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细胞凋亡及其信号转导途径
细胞胞凋亡是生物体细胞受基因精确调控的主动消亡过程,在多细胞生物体调控机体发育、维持内环境稳定中起着重要作用.细胞凋亡的机制是高度复杂而精确的,它是能量依赖的分子连锁反应,有多种分子参与、多重信号转导通路介导其调控.本文对细胞凋亡途径及其信号转导的研究概况进行综述.
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TRAIL真核质粒联合紫杉醇诱导宫颈癌细胞凋亡的实验研究
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)是肿瘤坏死因子家族成员,TRAIL可以通过细胞表面受体途径和线粒体途径诱发多种肿瘤细胞发生调亡,而对正常细胞无明显杀伤作用,在肿瘤治疗中具有广阔的应用前景.
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厚朴酚对白血病细胞K562体外作用机制探讨
目的 探讨中草药提取物厚朴酚对慢性髓性白血病细胞株K562的体外作用机制.方法 选用不同浓度(0、5、10、15、20、25 mol/L)厚朴酚处理K562细胞不同时间(24h、48h),用MMT方法测定厚朴酚对K562细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测厚朴酚对K562细胞凋亡的影响.结果 厚朴酚对K562有明显的增殖抑制作用,呈明显的时间-剂量依赖关系;其作用24 h、48 h的半数有效抑制率(IC50)分别为9.05、5.62μmol/L(P＜0.05).流式细胞术检测结果显示,0、5、10、15 μmol/L厚朴酚处理24 h后细胞凋亡率分别为1.35％、16.91％、29.61％、46.26％,呈剂量-时间依赖性(P＜0.05);同时厚朴酚能够抑制BCL-2的表达、上调Bax、细胞色素C及活化的caspase-3、caspase-9的表达.结论 厚朴酚对K562细胞具有明显的增殖抑制作用,其作用可能是通过caspase依赖的线粒体途径诱导细胞凋亡的.
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ROS在齐墩果酸诱导HL-60细胞凋亡中的作用
目的 观察ROS在齐墩果酸(OA)诱导HL-60细胞凋亡中的作用.方法 分瓶培养细胞,实验设空白对照组和12、24、48 h的OA用药组.收集细胞,提取细胞总蛋白,制备去线粒体细胞浆蛋白,Western印迹法检测caspase-9表达.流式细胞术检测ROS水平.结果 OA处理HL-60细胞后,ROS含量增加,并引起caspase-9的激活.结论 OA使ROS量增加,通过线粒体凋亡信号通路诱导HL-60细胞凋亡.
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齐墩果酸通过线粒体途径诱导原髓细胞白血病细胞株细胞凋亡
目的：探讨原髓细胞白血病细胞株HL－60细胞半胱氨酸蛋白酶（ Caspase）－9、Smac／DIABLO、细胞色素C（ Cyt－c）和线粒体凋亡诱导蛋白（ Bid）表达及齐墩果酸（ OA）对HL－60细胞线粒体凋亡信号通路的干预作用。方法细胞分瓶培养，实验设空白对照组和12、24、48 h的OA用药组，收集细胞，提取细胞总蛋白、线粒体蛋白和去线粒体细胞浆蛋白，Western印迹法分别检测Caspase－9、Bid、Smac／DIABLO和Cyt－c的表达。结果OA引起HL－60细胞质中Cyt－c和Smac／DIABLO含量增加，并引起Caspase－9的激活，线粒体Bid蛋白含量增加。结论 OA可以通过线粒体凋亡信号通路诱导HL－60细胞凋亡。
关键词： 齐墩果酸 白血病细胞株HL-60 线粒体途径 bid 细胞色素C -
过氧化氢通过线粒体途径诱导成骨细胞凋亡
目的 探讨氧化应激状态诱导成骨细胞系MC3T3-E1凋亡中线粒体途径的作用.方法 采用MTT法检测不同浓度过氧化氢处理后MC3T3-E1的增殖情况;Annexin V-FITC/PI流式细胞学检测细胞凋亡;JC-1流式细胞学检测线粒体膜电位;DCFH-DA流式检测活性氧簇(ROS)活性;Western印迹检测线粒体Bax表达水平.结果 MC3T3-E1过氧化氢处理后,细胞增殖明显抑制呈剂量效应关系,ROS活性和凋亡增加,线粒体膜电位降低.结论 过氧化氢可以增加细胞内ROS水平,通过激活线粒体途径诱导细胞凋亡.
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009 死亡受体及线粒体途径与激活诱导T细胞凋亡
免疫系统形成了一系列确保激活的淋巴细胞能被有效清除的分子及信号途径,称之为激活诱导的细胞死亡.激活诱导的细胞死亡主要负责调节免疫细胞稳态及清除自身反应性淋巴细胞.死亡受体途径及线粒体死亡途径分别是细胞凋亡的外在途径和内在途径,也参与了激活诱导的T细胞凋亡,本文就外周成熟T细胞凋亡相关的死亡受体途径、线粒体死亡途径及其相关调控机制研究进展作一综述.
关键词： 激活诱导的T细胞凋亡 死亡受体途径 线粒体途径 -
川陈皮素诱导人卵巢癌细胞(HO8910)的凋亡效应
目的 探讨川陈皮素诱导浆液性上皮性卵巢癌细胞(HO8910)凋亡的作用及分子机制.方法 采用MTT检测川陈皮素对HO8910细胞和正常卵巢上皮细胞(IOSE80)生长活力的影响,流式细胞术检测HO8910细胞凋亡率,吖啶橙染色检测H08910细胞核的形态,JC-1染色判断川陈皮素是否通过线粒体途径诱导HO8910细胞凋亡,Western blot检测Bad、Bcl-xl、Akt、p-Akt、pro-caspase 9和pro-caspase 3蛋白的表达.结果 川陈皮素选择性地影响HO8910细胞的活力;当川陈皮素浓度为80 μg/mL时诱导的HO8910细胞凋亡率上升;川陈皮素浓度为80 μg/mL时作用24h细胞核发生明显聚集;川陈皮素以浓度依赖方式使细胞线粒体膜电位下降;川陈皮素上调了促凋亡蛋白Bad、pro-caspase 9和pro-caspase 3的表达,下调了抗凋亡蛋白Bcl-xl、Akt和p-Akt的表达.结论 川陈皮素可通过线粒体途径,抑制PI3K/Akt信号通路激活,诱导HO8910细胞凋亡.
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蛇毒在细胞凋亡线粒体途径中的研究进展
本文简述了细胞凋亡过程中线粒体途径细胞色素C释放的机制,回顾了近年蛇毒对不同肿瘤的作用效果的研究,并归纳了蛇毒抗肿瘤机制线粒体途径的研究.细胞凋亡(apoptosis)是由基因调控的,响应于死亡信号,发生在所有细胞的生理和病理过程,为细胞编程死亡(Programmed cell death,PCD)的方式.细胞凋亡影响着机体疾病的发生发展,凋亡细胞自身发生收缩和凝结,细胞骨架崩溃,核膜拆卸,和核DNA分解成片段.研究发现线粒体是细胞凋亡过程中的关键细胞器之一.多种刺激因子均可引起线粒体的功能障碍.较多数据显示细胞色素C(Cytochrome C,Cyt-C)释放是线粒体途径的关键步骤.蛇毒作为天然药用资源有着许多药用价值,不少研究指出蛇毒可以诱导细胞凋亡且其作用机制可能与线粒体途径有关,而线粒体途径的关键作用步骤是影响细胞色素C(Cyt-C)的释放.
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枸杞多糖对电离辐射所致小鼠骨髓单核细胞凋亡的抑制作用
[目的]探究枸杞多糖对X射线所致的小鼠骨髓单核细胞(BMNCs)凋亡的作用机制.[方法]体外培养BMNCs,建立放射损伤细胞模型.X射线照射后枸杞多糖组立即给予100、200、400、800μg/mL枸杞多糖,辐射对照组和正常组给予等量不合枸杞多糖的RPMI1640培养液,分别于照射后24、48、72、96h采用MTT法检测细胞活力,用流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,用JC-1荧光探针法检测细胞线粒体膜电位,用分光光度法检测细胞中半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3活性,用蛋白免疫印迹法检测B淋巴细胞瘤(Bcl)-2和细胞色素C的表达.[结果]照射后24h,与辐射对照组相比:枸杞多糖各组和正常组细胞活力均升高(P＜0.01);枸杞多糖各组和正常组细胞凋亡率分别降低5.95％、5.84％、5.33％、3.96％、5.48％(P＜0.01);200、400、8000μg/mL枸杞多糖组和正常组线粒体膜电位下降的细胞数占总细胞数的比例明显减少(P＜0.01)(分别减少5.79％、10.16％和11.21％、19.01％);枸杞多糖各组和正常组Caspase-3活性下降(P＜0.05);400、800 μg/mL枸杞多糖组和正常组Bcl-2的表达明显升高(P＜0.05),细胞色素C的表达量明显下降(P＜ 0.05).[结论]枸杞多糖对X射线所致的小鼠骨髓单核细胞的凋亡有抑制作用,可能是通过作用于Caspase-3,细胞色素C和Bcl-2所在的线粒体途径来实现.
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秦皮甲素对肺癌小鼠抑瘤作用的研究
目的 探讨秦皮甲素对小鼠肺癌移植瘤的影响及作用机制.方法 分组对比观察秦皮甲素对小鼠Lewis肺癌移植瘤的影响,瘤组织称重计算抑瘤率,免疫印迹法检测秦皮甲素对凋亡基因Bax、Bcl-2的影响.流式细胞仪检测瘤细胞增殖周期及凋亡,JC-1染色检测线粒体膜电位.结果 秦皮甲素可抑制小鼠肺癌移植瘤的生长和瘤细胞的增殖周期,降低线粒体膜电位,在上调Bax蛋白表达的同时下调Bcl-2蛋白表达,且呈剂量依赖性.结论 秦皮甲素对小鼠肺癌移植瘤有显著的抑制作用.使肿瘤细胞阻滞于S期,并通过线粒体途径诱导凋亡.
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活性氧与内质网应激介导肝细胞凋亡研究进展
凋亡是程序性细胞死亡,目前已知的3条凋亡途径包括死亡受体途径、线粒体途径及内质网应激凋亡途径.
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地西他滨抗套细胞淋巴瘤胞株Jeko-1作用机制的研究
背景与目的:套细胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma,MCL)是一种难治性的恶性肿瘤,预后差.地西他滨对骨髓异常增生综合征及难治性急性髓性白血病的治疗临床上已达成共识,但是目前鲜有地西他滨对MCL作用的报道.本文探讨地西他滨抗MCL细胞的作用机制.方法:以MCL细胞株Jeko-1作为研究对象,采用MTT法检测地西他滨对细胞增殖的影响,Annexin V/PI双重染色法检测其对细胞凋亡的影响,采用DiOC6(3)染色/流式细胞术检测Jeko-1细胞线粒体跨膜电位的丢失,Western blot检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)及凋亡途径相关蛋白的表达,用亚硫酸氢盐测序(bisulfate sequencing PCR,BSP)技术检测地西他滨作用Jeko-1细胞前后PCDH8基因启动子CpG岛的甲基化水平变化.结果:地西他滨能有效抑制Jeko-1细胞的增殖并诱导其凋亡,凋亡率呈时间和剂量依赖性增加,并引起MCL细胞线粒体跨膜电位丢失,Cyclin D1蛋白表达水平降低,caspase 3、caspase 9表达水平增加.本研究另发现Jeko-1细胞中PCDH8基因启动子CpG岛的甲基化率为76.67%,经过0.5 μmol/L低浓度的地西他滨处理72 h后,其甲基化率下降至48.33%.结论:地西他滨在对MCL细胞的作用中,高浓度时起到细胞毒作用,低浓度时则具有去甲基化作用,为今后的临床治疗提供了新的理论依据.
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1,4-二（2-苄硒乙氧基）蒽诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡的研究
背景与目的：硒是人类生命活动中必不可少的微量元素之一，对人类健康的巨大作用是其他物质无法替代的。硒的小分子化合物1,4-二(2-苄硒乙氧基)蒽{1,4-bis[2-(benzylselanyl)ethoxy] anthracene， BSEA}具有杀菌消炎的作用，但BSEA的抗癌作用尚未见报道。该研究旨在探讨BSEA诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡及其作用机制。方法：不同浓度的BSEA处理人喉癌Hep-2细胞24 h后，采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)法检测细胞生长抑制率；在荧光显微镜下观察细胞形态；Annexin Ⅴ-FITC法检测细胞凋亡；JC-1检测线粒体膜电位；酶标分析仪检测caspase-3和caspase-8活性；实时荧光定量聚合酶链反应(real-time flu-orescent quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR)和蛋白[质]印迹法(Western blot)分别检测Bax、XIAP mRNA和蛋白表达水平。结果：BSEA处理人喉癌Hep-2细胞24 h后，BSEA对其生长抑制呈剂量依赖性，IC50为35.74μmol/L；80μmol/L BSEA处理的Hep-2细胞在荧光显微镜下可观察到明显的凋亡小体；磷脂酰丝氨酸外翻加剧；线粒体膜电位开始下降；caspase-3活性的影响呈剂量依赖趋势，而caspase-8活性未见显著变化；Bax的mRNA和蛋白表达水平上升，XIAP的mRNA和蛋白表达水平下降。结论：BSEA对人喉癌Hep-2细胞生长有明显的抑制作用，并能通过线粒体途径诱导细胞凋亡。
关键词： 1 4-二(2-苄硒乙氧基)蒽 Hep-2细胞 细胞凋亡 线粒体途径 -
泽漆抑制三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞及其凋亡机制研究
目的 研究泽漆对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞的作用及其作用机制.方法 用MTT法检测细胞活力;用荧光显微镜法测定MDA-MB-231细胞的活性氧(ROS)生成量;用流式细胞仪检测细胞的凋亡率;用TUNEL检测法检测细胞凋亡DNA碎片;用Western blot检测caspase-9、caspase-3、PARP等凋亡相关因子的水平变化.结果 MTT试验显示泽漆提取物对MDA-MB-231细胞具有显著的抑制作用,但作用可被ROS抑制剂NAC及caspase抑制剂Z-VAD-FMK所消除;荧光显微镜检测显示泽漆提取物能显著提高ROS的生成;流式细胞仪检测显示泽漆提取物处理后,PI染色阳性细胞明显增加,但被NAC减弱.Caspase-9、caspase-3在提取物处理后均转为激活形式,PARP被剪切.TUNEL法显示,提取物处理后细胞凋亡碎片明显增多,而提前加入ROS抑制剂NAC和caspase抑制剂Z-VAD-FMK能使泽漆提取物诱导凋亡的DNA碎片明显减少.结论 泽漆乙酸乙酯提取物可以有效抑制MDA-MB-231细胞的生长,诱导其凋亡,其作用机制可能与ROS过量生成所致的线粒体损伤途径有关.
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线粒体途径在温热化疗诱导胃癌细胞AGS凋亡中的作用
目的 探讨线粒体途径在温热化疗诱导胃癌细胞AGS凋亡中的作用.方法 应用人胃癌细胞株AGS,根据不同实验处理分为常温对照(NT)、单纯温热(HT)、常温化疗(NTCT)和温热化疗(HTCT)四组.Western blotting法检测AGS细胞中Bax、Bcl-2蛋白及其线粒体胞质蛋白中细胞色素C的表达,实时PCR检测其Bax、Bcl-2的mRNA表达;分别测定各组AGS细胞Caspase 3和Caspase 9的酶活性变化.结果 与NT、HT、NTCT组比较,HTCT组AGS细胞Bcl-2蛋白表达下调而Bax蛋白表达上调,Bax/Bcl-2显著上升;线粒体胞质蛋白中细胞色素C表达增加;Caspase 9和Caspase 3的酶活性显著增高.结论 HTCT可引起AGS细胞Bcl-2、Bax基因和蛋白表达水平发生改变,促使其细胞色素C由线粒体释放进入细胞质,从而诱导细胞凋亡.
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心肌和脑保护中的新策略--线粒体途径
线粒体KATP通道被认为是心肌和脑缺血预适应和药物性预适应的效应器,线粒体膜电位耗散和继发的通透性转换孔道(PTP)的开放是细胞凋亡的上游途径.线粒体KATP通道开放可以预防线粒体膜电位的耗散.以线粒体为靶位的新型抗氧化应激和细胞凋亡的器官保护方法将有广泛的临床应用前景.
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齐墩果烷三萜类化合物的抗肿瘤活性及机制研究进展
齐墩果烷三萜类化合物具有广泛的生物活性,其中包括抗肿瘤活性.近年来的研究显示,该类化合物对肿瘤细胞的促凋亡作用与肿瘤细胞线粒体途径的激活密切相关.介绍了齐墩果烷三萜类化合物的抗肿瘤活性,以及该类化合物激活肿瘤细胞凋亡线粒体途径的机制,为进一步探究该类化合物的作用机制及相关药物研发提供参考.
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白藜芦醇诱导人前列腺癌DU145细胞凋亡的作用机制
研究白藜芦醇诱导人前列腺癌DU145细胞凋亡的作用机制.采用MTT检测细胞增殖情况,活性氧试剂盒分析细胞内ROS水平;流式细胞术观察细胞凋亡和细胞周期的变化. Western blot检测凋亡相关蛋白以及相关通路蛋白表达.结果表明,经不同药物浓度处理,白藜芦醇可以诱导DU145细胞发生凋亡,使细胞周期阻滞于G0/G1期,提高细胞内ROS水平,降低细胞内线粒体膜电位水平,并呈剂量依赖性.白藜芦醇通过上调Bax蛋白的表达和抑制Bcl-2蛋白表达,促使Bax/Bcl-2比值升高,激活Caspase级联反应从而诱导细胞发生凋亡.进一步研究发现白藜芦醇可以升高细胞内ROS水平,降低线粒体膜电位水平,从而通过线粒体途径诱导DU145细胞发生凋亡.因此,白藜芦醇可能通过ROS-线粒体途径诱导人前列腺癌DU145细胞凋亡.
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芦荟多糖通过线粒体途径诱导人肺腺癌A549细胞凋亡
目的 观察芦荟多糖(aloe polysaccharide,AP)对人肺腺癌A549细胞的诱导凋亡作用,并初步探讨其作用机制.方法 AP作用于A549细胞后,用MTS法检测细胞生长情况,采用Hoechst荧光染色和DNA ladder检测A549细胞的凋亡情况;用Western blot法检测凋亡相关分子caspase-9,caspase-8,caspase-3和Bcl-2的表达情况;应用比色法检测caspase活性.结果 ①AP可呈时间和剂量依赖性抑制A549细胞生长(P＜0.01).②40μmol·L-1的AP可呈时间依赖性诱导A549细胞出现凋亡形态学改变:核浓缩、核碎裂和DNA梯状条带;③A549细胞的caspase-9,caspase-8和caspase-3均在AP处理后24 h内被激活,且caspase-9和caspase-3早于caspase-8活化(P＜0.05),Bcl-2蛋白呈时间依赖性下调.结论 AP能够诱导人肺腺癌A549细胞凋亡,其作用机制可能与AP激活线粒体凋亡途径有关.
