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B细胞淋巴因子9基因在人乳腺癌细胞株的表达
目的 观察B细胞淋巴因子9基因(BCL9)在不同人乳腺癌细胞株中的表达.方法 实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot法检测人乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MCF-7和MDA-MB-453中BCL9的mRNA及蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞周期,计算增殖指数,比较不同细胞株之间增殖能力.结果 Real-time PCR检测细胞株BCL9的mRNA表达在MDA-MB-231 (0.016 ±0.004)中表达量高,MCF-7(0.008±0.002)次之,MDA-MB-453(0.004±0.002)表达水平低,差异有统计学意义(MDA-MB-231与MCF-7比较,P=0.000;MDA-MB-231与MDA-MB-453比较,P=0.000;MCF-7与MDA-MB-453比较,P=0.021).BCL9蛋白在细胞间表达量为MDA-MB-231 (0.629 ±0.101)＞ MCF-7 (0.204±0.990)＞MDA-MB-453 (0.397 ±0.196),差异有统计学意义(MDA-MB-231与MCF-7比较,P=0.012;MDA-MB-231与MDA-MB-453比较,P=0.000;MCF-7与MDA-MB-453比较,P=0.030).流式细胞术增殖指数显示MDA-MB-231 (0.483±0.010)细胞高于MDA-MB-453 (0.358±0.032;P=0.009)和MCF-7 (0.397 ±0.061;P =0.040),差异有统计学意义.另BCL9基因的表达与BCL9蛋白的表达呈正相关;BCL9基因与细胞增殖指数呈正相关.结论 BCL9在人乳腺癌不同细胞株间表达水平不同,而对于三阴性乳腺癌的典型代表MDA-MB-231细胞株细胞增殖能力比较强,BCL9的表达水平也较高,两者呈正相关.
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二甲双胍对乳腺癌细胞株的抑制作用
本实验旨在观察二甲双胍对乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231的影响,探讨其抗肿瘤的作用及其机制.一、材料和方法1.人乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231复苏,扩增.收集对数生长期的细胞,调整细胞浓度为5×105个/ml.共设4组:空白对照组、二甲双胍组、表阿霉素组、二甲双胍+表阿霉素组.每组设3孔,每孔(6孔板)加入细胞总数为5×105个,加入相应的药物及培养液.孵育48 h,计数.流式细胞仪检测.
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NRP-1过表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231、SK-BR-3生物学行为的影响
目的 通过上调乳腺癌细胞MDA-MB-231、SK-BR-3中NRP-1的表达,观察NRP-1对细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的影响.方法 构建pcDNA3.1-NRP-1表达载体,脂质体介导NRP-1表达质粒转染MDA-MB-231、SK-BR-3细胞,用G418筛选出稳定转染的乳腺癌细胞株.利用RT-qPCR、Western blot法分别检测NRP-1基因mRNA及其蛋白表达;CCK-8法、AnnexinⅤ-APC/7-AAD法、Transwell小室分别检测转染细胞增殖率、凋亡率及侵袭、迁移能力.结果 成功构建pcDNA3.1-NRP-1表达载体,转染MDA-MB-231、SK-BR-3细胞并筛选稳定表达系.与对照组相比,过表达组细胞的NRP-1 mRNA及蛋白表达水平明显升高(均P＜0.05);NRP-1过表达组的细胞较对照组增殖率增加、凋亡率降低、侵袭及迁移能力增强(均P＜0.05).结论 NRP-1在乳腺癌发展、浸润、转移中起着一定的作用,它可促进乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,抑制其凋亡.
关键词： 神经纤毛蛋白-1 乳腺癌 MDA-MB-231 SK-BR-3 -
脾源性酪氨酸激酶Syk的抗肿瘤作用
目的 探讨脾源性酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,Syk)的体内外抗肿瘤作用.方法 经脂质体介导将全长Syk cDNA转入Syk阴性表达的高侵袭性人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,应用MTT法、Transwell小室法分别检测Syk cDNA体外抗肿瘤细胞增殖及侵袭迁移作用;采用BABL/c(nu/nu)裸鼠皮下移植瘤模型,检测转染及未转染肿瘤细胞的成瘤及肺转移情况.结果 转染全长Syk cDNA的MDA-MB-231细胞与转染空载体及未转染MDA-MB-231细胞相比,体外增殖情况未见明显改变,而侵袭及迁移实验中的穿膜细胞数(总迁移细胞数/5HPF)却均明显减少(P＜0.05);同样,接种不同肿瘤细胞的裸鼠皮下移植瘤成瘤情况未见明显差异,但接种转染组肿瘤细胞的肺转移率却显著低于未转染组及空载体转染组(P＜0.05).结论 Syk通过改变乳腺肿瘤细胞的侵袭迁移能力参与其抗瘤作用.
关键词： 脾源性酪氨酸激酶 乳腺肿瘤 侵袭转移 MDA-MB-231 -
虫草素对MDA-MB-231细胞增殖的影响与TMSG-1表达的研究
目的 研究虫草素对乳腺癌细胞株MDA-MB-231的作用与人肿瘤转移抑制基因TMSG-1mRNA表达的影响,探讨其抗癌作用机制.方法 体外培养乳腺癌细胞株MDA-MB-231,加入虫草素干扰,免疫组化技术检测TMSG-1蛋白表达；半定量RT-PCR检测MDA-MB-231细胞中TMSG-1mRNA表达状况；使用MTT法检测对肿瘤细胞增殖的抑制作用.结果 虫草素可使乳腺癌MDA-MB-231细胞中TMSG-1mRNA与蛋白表达上调,同时对乳腺癌细胞生长有抑制作用.结论 虫草素能抑制乳腺癌细胞的增殖,可以上调TMSG-1 mRNA与蛋白的表达发挥潜在的抗肿瘤细胞转移的作用,为国产新型抗肿瘤药物的临床研发及运用提供实验室依据.
关键词： 虫草素 乳腺癌 MDA-MB-231 TMSG-1 -
微小核糖核酸101异常表达与乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的关系
目的 探讨微小核糖核酸101(miRNA-101)在人乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达及其对MDA-MB-231细胞增殖的影响.方法 实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测乳腺癌细胞MDA-MB-231和正常乳腺上皮细胞MCF-10A中miRNA-101的表达.采用Lipofectamine TM2000将miRNA-101-mimic/inhibitor/NC分别转染至MDA-MB-231细胞中,通过qRT-PCR检测miRNA-101的转染效率,CCK-8实验检测MDA-MB-231细胞的增殖.结果 miRNA-101在MDA-MB-231细胞中的表达水平低于正常乳腺细胞MCF-10a(P ＜0.01).转染miRNA-101 mimic后MDA-MB-231细胞的增殖能力减弱(P＜0.05),而转染miRNA-101 inhibitor后细胞的增殖能力增强(P＜0.05).结论 miRNA-101在乳腺癌细胞MDA-MB-231中低表达,转染miRNA-101 mimic后乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖减弱.
关键词： 乳腺癌 MDA-MB-231 miRNA-101 增殖 -
JAK抑制剂AG490诱导乳腺癌细胞凋亡及对Survivin表达的影响
背景与目的:已有研究证实Survivin在多种乳腺癌中可呈高表达且与肿瘤的恶性程度和患者预后密切相关,但是Survivin在乳腺癌细胞中高表达的相关机制尚有待深入了解.本实验拟研究JAK-STAT信号通路抑制剂AG490在人乳腺癌细胞MDA-MB-231中对Survivin表达以及对肿瘤细胞增殖、凋亡的影响.方法:以MDA-MB-231细胞为研究对象,应用AG490后,用Western blot检测细胞中P-STAT3、Survivin的蛋白表达变化、RT-PCR检测Survivin mRNA的变化;用MTT法检测细胞增殖活性的改变;用流式细胞术检测细胞凋亡的情况.结果:AG490使MDA-MB-231细胞中P-STAT3和Survivin的蛋白表达减少,同时细胞的增殖活性降低,凋亡增多.P-STAT3/β-actin用药前为0.74,AG490 40 μmol/L作用24 h后为0.21;Survivin/β-actin用药前为1.09,40 μmol/L AG490作用24 h后为0.28.40μmoL/L AG490作用24 h后细胞出现"亚Gl"峰,凋亡率为5.62%;AG490 40μmol/L,作用48 h后细胞凋亡率为28.81%.结论:AG490可诱导MDA-MB-231细胞凋亡、减少Survivin的表达.
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利多卡因对表皮生长因子诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞上皮间质转化和迁移能力的影响
目的 探讨利多卡因对表皮生长因子(EGF)诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞(MDA-MB-231)上皮间质转化(EMT)和迁移能力的影响.方法 以未经处理的MDA-MB-231细胞为空白对照组(A组),以10 ng/mL EGF处理的为EGF组(B组),在10 ng/mL EGF中分别加入50、500、5000μmol/L的利多卡因(C、D、E组)干预MDA-MB-231细胞;采用噻唑蓝(MTT)比色法检测利多卡因对MDA-MB-231细胞活性的影响,划痕实验检测MDA-MB-231细胞迁移能力的变化,Western blot检测MDA-MB-231细胞EMT标记蛋白紧密连接蛋白-1(ZO-1)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达.结果 与A组相比,EGF处理后(B、C、D、E组)MDA-MB-231细胞活性和迁移能力增强(P<0.05),Western blot显示上皮标志分子ZO-1蛋白表达减少(P<0.001),间质标志分子MMP-9(P<0.001)蛋白表达增强;而利多卡因500μmol/L(D组)、5000μmol/L(E组)与EGF联合干预MDA-MB-231细胞后,其迁移能力与细胞活性较B组降低,ZO-1蛋白表达上调,MMP-9蛋白表达下调.结论 利多卡因可抑制EGF诱导的MDA-MB-231细胞EMT和迁移.
关键词： MDA-MB-231 利多卡因 表皮生长因子 上皮间质化 -
LY294002和RAD001对人乳腺癌MDA－MB－231细胞株增殖与凋亡的影响
目的：研究mTOR和PI3K特异性抑制剂RAD001和LY294002对人乳腺癌MDA－MB－231细胞株增殖与凋亡的影响。探讨PI3K／AKT／mTOR信号通路上下游不同靶点联合阻滞对人乳腺癌MDA－MB－231细胞株的抗肿瘤效应及其机制。方法体外RAD001和LY294002单独或者联合使用，通过MTT实验计算药物半数抑制浓度IC50。应用流式细胞仪分析细胞周期分布及凋亡。结果（1） LY294002和RAD001抑制MDA－MB－231细胞的活力值且呈剂量依赖性。（2）LY294002和RAD001的IC50使MDA－MB－231细胞停滞在G1期（P＜0.05），联用的效应比单独用更显著（P＜0.05）。（3）LY294002和RAD001单独使用时能显著增加人体MDA－MB－23细胞的凋亡率（P＜0.05）。联用时与单一药物使用相比，MDA－MB－231细胞的凋亡率显著增加，联合用时MDA－MB－231细胞凋亡率为52.67％。结论 PI3K／AKT／mTOR信号通路上下游不同靶点联合干预时两药的阻滞效应呈现相加作用，能够充分发挥抗肿瘤效应，抑制人乳腺癌MDA－MB－231细胞的增殖并诱导细胞凋亡。
关键词： MDA-MB-231 RAD001 LY294002 PI3K 增殖与凋亡 -
PTEN 对乳腺癌细胞 MDA －MB －231增殖和迁移的影响
目的：探讨PTEN对乳腺癌细胞MDA－MB－231增殖和迁移能力的影响。方法体外培养乳腺癌细胞株MDA－MB－231，质粒转染技术建立过表达PTEN的稳定细胞株MDA－MB－231／PTEN作为MDA－MB－231／PTEN组，空载体细胞株MDA－MB－231／pcDNA3．1作为阴性对照组，以未转染细胞为正常对照组，RT－PCR检测各组细胞PTEN的表达水平，MTT法检测各组MDA－MB－231细胞的增殖能力，Transwell小室迁移实验检测各组MDA－MB－231细胞的迁移能力。结果 PTEN在MDA－MB－231／PTEN细胞中表达量明显高于阴性对照组和正常对照组。而阴性对照组和正常对照组PTEN表达量差异无统计学意义。转染PTEN基因可显著抑制乳腺癌细胞MDA－MB－231的增殖和迁移能力。结论 PTEN对乳腺癌细胞的体外增殖和迁移能力有抑制作用。
关键词： PTEN 乳腺癌 增殖和迁移 MDA-MB-231 -
BLNK基因慢病毒载体构建及其稳定表达的人乳腺癌MDA-MB-231细胞株的筛选
目的 构建人BLNK基因慢病毒载体,筛选稳定表达BLNK的人乳腺癌MDA-MB-231细胞株,为探讨BLNK对乳腺癌的调控作用提供细胞株模型.方法 采用PCR法从3×Flag-BLNK质粒中扩增BLNK基因片段,连接到带有绿色荧光蛋白(GFP)标签的慢病毒载体表达质粒中,与包膜质粒pMD2.G、包装质粒psPAX2共转染293T包装细胞48 h,获得携带FLAG-BLNK的重组慢病毒,同时以慢病毒空载体FLAG-vector作为阴性对照.以重组慢病毒及阴性对照慢病毒分别感染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,1周后在高倍镜100×视野下观察被感染细胞数及细胞状态,在荧光显微镜下通过观察GFP的表达情况,筛选稳定表达BLNK的细胞株.采用反转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)的方法和Western Blotting法检测该细胞系中BLNK基因的表达情况.结果 PCR成功扩增出BLNK基因片段,插入慢病毒表达载体后,利用核酸序列测定证实重组慢病毒质粒构建成功.通过慢病毒包装三质粒表达系统获得表达BLNK的重组慢病毒,感染MDA-MB-231细胞后,在荧光显微镜下能够明显观察到绿色荧光且细胞形态正常.RT-qPCR检测结果显示,感染表达BLNK慢病毒的MDA-MB-231细胞中BLNK表达水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01).Western blotting检测结果表明,筛选出的GFP阳性的人乳腺癌MDA-MB-231细胞株可过表达BLNK.结论 成功构建了含BLNK基因的慢病毒表达载体,并筛选出稳定表达BLNK的人乳腺癌MDA-MB-231细胞株,为进一步明确乳腺癌的发生、发展机制奠定了基础.
关键词： BLNK 慢病毒载体 乳腺癌 MDA-MB-231 -
硫酸乙酰肝素蛋白聚糖对乳腺癌细胞的抑制与诱导凋亡作用
目的:观察两种硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)对MDA-MB-231乳腺癌细胞生长的影响及机制.方法:利用MTT法和细胞生长曲线检测HSPG对MDA-MB-231细胞生长的抑制作用,Hoechst33258荧光染色法、流式细胞术结合Annexin V-FITC及PI双标记染色检测HSPG对MDA-MB-231细胞凋亡的影响.结果:MTT法测得不同浓度MCF-7型HSPG作用于MDA-MB-231细胞24、48、72 h均可明显抑制细胞生长,并且呈现剂量依赖性;生长曲线显示不同浓度MCF-7型HSPG可明显抑制MDA-MB-231的生长;荧光染色法和流式细胞术显示MCF-7型HSPG诱导MDA-MB-231细胞凋亡增加;MDA-MB-231型HSPG对其源细胞(MDA-MB-231)则无生长抑制作用,对其凋亡率也无明显影响.结论:MCF-7型HSPG对MDA-MB-231细胞生长具有显著的抑制作用,其机制可能与诱导细胞凋亡增加有关.
关键词： 乳腺肿瘤 细胞凋亡 硫酸乙酰肝素蛋白聚糖 MCF-7 MDA-MB-231 -
重组质粒pDNR-Dual-Rab25的构建及其在人乳腺癌细胞株MDA-MB-231中的表达
目的:构建真核表达质粒pDNR-Dual-Rab25,并在人乳腺癌细胞MDA-MB-231(MM231)中表达.方法:采用DNA重组技术将Rab25cDNA片段与载体pDNR-Dual连接,转染至人乳腺癌细胞株MM231中, G418筛选细胞,RT-PCR检测MM231细胞中Rab25基因的表达, MTT法检测MM231细胞增殖活性,绘制细胞生长曲线.结果:经PCR、酶切及测序鉴定均证实重组质粒pDNR-Dual-Rab25构建成功,转染的人乳腺癌细胞株MM231中能扩增出与Rab25目的基因片段大小一致的DNA片段,说明该质粒经转染后能够在MM231细胞中稳定表达.经MTT法检测,转染重组质粒pDNR-Dual-Rab25的MM231细胞的增殖力明显增强.结论:成功构建真核表达质粒pDNR-Dual-Rab25,转染至MM231细胞后成功表达,且细胞增殖力明显增强,为研究Rab25基因对乳腺癌的影响提供了实验依据.
关键词： Rab25 乳腺癌 MDA-MB-231 -
脂质体法pcDNA3-ELAC2质粒转染乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231以及前列腺癌细胞Du-145
目的:构建稳定、高效表达ELAC2基因的乳腺癌细胞模型MCF-7/ELAC2、MDA-MB-231/ELAC2,以及前列腺癌细胞模型Du-145/ELAC2,为探索ELAC2基因的生物学功能奠定实验基础.方法:将构建pcDNA3-ELAC2的质粒采用脂质体法转染乳腺癌细胞和前列腺癌细胞,用RT-PCR和Western Blot分别检测ELAC2基因在细胞中的mRNA表达和蛋白表达.结果:pcDNA3-ELAC2质粒构建成功并顺利导入乳腺癌细胞和前列腺癌细胞中,且检测到ELAC2基因的mRNA和蛋白高表达.结论:构建的pcDNA3-ELAC2重组质粒能够在转染的乳腺癌细胞和前列腺癌细胞中稳定、持续和高效地表达,为进一步研究ELAC2基因的生物学功能提供了理想的实验模型.
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人乳腺癌上皮细胞miR-217对DNMT1调控作用的研究
目的 验证在乳腺癌上皮细胞系中,miR-217通过直接作用于DNMT1 3′UTR调控DNMT1表达,为后期动物实验和临床试验提供实验基础.方法 利用瞬时转染技术,在对应细胞系中,过表达、抑制miR-217,Western blot检测各实验组中DNMT1蛋白表达,并用含有miR-217野生型及突变型识别位点的DNMT1 3′UTR载体质粒分别转染293T细胞,检测相对荧光素酶活性改变.结果 过表达miR-217,DNMT1表达下降;抑制miR-217,DNMT1表达增高;双荧光素酶检测实验,DNMT1-UTR-WT的相对荧光素酶活性显著低于DNMT1-UTR-MUT,差异有统计学意义(P<0.05).结论 在乳腺癌上皮细胞系中,miR-217对DNMT1表达具有调控作用,且miR-217通过直接作用于DNMT1 3′UTR调控DNMT1表达.
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青蒿琥酯对生存素在乳腺癌细胞株MDA-MB-231表达的影响
目的 探讨青蒿琥酯对生存素(survivin)在乳腺癌细胞株MDA-MB-231中表达的影响.方法 以不同浓度(0、25、50 μg/mL)的青蒿琥酯处理MDA-MB-231细胞,分别于药物处理后24、48和72 h收集细胞及培养上清液,用RT-PCR检测不同组别、不同时间点的细胞中survivin的基因表达情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组、各时间点培养上清液中survivin的蛋白质表达水平.结果 PCR结果和ELISA结果均显示,随着药物浓度的增加和处理时间的延长,survivin基因水平和蛋白质水平的表达也逐渐降低,同一时间点各组间survivin的表达量进行单因素方差分析,差异有统计学意义(P＜0.05);对照组(0 μg/mL)在24 h和48 h survivin的表达量变化不大,经t检验分析,差异无统计学意义(P＞0.05),而各浓度经药物处理48 h后survivin的表达量明显低于24 h的表达,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 青蒿琥酯可通过抑制survivin的表达促进乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡.
关键词： 青蒿琥酯 MDA-MB-231 乳腺癌 生存素 -
REGγ促进人乳腺癌MDA-MB-231细胞株发生上皮-间充质转化的研究
目的:研究REGγ基因促进人乳腺癌细胞株MDA-MB-231发生上皮-间充质转化的生物作用.方法:免疫组化检测乳腺癌组织、与癌旁组织REGγ的表达差异以及转移淋巴结中REGγ的表达水平.Western blot和RT-PCR检测不同人乳腺癌细胞系REGγ的表达差异.构建REGγ基因过表达和干扰载体并将其导入MDA-MB-231细胞中, 然后用RT-PCR和细胞免疫荧光分别从转录水平和蛋白质水平检测上皮-间充质转化细胞标记物的表达水平的变化.分别通过划痕实验和Transwell证实REGγ对细胞侵袭迁移能力的影响.结果:免疫组化提示REGγ在乳腺癌组织 (阳性表达率为88.57％) 和转移淋巴结 (阳性表达率为87.5％) 中较癌旁组织 (阳性表达率为0) 明显高表达 (χ2=25.390, P=0.000;χ2=12.440, P=0.000) .MDA-MB-231细胞过表达REGγ后促进细胞发生上皮-间充质转化, 使细胞侵袭能力增强 (t=22.974, P=0.000) ;干扰REGγ后抑制上皮-间充质转化, 使细胞侵袭能力减弱 (t=12.118, P=0.000) .结论:REGγ促进人乳腺癌MDA-MB-231细胞发生上皮-间充质转化, 并促进肿瘤细胞侵袭转移.
关键词： REGγ MDA-MB-231 上皮-间充质转化 -
莲心碱对乳腺癌细胞MDA-MB-231自噬功能的影响
目的 观察莲心碱作用于乳腺癌细胞MDA-MB-231后,自噬表型的变化,初步论证莲心碱对乳腺癌细胞MDA-MB-231自噬功能的调控作用.方法 透射电子显微镜观察莲心碱处理后MDA-MB-231的亚细胞结构变化,激光共聚焦显微镜观察pEGFP-LC3或ptfLC3(mRFP-EGFP-LC3)转染后自噬小体的形成和自噬流的变化,Western blot检测自噬相关蛋白LC3B,SQSTM1/p62,Beclin1的表达,以及论证自噬流的变化.结果 透射电镜显示,与对照组比较,莲心碱处理后MDA-MB-231细胞内有较多自噬空泡出现,部分分裂的线粒体,但未见到高密度的嗜锇性的自噬溶酶体结构;EGFP-LC3转染后,莲心碱组自噬体数量显著多于对照组(P＜ 0.01);Western blot检测到自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ,SQSTM1/p62表达呈现量效性和时效性的增多[20 μmol/L组或24 h组与对照组比较(P＜0.01)],Beclin1未见显著变化[20 μmol/L组与对照组比较(P＞0.05)];mRFP-EGFP-LC3转染后,对照组可见少量自噬体和自噬溶酶体,莲心碱和Bafilomycin A1处理组均可见大量自噬体结构,未见显著自噬溶酶体结构;Westem blot证实莲心碱处理后增多的LC3B-Ⅱ不受Bafilomycin A1预处理的影响[莲心碱组LC3B-Ⅱ,SQSTM1/p62蛋白水平与Bafilomycin A1预处理加莲心碱组比较(P＞0.05)].结论 莲心碱抑制自噬小体成熟,阻断乳腺癌细胞MDA-MB-231自噬降解作用.
关键词： 乳腺癌 MDA-MB-231 莲心碱 自噬 -
千金藤素对乳腺癌细胞MDA-MB-231自噬降解的影响
目的 探讨千金藤素对乳腺癌细胞MDA-MB-231自噬的影响及其机制.方法 激光共聚焦显微镜观察千金藤素对转染了EGFP-LC3、tfLC3(mRFP-EGFP-LC3)质粒的MDA-MB-231细胞自噬体形成及自噬流变化的影响;Western blot检测自噬相关蛋白LC3B、p62以及Beclin1的表达水平.激光共聚焦显微镜观察千金藤素、Bafilomycin A1、Rapamycin分别对转染了EGFP-LC3、tfLC3(mRFP-EGFP-LC3)质粒的MDA-MB-231细胞自噬体形成及自噬流变化的影响;Western blot检测溶酶体相关膜蛋白LAMP1、LAMP2的表达.结果 千金藤素处理后细胞中的自噬体(EGFP-LC3荧光团)数量明显多于对照组[(30.40 ±6.42)vs(5.00±2.12),P＜0.01],自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ、p62的表达也呈量效和时效增多.转染ffLC3质粒后,千金藤素组和Bafilomycin A1组红绿荧光重叠呈现较多的黄色荧光团,而Rapamycin组出现较多的红色荧光团.千金藤素联用Bafilomycin A1并未进一步升高p62和LC3B-Ⅱ蛋白的表达水平,但联用Rapamycin明显升高了LC3B-Ⅱ蛋白的表达水平,同时,逆转了Rapamycin导致的p62蛋白表达水平减少.千金藤素既不影响对溶酶体的染色,也不减少LAMP1、LAMP2蛋白的表达水平,但影响了mRFP-LC3和mGFP-LAMP1的共定位.结论 千金藤素通过阻断自噬体与溶酶体的融合抑制MDA-MB-231细胞自噬体降解.
关键词： 千金藤素 MDA-MB-231 自噬 溶酶体 -
成骨前体细胞对乳腺癌细胞表达骨拟态特性及增殖的影响
目的 通过共培养体系探讨成骨前体细胞MC3T3-E1对MDA-MB-231乳腺癌细胞表达骨拟态特性及增殖的影响.方法 实验组将MC3T3-E1及MDA-MB-231细胞采用transwell小室共培养,上室接种MC3T3-E1成骨细胞,下室接种相同数量的MDA-MB-231细胞.对照组上、下室均采用相同数量及密度的MDA-MB-231细胞.实时荧光定量PCR、Western blot法检测实验组及对照组骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)的基因及蛋白的表达差异,采用CCK-8法检测各组增殖的差异,结晶紫染色法检测细胞集落形成差异.结果 与对照组相比,实验组OCN、OPN、OPG的基因及蛋白表达均有明显的上调(P＜0.05),MDA-MB-231细胞的增殖能力明显增高(P＜0.01);实验组MDA-MB-231细胞集落形成数量及大小均优于对照组.结论 短期共培养后MC3T3-E1成骨细胞可促进乳腺癌MDA-MB-231细胞表达骨拟态特性,并可促进其增殖及细胞集落形成.
关键词： 成骨前体细胞 乳腺癌 骨拟态 MDA-MB-231
