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辽宁地区汉族人群多巴胺D1受体基因T-800C位点的多态性研究
多巴胺受体是多巴胺系统的重要组成成分,近年来研究显示多巴胺D1受体(DRD1)与一些神经精神疾病的病因密切相关,并有研究表DRD1受体基因存在某些功能性多态性位点影响DRD1基因的转录[1-5].我们应用等位基因特异性扩增技术分析了DRD1基因T-800C位点的基因型及等位基因的频率在辽宁汉族人群中的分布情况,观察是否存在地区及种族差异,为疾病的关联研究及群体遗传学研究提供基础资料.
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利用等位基因特异性扩增检测人结直肠癌BRAF基因V600E突变
目的 建立一种基于等位基因特异性扩增技术检测人BRAF基因V600E突变的技术,用于检测低水平肿瘤点突变.方法 设计选择性扩增人BRAF基因V600E的引物,利用BRAF V600E突变型大肠癌细胞系HT29核酸混合于BRAF野生型大肠癌细胞系SW480中进行灵敏度检测,通过与Sanger测序法比较,利用其检测40例结直肠癌石蜡标本的BRAF V600E突变情况.结果 模拟细胞系混合检测显示该方法可检测出6.2%混杂于野生型基因里的BRAF V600E突变,利用该方法在40例大肠癌标本中成功检测出3例BRAF V600E突变,与测序法检出结果一致.结论 成功建立了利用等位基因特异性扩增技术检测人BRAF基因V600E突变的实验技术并用于检测实体肿瘤标本,与测序法相比该方法具有灵敏、简便、快速的特点,可用于人肿瘤BRAF V600E突变的筛查应用.
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应用等位基因特异性扩增法快速检测结核分支杆菌对利福平的耐药性
目的建立一套等位基因特异性扩增(ASA)的检测体系,用于结核分支杆菌对利福平耐药性的快速检测.方法根据结核分支杆菌野生型基因设计ASA特异性引物,ASA PCR扩增39株结核杆菌利福平耐药株的rpoB基因,经琼脂糖凝胶电泳检测,进而推断利福平的耐药性;同时进行DNA序列测定以验证ASA法的检测结果,并分析上海地区结核杆菌rpoB基因的突变特点.结果在39株利福平耐药株中共检出36株,敏感性为92.3%;与DNA测序结果的符合率为87.2%,并鉴定了11种不同类型的41种突变形式,其中包括9种点突变和2种基因缺失.结论用等位基因特异性扩增法分析结核分支杆菌的rpoB基因突变具有较高的特异性与敏感性.该法快速、简便、可靠,可应用于临床利福平耐药性的检测.
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CYP1A1基因多态性与肺癌个体易感性研究
[目的] 探讨CYP1A1 Msp1和Ile/Val多态性单独或联合作用,对肺癌易感性的影响.[方法] 以病例一对照研究的方法,采用PCR扩增限制酶切法(PCR-RFLP)和等位基因特异性扩增(Allele-Specific Amplification,ASA)检测92例肺癌病人(病例组)和98例非肿瘤病人(对照组)CYP1A1基因Msp1和Ile/Val基因型.[结果] Msp1多态性位点:具有B和C基因型者患肺癌的危险性是A基因型者的1.85倍(χ2=4.36,P＜0.05,OR=1.85,95% CI 1.04～3.30).Ile/Val多态性位点:Val/Val基因型者患肺癌的危险性是Ile/Ile基因型者的3.3倍(χ2=4.12,P＜0.05,OR=3.3,95% CI 1.02～10.72).Ile/Val基因型联合B基因型、C基因型或Val/Val基因型联合C基因型与Ile/Ile基因型联合A基因型相比,患肺癌的危险性增加,其相对危险度分别为3.09(χ2=5.81,P＜0.05,95% CI 1.7～9.96);4.74(χ2=4.74,P＜0.05,95% CI 1.11～20.9);5.5(χ2=4.42,P＜0.05,95% CI 1.27～23.6).[结论] CYP1A1 基因的B、C和Val/Val基因型可能是肺癌的易感基因型,两种易感基因型同时存在,更增加对肺癌的易感性.
关键词： CYP1A1 基因多态性 等位基因特异性扩增 易感性 肺癌病人 -
胆道系统癌与血浆k-ras基因突变检测
目的"探讨胆道系统癌患者外周血中是否存在k-ras基因突变及其诊断价值. 方法"提取血浆DNA,通过突变等位基因特异性扩增(MASA)方法检测k-ras基因codon12突变. 结果"7例胆囊癌中5例k-ras基因突变阳性(71.4%),6例肝内胆管细胞癌和3例总胆管癌中分别有2例(33.3%)及1例(33.3%)k-ras基因突变检测阳性.k-ras基因突变检测阳性而血清CA19-9、CEA水平均正常的胆囊癌、肝内胆管细胞癌与总胆管癌各1例. 结论"胆道系统癌外周血中存在肿瘤DNA,特别是胆囊癌检测血浆k-ras基因突变具有较高的诊断意义.
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等位基因特异性扩增酶联免疫法检测CYP1A1基因多态性
目的建立一种高效的基因多态性检测方法。方法用等位基因特异性扩增(ASA)和等位基因特异性扩增酶联免疫法(ASA-ELISA)对CYP1A1基因m2多态性进行检测。结果两种方法的检测结果基本一致，仅有1例不相同。ASA-ELISA将地高辛标记在扩增产物上，然后通过酶联免疫法检测扩增产物，检测灵敏度与等位基因特异性扩增(ASA)后琼脂糖凝胶电泳相比高100倍。结论该方法具有操作简单、快速、灵敏度高等特点，可用于大标本量的基因多态性检测。
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等位基因特异性PCR法快速检测结核分枝杆菌常见耐药突变基因
目的 建立一套同步检测结核分枝杆菌(MTB)常见耐药突变基因的等位基因特异性PCR (AS-PCR)检测体系,以间接判断对利福平(RFP)与异烟肼(INH)的耐药性.方法 用AS-PCR技术同步检测58株MTB临床分离株rpoB基因516位、526位和531位,katG基因315位及inhA基因-15位密码子突变,并与DNA测序结果进行比对.结果 AS-PCR法对RFP耐药株检出率为95.1％ (39/41),其中rpoB基因531位、526位、516位点突变分别检出28株、10株、2株,包括531位与526位联合点突变1株；未检出突变的2株RFP耐药株经测序验证1株未发生突变、1株发生533位点突变；RFP敏感株均未检测到突变.AS-PCR法对INH耐药株检出率为86.5％(45/52),其中katG基因315位点突变43株、inhA基因-15位点突变2株,未检出突变的7株INH耐药株经测序验证未见突变；INH敏感株均未检测到突变.结论 等位基因特异性PCR能够快速检测MTB常见突变基因,具有较高的敏感性与特异性,快速经济、操作简便.
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单管等位基因特异性扩增法同时测定多重单核苷酸多态性
目的:建立了一种单管等位基因特异性扩增法同时测定多重单核苷酸多态性(SNP).方法:以TYP基因外显子1上的3个SNP位点(71G>A、425A>T和758G>A)为例,首先采用PCR预扩增得一段含所有待测SNP位点的长片段;然后用限制性内切酶将其消化成短片段,在连接酶的作用下与设计的DNA适配器相连;以此连接产物为模板,在单个PCR管中加入一种适配器特异性通用引物和所有等位基因特异性引物进行PCR扩增;后用琼脂糖凝胶电泳法分离检测PCR扩增产物,并根据扩增片段的大小判断SNP的类型.结果:采用该法成功测定了30名健康中国人的TYP基因中的3个SNP位点,与限制性片段长度多态性法(RFLP)测定结果完全一致.结论:该方法特异性高、结果准确、检测成本低,可用于同时测定多个SNP位点.
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应用2种方法检测脊肌萎缩症运动神经元生存基因1缺失
目的:探讨脊肌萎缩症的基因诊断方法.方法:基于运动神经元生存基因的2个同源拷贝碱基上的差异,应用PCR-酶切和等位基因特异性PCR对8例脊肌萎缩症患者与其直系亲属及10例正常对照者对照进行脊肌萎缩症基因第7外显子缺失检测.结果:PCR-酶切和等位基因特异性PCR均显示8例脊肌萎缩症患者运动神经元生存基因第7号外显子缺失,正常对照组及患者亲属未发现缺失.结论:PCR-酶切结合等位基因特异性PCR是可靠的运动神经元生存基因缺失检测方法,提高了脊肌萎缩症基因诊断的准确性.
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多巴胺D1受体基因启动子区-2102C/A多态性与慢性抽动障碍的关系
目的 探讨多巴胺D1受体(DRD1)基因启动子区-2102C/A多态性位点与慢性抽动障碍的关系.方法 收集2004年1月-2005年10月及2011年1-2月中国医科大学附属盛京医院发育儿科门诊收治的119例慢性抽动障碍患儿(慢性抽动障碍组),同期在该科门诊体检的119例健康儿童作为健康对照组,提取2组静脉血白细胞基因组DNA,采用等位基因特异性扩增技术检测DRD1基因启动子区-2102C/A多态性位点的基因型.采用基因计数法及χ2检验等统计学方法分析2组儿童及按性别分组后-2102C/A位点等位基因及基因型频率分布是否存在差异.结果 -2102C/A位点基因型分布:CC基因型在慢性抽动障碍组和健康对照组分别为28.6%和24.4%,CA基因型分别为44.5%和46.2%,AA基因型分别为26.9%和29.4%,2组基因型分布比较差异无统计学意义(χ2=0.568,P=0.753);C等位基因频率在慢性抽动障碍组和健康对照组中分别为50.8%和47.5%,A等位基因频率在2组分别为49.2%和52.5%,2组比较差异无统计学意义(χ2=0.538,P=0.463).将样本按性别进行分组,男性组,CC基因型在慢性抽动障碍组和健康对照组分别为28.2%和23.4%,CA基因型分别为43.6%和43.8%,AA基因型分别为28.2%和32.8%,2组基因型分布比较差异无统计学意义(χ2=0.553,P=0.758);C等位基因频率在慢性抽动障碍组和健康对照组分别为50.0%和45.3%,A等位基因频率在2组分别为50.0%和54.7%,2组比较差异无统计学意义(χ2=0.619,P=0.431).女性组,CC基因型在慢性抽动障碍组和健康对照组分别为29.3%和25.5%,CA基因型分别为46.3%和49.1%,AA基因型分别为24.4%和25.5%,2组基因型分布比较差异无统计学意义(χ2=0.174,P=0.917);C等位基因频率在慢性抽动障碍组和健康对照组分别为52.4%和50.0%,A等位基因频率在2组分别为47.6%和50.0%,2组比较差异无统计学意义(χ2=0.112,P=0.738).结论 DRD1基因启动子区-2102C/A多态性可能与慢性抽动障碍无关.
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多巴胺D4受体基因多态性与原发性夜间遗尿症的关联研究
目的 研究多巴胺D4受体(dopamine D4 receptor,DRD4)基因的多态性及其组合分布与原发性夜间遗尿症(PNE)的相关性.方法 选取无亲缘关系的PNE儿童86例以及无亲缘关系的健康儿童100例为对照组,提取静脉血白细胞基因组DNA,采用聚合酶链反应及等位基因特异性扩增技术检测DRD4基因-12401./S,-521C/T与-616C/G 3个位点的基因型.结果 PNE组与对照组DRD4-616C/G的等位基因频率及基因型频率差异存在显著性(X2=8.13,P＜0.05;X2=6.23,P＜0.05).等位基因组合分布研究发现DRD4-1240 L/S-616C/G-521 C/T组合的单倍型LCT分布频率在PNE组明显高于正常对照组(X2=5.88,P＜0.05).结论 PNE儿童DRD4基因-616位点由G到C的转换可能影响DRIM基因的诱导及转录,DRD4基因启动子区3个功能多态位点构成的单倍型LCT可能进一步协同抑制了DRD4基因的转录活性,可能使DRD4蛋白表达降低,注意力缺陷,睡眠觉醒障碍,引起夜间遗尿.
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多巴胺D4受体基因启动子区多态性与慢性抽动障碍的关联研究
目的 探讨多巴胺D4受体(DRD4)基因启动子区的3个功能多态性与慢性抽动障碍是否存在相关性.方法 选取无亲缘关系的慢性抽动障碍患儿84例以及无亲缘关系的健康个体100例,后者作为对照组.提取静脉血白细胞基因组DNA,采用聚合酶链反应及等位基因特异性扩增技术检测DRD4基因启动子区-1240L/S,-616C/G和-521C/T 3个功能位点的基因型.用SHEsis在线统计软件分析各位点等位基因、基因型、单倍型频率及其组间差异.结果 DRD4基因-616C/G的等位基因频率及其基因型频率在慢性抽动障碍组显著高于正常对照组(χ2=8.419,P＜0.01;χ2=7.860,P＜0.05),DRD4基因-1240L/S,-616C/G和-521C/T组成的单倍型LCT的频率在慢性抽动障碍组显著高于正常对照组(χ2=6.371,P＜0.05).结论 DRD4基因-616C/G的等位基因可能与慢性抽动障碍相关联,携带有DRD4基因-1240L/S,-616C/G和-521C/T组成的单倍型LCT的个体可能更易患慢性抽动障碍.
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多巴胺D4受体基因启动子区多态性与原发性夜间遗尿症的关联研究
目的 研究多巴胺D4受体(dopamine D4 receptor,DRD4)基因-616C/G位点的多态性与原发性夜间遗尿症(PNE)的相关性.方法 选取无亲缘关系的PNE儿童86例以及无亲缘关系的健康儿童100例为对照组,提取静脉血白细胞基因组DNA,采用聚合酶链反应及等位基因特异性扩增技术检测DRD4基因-616C/G位点的基因型.结果 PNE组与对照组DRD4-616C/G位点的等位基因频率及其基因型频率差异有显著性(X2=9.022,P=0.003;X2=7.987,P=0.018).结论 PNE儿童DRD4基因-616位点由C到G的转换可能影响DKD4基因的诱导及转录,使DKD4蛋白表达降低,多巴胺递质代谢通路异常,睡眠觉醒障碍,引起夜间遗尿.
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辽宁地区汉族人群多巴胺D4受体基因启动子区3个位点的多态性研究
目的 探讨辽宁地区汉族人群多巴胺D4受体(dopamine D4 receptor,DRD4)基因启动子区的3个多态性位点的基因型及等住基因的频率分布.方法 用聚合酶链反应及等位基因特异性扩增技术对100名辽宁地区汉族人的DRD4基因启动子区3个多态性进行了检测,并与其他人群做了比较.结果 DRD4基因启动子区-1240L/S的等住基因频率分别为60%和40%.-616C/G的等位基因频率分别为18%和82%.-521C/T的等位基因频率分别为39%和61%.均符合Hardy-weinberg平衡定律.辽宁地区汉族人群DRD4基因启动子区3个多态性之间不存在连锁不平衡.中国人群与其他人群基因多态性分布频率对照研究发现,-1240L/S和-616C/G 2多态性分布差异存在显著性.结论 DRD4基因启动子区-1240L/S和-616C/G多态性分布具有种族差异.
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辽宁地区汉族人群多巴胺D1受体基因启动子区3个位点的多态性研究
目的 探讨辽宁地区汉族人群多巴胺D1受体(dopamine D1 receptor,DRD1)基因启动子区的3个多态性位点的基因型及等位基因的频率分布.方法 用等位基因特异性扩增技术对101名辽宁地区汉族人的DRD1基因启动子区3个多态性进行检测,并与文献中的其他人群进行比较.结果 ①DRD1基因启动子区-2102C/A的等位基因频率分别为47.5％和52.5％.-800T/C的等位基因频率分别为36.6％和63.4％.-48G/A的等位基因频率分别为43.6％和56.4％.均符合Hardy-Weinberg平衡定律.②辽宁地区汉族人群DRD1基因启动子区3个多态性之间不存在连锁不平衡.③中国人群与其他人群基因多态性分布频率对照研究发现,-2102C/A、-48G/A多态性分布差异有统计学意义,而-800T/C多态性分布差异没有统计学意义.结论 DRD1基因启动子区-2102C/A、-48G/A多态性分布具有种族差异,-800T/C多态性分布不具有种族差异.
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辽宁地区汉族人群多巴胺D2受体基因启动子区-241A/G的多态性研究
目的 探讨辽宁地区汉族人群多巴胺D2受体(dopamine D2 receptor,DRD2)基因启动子区-241A/G多态性位点的基因型及等位基因的频率分布.方法 用等位基因特异性扩增技术对101名辽宁地区汉族人的DRD2基因启动子区-241A/G多态性进行了检测,并与其他人群做比较.结果 (1)DRD2基因启动子区-241A/G的等位基因频率分别为49％和51％,均符合Hardy-Weinberg平衡定律.(2)中国人群与其他人群基因多态性分布频率对照研究发现,DRD2基因启动子区-241A/G多态性分布存在显著性差异.结论 DRD2基因启动子区-241A/G多态性分布具有种族差异.
