首页 > 文献资料
-
Bcl-9基因敲除对乳腺癌细胞株侵袭及迁移能力作用研究
目的 初步研究Bcl-9基因在3种乳腺癌细胞株中的表达情况,探讨Bcl-9基因的敲除对乳腺癌细胞株侵袭及迁移能力的影响及意义.方法 分析3种不同表型的人乳腺癌细胞株,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RTPCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测人乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MCF-7和MDA-MB-453中Bcl-9 mRNA及蛋白表达水平,筛选出高表达Bcl-9的细胞株;构建Bcl-9慢病毒质粒shRNA,针对高表达Bcl-9的细胞株做Bcl-9基因敲除实验;采用Transwell细胞小室及细胞划痕实验进一步研究Bcl-9基因的敲除对乳腺癌细胞株侵袭及迁移能力的影响.结果 MDA-MB-231细胞株Bcl-9 mRNA和蛋白表达水平均高于MCF-7和MDA-MB-453,且MCF-7高于MDA-MB-453 (P ＜0.05).实验组Bcl-9 mRNA和蛋白表达水平、MDA-MB-231穿膜细胞数、划痕愈合率均低于空白对照组和阴性对照组(P＜0.05).结论 Bcl-9基因的敲除可有效抑制乳腺癌细胞株MDA-MB-231侵袭及迁移能力,提示其可能成为抑制乳腺癌细胞侵袭及转移新的分子靶点.
关键词： 乳腺肿瘤 B细胞淋巴因子9 MDA-MB-231 肿瘤浸润 -
阳和汤含药血清对MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞增殖抑制作用的实验研究
目的:鉴于清代著名医家王洪绪和马培之对阳和汤能否治疗乳岩(乳腺癌)持不同现点,通过实验探讨阳和汤用于治疗乳腺癌的可行性.方法:通过体外实验探讨阳和汤大鼠含药血清对人类乳腺癌ER(+)细胞MCF-7和人类乳腺癌ER(-)细胞MDA-MB-231的增殖抑制作用,并通过流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡.结果:阳和汤对MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞均有抑制作用,呈剂量和时间依赖性,并能影响细胞周期分布,诱导肿瘤细胞凋亡.但是阳和汤对ER(-)的MDA-MB-231细胞的抑制和杀伤作用远比ER(+)的MCF-7细胞要强.结论:阳和汤可以运用于乳腺癌的治疗,但是更适用于ER(-)的乳腺癌患者.
-
熊果酸对乳腺癌细胞凋亡影响及其机制
目的:探讨熊果酸对乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞凋亡的影响及其机制.方法:体外培养MDA-MB-231细胞,用不同浓度的熊果酸处理24、48、72 h,MTT法测定其对MDA-MB-231细胞增殖的影响;倒置显微镜下观察细胞的形态学变化;熊果酸(浓度分别为20、40、80μmol/L)处理MDA-MB-231细胞48 h后,分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡和周期,分光光度计检测Casepase-3、Casepase-9相对活性,western blot法检测p16、p27基因表达情况.结果:熊果酸(浓度10～100μmol/L)能抑制MDA-MB-231细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;倒置显微镜下可观察到典型的细胞凋亡形态;熊果酸(浓度分别为20、40、80μmol/L)作用MDA-MB-231细胞48 h后,细胞凋亡率分别为11.5％、21.4％、36.6％,对照组凋亡率仅为2.2％;细胞周期结果显示熊果酸能抑制细胞的G1期行进和G1/S转换,S期细胞比例降低;Casepase-3、Casepase-9的相对活性显著增加;p16、p27的表达升高,呈剂量依赖性.结论:熊果酸能抑制MDA-MB-231细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与上调p16、p27表达阻滞细胞周期并增加细胞Caspase-3、Caspase-9激活线粒体凋亡途径有关.熊果酸是一种前景广阔的抗肿瘤药物.
-
组蛋白乙酰化修饰对瘦素诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞生长的影响
目的:研究组蛋白乙酰化修饰对瘦素诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞生长的影响.方法:采用实时定量PCR、Western blot法测定瘦素和组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)抑制剂SAHA对乳腺癌MDA-MB-231细胞生长的影响.应用染色质免疫沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)技术了解瘦素和SAHA影响组蛋白乙酰化水平的程度.结果:瘦素与乳腺癌MDA-MB-231细胞作用后HDAC1的mRNA和蛋白表达明显增强,并伴有组蛋白H3、H4乙酰化水平降低(P<0.05).ChIP结果显示瘦素处理的乳腺癌细胞p21WAF/CIP1启动子区域与乙酰化组蛋白H3、H4结合的染色质物质明显少于未处理细胞组的相同区域(P<0.05).结论:瘦素诱导乳腺癌细胞增殖过程中伴随组蛋白乙酰化水平的变化,通过激活HDAC的活性使核心组蛋白去乙酰化,从而抑制p21WAF/CIP1的表达,终促进细胞周期从G1→S期的进程.
关键词： 乳腺癌 MDA-MB-231 SAHA 去乙酰化 -
SAHA抑制瘦素诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的分子机制
目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA抑制瘦素诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的分子机制.方法:采用固相细胞凋亡抗体芯片技术测定瘦素和SAHA对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖产生的影响.结果:SAHA显著增强MDA-MB-231细胞中Bax、p21CIP1和p27KIP1的表达,并降低Survivin蛋白的含量;经SAHA作用后MDA-MB-231细胞中Caspase-3和Clusterin的表达水平明显上升,而肿瘤坏死因子受体超家族成员1A (TNFRSF1A)的表达水平明显下降.结论:SAHA可通过激活乳腺癌细胞内凋亡途径,并抑制细胞周期的进程而达到抑制乳腺癌发生的目的.
关键词： 乳腺癌 MDA-MB-231 增殖 瘦素 SAHA -
瘦素诱导乳腺癌三阴细胞系MDA-MB-231侵袭的形态学观察
目的：研究瘦素对乳腺癌三阴细胞系MDA-MB-231侵袭力的影响。方法：采用细胞划痕、Transwell细胞侵袭力测定等方法从形态学角度观察瘦素对乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭力产生的影响。结果：与对照组相比，瘦素可显著增强乳腺癌MDA-MB-231细胞向划痕中心移走的能力。Transwell实验发现瘦素处理后的乳腺癌细胞侵袭性较对照组细胞明显增强，穿透Transwell基底膜的细胞数量增多，细胞铺展良好，显示出较好的生长状态。结论：瘦素可诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞的游走，增强其侵袭力。
关键词： 瘦素 乳腺癌 MDA-MB-231 侵袭力 -
瘦素调控乳腺癌MDA-MB-231细胞周期进程的研究
目的：研究瘦素诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞周期进程。方法：采用MTT、细胞活力、凋亡及细胞周期测定瘦素刺激乳腺癌MDA-MB-231细胞生长、增殖的生物学能力。并采用实时定量PCR及Western blot法测定瘦素对乳腺癌细胞周期调控的分子机制。结果：瘦素作用浓度为1.25 nmol/L、作用时间为24 h的条件下对乳腺癌MDA-MB-231细胞有诱导生长的效果。经瘦素处理后的MDA-MB-231细胞表现为细胞活力显著增强，细胞死亡率和早晚期细胞凋亡发生率明显下降。细胞周期检测结果也证实经瘦素作用后MDA-MB-231细胞进入S期的细胞增多。通过筛查瘦素对细胞周期相关调控因子mRNA和蛋白水平表达影响中发现，瘦素对MDA-MB-231细胞周期调控因子相关的影响主要集中在G1→S期限制点调控上。结论：瘦素可显著刺激乳腺癌MDA-MB-231细胞生长，增强乳腺癌细胞恶变性的生物学能力。
关键词： 乳腺癌 MDA-MB-231 细胞周期 -
小干扰RNA表达质粒沉默△Np73对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响
目的:探讨靶向△Np73的小干扰RNA表达质粒转染人乳腺癌细胞株MDA-MB-231对其增殖和凋亡活性的影响.方法:构建△Np73小干扰表达质粒,脂质体法转染人乳腺癌细胞株MDA-MB-231;荧光显微镜下观察转染细胞绿色荧光蛋白表达,计算转染效率;实时荧光定量PCR检测细胞转染质粒后△Np73和TAp73 mRNA的表达;共转染pcDNA3-HA/DNp73α表达质粒与△Np73小干扰质粒,Western blot检测细胞转染后△Np73和TAp73表达;CCK-8法检测转染质粒后细胞生长抑制率;caspase 3活性分光光度法检测转染质粒并应用阿霉素处理后细胞的凋亡水平.结果:成功构建并转染△Np73小干扰表达质粒,转染效率达60％.△Np73小干扰质粒转染细胞能有效抑制内源性△Np73 mRNA和外源性△Np73蛋白表达,对TAp73无显著抑制作用.经△Np73质粒干扰的细胞增殖活性显著下降,与空白对照组相比差异显著,阿霉素诱导△Np73质粒转染细胞凋亡水平增加,与阴性对照组相比有显著差异.结论:△Np73小干扰RNA表达质粒能显著降低MDA-MB-231细胞中△Np73 mRNA及蛋白的表达,抑制细胞生长增殖,增强其被阿霉素诱导的凋亡水平,表明靶向沉默△Np73可能为未来人乳腺癌的治疗提供了一个新的策略.
关键词： △Np73 MDA-MB-231 RNA干扰 基因沉默 乳腺癌 -
18F-FES小动物PET/CT评价不同乳腺癌模型雌激素受体表达的差异
目的：用16α-18F-17β-雌二醇(18F-FES)小动物PET/CT评价不同类型乳腺癌模型雌激素受体(ER)表达的差异。方法：用ER阳性人乳腺癌细胞(ZR-75-1、MCF-7)和阴性细胞(MDA-MB-231)构建荷瘤裸鼠动物模型。阳性组每组各10只，接种前3 d植入雌激素缓释片，再将细胞与基质胶混合液接种于乳腺脂肪垫，成瘤后显像前3 d取出缓释片。阴性组5只，直接将细胞悬液接种于乳腺脂肪垫。当肿瘤长至长径5 mm左右时行18F-FES PET/CT显像，用%ID/gmax定量ER表达，然后用免疫组化测定并比较ER结果。数据分析采用单因素方差分析。结果：ZR-75-1、MCF-7和MDA-MB-231的瘤体成瘤率分别为100％(10/10)、70%(7/10)和100％(5/5)，瘤体随时间延长而增大，但三组之间差异无统计学意义(P＞0.05)，18F-FES%ID/gmax分别为6.6±1.0、3.3±0.5和1.1±0.1，三组之间差异均有统计学意义(P＜0.05)。T/M比值分别为4.2±0.3、2.6±0.2和1.1±0.1，三组之间差异均有显著统计学意义(P＜0.001)。18F-FES显像结果与免疫组化结果呈正相关(%ID/gmax：r2=0.65，P＜0.001；T/M：r2=0.87，P＜0.001)。结论：18F-FES PET/CT的%ID/gmax能准确评价不同类型荷人乳腺癌模型的ER表达水平，从而为进一步研究乳腺癌内分泌疗效提供了一种活体、无创、动态的分析方法。
-
塞来昔布对人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移、侵袭及黏附性的影响
背景与目的:三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)由于其高侵袭和高转移特性,是目前乳腺癌中预后差的一种亚型.大量研究表明塞来昔布(celecoxib)具有很好的抗肿瘤活性,可以抑制肿瘤生长、减少肿瘤血管发生,防止肿瘤的早期转移.为了进一步明确塞来昔布与TNBC细胞侵袭活性之间的关系,本实验研究塞来昔布作用下人TNBC细胞MDA-MB-231黏附、迁移及体外侵袭能力的变化,并初步探讨其可能的机制.方法:以不同浓度的塞来昔布(0、40、80、120 μmol/L)作用MDA-MB-231细胞24 h后,采用细胞基质黏附实验检测塞来昔布对MDA-MB-231细胞黏附能力的影响;采用细胞划痕实验检测塞来昔布对MDA-MB-231细胞平面迁移能力的影响;采用Transwell侵袭小室实验检测塞来昔布对MDA-MB-231细胞体外侵袭能力的影响;RT-PCR检测塞来昔布作用前后基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)MMP-2和MMP-9 mRNA的表达情况.结果:经80、120 μmol/L塞来昔布作用24 h后,MDA-MB-231细胞与基质的黏附能力分别为(50.2±7.3)%和(31.5±2.2)%,与对照组(96.8±10.9)%相比显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05).Transwell侵袭小室实验结果显示,经80、120 μmol/L塞来昔布作用后MDA-MB-231细胞趋化运动明显减少,穿过人工基底膜的细胞较对照组显著降低(P<0.05).划痕实验结果显示,经塞来昔布作用后MDA-MB-231细胞平面迁移到损伤区的细胞数明显减少(P<0.05).RT-PCR结果显示,经塞来昔布作用MDA-MB-231细胞后,MMP-2和MMP-9 mRNA的表达水平显著降低(P<0.05).结论:塞来昔布能显著地抑制MDA-MB-231细胞黏附、细胞体外的迁移和侵袭能力,该作用可能与抑制MMP-2和MMP-9 mRNA的表达有关.
关键词： 塞来昔布 三阴性乳腺癌 MDA-MB-231 侵袭 基质金属蛋白酶 -
蛋白4.1家族在不同乳腺癌细胞株中的表达与定位
背景与目的:目前,已在多种人类肿瘤中发现蛋白4.1家族成员表达异常.本研究旨在通过检测蛋白4.1家族成员(4.1R/B/G/N)在3株转移能力不同的人乳腺癌细胞株MCF-7、T-47D和MDA-MB-231中的表达和定位,探讨蛋白4.1家族成员与乳腺癌细胞转移能力之间的关系.方法:采用Western blot检测蛋白4.1家族成员在MCF-7、T-47D和MDA-MB-231细胞中的表达;免疫荧光标记对蛋白4.1家族成员在3株细胞中的表达进行定位.结果:4.1R/B/G在3种细胞系中均有表达,在T-47D细胞中的表达量均明显高于在MCF-7细胞中的表达量(P<0.05):但在高转移性的MDA-MB-231细胞中它们的表达水平转而下降.4.1N在T-47D细胞中的表达量明显低于在MCF-7细胞中的表达量(P<0.01),而在MDA-MB-231细胞中的表达则几乎检测不到,提示4.1N表达下调或缺失与乳腺癌细胞转移能力密切相关.4.1R/B/G/N在MCF-7和T-47D细胞中均主要定位于细胞膜及胞间连接处,同时4.1B在细胞核中也有表达;而在高转移的MDA-MB-231细胞中蛋白4.1家族成员均定位于细胞质中,提示蛋白4.1家族成员亚细胞定位的改变可能是乳腺癌细胞转移过程中的重要事件.结论:4.1N表达缺失和蛋白4.1家族成员亚细胞定位的改变与乳腺癌细胞MDA-MB-231的高转移性密切相关.
关键词： 蛋白4.1 MCF-7 T-47D MDA-MB-231 转移 -
塞来昔布通过阻断NF-κ B信号通路诱导人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞周期阻滞的相关研究
背景与目的:研究表明塞来昔布能抑制人乳腺癌细胞增殖、诱导其凋亡,但其对肿瘤细胞周期的作用机制尚不明确.本实验研究塞来昔布是否通过阻断NF-κ B信号通路对人乳腺痛细胞MDA-MB-231增殖及周期产生影响.方法:MTT法和流式细胞术观察塞来昔布对MDA-MB-231细胞增殖、周期分布的影响:应用RT-PCR和Western印迹法检测经塞来昔布干预该细胞24 h后,细胞周期相关因子及NF-κ B信号途径中p-Ⅰκ B α的变化.结果:塞来昔布可显著抑制MDA-MB-231细胞生长,呈时间剂量依赖性.高浓度塞来昔布可改变细胞进程,将其阻滞于G0/G1期.塞来昔布作用24 h后,细胞周期相关蛋白CyclinD1、CDK4呈剂量依赖性表达下降(P<0.05).同时,细胞中P-Ⅰκ B α表达随药物浓度增加而下降(P<0.05).结论:塞来昔布能显著抑SUMDA-MB-231细胞增殖,诱导细胞G0/G1期阻滞,其作用机制可能是通过抑制Ⅰκ B α的磷酸化阻断NF-κB信号通路,进而下调其下游基因CyclinD1对细胞周期进行调控.
-
miR-199a-3p在乳腺癌中的表达及其作用
背景与目的：多种微小RNA(microRNA，miRNA)在乳腺癌中异常表达，在乳腺癌的发生、发展中起重要作用。miRNA可能是治疗乳腺癌的新靶点。该研究旨在探讨miR-199a-3p在乳腺癌中的表达水平，及其对乳腺癌癌细胞增殖和凋亡的影响。方法：运用实时定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction，QRT-PCR)检测乳腺癌患者癌组织、癌旁正常组织、人乳腺癌细胞和人乳腺细胞中miRNA-199a-3p的表达水平，miR-199a-3p mimic(或inhibitor)转染乳腺癌细胞MDA-MB-231过表达(或沉默)miR-199a-3p的表达后，通过MTT法检测细胞增殖能力，Hoechst染色法和caspase-3活力测试检测细胞凋亡情况。结果：相对癌旁正常组织和人正常乳腺细胞，miR-199a-3p在乳腺癌患者癌组织和人乳腺癌细胞中表达下调。在MDA-MB-231中转染miR-199a-3p mimic过表达miR-199a-3p可抑制细胞增殖，促进其凋亡；在MDA-MB-231中转染miR-199a-3p inhibitor沉默miR-199a-3p可促进细胞增殖，抑制其凋亡。结论：miR-199a-3p在乳腺癌中表达下调，并通过调节乳腺癌细胞增殖和凋亡发挥抑癌作用。
关键词： 乳腺癌 miR-199a-3p MDA-MB-231 增殖 凋亡 -
miRNA-210对人乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响
目的:探讨miRNA-210(miR-210)在人乳腺癌组织中的表达及其对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、迁移和侵袭的影响.方法:收集2011年10月至2012年6月期间昆明医科大学第一附属医院20例乳腺癌患者组织标本,real-time PCR检测乳腺癌组织和癌旁组织以及乳腺癌细胞MDA-MB-231和正常乳腺细胞MCF-10a中miR-210的表达.采用LipofectamineTM 2000将miR-210 inhibitor转染至MDA-MB-231细胞中,通过荧光显微镜检测miR-210的转染效率,MTT和软琼脂克隆形成实验检测MDA-MB-231细胞的增殖,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Transwell法检测细胞的迁移、侵袭能力.结果:miR-210在乳腺癌组织和MDA-MB-231细胞中的表达水平均显著高于癌旁组织和正常乳腺细胞(P＜0.01).miR-210 inhibitor成功转染MDA-MB-231细胞,转染效率为(88.29±2.98)％,转染miR-210 inhibitor后MDA-MB-231细胞的增殖和克隆形成能力明显减弱(P＜0.05),被阻滞于G0/G1期的细胞数明显增多[(64.23±3.12)％ vs (55.53±0.96)％,P＜0.01],凋亡细胞比例也显著增加[(31.90 ±3.05)％vs (15.98±0.63)％,P＜0.01],细胞的迁移[(291.00±43.12) vs (1137.38 ±83.49)个,P＜0.01]、侵袭[(131.63±32.01) vs (647.88 ±31.20)个,P＜0.01]均受到明显抑制.结论:miR-210在乳腺癌组织和细胞中过表达,转染miR-210 inhibitor后乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖、迁移和侵袭能力明显减弱.
-
上调miR-181b表达对乳腺癌细胞功能的影响
目的:探讨上调miR-181b的表达对人乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞功能的影响及其可能的靶向基因.方法:应用脂质体介导的方法将miR-181b模拟物(miR-181b mimics)分别转染MDA-MB-231和MCF-7细胞后,通过MTT、Transwell和FCM法分别检测细胞增殖和迁移能力及细胞周期的变化.将含细胞周期蛋白依赖性激酶8 (cyclin-dependent kinase 8,CDK8)基因3'端非翻译区(3'-untranslated region,3'-UTR)的重组载体psiCHECK-2/CDK8-3' UTR和miR-181bmimics共转染入人胚肾HEK293T细胞,应用双荧光素酶报告系统验证CDK8基因3'-UTR是否有miR-181b的结合位点.蛋白质印迹法检测miR-181b mimics转染后MDA-MB-231和MCF-7细胞中CDK8蛋白的表达情况.结果:与转染miR-181b模拟物阴性对照(negative control,NC)(miR-181b mimics-NC)组比较,miR-181b mimics转染组MDA-MB-231和MCF-7细胞的增殖和迁移能力受到抑制(P＜0.05),细胞周期主要阻滞于G0/G1期(P＜0.01);psiCHECK-2/CDK8-3'UTR和miR-181b mimics共转染组HEK293T细胞的荧光素酶活性下降(P＜0.01),证实miR-181b与CDK8基因3'-UTR可特异性靶向结合.与转染miR-181bmimics-NC组比较,miR-181b mimics转染组MDA-MB-231和MCF-7细胞中CDK8蛋白的表达水平明显下调(P＜0.05).结论:上调miR-181b的表达可显著抑制人乳腺癌细胞的增殖和迁移,这种作用可能与miR-181b靶向调节CDK8的表达有关.
-
骨形态发生蛋白9对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响
目的:探讨骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMPg)在体内、外对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响.方法:将pAdtrack-CMV/BMP9和pAdtrack-CMV/GFP腺病毒感染MDA-MB-231细胞,RT-PCR法检测MDA-MB-231/GFP和MDA-MB-231/BMP9细胞中BMP9 mRNA的表达,MTT法、平板集落形成实验和FCM法检测细胞增殖和凋亡的情况.建立裸鼠MDA-MB-231、MDA-MB-231/GFP和MDA-MB-231/BMP9移植瘤模型,测量移植瘤体积,TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡情况.结果:MDA-MB-231和MDA-MB-231/GFP细胞中无BMP9 mRNA的表达,MDA-MB-231/BMP9细胞中有明显BMP9 mRNA表达;MDA-MB-231/BMP9细胞增殖抑制率高于MDA-MB-231/GFP细胞(P<0.05),而细胞集落形成率明显低于MDA-MB-231/GFP和MDA-MB-231组(P<0.05),细胞凋亡率则明显高于MDA-MB-231/GFP和MDA-MB-231组(P<0.05).MDA-MB-231/BMP9组的裸鼠移植瘤体积明显小于MDA-MB-231/GFP和MDA-MB-231组(P<0.001),而移植瘤细胞中的凋亡指数则明显高于MDA-MB-231/GFP和MDA-MB-231组(p<0.001).结论:BMP9可在体内、外抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖并促进其凋亡.
-
siRNA下调EIF4E基因对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和周期的影响
目的:应用小干扰RNA (small interfering RNA,siRNA)乳腺癌MDA-MB-231细胞中真核细胞翻译起始因子4E' (eukaryotic translation initiation factor 4E,EIF4E)基因的表达,探讨其对乳腺癌细胞增殖和生长周期的影响.方法:构建针对EIF4E基因的siRNA表达质粒,采用脂质体法将表达质粒pGPU6/GFP/Neo-EIF4E转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞;分别采用RT-PCR,Western印迹法和免疫细胞化学法检测转染EIF4E siRNA后,对MDA-MB-231细胞中EIF4E及cyclinD1 mRNA和蛋白的表达水平的影响;MTT法、平板克隆形成实验和FCM检测MDA-MB-231细胞增殖活性、克隆形成率及细胞周期.结果:成功构建EIF4E siRNA表达质粒.RT-PCR,Western印迹法和免疫细胞化学法检测结果显示,MDA-MB-231细胞中EIF4E及cyclinD1 mRNA和蛋白表达均明显下降(P<0.05).转染EIF4EsiRNA组细胞生长缓慢,集落形成数明显减少,与空白对照组和转染空载体组比较,差异有统计学意义(P<0.05).FCM检测结果显示,EIF4E siRNA转染组G,期细胞所占百分比为(71.30±0.47)%,较空白对照组的(53.10±0.43)%明显增加,而S期细胞所占百分比为(12.53±0.13) %,较空白对照组的(26.47±0.38) %明显减少(P<0.05).结论:EIF4E siRNA可显著下调EIF4E基因在乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达水平,在一定程度上抑制乳腺癌细胞的增殖,有可能成为临床治疗乳腺癌的靶点之一.
关键词： 乳腺肿瘤 RNA 小分子干扰 细胞凋亡 真核细胞翻译起始因子 细胞 MDA-MB-231 -
华蟾素对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231生物学特性的影响
目的:探讨华蟾素(cinobufacini)对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖、细胞周期和体外侵袭的影响及其可能机制.方法:用CCK-8试剂盒测定并绘制华蟾素作用后MDA-MB-231细胞的生长曲线,FCM法分析细胞周期分布,Transwell小室检测MDA-MB-231细胞的体外侵袭能力, RT-PCR检测细胞周期素(cyclin)及p21 mRNA的表达变化.结果:华蟾素可抑制MDA-MB-231细胞的增殖能力,其半数抑制浓度(half inhibition concentration, IC50)为 0.31 mg/mL,抑制作用随着华蟾素作用时间的延长而增强,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);Transwell小室检测表明,华蟾素作用后细胞的侵袭能力比对照组明显下降(P<0.05);FCM分析可见,随着华蟾素浓度的增加,停滞于S期的细胞比率比对照组明显增加(P<0.000 1);华蟾素作用后,MDA-MB-231细胞cyclin A1、cyclin D1和cyclin E1 mRNA的表达水平下降, p21 mRNA的表达水平上升,但cyclin B1 mRNA的表达无明显改变.结论:华蟾素通过调控cyclin A1、cyclin D1、cyclin E1和p21的表达而抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭,并影响其细胞周期的分布.
-
丹参酮ⅡA对乳腺癌细胞株MDA-MB-231体外血管生成拟态的抑制作用
目的:研究丹参酮ⅡA对乳腺癌细胞株MDA-MB-231体外血管生成拟态的影响.方法:将培养的MDA-MB-231细胞分为丹参酮ⅡA组及对照组,应用MTT法检测细胞增殖活力的变化,体外管状形成试验检测管道形成能力的变化,通过RT-PCR和Western-blot技术检测细胞内与血管拟态形成相关基因表达的变化.结果:丹参酮ⅡA对MDA-MB-231细胞增殖有明显抑制作用,并抑制体外管道形成和肿瘤细胞VEGF的mRNA表达.结论:丹参酮ⅡA能抑制MDA-MB-231细胞的体外血管生成拟态的形成和细胞增殖,其机制可能是通过抑制VEGF的表达而实现.
关键词： 丹参酮ⅡA 血管生成拟态 MDA-MB-231 VEGF -
ST3GAL4对MDA-MB-231增殖及c-met通路的影响探究
目的 探讨唾液酸转移酶ST3 GAL4对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231增殖和c-met通路的影响.方法 分别设计3段针对ST3GAL4编码区的siRNA,通过RT-PCR和Western blot两种方法分别对其mRNA水平和蛋白水平进行检测;通过敲减ST3GAL4观察MDA-MB-231平板克隆形成能力和c-met磷酸化水平.结果 向胞内转染siRNA后40 h,ST3GAL4的mRNA水平和蛋白质水平较对照组(siNC)均降低;与对照组比较,敲减组(si ST3GAL4) MDA-MB-231克隆形成能力明显减弱(P＜0.05),c-met通路活化受到抑制.结论 ST3GAL4可能参与MDA-MB-231的增殖与关键信号通路c-met的激活.
关键词： ST3GAL4 MDA-MB-231 克隆形成 c-met
