后用MTT(四甲基偶氮唑盐)法检测各组细胞生长情况,用显微镜计数各组分裂期细胞所占比例,用流式细胞仪分析细胞周期(主要为C2/M期细胞和凋亡细胞比例).结果 MTT显示青蒿琥酯对MDA-MB-231细胞增殖有抑制作用,且随着药物浓度的增加和药物处理时间的延长,抑制作用增加,各实验组与对照组比较,经统计分析差异有统计学意义(P＜0.05);细胞分裂指数结果、流式细胞仪分析结果显示青蒿琥酯可明显增加MDA-MB-231细胞的分裂期细胞或G2/M比例和凋亡细胞比例,与时照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 青蒿琥酯可通过抑制MDA-MB-231细胞分裂而阻碍其增殖,同时还具有诱导细胞凋亡的作用,青蒿琥酯可作为治疗乳腺的一个潜在药物.
关键词： 青蒿琥酯 MDA-MB-231 乳腺癌 四甲基偶氮唑盐 流式细胞仪 -
单羧酸转运蛋白基因过表达对MDA-MB-231乳腺癌细胞生物学行为的影响
目的 研究单羧酸转运蛋白(MCT)基因过表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡、细胞周期、侵袭和转移能力的影响.方法 将真核表达质粒pcDNA3.1/MCT及空质粒pcDNA3.1分别转染乳腺癌MDA-MB-231细胞.采用实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法分别检测转染后细胞内MCT基因的表达.Annexin V-FITC/PI染色和PI单染色结合流式细胞术检测MCT基因过表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡、细胞周期的影响,Transwell(R)实验检测MCT基因过表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响,划痕实验检测MCT基因过表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移能力的影响.结果 实验组MCT的mRNA和蛋白水平明显高于转染空质粒的阴性对照组和未处理组;MCT过表达能促进乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡,G2期细胞减少、S期细胞增多,同时能抑制癌细胞的侵袭和迁移能力.结论 MCT基因过表达能促进MDA-MB-231细胞的凋亡、调节细胞G2/M期检控点,抑制细胞的侵袭和迁移能力.
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ABT-263增敏Lexatumumab诱导三阴性乳腺癌细胞凋亡的研究
目的:研究Bcl-2抑制剂对于死亡受体单克隆抗体Lexatumumab激活诱导三阴性乳腺癌细胞凋亡的增敏效果.方法:体外培养ER、PR和HER-2三阴性细胞株.分为对照组、ABT-263处理组、Lexatumumab处理组、ABT-263+ Lexatumumab处理组.用亚致死剂量的ABT-263,或者Lexatumumab,或者二者同时处理细胞,荧光显微镜观察对照组和处理组细胞内细胞核凋亡形态变化情况.然后凋亡细胞计数,统计凋亡率.免疫印迹(Western blotting)法检测细胞凋亡标志性蛋白Caspase3和PARP切割条带在各组中的表达,以评估Bcl-2抑制作用对死亡受体信号通路诱导细胞凋亡的影响.结果:在荧光显微镜下,可以观察到ABT-263和Lexatumumab单独处理细胞不能够诱导三阴性乳腺癌细胞核出现固缩凝聚现象.抑制剂ABT-263能够显著逆转Lexatumumab诱导的乳腺癌细胞凋亡.结论:Bcl-2抑制剂ABT-263能够增敏单克隆抗体Lexatumumab诱导三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞凋亡.ABT-263和Lexatumumab联合诱导的凋亡作用具有Caspase依赖性.
关键词： Bcl-2 乳腺癌 MDA-MB-231 Lexatumumab 细胞凋亡 -
乳腺癌肿瘤相关成纤维细胞对MDA-MB-231细胞增殖、凋亡、黏附及侵袭的影响
目的:研究乳腺癌肿瘤相关成纤维细胞(carcinoma-associated fibroblasts,CAFs)对乳腺癌细胞增殖、凋亡、黏附和侵袭能力的影响.方法:首先,从6例乳腺癌病人肿瘤及癌旁正常乳腺组织块分别分离培养成对的CAFs和正常成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs).然后,通过Transwell小室将CAFs或NFs与乳腺癌MDA-MB-231细胞体外共培养,进行增殖(MTT)、侵袭、黏附实验及流式细胞仪细胞凋亡检测.结果:MDA-MB-231与CAFs或NFs共培养后乳腺癌细胞的增殖活性显著增强(P＜0.05).与NFs相比,这种差异在同CAFs共培养组更为明显(P =0.011).与CAFs共培养之后,MDA-MB-231的早期凋亡显著减少(P=0.026);而与NFs共培养之后则无显著差异.CAFs或NFs对MDA-MB-231细胞的细胞周期和晚期凋亡无明显影响.与CAFs或NFs共培养24小时后,MDA-MB-231细胞的侵袭、黏附能力明显增强,黏附数目为(34.7±4.84)个/视野(CAFs)和(20.16±0.09)个/视野(NFs),(P =0.000);侵袭数为(89±4.62)个/视野(CAFs)和(81.6±6.08)个/视野(NFs),(P＜0.05).结论:CAFs能促进乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、减少其早期凋亡;同时对乳腺癌细胞的黏附和侵袭能力有促进作用.可是NFs的作用较CAFs为弱.有关CAFs影响乳腺癌肿瘤细胞的生物学特性的机制有待于进一步研究.
关键词： 乳腺癌 间质 肿瘤相关成纤维细胞 MDA-MB-231 -
Iressa对ER表达状态不同的乳腺癌细胞增殖的影响
目的:观察Iressa对雌激素受体表达状态不同的人乳腺癌细胞:ER(+)的MCF-7和ER(-)的MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用.方法:设置Iressa不同浓度组、时间组,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测Iressa对细胞生长的影响,并分析量效关系、时效关系.结果:Iressa以0.01-1μmol/L浓度作用24h之后对2种细胞均有抑制增殖的作用,其中MDA-MB-231的抑制率于48h达到高峰;浓度为10 μmol/L时抑制率高峰,MCF-7出现在48h,而MDA-MB-231在72h;且同浓度的Iressa作用相同时间后,对MDA- MB-231的抑制率更高.结论:一定浓度的Iressa作用一定时间后对雌激素受体表达状态不同的人乳腺癌细胞有抑制细胞增殖的作用,且对ER(-)的MDA-MB-231细胞作用更显著.
关键词： 乳腺癌细胞MCF-7 MDA-MB-231 Er Iressa MTT 增殖 -
ZIC1联合苦参碱对人乳腺癌 MDA - MB -231细胞增殖、迁移及凋亡的影响
目的：探讨 ZIC1联合苦参碱对人乳腺癌 MDA - MB -231细胞的增殖、迁移能力及凋亡的影响。方法：将慢病毒载体 rLV - Zic1- PGK - puro 稳定转染人乳腺癌 MDA - MB -231细胞株并得到稳定传代的细胞株，Western blot 法检测转染效果。以人乳腺癌 MDA - MB -231细胞及 ZIC1基因稳定转染的细胞为研究对象进行药物实验，MTT 法筛选出苦参碱的半数抑制浓度（IC50）后分组，划分 A 空载不加药组（阴性对照组），B空载加药组，C 转染不加药组和 D 转染加药组。对四组细胞采用黏附试验检测细胞黏附（增殖）能力、划痕实验检测细胞迁移能力、流式细胞术检测细胞凋亡。结果：ZIC1或苦参碱单独作用均可抑制乳腺癌 MDA - MB-231细胞黏附（增殖）、迁移及增强其凋亡，差异较对照组有统计学意义（P <0.05），且在抑制细胞迁移上存在时间依赖性。两者联合作用抗癌效果更明显，差异较其它三组有统计学意义（P <0.05）。结论：苦参碱联合 ZIC1可明显增强对人乳腺癌 MDA - MB -231细胞的抑癌效果。
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miR -374过表达增强人乳腺癌细胞对多西他赛的耐药性
目的：观察 miR -374过表达对人乳腺癌 MDA - MB -231细胞 docetaxel（多西他赛）耐药性的影响。方法：qPCR 检测 miR -374过表达细胞 MDA - MB -231- miR -374和对照细胞 MDA - MB -231- Cherry 中miR -374的相对含量；采用不同浓度的多西他赛处理细胞72小时后，MTT 检测细胞的活性。在终浓度为3.2 nmol/ L 的多西他赛处理下，用平板克隆实验检测 MDA - MB -231- Cherry 和 MDA - MB -231- miR -374细胞的增殖能力。流式细胞术检测细胞周期和凋亡。结果：与 MDA - MB -231- Cherry 细胞相比，miR -374过表达细胞 MDA - MB -231- miR -374中 miR -374的相对表达量明显增高；MDA - MB -231- miR -374细胞的耐药性和克隆形成能力明显增强（P ﹤0.05）。细胞凋亡率明显降低，G0/ G1期细胞减少，S 期细胞增加，G2/M 期细胞增加。结论：miR -374过表达可明显增强乳腺癌细胞株 MDA - MB -231对多西他赛的耐药性。
关键词： miR-374 MDA-MB-231 耐药性 多西他赛 -
天然产物增强阿霉素抗乳腺癌作用的体外筛选
目的：从植物天然产物中筛选具有增强阿霉素抗乳腺癌细胞增殖作用的活性化合物，并对两药联合后的体外抗肿瘤活性进行初步评价。方法采用M T T法研究15种单体化合物对人乳腺癌细胞MDA‐MB‐231的影响。结果小檗碱、松萝酸、鱼腥草素钠、槲皮素在50μg?mL －1时对MDA‐MB‐231细胞的抑制率分别为72％（P＜0．001），74％（P＜0．001），91％（P＜0．001）和59％（P＜0．01），且具有剂量依赖性。联合用药结果显示，小檗碱与阿霉素联用，CI值小于1。结论小檗碱、松萝酸、鱼腥草素钠、槲皮素对MDA‐MB‐231细胞的增殖活性具有抑制作用，同时，小檗碱与阿霉素联用具有协同抗肿瘤作用。
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阿帕替尼对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞抑制作用体外研究
目的：探讨阿帕替尼对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231生长影响及其机制。方法：将不同浓度的阿帕替尼作用乳腺癌MDA-MB-231细胞24h、48h、72h，采用MTT法检测不同浓度及时间的阿帕替尼对MDA-MB-231细胞的生长抑制作用；采用流式细胞仪检测阿帕替尼对MDA-MB-231细胞作用后的凋亡率及其细胞周期分布的影响。结果：阿帕替尼对乳腺癌MDA-MB-231细胞有明显的生长抑制作用，且存在时间剂量依赖关系；阿帕替尼可以明显的促进细胞凋亡，其凋亡率随时间延长而显著增加，与对照组相比，差异具有统计学意义；阿帕替尼对MDA-MB-231细胞的作用与其对细胞周期的相关性作用不明显。结论阿帕替尼能通过诱导细胞凋亡抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖能力。
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Thrsp蛋白在乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231细胞株中表达及鉴定
目的：鉴定Thrsp甲状腺激素应答蛋白（Thrsp，S14）在乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞株中的表达，并建立2株细胞的标准生长曲线，为研究甲状腺激素应答蛋白在乳腺癌细胞转移增殖中的作用及机制奠定基础。方法取对数生长期的乳腺癌 MCF-7、MDA-MB-231细胞，用 CCK8法检测，用 Excel自带统计软件求平均值并绘制生长曲线。细胞爬片，Thrsp蛋白免疫组化 SP法染色，DBA显色，显微镜下观察，采用 Western Blot法检测2株细胞中Thrsp蛋白表达及相对量。结果连续培养72 h MCF-7、MDA-MB-231细胞株达到对数生长期。Thrsp蛋白在乳腺癌细胞株MDA-MB-231中呈弱阳性表达，在MCF-7中呈阳性表达。Thrsp蛋白电泳大小位于17 ku。MBA-MD-231细胞株中Thrsp蛋白表达水平低于 MCF-7细胞株，与免疫组化结果一致。结论 Luminal A乳腺癌细胞株MCF-7细胞株中Thrsp蛋白表达正常；Basal细胞株MDA-MB-231中Thrsp蛋白表达下调。
关键词： 乳腺癌 MCF-7 MDA-MB-231 Thrsp蛋白
