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罗勒多糖对卵巢癌肿瘤转移相关基因SEMA4C表达影响实验研究
目的:观察分析罗勒多糖对卵巢癌SKOV3细胞肿瘤转移相关基因SEMA4C表达的影响,揭示罗勒多糖抗卵巢癌转移的作用机制.方法:体外培养卵巢癌SKOV3细胞,实验分为5组,A组为不加罗勒多糖处理的空白对照组,B组(罗勒多糖100 mg/L)、C组(罗勒多糖500 mg/L)、D组(罗勒多糖1 000 mg/L)、E组(紫杉醇0.05 μmol/L)为紫杉醇组;荧光实时定量PCR检测不同处理组细胞中SEMA4C mRNA的表达变化;免疫细胞化学分析不同处理组细胞中Se-ma4C蛋白的表达差异.结果:SKOV3细胞中SEMA4C mRNA相对表达量,B组为(3.60±0.01)×10-4,C组为(3.04±0.34)×10-4,D组为(1.81±0.42)×10-4,E组为(5.56±0.14)×10-4,与A组(9.02±0.41)×10-4比较,差异均有统计学意义,P＜0.01;B、C和D组与E组比较,差异有统计学意义,P＜0.01;SKOV3细胞中Sema4C蛋白表达平均光密度B组为9.64±0.21,C组为8.58±0.16,D组为6.15±0.38,E组为12.16±0.20,与A组的15.19±0.22比较,差异有统计学意义,P＜0.01;B、C和D组与E组比较,差异均有统计学意义,P＜0.01;罗勒多糖可以抑制卵巢癌细胞中SEMA4C mRNA及编码蛋白的表达,且随着药物浓度的增大,抑制作用越明显.结论:罗勒多糖可下调肿瘤转移相关基因SEMA4C的表达,可能是罗勒多糖抗卵巢癌淋巴道转移的新机制.
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低氧环境下罗勒多糖对卵巢癌细胞生物学行为的影响
目的:观察不同氧环境下中药罗勒多糖对人卵巢癌细胞株SKOV3生物学行为的影响,探讨其抗卵巢癌作用的可能机制.方法:罗勒多糖分别在常氧(21%O2、5%CO2)和乏氧(1%O2、5%CO2和94%N2)环境中作用于人卵巢癌细胞株SKOV3,形态学观察不同氧环境下各组细胞形态差异;细胞凋亡-Hoechst 33258染色检测药物对人卵巢癌细胞凋亡情况的影响;MTT法检测各组细胞增殖能力的变化.结果:与对照组相比,乏氧环境下罗勒多糖能够促进人卵巢癌细胞株SKOV3的凋亡,抑制SKOV3细胞增殖,而常氧环境下罗勒多糖作用相反.结论:罗勃多糖在常氧及乏氧环境下对人卵巢癌细胞株SKOV3生物学行为的影响效应截然相反,提示抗肿瘤药物及生物疗法的体外机制研究设计应充分考虑氧环境的影响.
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罗勒多糖提取纯化及红外光谱分析
目的:对罗勒多糖进行分离纯化,并进行红外光谱分析.方法:通过水提醇沉、Sevag法除蛋白,再经DEAE离子交换柱层析对多糖进行分离纯化.用红外光谱分析多糖的特征吸收峰.结果:苯酚硫酸法测得罗勒粗多糖含量为28％,考马斯亮蓝测蛋白质含量为10％,用Sevag法除蛋白,纯化率为60％.用DEAE层析柱法纯化,得到中性多糖和酸性多糖,用琼脂糖凝胶电泳法测得结果均为均一多糖.红外光谱分析罗勒多糖具有明显的多糖类物质吸收峰.结论:水提醇沉法提取罗勒多糖提取效率高,可作为罗勒多糖的一种常用提取方法.DEAE离子交换柱对罗勒多糖分离效果较好.
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罗勒多糖对H22肝癌荷瘤小鼠化疗增效药效学研究
目的:研究罗勒多糖对H22荷瘤小鼠化疗增效的影响.方法:通过对H22荷瘤小鼠瘤质量及生存率的检测,观察罗勒多糖与紫杉醇合用对H22荷瘤小鼠的增效作用;通过检测血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶及尿素氮,观察罗勒多糖联合化药对H22荷瘤小鼠肝肾的影响.结果:罗勒多糖能在一定程度上增强紫杉醇的抑瘤作用以及提高小鼠生存率,并对肝肾无损伤作用.结论:罗勒多糖对荷瘤小鼠具有一定的化疗增效及提高生存率的作用.
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罗勒多糖对树突状细胞表面分子表达的影响
目的:观察罗勒多糖对人外周血单核细胞来源的树突状细胞(Dendritic cell,DC)表面分子表达的影响,探讨其抗肿瘤免疫机制.方法:从正常人外周血分离获得单核细胞,加入含10%胎牛血清、GM-CSF及IL-4的RPMI1640,37℃培养5天,实验组加入罗勒多糖,对照组加入PBS,流式细胞仪检测细胞表面分子的表达.结果:在细胞因子的诱导下,CD14+单核细胞逐渐分化为DC,罗勒多糖作用组与对照组DC均表达CD209、CD80、CD83、CD86、CD1a和HLA-DR,与对照组相比,罗勒多糖组DC表面分子CD80和HLA-DR的表达均明显上调.结论:罗勒多糖能够调节DC表面分子CD80和HLA-DR的表达,这可能是罗勒多糖发挥其抗肿瘤免疫的机制之一.
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低氧环境下罗勒多糖对乳腺癌细胞TIMPs mRNA表达的影响
目的:探讨低氧对人乳腺癌细胞株MDA-231金属蛋白酶组织抑制剂(TIMPs)mRNA表达的影响,以及罗勒多糖(basil polysaccharide,BP)对TIMPs的作用.方法:分别置MDA-231细胞株于常氧(21% O2、5% CO2)、低氧(1% O2、5%CO2和94% N2)环境中和罗勒多糖(200μg/ml)培养6 h,RT-PCR技术检测不同处理组细胞TIMP1、2、3 mRNA水平.结果:MDA-231细胞株表达TIMP1、2 mRNA,未检测到TIMP3 mRNA;低氧环境下MDA-231细胞株TIMP1、2 mRNA水平显著上升(P＜0.05);罗勒多糖处理后TIMPs mRNA的含量,无论常氧组还是低氧组都有显著改变:常氧环境下罗勒多糖可明显下调MDA-231细胞株中TIMP1、2 mRNA的表达(P＜0.05),而低氧环境下则显著上调其表达(P＜0.05).结论:罗勒多糖在常氧及低氧环境下对MDA-231细胞TIMP1、2基因表达的影响效应截然相反,提示抗肿瘤药物及生物疗法的体外机制研究设计应充分考虑氧环境的影响.
关键词： 低氧 金属蛋白酶组织抑制剂 乳腺癌细胞 罗勒多糖 -
罗勒多糖对肿瘤转移行为的影响
目的:观察罗勒多糖对肿瘤细胞不同途径转移行为的影响,并从细胞间通讯功能的恢复以及体内NK细胞活性的变化两方面探讨其抗肿瘤转移的可能作用机制.方法:Metfigel穿膜法体外观察罗勒多糖对肿瘤细胞移动活性的影响;建立不同途径的肿瘤转移模型,体内观察罗勒多糖对肿瘤转移行为的影响.SLDT技术检测罗勒多糖对细胞通讯功能的影响;51Cr释放法检测罗勒多糖对NK细胞活性的影响.结果:罗勒多糖在体内外均具有显著的抗肿瘤转移作用;与对照组相比细胞间通讯功能有一定程度的恢复;NK细胞的活性明显提高.结论:罗勒多糖具有明显的抗肿瘤转移作用,可能是一种具有潜在开发价值的新的抗肿瘤转移药物,其抗肿瘤转移作用是通过多个药效靶点综合作用的结果.
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表达谱芯片技术在药物作用机制研究中的应用
目的探讨表达谱芯片技术在研究药物作用机制中的价值.方法建立荷NuTu-19卵巢癌的大鼠模型及相应对照,用罗勒多糖治疗50天,处死大鼠,以腹水量、腹腔脏器转移程度积分判断各组肿瘤生长及转移情况.提取癌组织总RNA,用RT-PCR逆转录合成eDNA,分别采用Cy3-dUTP、Cy5-dUTP标记对照组和药物组cDNA,与含有2 000点的大鼠基因表达谱芯片杂交,杂交芯片扫描结果用ImaGene 3.0软件分析,计算Cy3、Cy5两种荧光信号的强度比值.结果对照组与药物组之间共有168条差异表达基因,表达差异在3倍以上的基因有65条,均为表达下调基因;表达差异在2倍以上的基因有103条,其中表达上调基因43条,下调基因60条.经归类分析,表达差异基因主要为:①肿瘤转移相关基因;②与免疫应答有关的基因;③与细胞能量代谢有关的酶类;④与药物代谢及敏感性有关酶类的基因;⑤与信号转导以及转录过程有关的基因等.结论罗勒多糖可能通过抑制肿瘤代谢、调节肿瘤转移相关基因的表达等多种作用途径抑制肿瘤的转移,表达谱芯片技术可以快速确定药物作用的可能机制,并为进一步研究提供重要信息,加快药物的研发速度.
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罗勒多糖对紫杉醇抑制肺腺癌A549细胞增殖作用的影响
目的：探讨罗勒多糖对紫杉醇体外抑制人肺腺癌A549细胞增殖作用的影响。方法：采用MTT法测定罗勒多糖对紫杉醇抑制 A549细胞增殖作用的影响，倒置相差显微镜下观察罗勒多糖联合紫杉醇导致的 A549细胞形态学变化，并采用Hoechst 33342/PI荧光双染法分析罗勒多糖与紫杉醇联合应用所引起的A549细胞死亡方式。结果：MTT检测和形态学观察表明罗勒多糖对紫杉醇抑制A549细胞增殖具有明显的增效作用，其增效作用呈浓度和时间依赖性；Hoechst 33342/PI检测显示紫杉醇及紫杉醇联合罗勒多糖作用48 h后可见凋亡细胞。结论：罗勒多糖能增强紫杉醇对人肺腺癌A549细胞株增殖的抑制作用，具有化疗增效作用，这种增效作用以诱导细胞凋亡为主要方式，呈浓度和时间依赖性。
关键词： 罗勒多糖 紫杉醇 化疗增效 人肺腺癌A549细胞 -
罗勒多糖对人卵巢癌细胞SKOV3细胞骨架的影响
目的:观察罗勒多糖对人卵巢癌细胞SKOV3细胞骨架的影响,探讨罗勒多糖抗卵巢癌细胞侵袭转移的可能机制.方法:将卵巢癌SKOV3细胞分为4组,A组为不加罗勒多糖处理的空白对照组,B、C、D组分别用不同浓度罗勒多糖处理,以罗丹明-鬼笔环肽标记微丝,免疫荧光法标记微管,用荧光显微镜观察.结果:罗勒多糖作用的SKOV3细胞微丝重排、伪足减少、微管蛋白弥散分布、细胞骨架的网络结构发生改变;这一作用与剂量呈正相关.结论:罗勒多糖可能通过影响人卵巢癌SKOV3细胞微丝、微管来调节其运动性和侵袭力.
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罗勒多糖对卵巢癌生物学行为的影响及其机制研究
目的:观察中药罗勒多糖对卵巢癌生物学行为的影响,探讨其抗卵巢癌作用的可能机制.方法:建立荷NuTu-19卵巢癌大鼠模型,观察罗勒多糖对荷瘤鼠肿瘤生物学行为的影响;抽提肿瘤组织总RNA,逆转录标记cDNA探针,用Cy3-dUTP标记对照组,Cy5-dUTP标记实验组,与表达谱芯片进行杂交,ImaGene3.0软件分析统计.同时取肿瘤组织,进行常规病理学检测.结果:与对照组相比,罗勒多糖治疗组肿瘤的生长及转移行为都受到明显的抑制:肿瘤数量减少,体积减小,腹水量显著减少(P《0.05);腹腔脏器转移程度积分显著降低(P《0.01).罗勒多糖作用后,卵巢癌的基因表达谱发生了明显变化,应用表达谱芯片共筛选出168条差异表达基因.结论:罗勒多糖通过多个药效靶点抗肿瘤增殖及转移.
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罗勒多糖对顺铂等三种化疗药物抑瘤增效作用的实验研究
目的:研究罗勒多糖与顺铂、盐酸吡柔比星和氟尿嘧啶三种化疗药物合用对不同组织来源的肿瘤细胞株的生长抑制作用,以期明确罗勒多糖对化疗药物抑瘤增效适用范围.方法:体外培养人肺腺癌A549细胞株、人喉癌Hep-2细胞株和人胃癌SGC-7901细胞株,采用MTT法测定罗勒多糖对顺铂、盐酸吡柔比星和氟尿嘧啶抑制上述肿瘤细胞生长的增效作用.结果:罗勒多糖联合顺铂、盐酸吡柔比星和氟尿嘧啶共同作用48 h可明显提高三种化疗药物对A549细胞、Hep-2细胞和SGC-7901细胞的生长抑制作用,且其作用具有一定的剂量依赖性.结论:罗勒多糖对多种化疗药物抑制不同组织来源的肿瘤细胞株的生长具有增效作用,提示罗勒多糖对化疗药物抑瘤增效具有广泛适用性.罗勒多糖是一种潜在的化疗增效药物,也可以作为化疗辅助的功能食品开发应用.
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罗勒多糖对肝癌H22淋巴道转移模型小鼠生存期的影响
目的:观察罗勒多糖对肝癌H22淋巴道转移模型小鼠生存期的影响,进一步探讨罗勒多糖抗肿瘤转移的作用机制.方法:建立肝癌H22淋巴道转移小鼠模型,实验共做3批次,每批动物同一性别,每批实验均分3组,即阴性对照组、罗勒多糖组和丝裂霉素组.观察并计算小鼠平均存活天数和生命延长率、半数死亡时间、中位生存时间以及体质量增长值.结果:罗勒多糖可使模型小鼠平均存活天数明显延长,并使生命延长率大于30％;可延长模型小鼠半数死亡时间和中位生存时间,可使中位生存天数延长率大于125％;罗勒多糖还可使模型小鼠体质量增长明显,且使体质量减轻作用走势平缓.结论:罗勒多糖能明显延长肝癌H22淋巴道转移模型小鼠的生存期,且使小鼠体质量增长明显,可改善动物的生存质量.
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罗勒多糖含量测定方法研究
目的：对苯酚-硫酸法和蒽酮-硫酸法两种常用测定罗勒多糖的方法进行优化研究。方法：采用多功能酶标仪，考察比较苯酚-硫酸法和蒽酮-硫酸法测定多糖的工艺条件。结果：苯酚-硫酸法测得罗勒多糖含量为8.04%，蒽酮-硫酸法测得罗勒多糖含量为7.99%。苯酚-硫酸法测得多糖含量为67.22%。结论：苯酚-硫酸法测定罗勒多糖含量操作简便，稳定可靠。
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基因芯片技术在研究中药分子作用机制中的应用
目的:探讨罗勒多糖抑瘤作用和机制以及基因芯片技术在中药分子作用机制研究中的应用.方法:建立荷NuTu-19卵巢癌大鼠模型及相应对照,观察中药罗勒多糖对荷瘤鼠肿瘤生长及转移行为的影响;同时提取肿瘤组织总RNA,用RT-PCR逆转录合成cDNA,分别用Cy3-dUTP、Cy5-dUTp标记对照组和药物组cDNA,与含有2 000点的大鼠基因表达谱芯片杂交,杂交芯片扫描结果用ImaGene3.0软件进行分析统计.结果:对照组与药物组之间共有168条差异表达基因,经归类分析,表达差异基因主要为:①肿瘤转移相关基因;②与免疫应答有关的基因;③与细胞能量代谢有关的酶类;④与药物代谢及敏感性有关酶类的基因;⑤与信号转导以及转录过程有关的基因等.结论:罗勒多糖可能通过多种作用途径抑制肿瘤生长及转移,基因芯片技术可从基因水平解释中药的可能作用机制,并为进一步确切机制的研究提供重要信息.
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罗勒多糖对卵巢癌 SKOV3细胞 VEGF 受体表达的调控作用及对其侵袭能力的影响
目的：探讨罗勒多糖（ BPS）对卵巢癌SKOV3细胞血管内皮生长因子（ VEGF）受体表达的调控作用及对其侵袭能力的影响。方法酶联免疫吸附试验（ ELISA）、实时定量PCR及流式细胞术分别检测BPS对SKOV3细胞分泌VEGF的影响及对VEGF受体（ VEGFRs）在SKOV3细胞表达的调控作用；Transwell试验检测不同浓度BPS对SKOV3细胞侵袭能力的影响；通过特异性shRNA慢病毒表达载体感染的方法稳定敲减 VEGFR2在SKOV3细胞的表达后，Transwell试验检测其对BPS侵袭抑制能力的影响。结果 BPS并未影响SKOV3细胞VEGF分泌水平的表达，对VEGFR1、VEGFR3在SKOV3的表达也无显著影响，但可明显上调VEGFR2在SKOV3细胞的表达；Transwell试验显示BPS可抑制SKOV3细胞的体外侵袭能力，并具有一定的浓度依赖性；成功感染携带VEGFR2 shRNA的慢病毒表达载体后，VEGFR2在SKOV3细胞的表达显著下调（P＜0．01），且BPS对敲减VEGFR2表达的SKOV3细胞侵袭抑制能力显著降低。结论 BPS可显著抑制SKOV3细胞的侵袭能力，其抑制作用部分是通过上调VEGFR2在SKOV3细胞的表达介导的。
关键词： 卵巢肿瘤 罗勒多糖 侵袭 血管内皮生长因子受体2 -
罗勒多糖对乳腺癌细胞系MDA-MB-231侵袭的影响
目的 观察罗勒多糖对乳腺癌细胞系MDA-MB-231侵袭性的影响.方法 将体外培养的MDA-MB-231细胞分为实验组和对照组.实验组细胞用不同浓度罗勒多糖(100、300 μg/mL)处理,对照组不加任何刺激因子.Transwell小室检测细胞侵袭能力,RT-PCR、Western blotting方法检测与侵袭相关的基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和膜型基质金属蛋白酶1(MT1-MMP)的表达.结果 ①罗勒多糖可抑制MDA-MB-231细胞的侵袭力(P＜0.01);②罗勒多糖抑制MT1-MMP分子的mRNA表达(P＜0.05)及下调其蛋白表达水平.③罗勒多糖对MMP-2及MMP-9分子的mRNA表达无影响.结论 罗勒多糖可通过下调MT1-MMP的表达抑制MDA-MB-231细胞的侵袭.
关键词： 罗勒多糖 肿瘤侵袭 膜型基质金属蛋白酶-1 乳腺肿瘤 -
罗勒多糖对肝癌细胞缺氧模型组蛋白去甲基化酶LSD1、JMJD2B及JARID1B表达的影响
目的 研究罗勒多糖对肝癌细胞MHCC97H和MHCC97L缺氧模型组蛋白去甲基化酶LSD1、JMJD2B及JARID1B表达的影响,探讨罗勒多糖抗肿瘤侵袭转移作用与表观遗传修饰的关系.方法 采用二氯化钴诱导肝癌细胞缺氧,建立肝癌细胞MHCC97H和MHCC97L体外缺氧模型,通过不同剂量罗勒多糖干预24h,细胞划痕实验检测缺氧条件下肝癌细胞的迁移能力,实时荧光定量PCR法检测各组肝癌细胞中HIF-1α、LSD1、JMJD2B及JARID1B mRNA表达水平,Western-blot法检测各组肝癌细胞中HIF-1α、LSD1、JMJD2B及JARID1B蛋白表达情况.结果 罗勒多糖能抑制缺氧条件下MH-CC97H和MHCC97L细胞的迁移能力,下调细胞中HIF-1α mRNA及蛋白的表达水平,与缺氧模型组相比有显著性差异(P＜0.05);罗勒多糖能够下调MHCC97H细胞缺氧条件下LSD1、JMJD2B、JARID1B mRNA和蛋白的表达,与缺氧模型组相比有显著性差异(P＜0.05);缺氧条件下MHCC97L细胞中LSD1、JMJD2B、JARID1B mRNA和蛋白的表达与正常对照组无显著性差别(P＞0.05),罗勒多糖对这三种酶的表达亦无显著作用.结论 罗勒多糖能改善不同转移潜能肝癌细胞MHCC97H和MHCC97L的缺氧微环境,抑制肿瘤细胞的侵袭转移.其中罗勒多糖对高转移潜能肝癌细胞MHCC97H的抗侵袭转移作用与其对细胞中组蛋白去甲基化酶LSD1、JMJD2B、JARID1B的调节有关,而对低转移潜能肝癌细胞MH-CC97L侵袭转移能力的调节未发现与LSD1、JMJD2B、JARID1B有明显关系.
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罗勒多糖抗肿瘤转移作用的机制研究
目的：探讨罗勒多糖抗肿瘤转移作用的可能机制。方法通过Metrigel穿膜法体外观察罗勒多糖对肿瘤细胞迁移的影响；建立不同途径的肿瘤体内转移模型，观察罗勒多糖对肿瘤转移行为的影响；LuciferYellow划痕标记荧光传输法检测罗勒多糖对细胞通讯的影响。结果在体外经不同浓度的罗勒多糖处理48 h后的PG细胞，穿过人工基底膜的细胞数显著减少；罗勒多糖对黑色素瘤B16-F10人工肺自发性转移行为具有明显的抑制作用；罗勒多糖对细胞通讯功能缺陷的PG细胞具有一定程度的恢复作用。结论罗勒多糖在体内外均有显著的抗肿瘤侵袭、转移作用，对细胞通讯功能具有一定程度的恢复作用，其机制是通过多个药效靶点综合作用的结果。
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罗勒多糖联合紫杉醇对A549细胞线粒体膜电位和细胞周期的影响
目的 探讨罗勒多糖联合紫杉醇对人非小细胞肺癌A549细胞株增殖和细胞周期及细胞凋亡的影响,以及与人非小细胞肺癌A549细胞株线粒体及其细胞内钙离子浓度的关系.方法 采用PI染色流式细胞仪检测细胞周期分布;采用JC-1染色激光扫描共焦显微镜及流式细胞检测仪检测线粒体膜电位变化;采用Fluo-3/AM染色激光扫描共焦显微镜检测钙离子荧光强度变化.结果 与紫杉醇用药组比较,罗勒多糖联合紫杉醇药物可阻滞细胞周期G2/M期及S期,显示细胞凋亡数增加;JC-1染色结果显示罗勒多糖联合紫杉醇药物可使红色荧光强度下降,绿色荧光明显增强,显示线粒体膜电位下降;Huo-3/AM染色结果显示罗勒多糖联合紫杉醇药物可使红色荧光强度明显增强,显示胞浆内钙离子浓度升高.结论 罗勒多糖联合紫杉醇药物可提高线粒体膜通透性,使胞浆内钙离子浓度升高,线粒体膜电位下降,影响细胞周期,导致细胞凋亡增加,达到化疗增效的作用.
