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甘草酸二铵对人肺癌细胞A549增殖作用的影响
目的研究甘草酸二铵对人肺癌细胞系A549增殖的影响.方法采用A549细胞体外培养的方法,以MTT、3[H]-TdR掺入法及流武细胞术观察细胞的增殖情况.结果甘草酸二铵能促进A549细胞代谢MTT,增加其3[H]的掺入率,并呈现剂量依赖性.在100ng/ml时,流武细胞术显示,甘草酸二铵可抑制A549细胞由静止期进入DNA合成期.结论甘草酸二铵能呈剂量依赖型抑制A549细胞的分裂增殖.
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槲皮素对IL-1β刺激肺上皮细胞表达ICAM-1的影响
目的:研究槲皮素对重组人白介素-1β(IL-1β)刺激肺上皮细胞株A549细胞表达细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的影响,并探讨可能的分子机制.方法:IL-1β处理A549细胞,用不同浓度槲皮素干预;RT-PCR法检测ICAM-1 mRNA的表达;Western blotting检测核转录因子NF-kB及其抑制剂1kB的表达.结果:IL-1β能刺激A549细胞表达ICAM-1,这种现象可以被槲皮素抑制,并有一定浓度依赖关系,IL-1β可增加NF-kB的活化,抑制1kB的表达,而槲皮素作用后,NF-KB活化抑制,1KB表达增加.结论:槲皮素通过调节NF-kB的活化而抑制IL-1β诱导A549细胞表达ICAM-1,提示槲皮素可能通过对炎症因子负性调控而发挥其抗炎作用.
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褪黑素联合顺铂对肺腺癌A549细胞生长的影响
目的:探讨褪黑素联合顺铂对肺腺癌A549细胞增殖的影响.方法:分别将不同浓度褪黑素(100、300、500、700、1 000 μmol/L)及顺铂(2.5、5、10 μg/mL)联合与肺腺癌A549细胞共培养48 h,MTT法检测细胞抑制率.结果:不同浓度顺铂(2.5、5、10 μg/mL)与500 μmol/L的褪黑素联合使用对肺腺癌细胞生长抑制率[(71.25 ±5.01)%、(86.37±7.10)%、(77.63±8.65)%)]明显高于单独使用顺铂(P<0.05).结论:褪黑素和顺铂均可抑制肺腺癌A549细胞增殖,二者联合可协同抑制肿瘤细胞增殖.
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中药姜黄素对人肺癌A549细胞的抑制作用及其机制
目的:研究姜黄素(Curcumin)对人A549细胞的抑制作用,并探讨其作用机制.方法:将细胞分为对照组和20、40、80μmol/L姜黄素处理组,采用MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测A549细胞凋亡情况,RT-PCR法检测Bax和Bcl-2 mRNA表达情况,Western bloting法检测细胞色素c和Caspase-3表达情况.结果:姜黄素能显著抑制A549细胞的活性(P＜0.01).经姜黄素处理后,A549细胞的凋亡率明显升高,与对照组比较差异具有统计学意义(P＜0.01).此外,姜黄素诱导使A549细胞Bax/Bcl-2比值明显上升(P＜0.01),细胞色素c和Caspase-3蛋白的表达均显著上调(P＜0.01).结论:姜黄素可抑制A549细胞的活性和增殖,促进A549细胞凋亡进程,其作用机制可能与姜黄素激活A549细胞线粒体凋亡途径有关.
关键词： 姜黄素 A549细胞 细胞凋亡 BAX/BCL-2比值 Caspase-3 -
羟基喜树碱对肺癌细胞A549抑制作用的研究
目的:研究羟基喜树碱对人肺癌A549细胞的抑制效果,探讨抗癌药物对细胞凋亡与周期的调控作用.方法:CCK-8法测定不同浓度的HCPT对A549细胞的生长抑制作用,AO/EB染色观察细胞生长情况;琼脂糖凝腔电泳验证细胞调亡的特征性DNA条带;用流式细胞仪测定抗癌药物羟基喜树碱对细胞凋亡和细胞周期的影响.结果:CCK-8结果表明不同浓度的HCPT对A549细胞的生长抑制作用不同;琼脂糖凝胶电泳可见调亡细胞DNA的梯状条带;荧光显微镜下观察到经AO/EB染色的典型凋亡细胞;在相同浓度下,随时间的延长细胞的凋亡率也逐渐增加,1μmol/l的HCFT作用于A549细胞对其抑制效果为明显,细胞凋亡率为32.03%.结论:抗癌药物羟基喜树碱对A549有抑制效果,促进其细胞凋亡,参与细胞周期调控.
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人参皂苷Rg3诱导肺癌细胞A549凋亡的机制研究
目的:探讨人参皂苷Rg3诱导肺癌细胞A549凋亡的机制.方法:采用Annexin V FITC/PI双染流式细胞仪分析A549细胞的凋亡情况;采用台盼蓝染色检测细胞活率;采用Hoechst 33258荧光染色观察细胞形态变化;采用Western blot技术检测Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果:人参皂苷Rg3可以诱导肺癌细胞A549凋亡.人参皂苷Rg3所诱导的A549细胞凋亡具有时间和剂量依赖性,其机制涉及Bcl-2表达下调和Bax表达上调.结论:人参皂苷Rg3能够诱导A549细胞凋亡.其作用机制可能与Bcl-2表达下调和Bax表达上调有关.
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丹参水提液对肺癌A549细胞增殖的抑制作用
目的:探讨不同浓度的丹参水提液对体外培养的人肺癌细胞系A549细胞增殖及凋亡的影响.方法:不同浓度的丹参水提液作用于人肺癌细胞A549细胞株24,48,72 h后,MTT法观察药物对肺癌A549细胞生长的抑制效应;作用于细胞48 h后倒置显微镜观察细胞形态学的改变;应用AO/EB荧光染色法观察不同浓度丹参水提液作用细胞48 h后对细胞凋亡的影响;AnnexinV/PI双染流式细胞仪检测经药物作用24 h后A549细胞凋亡情况.结果:丹参水提液可剂量依赖性地抑制A549细胞的增殖,抑制增殖作用以48 h效果佳;通过倒置显微镜可观察到细胞的形态学改变;细胞荧光染色出现了明显的凋亡细胞,表现为细胞皱缩、核染色质浓缩、核碎裂等凋亡特征性的形态学改变;流式细胞仪检测结果显示丹参水提液可诱导细胞凋亡.结论:丹参水提液可对人肺癌细胞系A549细胞具有显著的体外增殖抑制作用,其主要作用可能与诱导细胞凋亡有关.
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肺瘤平膏防治非小细胞肺癌的研究进展
结合古今文献对肺癌的认识,总结了近10年来肺瘤平膏治疗肺癌的中医基础理论、临床观察和实验研究,并分析肺瘤平膏治疗肺癌的优势、存在的问题和今后的设想,为中医药治疗肺癌提供研究思路.
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胰岛素样生长因子-1对高氧诱导的A549细胞凋亡的影响
目的 胰岛素样生长因子-1(IGF-1)具有促进细胞分化、抑制细胞凋亡等多种生物学活性.该研究旨在探讨IGF-1对高氧诱导的A549细胞凋亡的影响及其抗凋亡机制.方法 将传代培养的A549细胞暴露于高氧环境,并以不同浓度IGF-1(1、10、100 ng/mL)干预48 h,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,Annexin VFITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡变化,同时用流式细胞仪检测凋亡调控相关蛋白(Bax、Bcl-2)表达水平的变化.结果 高氧组细胞存活率为(51±3)％,IGF-1干预组细胞存活率随着IGF-1药物浓度的递增逐渐升高,中、高剂量IGF-1干预组细胞存活率分别为(64±3)％和(88±4)％,与高氧组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).高氧组A549细胞凋亡率为(38.3±5.4)％,较空气组(2.4±0.9)％明显增多；高氧组Bcl-2的蛋白表达水平为(72±5)％,较空气组(91±4)％明显下降；高氧组Bax的表达水平为(54±6)％,较空气组(3±2)％明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).与高氧组比较,IGF-1干预组细胞凋亡率随着药物浓度的增加逐渐下降,分别为(16.1±4.7)％、(9.2±2.8)％和(6.9±2.5)％,差异有统计学意义(P＜0.05).与高氧组比较,IGF-1干预组细胞Bcl-2的表达逐渐增高,分别为(79±4)％、(94±4)％和(100±5)％,而Bax的表达逐渐下降,分别为(26±4)％、(5±2)％和(4±2)％,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 高氧明显抑制A549细胞的增殖,促进其凋亡；IGF-1具有促进A549细胞增殖,通过调节凋亡调控蛋白Bcl-2和Bax表达,抑制高氧诱导的A549细胞凋亡的作用.
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mitoKATP通道开放剂对高氧诱导人A549细胞凋亡的保护作用
目的 探讨mitoKATP通道开放剂二氮嗪对高氧诱导人A549细胞凋亡的保护作用和机制.方法 体外培养人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549),随机分为对照组、高氧组(换液后通人900 mL/L氧气和50 mL/L二氧化碳高纯混合气,10 min后密闭培养)和二氮嗪组(用终浓度为100 μmol/L的二氮嗪培养液预处理24 h再进行高氧诱导).3组分别于处理后12、24、48 h收集细胞进行检测.倒置相差显微镜下观察A549细胞形态,流式细胞仪检测48 h的细胞凋亡,免疫组化法检测细胞内Omi/HtrA2的表达.结果 与对照组相比,高氧组细胞受损明显,形态改变,细胞凋亡率增加(P<0.05),胞浆Omi/HtrA2表达增多(P<0.05).与高氧组相比,二氮嗪组细胞损伤状况明显得到改善,细胞生长状况明显好转,形态明显变好;胞浆Omi/HtrA2表达减少(P<0.05),细胞凋亡率减少(P<0.05).结论 mitoKA7P通道开放剂二氮嗪具有降低Omi/HtrA2表达和A549细胞凋亡,从而减轻高氧诱导的肺损伤的作用.
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阿霉素偶联氧化锌量子点的制备及其对肺癌A549细胞增殖抑制作用的研究
目的 开发一种具有减毒增效作用的载阿霉素的ZnO量子点(ZnO QDs).方法 制备TK键偶联阿霉素(DOX)/ ZnO QDs的药物载体,并通过DLS考察粒径的变化、FT-IR鉴定化学结构、ζ电势考察每一步反应后量子点表面电势的变化等多种方法加以表征,以确认载体的形成,后采用噻唑蓝比色法(MTT法)考察其对人肺癌A549细胞增殖的抑制作用.结果 成功构建偶联阿霉素的ZnO QDs,体外释放实验证明载体具有酸敏释药的性质,MTT结果显示其对A549细胞具有较强的杀伤效应.结论 阿霉素偶联ZnO QDs可以在肿瘤细胞内有效释药,并产生较强的细胞杀伤作用,具有进一步开发成体内抗肿瘤递药系统的潜力.
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索拉非尼对非小细胞肺癌H460与A549细胞株的抑制作用及其机制
目的 探讨索拉非尼对非小细胞肺癌H460、A549细胞株的抑制效果及其作用机制.方法 选取H460、A549细胞株进行培养,随机分为对照组和不同浓度(3.0 μmol·L-1,6.0 μmol·L-1,9.0 μmol·L-1)索拉非尼组,采用MTT法检测各组细胞的增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期,Western blot法检测Cyclin E1和E2F1的蛋白表达.结果 不同浓度索拉非尼组H460、A549细胞OD值均明显低于对照组(P<0.05),其中9.0 μmol·L-1索拉非尼组H460、A549细胞OD值分别为(0.550± 0.080)和(0.603±0.073),明显低于其他各组(P<0.05).不同浓度索拉非尼组H460、A549细胞G0/G1期比例均明显高于对照组(P<0.05),其中9.0 μmol·L-1索拉非尼组H460、A549细胞G0/G1期比例分别为(68.20±7.40)%和(69.12±7.04)%,明显高于其他各组(P<0.05).不同浓度索拉非尼组H460、A549细胞Cyclin E1和E2F1蛋白表达明显低于空白对照组(P<0.05),其中9.0 μmol·L-1索拉非尼组H460细胞Cyclin E1和E2F1蛋白表达分别为(0.206±0.097)和(0.412±0.096),A549细胞Cyclin E1和E2F1蛋白表达分别为(0.210±0.094)和(0.311±0.095),均明显低于其他组(P<0.05).结论 索拉非尼可抑制非小细胞肺癌H460、A549细胞增殖,将细胞阻滞于G1期,可能与调控Cyclin E1和E2F1蛋白有关.
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超小铂纳米粒的合成及其对肺癌A549细胞的增殖抑制作用研究
目的 制备超小铂纳米粒并评价其体外细胞毒效应.方法 以乙酰丙酮铂、超氢化试剂、油酸油酰胺等为原料,采用高温还原法制备超小型铂纳米粒,对其粒径分布进行测定,通过透射电镜(TEM)观察其形貌.选择人肺癌A549细胞,采用MTT法评价其细胞毒作用.结果 成功制备超小铂纳米粒,其粒径为(3±1.2)nm,经TEM观察呈规整圆形或椭圆形颗粒状,分散性较好,对A549肺癌细胞具有较强的杀伤作用.结论 以二(乙酰丙酮)铂(II)为原料可制备超小铂纳米粒,其粒径分布均匀,且初步证实对肿瘤A549细胞有较强的杀伤作用.
关键词： 超小铂纳米粒 二(乙酰丙酮)铂(Ⅱ) A549细胞 -
罗勒多糖联合紫杉醇对A549细胞线粒体膜电位和细胞周期的影响
目的 探讨罗勒多糖联合紫杉醇对人非小细胞肺癌A549细胞株增殖和细胞周期及细胞凋亡的影响,以及与人非小细胞肺癌A549细胞株线粒体及其细胞内钙离子浓度的关系.方法 采用PI染色流式细胞仪检测细胞周期分布;采用JC-1染色激光扫描共焦显微镜及流式细胞检测仪检测线粒体膜电位变化;采用Fluo-3/AM染色激光扫描共焦显微镜检测钙离子荧光强度变化.结果 与紫杉醇用药组比较,罗勒多糖联合紫杉醇药物可阻滞细胞周期G2/M期及S期,显示细胞凋亡数增加;JC-1染色结果显示罗勒多糖联合紫杉醇药物可使红色荧光强度下降,绿色荧光明显增强,显示线粒体膜电位下降;Huo-3/AM染色结果显示罗勒多糖联合紫杉醇药物可使红色荧光强度明显增强,显示胞浆内钙离子浓度升高.结论 罗勒多糖联合紫杉醇药物可提高线粒体膜通透性,使胞浆内钙离子浓度升高,线粒体膜电位下降,影响细胞周期,导致细胞凋亡增加,达到化疗增效的作用.
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塞来昔布对人肺癌A549细胞株增殖抑制和凋亡诱导作用观察
目的 体外研究选择性环氧化酶2 (COX-2)抑制剂塞来昔布对人肺癌细胞株A549增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 采用噻唑蓝(MTT比色法)观察不同浓度的塞来昔布对人肺癌细胞株A549的增殖抑制作用,TUNEL染色检测细胞凋亡,并用含半胱氨酸的门冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)活性检测试剂盒检测其活性变化.结果 塞来昔布能够以浓度依赖性方式有效地抑制K562细胞增殖,药物的Ic50为33.98 μmol·L-1;TUNEL染色分析显示给予不同浓度塞来昔布的细胞与未给予塞来昔布的细胞相比凋亡率有差异(P＜0.05),经塞来昔布处理的A549细胞内caspase-3的A405较正常对照组有显著增加(P＜0.05).结论 塞来昔布能够抑制A549细胞增殖,并呈药物浓度依赖性；塞来昔布能以浓度依赖性方式诱导K562细胞凋亡,其机制涉及caspase-3活化的信号转导途径.
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鸦胆子油乳对人非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和自噬的影响及机制
目的:探讨鸦胆子油乳对人非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和自噬的影响及机制.方法:以A549细胞为研究对象,先采用不同浓度的鸦胆子油乳处理,并将其分为对照组和低、中、高剂量鸦胆子油乳组(0,2.5,5.0,10.0 mg/mL);再采用5.0 mg/mL鸦胆子油乳或3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)+5.0 mg/mL鸦胆子油乳处理,并将其分为鸦胆子油乳组和3-MA+鸦胆子油乳组.采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)和克隆形成实验检测细胞增殖,划痕实验和Transwell实验测量细胞迁移;应用细胞免疫荧光和Western印迹分析细胞自噬.结果:与对照组(0 mg/mL)相比,低、中、高剂量(2.5,5.0,10.0 mg/mL)鸦胆子油乳组的A549细胞增殖受抑制、细胞克隆形成数减少、细胞迁移率降低、Transwell穿膜细胞数减少(均P＜0.05),且呈现剂量依赖性(均P＜0.05);与对照组(0 mg/mL)相比,5.0 mg/mL鸦胆子油乳组的A549细胞微管相关蛋白轻链3(microtu-bule associated protein 1 light chain 3,LC3)绿色荧光聚集、LC3-II/LC3-I比值增加,p62水平降低(均P＜0.05);与鸦胆子油乳组(5.0 mg/mL)相比,3-MA+鸦胆子油乳组的A549细胞增殖增加,细胞克隆形成数、细胞迁移率和Transwell穿膜细胞数增多(均P＜0.05).结论:鸦胆子油乳可诱导非小细胞肺癌A549细胞自噬,可参与肿瘤细胞增殖和迁移的抑制作用.
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热休克蛋白在肺腺癌细胞及组织中的表达
目的:探讨热休克蛋白(heat shock proteins, HSPs)在肺腺癌A549细胞及组织中的表达情况.方法:分别以正常人支气管上皮(human bronchial epithelium,HBE)细胞和正常肺组织为对照,采用免疫印迹及RT-PCR的方法,从细胞水平和组织水平观察HSP86,HSP70及aB晶状体蛋白在肺腺癌A549细胞及组织中的表达情况.结果:与HBE细胞及正常肺组织比较,A549细胞及癌组织中HSP86,HSP70及aB晶状体蛋白的mRNA与蛋白质表达均显著增加(P＜0.05),其中以HSP70的增加为显著(P＜0.01).结论:肺腺癌细胞及组织中HSPs的表达量高于HBE细胞及正常肺组织,其中以HSP70的增加为显著.
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抑制A549细胞COX-2表达的D-siRNAs的合成
目的:利用长片段双链RNA(dsRNAs)在体外经Dicer酶消化获得小RNA(D-siRNAs)的方法合成抑制A549细胞COX-2表达的siRNAs,以期获得治疗气道炎症和肿瘤的一种新思路.方法:用RiboMAX Large Scale RNA Production Systems-SP6 and T7试剂盒体外将COX-2 DNA转录为RNA.长片段COX-2 RNA经Dicer酶消化为小RNA,纯化并获取小RNA(D-siRNAs).结果:在体外,长片段双链A549细胞COX-2的RNA经Dicer酶消化后可成功获得抑制A549细胞COX-2表达的小RNA.结论:在体外,长片段dsRNAs经Dicer酶消化可成功获得21～23个碱基的小RNA.
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复方菝葜颗粒对非小细胞肺癌A549细胞Bcl-2和Bax基因表达的影响
目的:观察复方菝葜颗粒(compound rhizoma smilacinus granule,CRSG)对非小细胞肺癌A549细胞Bcl-2和Bax mRNA表达水平的影响,探讨CRSG抑制非小细胞肺癌的作用机制.方法:雄性SD大鼠30只,随机分为两组,每组15只.一组灌服复方菝葜颗粒,2次/d;另一组灌服等剂量的蒸馏水,第6次灌胃后的2 h提取血清.A549细胞株随机分为中药实验组、西药对照组、正常对照组,分别加入10%的含药血清、顺铂3 μg/mL和10% SD大鼠血清,培养48h后收集细胞,RT-PCR测定Bcl-2和Bax mRNA的表达水平.结果:各组细胞培养48 h后中药实验组、西药对照组细胞Bcl-2 mRNA表达下调,Bax mRNA表达上调, Bcl-2/Bax比值则显著降低,与正常对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.01). 结论:非小细胞肺癌A549细胞存在Bcl-2 mRNA高表达、Bax mRNA低表达,复方菝葜颗粒干预后可使Bax mRNA表达量显著增加,Bcl-2 mRNA表达及Bcl-2/Bax比例显著降低,这可能是其对非小细胞肺癌发挥抑瘤作用的分子机制之一.
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慢性阻塞性肺疾病患者C-反应蛋白的变化及LPS诱导下人肺泡型细胞(A549)C-反应蛋白的表达
目的:观察人肺上皮细胞在细菌脂多糖(LPS)诱导下CRP mRNA的表达及CRP分泌.方法:收集临床慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者同步晨痰和血浆,进行CRP ELISA检测;对培养的人肺泡上皮细胞株(A549细胞)给予不同浓度、不同时间LPS刺激,同时设立对照组,细胞处理后提取RNA用于RT-PCR.同时,对培养上清液进行CRP ELISA检测.结果:COPD患者痰中CRP浓度明显高于同期外周血中CRP的浓度(P<0.05).培养的A549在不同浓度和不同时间的LPS诱导下有CRP mRNA表达及CRP的分泌,且呈时间依赖性,与对照组比较有统计学意义(P<0.05～0.01).结论:COPD患者呼吸道内可能存在CRP的自分泌;A549在LPS诱导下存在CRP mRNA的表达及分泌.
